Способ диагностики рака молочной железы

Изобретение относится к медицине и иммунологии и представляет собой новый способ проведения диагностики, основанный на определении белковых молекул - антител - к специфичной и чувствительной комбинации опухоле-ассоциированных гликанов на фоне индивидуальных особенностей конкретного больного. Данное изобретение может найти применение в иммунологии и медицине для исследования и диагностики рака молочной железы. В способе диагностики рака молочной железы детектируют в крови человека антитела, направленные к следующим гликанам: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα, HOCH2(HOCH)4CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ с помощью микрочипа с нанесенными на него указанными гликанами и, по наличию в крови уровня антител выше порогового одновременно ко всем указанным гликанам, диагностируют рак молочной железы. Предлагаемый способ позволяет улучшить чувствительность и специфичность диагностики рака молочной железы. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Область техники

Изобретение относится к медицине и иммунологии, и представляет собой принципиально новый способ проведения диагностики, основанный на определении белковых молекул - антител - к специфичной и чувствительной комбинации опухоле-ассоциированных гликанов (сигнатуре) на фоне индивидуальных особенностей конкретного больного. Данное изобретение может найти применение в иммунологии и медицине для исследования и диагностики рака молочной железы.

Уровень техники

Рак молочной железы является одним из наиболее значимых заболеваний у женщин, характеризующийся высоким уровнем заболеваемости и являющийся ведущей онкологической патологией у женщин старше 40 лет. Раннее выявление рака молочной железы является социально значимой задачей современного здравоохранения.

На сегодняшний день диагностика рака молочной железы представляет собой комплексное обследование пациента, включающего в себя индивидуальный врачебный осмотр, а также инструментальные методы исследования: маммографию, ультразвуковое обследование, биопсия. К сожалению, в большинстве случаев заболевание диагностируется на довольно поздней стадии.

Важной составляющей диагностики является определение опухоль-ассоциированных антигенов в сыворотке крови пациента. Многочисленные исследования выявили множество антигенов, ассоциированных с раком молочной железы человека и характеризующих биологические особенности опухоли - пролиферативную активность, гормональную чувствительность, выраженность метастазирования. Однако до сих пор не найдено ни одного маркера, специфичного только для опухоли.

Например, СА15-3, широко используется при наблюдении за течением заболевания и возникновением рецидивов, зарекомендовавший себя как высокоспецифичный маркер отдаленных метастазов со специфичностью 96% (I. P. Tomlinson, A. Whyman, J. A. Barrett, J. K. Kremer. Tumour marker СА15-3: possible uses in the routine management of breast cancer Eur J Cancer. 1995 Jun; 31A(6): 899-902). Однако он не обладает достаточной чувствительностью и специфичностью для диагностики на ранней стадии рака (не более 60% (М.Л. Алексеева Е.В. Гусарова С.М. Муллабаева Т.С. Понкратова. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования. Пробл. Репрод. 3, 65-79 (2005)). Группа онкофетальных антигенов - раковоэмбриональный антиген (РЭА) и тканевый полипептидный антиген (ТРА) - также не являются специфичными к опухолевым клеткам, их определение используют только для оценки прогноза и ранней диагностики отдаленных метастазов. Сочетанное определение уровня РЭА, ТРА и СА15-3 в крови больных раком молочной железы увеличивает чувствительность и специфичность оценки эффективности лечения и прогноза до 90% (A. Nicolini, С. Colombini, L. Luciani, A. Carpi, L.Giuliani. Evaluation of serum СА15-3 determination with CEA and ТРА in the postoperative follow-up of breast cancer patients. Br. J. Cancer. 64(1), 154-158 (1991)), но не диагностики.

В клинической практике довольно часто наблюдаются случаи, когда уровень онкомаркеров был в границах нормы, несмотря на наличие злокачественной опухоли у пациента. Такая ситуация нередка при начальных стадиях развития опухоли. В связи с этим, онкомаркеры обычно используются только при профилактических исследованиях пациентов, входящих в группы риска развития новообразований, а также при мониторинге установленного лечения.

