Способ моделирования экспериментального аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва


 


Владельцы патента RU 2504019:

Государственное бюджетное учреждение "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ Академии наук Республики Башкортостан" (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаза. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока начиная с 7 суток после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва. 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии.

При введении аденовируса под конъюнктиву глазного яблока кролика на 3-5 сутки происходило развитие аденовирусного конъюнктивита, ограниченного местом введения суспензии вируса (М.Т. Азнабаев, В.Б. Мальханов, Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз, 1995, С.54-59).

При введении в переднюю камеру глаза кролика суспензии, содержащей аденовирус типа 6 или 8 (инфекционные титры соответственно 104 и 102 ТДЦ50/0,1 мл.), адаптированный к перевиваемой линии клеток НЕр-2 или HELA, гистологически развивался серозный ирит, который проходил к 28 суткам опыта (М.Т. Азнабаев, В.Б. Мальханов, Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз, 1995, С.54-59).

Также показано развитие экспериментального аденовирусного увеита морских свинок при введении аденовируса типа 6 в переднюю камеру глаза. Гистологически выявляли поражения роговицы в зоне лимба, радужной оболочки, плоской части цилиарного тела. Воспалительные изменения в хориоидее были обнаружены лишь на 7 сутки после заражения (М.Т. Азнабаев, В.Б. Мальханов, Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз, 1995, С.54-59).

Во всех выше изложенных экспериментальных работах поражение зрительного нерва при экспериментальных увеитах не происходило.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ моделирования увеита аденовирусной этиологии, заключающийся в интраокулярном заражении экспериментального животного, отличающийся тем, что в переднюю камеру глаза экспериментального животного инсулиновой иглой вводят аденовирус в дозе, равной или превышающей 103 ТДЦ50/0,1 мл для перевиваемой культуры НЕр-2 с последующим исследованием сосудистой оболочки глаза с 14 по 28 день после заражения (заявка RU 97109970, опубликована 27.05.1999.).

При моделировании аденовирусной инфекции глаза экспериментальных животных, чем меньше размер глазного яблока, тем чаще развивается травматическое повреждение оболочек глазного яблока. Более того, во всех экспериментальных исследованиях для введения вируса простого герпеса использовалась инсулиновая игла больших размеров (не менее 22G), которая травмировала оболочки глаза и вызывала неспецифическую воспалительную реакцию.

Кроме того, при моделировании аденовирусной инфекции глазного яблока аденовирус типа 6 был адаптирован к клеткам перевиваемых клеток НЕр-2, HELA и вводился только под конъюнктиву, на роговицу или в переднюю камеру глаза. Эти способы не приводили к поражению зрительного нерва.

Задачей предлагаемого изобретения является создание модели экспериментального аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенной к указанному заболеванию у человека и уменьшение вероятности травмирования оболочек глаза иглой.

Технический результат при использовании изобретения - повышение частоты и точности моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, предотвращение развития не желательного сопутствующего травматического повреждения оболочек глаза.

Предлагаемый способ моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, осуществляется следующим образом. Иглой 33 G кроликам породы шиншилла в стекловидное тело глаза через плоскую часть цилиарного тела вводят культуральную жидкость, содержащую аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи в дозе 10000 ТЦЦ50. Проводят гистологические исследования удаленного глазного яблока, начиная с 7-х суток после заражения, которые позволяют изучить течение данного заболевания.

Десяти кроликам (20 глаза) породы шиншилла через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили по 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД50 аденовируса типа 6, адаптированного к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, полученной по стандартной методике [Вирусология. Методы: Пер. с англ // Под. ред. Б. Мейхи. - М.: Мир, 1988. - С.254-269.]. На 7 и 21 день произвели забой животных и проводили гистологические исследования удаленных глазных яблок. На 7-е сутки выявляли острый воспалительный процесс в цилиарном теле и зрительном нерве. В цилиарном теле наблюдали выраженный отек, диффузную воспалительную инфильтрацию, представленную нейтрофильными лейкоцитами, эозинофилами, моноцитами и лимфоцитами, местами наблюдали формирование абсцессов. Эпителий с признаками вакуолизации цитоплазмы, местами слущен. Одновременно в толще зрительного нерва, между нервными волокнами выявляли скопление отечной жидкости, очаги лимфоцитарной инфильтрации с примесью единичных нейтрофилов, а также периваскулярную инфильтрацию лимфоцитами и единичными лейкоцитами. В коллатеральных сосудах глазной артерии и вены зрительного нерва отмечено увеличение проницаемости их стенок, экссудация плазмы крови в периваскулярную зону и тканевые структуры. На 21-е сутки в гистологических срезах выявляли усиление воспалительной реакции в цилиарном теле, радужной оболочке и зрительном нерве. Степень инфильтрации воспалительными клетками цилиарного тела возросла. Усилилось полнокровие сосудов, определялись участки кровоизлияний. В цилиарном теле наблюдали диффузную инфильтрацию ткани лимфоцитами, моноцитами, единичными нейтрофилами, в области воспаления появились плазмоцитарные клетки. Клетки эпителия выглядели набухшими, с признаками вакуолизации, местами они были слущены. Эпителиальная выстилка разрушена, гомогенизирована. В плоской части цилиарного тела определялось изъязвление внутреннего ретинального слоя, была замечена инфильтрация клетками воспаления. В зрительном нерве выявлен очаг деструкции нервной ткани с массивным геморрагическим пропитыванием, кистозными расширениями, лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрацией, дистрофически измененными нейроцитами.

