Способ моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации


 


Владельцы патента RU 2504844:

Государственное бюджетное учреждение "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ Академии наук Республики Башкортостан" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации. У крыс моделируют сахарный диабет путем интрабрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят крысиный VEGF 164 на 1-е, 3-и и 7-е сутки по 1 мкг, в суммарной дозе 3 мкг. Способ обеспечивает неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем изучать эффективность и определять целесообразность проводимой терапии этого заболевания. 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания модели патологического процесса неоваскуляризации макулярной зоны сетчатки на фоне сахарного диабета в экспериментальной офтальмологии.

Известен способ создания экспериментальной модели инсулинозависимого сахарного диабета путем однократного внутрибрюшинного введения аллоксана гидрата экспериментальным животным в дозе 170 мг/кг. Аллоксан, применяемый в моделировании сахарного диабета, генерирует токсичные свободные радикалы, повреждающие В-клетки островков Лангерганса, клетки почек, печени, легких, а также адипоциты (Szkudelski Т. The mechanism of alloxan end streptozotocin action in В cells of the rat pancreas // Physiol. Res. - 2001. - №50. - P.536-546.). При аллоксановом диабете возникает окислительный стресс в жировой ткани, характеризующийся увеличением содержания в ней продуктов липидной пероксидации, нарушением тиолдисульфидного обмена. Активация перекисного окисления липидов и снижение антиоксидантного потенциала системы глутатиона в жировой ткани крыс при экспериментальном диабете может приводить к стимуляции спонтанного липолиза в адипоцитах и возникновению инсулинорезистентности (Иванов В.В. и др. Перекисное окисление липидов и система глутатиона в жировой ткани крыс с аллоксановым диабетом // Бюллетень СО РАМН. - 2010. - 30, №6. - С.101-104.). При моделировании сахарного диабета в эксперименте, патологические изменения на глазном дне не появляются, т.к. активируется гематоофтальмический барьер. Кроме того, для возникновения процесса пролиферации в стекловидном теле на фоне сахарного диабета требуется до 2 лет, что существенно затрудняет проведение эксперимента. Эти факторы приводят к необходимости дополнительного воздействия на сетчатку на фоне системного сахарного диабета.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ моделирования неоваскуляризации сетчатки и зрительного нерва у кроликов, заключающийся в том, что кроликам проводят интравитреальное введение водного раствора рекомбинантного человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста в объеме 0,05-0,1 мл, причем дозу указанного средства вводят дробно: на 1 и 3 сутки эксперимента доза составляет 3 мкг, на 7 и 11 сутки - 1,5 мкг, на 15 сутки - 1,0 мкг и на 24 сутки - 5,0 мкг [патент RU 2408083, 2010 г.]. Способ обеспечивает последовательность развития изменений на глазном дне при четкой зависимости от вводимой дозы, что позволяет проследить все этапы патологического процесса, приводящего к новообразованию сосудов заднего отдела глаза. Однако изменения в сетчатке связаны с поражением на локальном уровне. Данная модель не является этиологической для моделирования патологического процесса, связанного с нарушением общего обмена, гипергликемией.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка достоверного, технически простого в выполнении метода моделирования поражения макулярной области с неоваскуляризацией сетчатки на фоне экспериментального сахарного диабета.

Технический результат при использовании изобретения - развитие диабетической неоваскуляризации, этиотропность патологических изменений на глазном дне с общими эндокринными нарушениями.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе моделирования диабетической неоваскуляризации макулярной области сетчатки, включающем введение в стекловидное тело глаза экспериментального животного в качестве токсического агента Vascular endothelial growth factor (VEGF) дробно на 1, 3 и 7-е сутки, согласно изобретению в качестве экспериментального животного используют крысу, причем предварительно в брюшную полость вводят аллоксан в дозе 15,0 мг/100 г веса, через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета в качестве VEGF вводят по 1 мкг крысиного VEGF 164 в суммарной дозе 3 мкг.

Выбор данного вида животных обусловлен тем, что кровоснабжение сетчатки крысы более близко к человеку, чем кровоснабжение глаза кролика, а также большей экономичностью модели. Введение крысиного VEGF 164 через 6,5 недель после развития экспериментального сахарного диабета обеспечивает формирование модели диабетической неоваскуляризации, этиотропность патологических изменений на глазном дне с общими эндокринными нарушениями. Таким образом, сочетание в одной модели двух факторов (экспериментального сахарного диабета и интравитреального введения VEGF 164) дает развитие стойкой диабетической неоваскуляризации. Дробность введения обеспечивает последовательность развития изменений на глазном дне.