Благодаря работе Хакомори (S. Hakomori Tumor-associated carbohydrate antigens. Annu Rev Immunol. 2, 103-126 (1984)), практический интерес онкологов вызывает класс гликановых антигенов, известных как опухоле-ассоциированные углеводные антигены (TACAs), присутствующие на поверхности клеток, компонентах тканей и в кровотоке. TACAs детектируются на всех злокачественных новообразованиях, являясь результатом онкологической трансформации и играя роль ключевых молекул при метастазировании. Не последнюю роль при онкотрансформации играют анти-гликановые антитела (Е.Р. Smorodin, О.А. Kurtenkov, B.L. Sergeyev, K.E. Kodar, V.I. Chuzmarov, V.P. Afanasyev. Postoperative change of anti-Thomsen-Friedenreich and Tn IgG level: the follow-up study of gastrointestinal cancer patients. World J. Gastroenterol. 14(27), 4352-4358 (2008), Schwartz-Albiez R. Naturally occurring antibodies directed against carbohydrate tumor antigens. Adv. Exp. Med. Biol. 750, 27-43 (2012)). Основным инструментом для изучения анти-гликановых антител является гликочип или гликановый эррей (O. Blixt, et al.. Printed covalent glycan array for ligand profiling of diverse glycan binding proteins Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101 (49), 17033-17038 (2004)). С помощью этого метода были исследованы профили антител здоровых доноров (М.Е. Huflejt, M. Vuskovic, D. Vasiliu, H. Xu, P. Obukhova, N. Shilova, A. Tuzikov, O. Galanina, B. Arun, K. Lu, N.V. Bovin. Anti-carbohydrate antibodies of normal sera: findings, surprises and challenges. Mol. Immunol. 46(15), 3037-3049 (2009)), а также больных раком, например, лимфомой Ходжкина (С.Н. Lawrie, Т. Marafloti, C.S. Hatton, S. Dimhofer, G. Roncador, P. Went, A. Tzankov, S.A. Pileri, K. Pulford, A.H. Banham. Cancer-associated carbohydrate identification in Hodgkin's lymphoma by carbohydrate array profiling. Int. J. Cancer. 118, 3161-3166 (2006)) и раком яичника (F. Jacob, D.R. Goldstein, N.V. Bovin, T. Pochechueva, M. Spengler, R. Caduff, D. Fink, M. Vuskovic, М.Е. Huflejt, V. Heinzelmann-Schwarz. Serum antiglycan antibody detection of nonmucinous ovarian cancers by using a printed glycan array. Int. J. Cancer. 130(1), 138-146 (2012)). [1]. Подход, описанный в статье [1] является ближайшим аналогом данного изобретения.

Согласно цитированной статье [1], поиск нового поколения маркеров немуцинозного рака яичника осуществляли с помощью гликанового эррея, содержащего 203 олигосахаридные структуры. В исследовании участвовали 24 здоровых донора и 33 больных раком яичника. Посредством кластерного анализа был выявлен паттерн антител к специфическим углеводным структурам, состоящий из 10 гликанов. Найденный паттерн позволил авторам [1] достоверно различить здоровых доноров и раковых больных (чувствительность и специфичность составили 79,2 и 84,8%, соответственно). Однако данный подход лишь незначительно улучшил характеристики классической тест-системы, основанной на параллельном определении опухолевого маркера СА125 (методом иммуноферментного анализа). Подобных работ в области рака молочной железы не проводилось.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является создание специфичного и чувствительного способа проведения диагностики рака молочной железы.

Техническим результатом изобретения является специфичная и чувствительная комбинация опухоле-ассоциированных гликанов.

Технический результат достигается способом диагностики рака молочной железы, заключающимся в том, что в крови человека детектируют антитела, направленные к следующим гликанам: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα, НОСН2(НОСН)4CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ с помощью микрочипа с нанесенными на него указанными гликанами и, по наличию в крови уровня антител выше порогового одновременно ко всем указанным гликанам, диагностируют рак молочной железы.

Настоящим изобретением предлагается способ диагностики рака молочной железы, основанный на детектировании углевод-связывающих белковых молекул - антител к комбинации углеводных лигандов (гликанов) с помощью микрочипа. Данные антитела детектируются в исследуемых образцах сыворотки крови одновременно при помощи вторичных антител, содержащих флуоресцентную метку, или любой другой системой визуализации. Лиганды представляют собой олигосахариды, и/или полисахариды, и/или пептиды, и/или гликопептиды, и/или биотин. Один чип содержит множество индивидуальных лигандов. Часть из них служат в качестве положительного и отрицательного контролей работы микрочипа.