Пример. Кролику №9 породы шиншилла массой 2,15 кг через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД50 аденовируса типа 6, адаптированного к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи. На 7 и 21 день произвели забой животных и провели гистологические исследования удаленных глазных яблок. На 7-е сутки выявляли острый воспалительный процесс в цилиарном теле и зрительном нерве. В цилиарном теле наблюдали выраженный отек, диффузную воспалительную инфильтрацию, представленную нейтрофильными лейкоцитами, эозинофилами, моноцитами и лимфоцитами, местами наблюдали формирование абсцессов. Эпителий с признаками вакуолизации цитоплазмы, местами слущен. Одновременно в толще зрительного нерва, между нервными волокнами выявляли скопление отечной жидкости, очаги лимфоцитарной инфильтрации с примесью единичных нейтрофилов, а также периваскулярную инфильтрацию лимфоцитами и единичными лейкоцитами. В коллатеральных сосудах глазной артерии и вены зрительного нерва отмечено увеличение проницаемости их стенок, экссудация плазмы крови в периваскулярную зону и тканевые структуры. На 21-е сутки развитию увеита соответствовали следующие гистологические изменения. Степень инфильтрации воспалительными клетками цилиарного тела возросла. Усилилось полнокровие сосудов, имелись участки кровоизлияний. В цилиарном теле наблюдали диффузную инфильтрацию ткани клетками воспаления, также наблюдали появление плазмоцитарных клеток. Эпителиальные клетки выглядели набухшими, с признаками вакуолизации, местами слущены. Эпителиальная выстилка разрушена, гомогенизирована. В плоской части цилиарного тела определялось изъязвление внутреннего ретинального слоя, была замечена инфильтрация клетками воспаления. В зрительном нерве выявлен очаг деструкции нервной ткани с массивным геморрагическим пропитыванием, кистозными расширениями, лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрацией, дистрофически измененными нейроцитами.

Таким образом, предлагаемый способ моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, отсутствует травматическое повреждение оболочек глазного яблока и хрусталика.

Способ моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, характеризующийся тем, что через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50, при этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока, начиная с 7 суток после заражения.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и предназначено для изучения принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам эффлюксного белка-транспортера Pgp (гликопротеина-Р).