Предлагаемый способ моделирования диабетической неоваскуляризации заключается в предварительном моделировании сахарного диабета и последующем введении в стекловидное тело крысиного VEGF (Vascular endothelial growth factor) 164 по методике интравитреального доступа. Сахарный диабет воспроизводят после 24 ч голодания путем внутрибрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета каждому животному под эфирным наркозом выполняют интравитреальные инъекции: через плоскую часть цилиарного тела на расстоянии 1 мм от лимба в нижне-наружном секторе вводят крысиный VEGF 164 в суммарной дозе 3 мкг, дробно по 1 мкг на 1-е, 3 и 7 сутки. Для контроля проводится непрямая офтальмоскопия на 3-и, 7-е и 14-е сутки после инъекции в условиях медикаментозного мидриаза (инсталляции S.Tropicamidi 1%) и гистологические исследования на 1-, 3-, 7-, 14-й день. Методика апробирована на 112 крысах-самцах породы Wistar весом 200 г. Животных выводили из эксперимента методом воздушной эмболии после введения в наркоз на 3-й, 7-е и 14-е сутки, глаза энуклеировали (согласно приказу Минвуза СССР №724 от 13.11.1984). Для морфологического исследования на микротоме готовили серийные срезы толщиной 7-10 мкм. Окраску гистологических срезов осуществляли гематоксилин-эозином.

В результате совмещения модели сахарного диабета и неоваскуляризации сетчатки с развитием отека определяет появление новой патогенетической параллели с развитием нозологии, идентичной патологии сетчатки при диабете. В отличии от локального воздействия VEGF без системных нарушений, предложенная модель определяет неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем определять целесообразность проводимой терапии.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующим примером: 3 крысам-самцам породы Wistar, весом 200 грамм воспроизводился сахарный диабет после 24 ч голодания путем внутрибрюшинного введения аллокеана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета животному под эфирным наркозом через плоскую часть цилиарного тела вводился крысиный VEGF 164 на расстоянии 1 мм от лимба в нижне-наружном секторе. Проводилось 3 инъекции препарата: на 1-е, 3-и и 7-е сутки эксперимента вводили по 1 мкг VEGF. Суммарная доза VEGF составила 3 мкг.По данным инструментальных и патоморфологических исследования после первого введения 1 мкг VEGF наблюдалось расширение и извитость сосудов сетчатки. Введение 2 мкг VEGF (две инъекции по 1 мкг) вызывало появление множественных ретинальных геморрагии, обогащение сосудистой сети сетчатки за счет открытия в норме не функционирующих капилляров. На 14-е сутки после начала эксперимента в результате 3 инъекций по 1 мкг VEGF отмечалось появление массивных ретинальных кровоизлияний и новообразованных сосудов. Животные выводились из эксперимента методом воздушной эмболии после введения в наркоз на 3-и, 7-е и 14 сутки (согласно приказу МинВуза СССР №724 от 13.11.1984). Гистологически было выявлено, что новообразованные сосуды появлялись в сетчатке и преламинарной части зрительного нерва, прорастали на внутреннюю их поверхности и прилежащую зону стекловидного тела в виде почек, которые состоящих из пролиферирующих новообразованных сосудов. Также определялось полнокровие сосудов хориоидеи с краевым стоянием форменных элементов крови. В зоне фоторецепторного слоя визуализировались кисты, друзы, новообразованные сосуды, что определяет появление неоваскуляризации и диабетического макулярного отека одномоментно.

Способ моделирования диабетической неоваскуляризации макулярной области сетчатки, включающий введение в стекловидное тело глаза экспериментального животного в качестве токсического агента Vascular endothelial growth factor (VEGF) дробно на 1, 3 и 7 сутки, отличающийся тем, что в качестве экспериментального животного используют крысу, причем предварительно в брюшную полость вводят аллоксан в дозе 15,0 мг/100 г веса, через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета в качестве VEGF вводят по 1 мкг крысиного VEGF 164 в суммарной дозе 3 мкг.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине и тканевой инженерии, и может быть использовано для получения экстрацеллюлярных матриксов кровеносных сосудов малого калибра.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаза. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и предназначено для изучения принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам эффлюксного белка-транспортера Pgp (гликопротеина-Р).