Эффективность использования комбинации маркеров была показана в работе (R. Radpour, Z. Barekati, C. Kohler, Q. Lv, N. Bürki, C. Diesch, J. Bitzer, H. Zheng, S. Schmid, X.Y. Zhong. Hypermethylation of tumor suppressor genes involved in critical regulatory pathways for developing a blood-based test in breast cancer. PLoS One. 6(1), el 6080. (2011)) при разработке эпигенетического теста на рак молочной железы в крови пациентов. Тест основан на фиксировании изменений в метилировании участков генов-супрессоров опухолевого роста при раке молочной железы. Авторы показали, что чувствительность и специфичность диагностики существенно возрастает, если использовать комбинацию из 8 генов вместо одного, можно увеличить чувствительность и специфичность до уровня более, чем 90%. Однако, как отмечают авторы (Van De Voorde L, Speeckaert R, Van Gestel D, Bracke M, De Neve W, Delanghe J, Speeckaert M. DNA methylation-based biomarkers in serum of patients with breast cancer. Mutat. Res. 751(2), 304-325 (2012)), следует с осторожностью относится к эпигенетическим маркерам, таким как метилирование ДНК, поскольку они достаточно сильно подвержены влиянию нормальных физиологических процессов, таких как, например, старение.

В настоящем изобретении тот же принцип объединения нескольких маркеров в диагностическую комбинацию лигандов (сигнатуру) приложен для диагностики рака молочной железы. По сравнению с указанным выше подходом [1] подобное объединение принципиально улучшило чувствительность и специфичность диагностики, поскольку существующие на сегодняшний день биомаркеры рекомендованы к использованию только с целью оценки эффективности лечения и профилактических исследований, но не для диагностики.

Далее, изобретение иллюстрируется ссылками на рисунки, а также примерами, которые приводятся исключительно с целью иллюстрации и пояснения сущности заявленного изобретения, но которые не предназначены для ограничения объема притязаний.

Список использованных сокращений

ROC-анализ - анализ взаимодействия чувствительности и представительности

AUC - площадь под ROC-кривой, показатель точности диагностического теста;

CMG - диглицил-Н-карбоксиметилглицин;

BovSlOG - Ser-Ala-Pro-Asp-Thr-Arg-Pro-Ala-Pro-Gly-NH2;

ИФБ - 0,1 М изотонический фосфатный буфер (0,01 М Na2HPO4, 0,01 М NaH2PO4, 0,138 М NaCl и 0,0027 М KCl, рН 7,4).

ИФБ - 1%, 0,1%, 0,05% - ИФБ, содержащий 1, 0,1 и и 0,05% Tween20, соответственно;

БСА - бычий сывороточный альбумин;

Ig(G+M+A) - иммуноглобулины классов G, M, A.

Фиг.1 демонстрирует результаты ROC-анализа эффективности диагностики рака молочной железы, основанной на использовании сигнатуры из 15 гликанов. Рядом с кривой приведена величина порогового значения с соответствующими показателями специфичности и чувствительности, а также величина AUC с доверительными интервалами.

Осуществление изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает способ проведения диагностики рака молочной железы, основанный на определении белковых молекул - антител - к специфичной и чувствительной комбинации опухоле-ассоциированных гликанов (сигнатуре) на фоне индивидуальных особенностей конкретного больного.

Способ диагностики рака молочной железы по данному изобретению заключается в одновременном детектировании углевод-связывающих белковых молекул - антител D в исследуемых образцах сыворотки крови к сигнатуре из углеводных лигандов, специфичных для рака молочной железы, с использованием микрочипов. Антитела детектируются одновременно при помощи вторичных антител, содержащих флуоресцентную метку, либо любой другой системы визуализации антител.

В качестве лигандов микрочипа используются амино-спейсерированные олигосахариды, а также полисахариды (наличие спейсера у последних не обязательно), а также вещества неуглеводной природы, такие как биотин и пептиды. Лиганды, не входящие в сигнатуру, находятся на чипе в качестве положительного и отрицательного контролей.

