Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий


 


Владельцы патента RU 2506588:

Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к паразитологии. Для выделения и обнаружения личинок филяриат-микрофилярий, получают микроскопические препараты, для чего пробу крови помещают в пробирку с антикоагулянтом К3-ЭДТА, отделяют плазму от форменных элементов путем осаждения в течение 20-24 часов при температуре 4-15°С без центрифугирования. При этом осадок на своей поверхности, граничащей с плазмой, образует форму воронки, на дне которой концентрируются личинки филяриат-микрофилярий, из дна воронки отбирают 15-20 мкл жидкости - плазмы, смешивают с 1% раствором Люголя, готовят мазки, проводят микроскопирование и сбор гельминтов. Изобретение позволяет уменьшить трудоемкость выделения из крови микрофилярий.

 

Изобретение относится к паразитологии, в частности к сбору личинок филяриат (микрофилярий) из крови животных и человека.

Известен способ исследования крови на наличие личинок филяриат по Фюллеборну (Петров, A.M. Гельминтологическое исследование тканей [Текст] / A.M. Петров // Ветеринарная лабораторная практика. - Т.2. - М.: Изд. сельхоз. литературы, журн. и плакатов, 1963. - С.218-219). Для этого несколько миллилитров крови смешивают с жидкостью, состоящей из 95 мл 5%-ного раствора формалина, 5 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл концентрированного алкогольного раствора генцианвиолета; полученный раствор центрифугируют, а осадок исследуют на наличие личинок нематод.

Известен способ выделения из крови больных сахарным диабетом личинок гельминтов (патент РФ №2287815 С2, 2006.01, G01N 33/48, G01N 1/28), при котором пробы крови смешивают с антикоагулянтом К3-ЭДТА и физиологическим раствором 1:1, готовят на основе первого раствора второй раствор, с 0,5% NaOH соответственно берут 2:1, инкубируют полученный раствор при 60°С в течение 5-10 минут, центрифугируют его при 3000 об/мин в течение 5 минут, удаляют надосадочную жидкость, инкубируют осадок при 37°С в течение 10 минут, обрабатывают осадок 1% раствором Люголя при соотношении 1:1, готовят мазки, сушат при 37°С в течение 15-20 минут и проводят микроскопирование с объективами 10 и 40.

Известен способ, предложенный J.I. Knott (1939), сущность которого заключается в том, что в пробирку с 1 мл свежей крови добавляется 10 мл 2%-ного раствора формалина, и смесь центрифугируется в течение 5 минут при 1000-1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость удаляют, осадок смешивают в равных количествах с 0,1%-ным раствором метиленовой сини. Из окрашенного осадка делают мазок и исследуют под микроскопом (Knott J.I. Method for making microfilarial surveys on day blood // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. - 1939. - V.33. - P. 191-196).

Недостатком этих трех способов является то, что во время центрифугирования личинки подвергаются жесткому механическому воздействию, становятся мало- или неподвижными, меняется их морфологическая структура, затрудняющая их идентификацию до вида. Кроме того, выделение микрофилярий (личинок) из осадка, состоящей из клеток белой крови, разрушенных гемолизированных эритроцитов, паразитических организмов иной этиологии, кристаллов холестерина, раствора краски и неподвижных микрофилярий, требует выполнения очень большой кропотливой работы лаборанта.

Известен способ исследования крови на наличие личинок филариат по Т.И.Поповой (Петров A.M. Гельминтологическое исследование тканей [Текст] / A.M. Петров // Ветеринарная лабораторная практика. - Т.2. - М.: Изд. сельхоз. литературы, журн. и плакатов, 1963. - С.218-219). Кровь берут из яремной вены и смешивают ее с 4%-ным раствором лимоннокислого натрия в соотношении 1:10. Цитрированную кровь разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:7 или 1:10 и центрифугируют. Полученный осадок исследуют под микроскопом. В подготовленной таким образом крови личинки филяриат (микросетарии) остаются живыми (при температуре 13-15°С) в течение трех суток и при микроскопическом исследовании легко обнаруживаются.

Недостатком этого способа является то, что при добавлении воды резко меняется осмотическое давление, вызывающее разрушение эритроцитов. Выделение микрофилярий (личинок) из осадка, состоящего из клеток белой крови, разрушенных гемолизированных эритроцитов, паразитических организмов иной этиологии, кристаллов холестерина, раствора краски и неподвижных микрофилярий, требует выполнения очень большой кропотливой работы лаборанта.