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной стоматологии, и касается моделирования деминерализации эмали зуба. Для этого на удаленный зуб фиксируют брекет.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования первичного билиарного цирроза. Для этого в просвет бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки и терминальный отдел подвздошной кишки крысы вводят по 0,08-0,12 мл 45-50% спиртового раствора пикрилсульфоновой кислоты с интервалом 5-10 минут.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано при моделировании хронической гнойной костной раны. Формирование костного дефекта проводят вдоль оси кости, помещают в него смесь культуры музейного штамма Staphylococcus Aureus №5 в количестве 40-45 млн KОЕ на 1 кг массы тела экспериментального животного и 0,1 мл стерильного кварцевого песка.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования диабетического макулярного отека. Для этого крысе вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования мелкоочаговых мозговых геморрагий у новорожденных крыс. Для этого новорожденных крыс в возрасте 3-х дней помещают в камеру и подвергают воздействию звука силой 70 дБ, частотой 110 Гц, на протяжении 60 минут. Способ обеспечивает развитие мелкоочаговых мозговых геморрагий в коре головного мозга у 100% новорожденных крыс, без разрыва крупных сосудов, что наиболее близко соответствует клинической картине мозговых геморрагий у новорожденных детей. 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для выявления психотропных свойств изучаемых веществ осуществляют моделирование эмоционально-физической стрессовой ситуации, достигаемой помещением животных в цилиндр с холодной водой. Регистрируют время решения и выполнения задачи покинуть цилиндр при помощи предлагаемых средств спасения (рейка, лестница и веревка), установленных в цилиндре. Рассчитывают процентную вероятность решения задачи. Осуществляют расчет индексов, характеризующих психоэмоциональное и моторно-двигательное воздействие изучаемого вещества по определенным математическим формулам. Способ является технически простым, финансово низкозатратным, имеет высокий уровень воспроизводимости, позволяет с низкими затратами времени и высокой долей вероятности определить психоседативное или психостимулирующее действие изучаемого вещества.1 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и может быть использовано для изучения вопросов патогенеза нефрогенной артериальной гипертензии и для скрининговых и детальных фармакологических исследований. Для моделирования ренопаренхиматозной артериальной гипертензии взрослым крысам-самцам массой производят химическое повреждение паренхимы почек путем введения 0,1 мл 4% параформальдегида в верхний полюс обеих почек. Способ обеспечивает в короткие сроки получение стойкого повышения артериального давления, высокую воспроизводимость результата, простоту выполнения процедуры, ее малую инвазивность, короткий реабилитационный период при формировании значимых морфологических и биохимических перестроек в органах-мишенях, аналогичных клиническим вариантам ренопаренхиматозной артериальной гипертензии. 2 табл., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. После этого проводят однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией. Через 90 минут проводят сосудистые пробы с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции. Способ позволяет изучать NO - не обусловленные механизмы защитного эффекта при коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней внутрибрюшинным введением L-нитроаргининметилового эфира в дозе 25 мг/кг. После чего на фоне данной модели с 14 по 20 день беременности вводят внутрижелудочно азитромицин в дозе 30 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает выраженную коррекцию эндотелиальной дисфункции в особых условиях патогенеза этого состояния у беременных самок при дополнительном устранении остро возникающих инфекционных заболеваний или обострения хронически протекающих инфекционных процессов, которые также могут приводить к формированию гестоза. 1 пр.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента. Для коррекции ишемии с первых суток эксперимента внутрижелудочно вводят L-норвалин в суточной дозе 10,0 мг/кг, каждые 46 часов в течение 7 суток эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы в эксперименте за счет стимуляции неоангиогенеза. 1 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого лабораторным животным на вторые сутки эксперимента моделируют ишемию мышц голени. Никорандил вводят внутрижелудочно в суточной дозе 1,3 мг/кг в 2 приема в первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы за счет стимуляции неоваскулогенеза.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии кожного лоскута на питающей ножке. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента. На первые и четвертые сутки эксперимента внутрибрюшинно вводят никорандил в суточной дозе 1,3 мг/кг в 2 приема. Способ обеспечивает увеличение выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения за счет открытия АТФ-зависимых калиевых каналов и нитратоподобного эффекта никорандила в специфических условиях проведения эксперимента. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам профилактики развития опухолей у экспериментальных животных с высокой частотой спонтанного опухолеобразования. Сущность заявляемого способа заключается в том, что мышам - самцам линии СВА с высокой частотой спонтанного образования гепатокарцином - вводят комплексный фитоадаптогенный препарат фитомикс-40 (фм-40) в виде 10% раствора с питьевой водой в течение первого месяца постнатального развития животных, включая период завершения дифференцировки ткани печени. Способ обеспечивает увеличение средней продолжительности жизни, медианы выживаемости, снижение частоты возникновения спонтанных опухолей, улучшение качества жизни у животных. 2 ил.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, стоматологии и патофизиологии. Моделирование инфицированной раны слизистой оболочки полости рта проводят на внутренней поверхности нижней губы животного по средней линии. Для этого накладывают на нижнюю губу оригинальный ретрактор-зажим по п.2 на кожную и слизистые части нижней губы. При помощи зажима типа Бильрот браншами фиксируют участок слизистой оболочки полости рта площадью 2 мм2, проворачивая слизистую вокруг продольной оси на 360°. Производят отрыв в сторону оператора. На полученную рану наносят культивированную бактериальную взвесь в объеме 2 мл. Для осуществления способа предложено устройство - оригинальный ретрактор-зажим, состоящий из двух пластин, помещаемых на кожную и слизистые части нижней губы, соединенных пружинным шарниром и переходящих в рукоятки ретрактора-зажима. Пластина, накладываемая на слизистую часть нижней губы, имеет отверстие диаметром 5 мм с заостренными краями. Пластина, накладываемая на кожную часть губы, имеет шарообразный выступ диаметром 3,5 мм, высотой 2 мм. Изобретения позволяют моделировать естественный раневой процесс на слизистой оболочке полости рта животных, обеспечивают анатомическую доступность исследуемой области, стандартизацию раневой поверхности. Изобретения могут также использоваться в экспериментальной медицине по изучению эффективности влияния новых фармацевтических препаратов на раневой процесс слизистой оболочки полости рта экспериментальных животных. 2 н.п. ф-лы, 2 пр., 1 ил.
Наверх