Выбор гликанов, включаемых в сигнатуру, проводился на основании непараметрического теста Уилкоксона-Манна-Уитни (WMW) для дискриминации групп здоровых доноров и пациентов с раком молочной железы. На основании этого теста гликаны ранжировались, а затем последовательно суммировались в сигнатуру; при этом каждый последующий добавляемый гликан не должен был ухудшать точность теста.

При использовании в качестве маркера только одного гликана - Manβ1-4GlcNAcβ - точность теста была лишь средней (AUC=0,693), при объединении уже двух гликанов точность теста возрастала до 0,737, что уже является хорошим показателем. При использовании сигнатуры из 15 гликанов величина AUC составляла - 0,888, что соответствует очень хорошей точности теста.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет диагностировать рак молочной железы с использованием сигнатуры из 15 гликанов с точностью 88,8% (доверительный интервал 82,4-95,2%) и показателями чувствительности и специфичности 80 и 88%, соответственно. Соответствующие результаты ROC-анализа приведены на фиг.1. Регистрируемая величина - «отклик сигнатуры» - рассчитывается как сумма сигналов с проявленного биочипа от перечисленных ниже 15 гликанов (знак суммирования приведен после каждого гликана), преобразованных как описано в Примере: 1. Manβ1-4GlcNAcβ (+), 2. Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα (+), 3. НОСН2(НОСН)4CH2NH2 (+), 4. GlcAβ (-), 5. Galα (+), 6. 6-O-Su-GlcNAcβ (-), 7. GalNAcβ1-3Galβ (-), 8. 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ (+), 9. GlcAβ1-3Galβ (+), 10. Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ (+), 11. GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα (-), 12. Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα (-), 13. Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ (+), 14. Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ (+), 15. Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ (+).

Эффективность найденной сигнатуры протестировали на группе из 50 доноров («Заболевание отсутствует») и 60 пациентов с раком молочной железы («Заболевание присутствует»). Для всех пациентов диагноз был ранее подтвержден хирургическими методами. Полученные результаты приведены в Таблице. Как видно из Таблицы, часть результатов является ложноположительными (доноры, для которых тест показал положительный результат), а часть - ложноотрицательными (пациенты, для которых тест показал отрицательный результат), что, однако, не является критическим и соответствует очень хорошей точности разработанного диагностического теста.

Таблица
Проверяемый диагностический тест Заболевание
присутствует отсутствует
Диагностика рака молочной железы Тест положителен (рак есть) 49 9
Тест отрицателен (рака нет) 11 41
Всего 60 50

Приведенный ниже пример предназначен не для ограничения притязаний, а исключительно для иллюстрации отдельных воплощений настоящего изобретения.

Пример. Использование микрочипа для диагностики рака молочной железы.

Для конструирования чипа использовались следующие гликаны и другие лиганды.

1. Спейсерированные олигосахариды: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα, НОСН2(НОСН)4CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ.

2. Гликопептид GlcNAcβ1-[НООС(СН3)СН]-3-O-GlcNAcβ-L-аланил-D-изоглутаминил-L-лизин.

3. Полисахариды: Escherichia coli 052, 058, 073.

4. Биотин в виде производного с 6-аминогексановым спейсером.

5. Пептиды BovS10G и CMG.

Спейсерированные гликаны или другие лиганды растворяли в 300 мМ фосфатном буфере, рН 8,0, содержащем 0.005% Tween 20, в концентрации 50 мкМ и наносили их на поверхность N-гидроксисукцинимид-активированных слайдов Н (Schott Nextenon, Германия) с помощью устройства для контактной печати OmniGrid II (Digilab, США), как описано в работе (Blixt О., et al., Printed covalent glycan array for ligand profiling of diverse glycan binding proteins, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, v.101 (49), p.17033-17038). После последовательного нанесения всех лигандов, чип выдерживали в течение 1 ч при комнатной температуре и относительной влажности 80%, после чего блокировали оставшиеся непрореагировавшие активированные группы поверхности 100 мМ раствором борной кислоты (Хеликон, Россия), содержащим 25 мМ этаноламин (Merck, США) и 0,2% Tween-20, рН8,5. Заблокированные микрочипы промывали бидистиллированной водой и высушивали центрифугированием.

В исследовании участвовали 50 здоровых доноров и 60 пациентов с хирургически подтвержденным раком молочной железы.