Известен способ прямого исследования мазка крови при малом увеличении микроскопа (Архипов И.А. Дирофиляриоз [Текст] / И.А. Архипов, Д.Р. Архипова. - М., 2004. - 194 с.).

Недостатком этого способа является то, что при низкой интенсивности инвазии данный способ неэффективен без концентрации личинок, и кроме того, микрофилярии трудно увидеть из-за эритроцитов и провести дифференцировку по видам.

Технической задачей заявляемого изобретения является выделение из крови животных и человека личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, с концентрацией личинок без центрифугирования.

Технический результат решается тем, что для выделения из крови животных и человека личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, с концентрацией личинок без центрифугирования, пробы крови в пробирке с антикоагулянтом К3-ЭДТА, ставят в прохладное место при температуре 4-15°С в течение 20-24 часов, при этом кровь разделяется на плазму и осадок, последний на своей поверхности, граничащей с плазмой, образует форму воронки, на дне которой концентрируются личинки филяриат (микрофилярий). Из дна воронки отбирают жидкость (плазму) 15-20 мкл, смешивают с 1% раствором Люголя, готовят мазки и проводят микроскопирование. Форма воронки на поверхности осадка образуется вследствие чтение выпуклого в нижнюю сторону дна стеклянной пробирки, в которой была набрана кровь с антикоагулянтом К3-ЭДТА.

Заявленный способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, с концентрацией личинок:

- отличается от прототипов 1-3 тем, что концентрация личинок производится без центрифугирования;

- отличается от прототипов 1-4 тем, что выделение концентрированных личинок производится не с осадка, а с плазмы, представляющей прозрачную жидкость соломенного цвета;

- отличается от прототипа 5 способом концентрации личинок. Технической эффективностью предлагаемого изобретения является

выделение из стабилизированной крови животных и человека концентрированных без центрифугирования личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, скопившихся в воронкообразном дне плазмы крови, образованной поверхностью осадка, вследствие чтения последним выпуклого в нижнюю сторону дна стеклянной пробирки. В целом, предлагаемое изобретение позволяет уменьшить трудоемкость выделения из крови микрофилярий с концентрацией последних без центрифугирования и без посторонных примесей.

Способ выделения из стабилизированной крови животных и человека концентрированных без центрифугирования личинок филяриат - микрофилярий, свободных от примесей, предусматривающий получение пробы крови в пробирке с антикоагулянтом К3-ЭДТА, отделение плазмы от форменных элементов - осадка при температуре 4-15°С в течение 20-24 ч, при этом кровь разделяется на плазму и осадок, последний на своей поверхности, граничащей с плазмой, образует форму воронки, на дне которой концентрируются личинки филариат - микрофилярий, из дна воронки отбирают жидкость - плазму 15-20 мкл, смешивают с 1%-ным раствором Люголя, готовят мазки и проводят микроскопирование и сбор гельминтов.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности к эндохирургии. Для определения индивидуального риска развития острого панкреатита после эндоскопических транспапиллярных вмешательств проводят анализ демографических данных и результатов биохимического исследования крови.
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к средствам для определения чувствительности различных микроорганизмов, в том числе бактерий и грибов, к антимикробным веществам.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для дооперационного определения плотности ядра хрусталика. Для этого у больного в сыворотке венозной крови определяют фактор роста эндотелия сосудов (ФРЭС).

Группа изобретений относится к способу клеточного анализа цитологической или гистологической пробы и к способу получения виртуальной аналитической пластинки. Для клеточного анализа осуществляют по меньшей мере первую обработку пробы (2), при этом указанная обработка предназначена для маркировки патологических клеток среди здоровых клеток пробы.

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, и используется для диагностики ишемической нефропатии у новорожденного. Способ заключается в том, что осуществляют проведение в течение 1-3 дней жизни диагностического тестирования по анамнестическим и биохимическим показателям, включающим определение гестационного возраста, концентрацию ионов натрия в крови, микроальбумина в моче, отношения содержания карбоангидразы к креатинину в моче и концентрацию непрямого билирубина в крови с последующим вычислением вероятности (Р) ишемической нефропатии по формуле.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам диагностики, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации.
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии. Сущность способа прогнозирования инфекционного воспаления послеоперационной раны при накостном остеосинтезе длинных трубчатых костей состоит в том, что проводят анализ клеточного состава крови и определяют лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) Я.Я.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкогинекологии. Определяют иммунологические показатели: абсолютное количество лимфоцитов (лим_аб), TNFα (TNFα_к) и IL-10 (IL-10_к) в периферической крови, а также TNFα (TNFα_c) и IL-4 (IL-4_c) в цервикальной слизи.