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной стоматологии, и касается моделирования деминерализации эмали зуба. Для этого на удаленный зуб фиксируют брекет.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования первичного билиарного цирроза. Для этого в просвет бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки и терминальный отдел подвздошной кишки крысы вводят по 0,08-0,12 мл 45-50% спиртового раствора пикрилсульфоновой кислоты с интервалом 5-10 минут.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано при моделировании хронической гнойной костной раны. Формирование костного дефекта проводят вдоль оси кости, помещают в него смесь культуры музейного штамма Staphylococcus Aureus №5 в количестве 40-45 млн KОЕ на 1 кг массы тела экспериментального животного и 0,1 мл стерильного кварцевого песка.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования диабетического макулярного отека. Для этого крысе вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Лабораторным животным через 9 недель после прекращения воздействия токсиканта проводят стимуляционную миографию.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого моделируют ишемию мышц голени, в том числе при одновременном дополнительном моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения изолированного неврита зрительного нерва. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине и тканевой инженерии, и может быть использовано для получения экстрацеллюлярных матриксов кровеносных сосудов малого калибра. Для этого на первом этапе тканей фрагмент кровеносного сосуда отмывают дистиллированной водой в течение 1 часа при температуре +4°С. Затем фрагмент помещают в 0,05% раствор трипсина и 0,02%-ной ЭДТА на 1 час при температуре +37°С. На третьем этапе проводят обработку в 0,075% растворе додецилсульфата натрия в течение 24 часов при температуре 26°С. Далее фрагмент помещают в 0,25%-ный раствор Тритон Х-100 на 24 часа при температуре 26°С. На четвертом этапе данный фрагмент обрабатывают раствором, содержащим РНКазу А 20 мкг/мл и ДНКазу I 200 мкг/мл, в течение 6 часов при температуре +37°С. При этом после каждого этапа обработки фрагмент кровеносного сосуда трижды промывают в фосфатно-солевом буферном растворе по 10 минут. Весь процесс обработки осуществляют при постоянном перемешивании растворов и одновременной вибрации, создаваемой вибромотором, который расположен на наружной стенке емкости. Способ позволяет повысить качество децеллюляризации кровеносных сосудов малого калибра, сохранить их целостность и ультраструктуру для последующей иммобилизации клеток реципиента. 2 пр., 6 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации. У крыс моделируют сахарный диабет путем интрабрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят крысиный VEGF 164 на 1-е, 3-и и 7-е сутки по 1 мкг, в суммарной дозе 3 мкг. Способ обеспечивает неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем изучать эффективность и определять целесообразность проводимой терапии этого заболевания. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования мелкоочаговых мозговых геморрагий у новорожденных крыс. Для этого новорожденных крыс в возрасте 3-х дней помещают в камеру и подвергают воздействию звука силой 70 дБ, частотой 110 Гц, на протяжении 60 минут. Способ обеспечивает развитие мелкоочаговых мозговых геморрагий в коре головного мозга у 100% новорожденных крыс, без разрыва крупных сосудов, что наиболее близко соответствует клинической картине мозговых геморрагий у новорожденных детей. 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для выявления психотропных свойств изучаемых веществ осуществляют моделирование эмоционально-физической стрессовой ситуации, достигаемой помещением животных в цилиндр с холодной водой. Регистрируют время решения и выполнения задачи покинуть цилиндр при помощи предлагаемых средств спасения (рейка, лестница и веревка), установленных в цилиндре. Рассчитывают процентную вероятность решения задачи. Осуществляют расчет индексов, характеризующих психоэмоциональное и моторно-двигательное воздействие изучаемого вещества по определенным математическим формулам. Способ является технически простым, финансово низкозатратным, имеет высокий уровень воспроизводимости, позволяет с низкими затратами времени и высокой долей вероятности определить психоседативное или психостимулирующее действие изучаемого вещества.1 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и может быть использовано для изучения вопросов патогенеза нефрогенной артериальной гипертензии и для скрининговых и детальных фармакологических исследований. Для моделирования ренопаренхиматозной артериальной гипертензии взрослым крысам-самцам массой производят химическое повреждение паренхимы почек путем введения 0,1 мл 4% параформальдегида в верхний полюс обеих почек. Способ обеспечивает в короткие сроки получение стойкого повышения артериального давления, высокую воспроизводимость результата, простоту выполнения процедуры, ее малую инвазивность, короткий реабилитационный период при формировании значимых морфологических и биохимических перестроек в органах-мишенях, аналогичных клиническим вариантам ренопаренхиматозной артериальной гипертензии. 2 табл., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. После этого проводят однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией. Через 90 минут проводят сосудистые пробы с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции. Способ позволяет изучать NO - не обусловленные механизмы защитного эффекта при коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней внутрибрюшинным введением L-нитроаргининметилового эфира в дозе 25 мг/кг. После чего на фоне данной модели с 14 по 20 день беременности вводят внутрижелудочно азитромицин в дозе 30 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает выраженную коррекцию эндотелиальной дисфункции в особых условиях патогенеза этого состояния у беременных самок при дополнительном устранении остро возникающих инфекционных заболеваний или обострения хронически протекающих инфекционных процессов, которые также могут приводить к формированию гестоза. 1 пр.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента. Для коррекции ишемии с первых суток эксперимента внутрижелудочно вводят L-норвалин в суточной дозе 10,0 мг/кг, каждые 46 часов в течение 7 суток эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы в эксперименте за счет стимуляции неоангиогенеза. 1 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого лабораторным животным на вторые сутки эксперимента моделируют ишемию мышц голени. Никорандил вводят внутрижелудочно в суточной дозе 1,3 мг/кг в 2 приема в первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы за счет стимуляции неоваскулогенеза.
Наверх