Анализ сыворотки крови доноров и пациентов осуществляли следующим образом:

Чипы выдерживали в течение 15 мин в ИФБ, содержащем 0,1% Tween-20 (ИФБ - 0,1%), затем прибавляли 200 мкл исследуемой сыворотки крови донора или пациента, разбавленной в 15 раз с помощью ИФБ - 1%, содержащим 1% БСА и выдерживали на шейкере при относительной влажности 80% в течение 1 ч при 37°С. Затем чипы промывали ИФБ-0,05% и прибавляли 200 мкл раствора биотинилированных антител козы против человеческих иммуноглобулинов Ig(G+M+A) (ThermoSci, США), разведение 1:200 в ИФБ - 0,1%, содержащем 1% БСА. После инкубации на шейкере при относительной влажности 80% в течение 1 ч при 37°С чип промывали ИФБ - 0,05% и прибавляли раствор стрептавидина, меченого флуоресцентным красителем Alexa555, разведение 1:1000 в ИФБ - 0,1%. После инкубации чипов в течение 40 мин при комнатной температуре в отсутствие света, их промывали сначала ИФБ - 0,05%, затем бидистиллированной водой и высушивали центрифугированием. Изображения получали с помощью конфокального сканера ProScanArray Gx (PerkinElmer, США) с разрешением 5 мкм (мощность лазера 90%). Полученные файлы просматривали и обрабатывали с помощью программного обеспечения ScanArray Express 3.0 и Microsoft Excel.

Для расчета отклика сигнатуры полученные с чипов сигналы - относительные флуоресцентные единицы - сначала нормализовали по приведенным ниже формулам для линейной нормализации:

где и xij - необработанные и нормализованные значения интенсивностей сигнала для пациента i и гликана j, а li и si - параметры положения и масштабирования.

Параметры li и si определяли для каждого пациента (донора) независимо:

где J - набор индексов колонок, которые соответствуют гликанам, а также контрольным соединениям.

После чего данные подвергали процедуре нормализующего преобразования Бокса-Кокса (Box G.E.P., Сох D.R., An analysis of transformations. J R Stat Soc, 1964. В 26: p.211-252) с учетом отрицательных значений данных (согласно рекомендациям авторов (John J. A., Draper N. R., An alternative family of transformations. Appl Stat, 1980. 29: p.190-197)):

где λ - степень параметра преобразования, равная 0,2.

Отклик сигнатуры рассчитывали как сумму преобразованных сигналов от перечисленных ниже 15 гликанов (знак суммирования приведен после каждого гликана): 11. Manβ1-4GlcNAcβ (+), 2. Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα (+), 3. НОСН2(НОСН)4CH2NH2 (+), 4. GlcAβ (-), 5. Galα (+), 6. 6-O-Su-GlcNAcβ (-), 7. GalNAcβ1-3Galβ (-), 8. 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ (+), 9. GlcAβ1-3Galβ (+), 10. Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ (+), 11. GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα (-), 12. Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα (-), 13. Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ (+), 14. Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ (+), 15. Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ (+).

Если полученная величина была выше порогового значения в -2,3, то результат анализа считали положительным (рак есть), если ниже - результат отрицательный (рака нет).

Способ диагностики рака молочной железы, заключающийся в том, что в крови человека детектируют антитела, направленные к следующим гликанам: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα, НОСН2(НОСН)4CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ с помощью микрочипа с нанесенными на него указанными гликанами и по наличию в крови уровня антител выше порогового одновременно ко всем указанным гликанам диагностируют рак молочной железы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики вторичной иммунологической недостаточности при туберкулезе легких. До назначения специфической химиотерапии проводят иммунологическое исследование периферической крови больных туберкулезом легких и определяют клеточные, гуморальные и молекулярно-генетические параметры иммунного статуса пациента.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, эндокринологии, диабетологии, лабораторной диагностике. Способ диагностики аутоиммунных вариантов сахарного диабета, причем аутоиммунный вариант сахарного диабета диагностируется на основании сравнения показателей выработки фактора некроза опухоли альфа (ФНОα) (пкг/мл) в надосадочной жидкости после культивирования лимфоцитов, полученных из пробы крови пациента в условиях стимуляции аутоантигеном инсулином.
Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии. Способ обеспечивает повышение точности оценки эффективности лечения у больных язвенным колитом (ЯК) в достижении клинической ремиссии после четырехнедельного курса лечения.
Изобретение относится к области ветеринарной протозоологии и касается способа получения антигена для серологической диагностики анаплазмоза мелкого рогатого скота.
Настоящее изобретение относится к медицине и направлено на прогнозирование эффективности лечения идиопатического бесплодия у мужчин с ожирением препаратами - ингибиторами ароматазы.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки трансаминирования в синцитиотрофобласте. Сущность способа: гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы.