Изобретение относится к области медицины, в частности к применению молекулярных маркеров ВПЧ ВКР и их качественных и количественных характеристик для прогнозирования течения гиперпролиферативных заболеваний ШМ.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования индивидуального риска развития бронхиальной астмы в регионах с высокой и низкой распространенностью гельминтных инфекций.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и описывает способ прогнозирования адаптационных возможностей организма ребенка к хирургическому вмешательству по поводу несращения губы и неба. До операции, в течение 3-4 дней ежедневно, однократно у ребенка берут пробу слюны из ротовой полости, высушивают ее 1-2 часа при комнатной температуре и центральную зону полученной фации исследуют микроскопически, при этом за норму принимают кристаллы в виде «елочки» с супротивным расположением ветвей первого порядка, образующими в совокупности фон «морозного узора», с равномерным распределением кристаллов, и прогнозируют благоприятный фон для хирургического вмешательства, а при обнаружении кристаллов неправильной формы с рядом ответвлений на каждой «елочке» и в целом - неупорядоченным фоном по общему рисунку и его плотности, определяют состояние организма ребенка, неблагоприятное для хирургического вмешательства. Техническим результатом является упрощение, удешевление и доступность способа оценки адаптационных возможностей организма ребенка, повышение достоверности прогнозирования. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины. Для диагностики синдрома инсулинорезистентности проводят исследование слюны больного. К капле слюны больного добавляют каплю 0,9% раствора хлорида натрия. Выдерживают полученный препарат в течение 24 часов в горизонтальном положении при комнатной температуре, влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом. По наличию в кристаллограмме округлых, неправильной формы кристаллов в поле зрения на фоне четких ромбовидных центров кристаллизации с расходящимися лучами определяют наличие инсулинорезистентности, при отсутствии отдельных округлых, неправильной формы кристаллов на всем поле зрения судят об отсутствии инсулинорезистентности. Способ позволяет диагностировать метаболические изменения в организме при микроскопическом исследовании слюны пациента. 4 ил., 2 табл.
Изобретение относится к области ветеринарии. Для ранней диагностики заболевания молочной железы коров проводят определение электропроводности молока по каждой четверти вымени в каждую дойку. Предварительно у здоровой коровы, прошедшей диспансеризацию в течение трех дней, в утреннее и вечернее доение определяют электропроводность молока в процессе доения по каждой четверти вымени. Рассчитывают абсолютную среднюю электропроводность молока по каждой четверти вымени за три дня. В дальнейшем при каждом доении определяют показатель средней электропроводности молока по каждой четверти вымени и при отклонении показателя средней электропроводности молока хотя бы в одной из четвертей вымени в процессе доения от абсолютной средней электропроводности соответствующей четверти вымени в сторону увеличения на 10-15% и более диагностируют субклиническую форму мастита. Способ позволяет диагностировать субклиническую форму мастита. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике злокачественных новообразований иммунологическими методами. Проводят лабораторное исследование. При лабораторном исследовании определяют иммунологические показатели: содержание CD10×109/л, CD20×109/л, CD25×109/л лимфоцитов периферической крови, функциональный резерв нейтрофилов цервикальной слизи, уровень ИЛ-10 крови и уровни ИНФ-γ крови и ФНО-α цервикальной слизи. На основании полученных данных вычисляют показатель, на основании значения которого диагностируют carcinoma in situ или цервикальную интраэпителиальную неоплазию III степени. Способ позволяет осуществить дифференциальную диагностику стадий канцерогенеза шейки матки, тем самым усовершенствовать подходы к лечению женщин с тяжелой дисплазией и преинвазивным раком шейки матки и сохранить полноценную репродуктивную функцию у данной категории пациенток. 4 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии. Для прогнозирования эффективности предоперационной лучевой терапии плоскоклеточных карцином головы и шеи проводят иммуноферментное исследование уровня ТИМП-1 и ТИМП-2 в сыворотке крови. Дополнительно определяют уровень ММП-2 и размер первичной опухоли согласно международной классификации TNM. Рассчитывают дискриминантные функции Y1 и Y2, на основании сравнения которых прогнозируют эффективность предоперационной лучевой терапии. Способ повышает точность и информативность прогнозирования эффективности предоперационной лучевой терапии плоскоклеточных карцином головы и шеи за счет оценки наиболее информативных показателей. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, онкологии, лечению больных раком легкого, которым противопоказано оперативное лечение. Проводят введение химиопрепаратов (ХП), инкубированных с аутокровью, - аутогемохимиотерапию (АГХТ) и лучевую терапию (ЛТ). При этом до начала лечения у больного определяют в крови уровень пролактина и прогестерона, затем до начала АГХТ больной начинает прием бромокриптина 2,5 мг один раз в день во время еды и введение оксипрогестерона капроната 2 раза в неделю с интервалом в 3 суток по 1 мл внутримышечно. Затем проводят курс АГХТ, состоящий из 1-3 введений ХП на аутокрови, и в случае полной резорбции опухоли больного подвергают оперативному лечению в объеме пневмонэктомии, а в случае частичной резорбции через две недели после последнего введения ХП на аутокрови проводят ЛТ: вначале по 2 Гр 2 раза в день с интервалом 4-5 часов, начиная с 5 дней в неделю до достижения очаговой дозы 28 Гр. Затем 2 нед. перерыв, далее по 4 Гр ежедневно, 3 фракции облучения в неделю, всего 6 фракций, до СОД за весь курс ЛТ 52 Гр. На протяжении всего лечения больной продолжает прием бромокриптина и оксипрогестерона капроната под контролем уровней пролактина и прогестерона в крови: по сравнению с показателями до лечения уровень пролактина должен снижаться к концу лечения, а уровень прогестерона - увеличиваться. Способ обеспечивает улучшение результатов консервативного лечения больных данной группы: уменьшение размеров опухолевого очага и лимфоузлов, вплоть до полного регресса первичной опухоли в 30%, переход больных в резектабельное состояние, улучшение качества жизни больных. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу протезирования внутрижелудочковых кровоизлияний у доношенных детей, родившихся от матерей с артериальной гипертензией. Сущность способа состоит в том, что проводят учет анамнестических данных матери и клиническое обследование ребенка, а именно определяют наличие генетической тромбофилии у матери, наличие синдрома задержки роста плода (СЗРП) у ребенка, в пуповинной крови определяют содержание стандартного дефицита оснований (BEecf) и стандартного бикарбоната (НСО3--), парциальное напряжение кислорода (рO2), а также относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови на первые сутки жизни ребенка, с последующим вычислением прогностического индекса (PI) по формуле. При РI более 0 делают заключение об отсутствии риска внутрижелудочкового кровоизлияния, а при PI менее 0 прогнозируют высокий риск развития данной патологии у детей в раннем неонатальном периоде. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность прогноза развития внутрижелудочковых кровоизлияний у доношенных детей, родившихся от матерей с артериальной гипертензией. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения риска злокачественности клеток. Для этого из образца биопсии, полученного от субъекта, готовят клеточный отпечаток или суспензию клеток, создают условия гипоксии. Подвергают повторяющимся воздействиям повреждающего агента, выбранного из УФ-света. Проводят спектро-флурометрическое исследование образца после повторяющегося воздействия УФ-светом, и в случае, если в темповых условиях обнаружен прирост интенсивности флуоресценции NAD(P)H, диагностируют клетки как злокачественные. Изобретение обеспечивает выявить высоко-устойчивые раковые клетки как показатели негативного опухолевого прогноза in vivo для той опухоли, из которой взят исследуемый образец. Время выявления злокачественности и устойчивости опухолевых клеток составляет несколько минут. 6 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течение хронического лимфолейкоза. Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течение хронического лимфолейкоза включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизмов -889С/Т гена интерлейкина 1А и VNTR антагониста рецептора интерлейкина 1. Прогнозируют повышенный риск развития тромбоцитопении в течение хронического лимфолейкоза в случае выявления аллеля -889Т IL-1A и/или аллеля IL-IRa∗1. 1 табл., 4 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу скрининговой диагностики стеноза артериовенозной фистулы у больных с терминальной стадией хронической болезни почек. Сущность способа состоит в том, что у пациентов, находящихся на лечении программным гемодиализом, в комплексе определяют содержание тромбоцитов в крови (Х1, ×109/л), концентрацию мочевины (Х2, ммоль/л), концентрацию фосфора (Х3, ммоль/л), концентрацию трансферрина (Х4, г/л), концентрацию кальция (Х5, ммоль/л) в сыворотке крови и коэффициент эффективности диализа Kt/Vэкв (X6, ед) и затем определяют значение дискриминантной функции (ДФ) по формуле. При положительном значении величины ДФ диагностируют наличие стеноза в артериовенозной фистуле. Использование заявленного способа с вероятностью более 95% без проведения дополнительных лабораторных и клинических исследований позволяет диагностировать наличие или отсутствие стенотических изменений в артериовенозной фистуле, что дает возможность в случае необходимости планировать минимальную по объему реконструктивную операцию. 3 пр.
Наверх