Изобретение относится к клинической медицине, а именно к способу диагностики туберкулезного инфицирования. Сущность способа состоит в том, что осуществляют взятие периферической крови пациента, проводят инкубацию цельной крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, и без них, центрифугирование проб с отделением плазмы, определение в супернатантах содержание IL-2 и диагностирование наличия заболевания по разнице его концентраций в пробах по сравнению с выбранной пороговой величиной.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии, и может быть использовано для определения активности туберкулезного процесса. Для этого проводят инкубацию цельной крови пациента крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, центрифугирование пробы с отделением плазмы и определение в супернатантах содержания антигениндуцированного гамма-интерферона (IFNγ), антигениндуцированного интерлейкина - 6 (IL-6) и спонтанной продукции трансформирующего ростового фактора-α (TGFα).

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложено моноклональное антитело, которое специфически связывает сульфатиды и сульфатированные протеогликаны, а также фармацевтическая композиция для лечения атеросклероза и набор реагентов для диагностики атеросклеротических повреждений, применение антитела для получения лекарственного средства для лечения атеросклероза и в качестве вакцины.

Изобретение предназначено для определения аутоантител, специфичных к мускариновому М2-рецептору, которое может быть использовано для диагностики идиопатических нарушений сердечного ритма.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и нефрологии, и может быть использовано для диагностики мочекаменной болезни (уролитиаза). Сущность способа: исходную пробу мочи разделяют на два одинаковых образца, получают гистограммы распределения частиц по размерам, по которой определяют процентное содержание олигомерной формы Т&НЕ(7) белка Тамма-Хорсфалла и сравнивают гистограммы образцов. В качестве реагента для идентификации белка Тамма-Хорсфалла используют моноклональные антитела, вступающие с белком Тамма-Хорсфалла в имунно-афинную реакцию. Из второго образца извлекают белок Тамма-Хорсфалла Т&НЕ(28) и в обоих образцах мочи определяют содержание олигомерной формы Т&НЕ(28) белка Тамма-Хорсфалла в свободном состоянии и в агрегатах с микрокристаллами оксалатов (в %). Затем рассчитывают соотношение выявленных олигомерных форм по формулам: С1=Т&НЕ(28)А/Т&НЕ(7) и C2=T&HE(28)F/T&HE(7). При соотношении С1>1.5 и любом значении соотношения С2 диагностируют уролитиаз, при соотношениях С1<0.1 и С2<1.81 диагностируют отсутствие заболевания, а при соотношениях С<1,5 и С2>1.81 пациента относят к группе риска развития уролитиаза. Способ позволяет проводить разграничение обследуемых не только на группы больных уролитиазом и здоровых, но и выделить группу риска развития уролитиаза. Способ обладает высокой точностью, специфичностью и чувствительностью, не требует больших трудозатрат и времени исследования. 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью у впервые выявленных больных туберкулезом легких (ТБ). Для этого до назначения противотуберкулезной химиотерапии в крови пациента определяют количество CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов. Вычисляют значения линейных классификационных функций по уравнениям: d1=-14,0015-0,0626×x1+0,5181×x2+2,4285×x3+0,2255×x4 и d2=-22,6954-0,1710×x1+0,6689×x2+3,1202×x3+0,3229×x4, где x1, x2, x3, x4 - количество субпопуляций CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов, соответственно. При d1<d2 прогнозируют туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя. Использование данного способа позволяет прогнозировать вариант течения ТБ с вероятностью 83,3% и позволяет применять меры коррекции лечебного воздействия. 5 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложено антитело, специфичное к TENB2, содержащее легкую и тяжелую цепи. Тяжелая цепь содержит замену на свободный (реакционноспособный) цистеин А121С, что соответствует А114С (нумерация по Кабату) или А118С (нумерация по Eu). Предложены варианты конъюгата для лечения рака предстательной железы, содержащего антитело, ковалентно связанное с ауристатином, в том числе посредством линкера. Описаны: фармацевтическая композиция для лечения рака предстательной железы, использующая в качестве активного начала антитело или его конъюгат; изделие для лечения рака предстательной железы на основе такой композиции. Предложены: способ определения белка TENB2 в образце - на основе антитела, а также анализ для выявления клеток рака предстательной железы у млекопитающего и способ ингибирования клеточной пролиферации - на основе конъюгата антитела и ауристатина. Описан способ получения конъюгата антитела (Аb) и ауристатина (D) с формулой Ab-(L-D)p, где р равно от 1 до 4, а L - линкер. Использование изобретения обеспечивает конъюгаты с повышенной стабильностью в сыворотке по сравнению с такими же конъюгатами без замены А121С в антителе, что может найти применение в медицине. 9 н. и 24 з.п. ф-лы, 18 ил., 2 табл., 4 пр.

Группа изобретений относится к области аналитической химии и может быть использована для детектирования целевых компонентов в жидком образце. Картридж (100) для детектирования целевых компонентов в жидком образце содержит: камеру (SC) для образцов; по меньшей мере, два резервуара (131 и 132), заполненные магнитными частицами (MP, MP'), которые специфичны по отношению к разным целевым компонентам; по меньшей мере, две чувствительные зоны (121 и 122) для детектирования магнитных частиц и/или целевых компонентов, причем магнитные частицы (MP, MP') разных резервуаров преимущественно достигают разных чувствительных зон, мигрируя в образце, заполняющем камеру для образцов, под влиянием магнитного (В) поля активации. Группа изобретений относится также к способу детектирования целевых компонентов с помощью указанного картриджа, устройству для детектирования целевых компонентов, содержащему указанный картридж, генератор магнитного поля и блок датчика детектирования внутри картриджа и к использованию указанного устройства для молекулярной диагностики, биологического анализа образцов или химического анализа образцов. Группа изобретений позволяет осуществить множественные анализы в одной камере без перекрестных реакций. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 7 ил.

Изобретение относится к области медицине, а именно онкологии, и может быть использовано для оценки радиочувствительности рака верхних дыхательных путей. Для этого определяют частоту гемопоэтических стволовых клеток с иммунофенотипом CD34+CD45low среди лимфоцитов периферической крови на стадиях рака Т3 или Т4 до лечения и сравнивают с ее дискриминационным уровнем 6,0×10-4. При значениях более 6,0×10-4 прогнозируют высокую радиочувствительность опухоли, а при значениях менее или равно 6,0×10-4 прогнозируют низкую радиочуствительность опухоли. Использование данного способа позволяет прогнозировать радиочуствительность злокачественных новообразований на облучение для оценки показаний к проведению лучевой терапии больных раком верхних дыхательных путей на стадии Т3 или Т4. 2 пр., 3 ил., 2 табл.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается прогноза исходов химиолучевой терапии плоскоклеточных карцином головы и шеи. Сущность способа: проводят иммуноферментное исследование уровня ТИМП-1 и ТИМП-2 в сыворотке крови, дополнительно определяют размер первичной опухоли согласно международной классификации TNM, степень дифференцировки опухоли, возраст больного и рассчитывают дискриминантные функции по уравнениям: Y1=-138,748+Х1*15,963+Х2*(-4,803)+Х3*0,018+Х4*2,319+Х5*1,188 Y2=-159,545+Х1*17,918+Х2*(-4,266)+Х3*0,028+Х4*2,427+Х5*1,242, где X1 - размер первичной опухоли согласно международной классификации TNM; Х2 - степень дифференцировки опухоли; Х3 - сывороточный уровень ТИМП-1, нг/мл; Х4 - возраст больного, лет; Х5 - сывороточный уровень ТИМП-2, нг/мл. Если Y1>Y2, то прогнозируют высокую вероятность хорошего исхода ХЛТ. Если Y1<Y2, то прогнозируют вероятность отсутствия эффекта ХЛТ. Способ направлен на повышения точности и информативности, а также эффективности лечения больных злокачественными новообразованиями головы и шеи. 2 пр.

Настоящее изобретение относится к способам диагностики фиброза печени у субъекта, включающим определение уровней экспрессии плазминогена урокиназного типа, матричной металлопротеиназы 9 и β-2-микроглобулина, вычисление на их основании балльной оценки и постановку диагноза. Также настоящее изобретение относится к набору для диагностики фиброза печени, содержащему первое антитело, специфически связанное с активатором плазминогена урокиназного типа (uРА), второе антитело, специфически связанное с матричной металлопротеиназой 9 (ММР9), и третье антитело, специфически связанное с β-2-микроглобулином (β-2-MG). 6 н. и 11 з.п. ф-лы, 33 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области микробиологии и молекулярной генетики и касается рекомбинантного полипептида А2, ДНК, его колирующей, штамма продуцирующего полипептид А2 и способов использования такого рекомбинантного полипептида. Представленный рекомбинантный полипептид А2, характеризуется аминоксилотной последовательностью из 346 аминокислот, в которой первые 13 аминокислот кодируются последовательностью плазмиды pQE 32 и ковалентно связаны с последующими 333 аминокислотами, кодируемыми последовательностью HAS-связывающего фрагмента хромосомной ДНК штамма DG 13 стрептококков группы G-CTG. Представленная группа изобретений может быть использована в диагностике, например, при создании тест-системы по определению микроальбуминурии - основного лабораторного критерия доклинической стадии диабетической нефропатии, а также в качестве реагента для выделения человеческого сывороточного альбумина аффинной хроматографией и для освобождения сыворотки крови от HAS, что позволит определять другие белки, присутствующие в сыворотке в более низких концентрациях. 7 н. и 2 з.п. ф-лы, 11 ил., 1 табл., 9 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности использования однократного курса ультразвукового кавитационного орошения полости матки у женщин с хроническим эндометритом. Для этого определяют в сыворотке крови концентрацию интерферона-гамма (IFN-γ) и интерлейкина 6 (IL-6) до проведения курса лечения. Вычисляют прогностический индекс (PI) по формуле: PI=-0,04X1+0,40X2-1,89, где X1 - концентрация IFN-γ, пг/мл; Х2 - концентрация IL-6, пг/мл. При значении PI более 0 делают заключение об эффективном использовании однократного курса ультразвукового кавитационного орошения полости матки, а при значении PI менее 0 прогнозируют его малоэффективное использование. Использование данного способа позволяет своевременно выявить группу женщин, у которых применение однократного курса ультразвукового кавитационного орошения полости матки малоэффективно, что дает возможность определить тактику ведения этих пациенток и за счет дифференцированного подхода повысить результативность лечения до 91%. 4 пр.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для определения функциональной активности компонента C3 комплемента человека. В лунках микропанели сорбируют тромбин, вносят анализируемую пробу, содержащую компонент C3 комплемента человека с неизвестной активностью, проводят инкубацию в присутствии этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА), выливают содержимое лунок, вносят конъюгат фермента с антителами против компонента C3 человека и субстрат этого фермента. Расчет активности компонента C3 проводят по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор содержит плоскодонную микропанель с сорбированным тромбином, конъюгат фермента с антителами к компоненту C3 комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови с известной активностью C3 в качестве стандарта. Предложенная группа изобретений позволяет определять функциональную активность компонента C3 комплемента человека без необходимости активации всей системы комплемента и обладает хорошей воспроизводимостью результатов. 2 н.п. ф-лы. 1 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и иммунологии и представляет собой новый способ проведения диагностики, основанный на определении белковых молекул - антител - к специфичной и чувствительной комбинации опухоле-ассоциированных гликанов на фоне индивидуальных особенностей конкретного больного. Данное изобретение может найти применение в иммунологии и медицине для исследования и диагностики рака молочной железы. В способе диагностики рака молочной железы детектируют в крови человека антитела, направленные к следующим гликанам: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6GalNAcα, HOCH24CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ с помощью микрочипа с нанесенными на него указанными гликанами и, по наличию в крови уровня антител выше порогового одновременно ко всем указанным гликанам, диагностируют рак молочной железы. Предлагаемый способ позволяет улучшить чувствительность и специфичность диагностики рака молочной железы. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Наверх