Пуриновые соединения, ингибирующие рi3к, и способы применения

Изобретение относится к новым пуриновым соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают свойствами ингибитора липидных киназ, включая p110 альфа и другие изоформы PI3K, и являются пригодными для лечения пролиферативных заболеваний, таких как рак. В формуле I

R¹ выбирают из Н, C₁-C₁₂алкила и -(C₁-C₁₂алкилен)-(C₅-C₆ гетероциклила), где гетероциклил может содержать 1-2 гетероатома в цикле, выбранных из азота, и в которых алкил и гетероциклил необязательно замещены одной или несколькими группами, независимо выбранными из -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -ОН, -S(О)₂N(СН₃)₂ и -S(O)₂СН₃; R² выбирают из C₁-C₁₂алкила, -(C₁-C₆алкилен)-(C₅-С₆ гетероциклила) или -(C₁-C₆алкилен)-С(=O)-(C₅-C₆гетероциклила), в каждой из которых гетероциклил содержит 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода, -(C₁-C₆алкилен)-(C₆арила), где арил выбран из фенила, и -(C₁-C₆алкилен)-(C₅-C₆гетероарила), где гетероарил содержит 1 атом азота, в которых алкил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, СН₃, -CF₃, -CO₂H, -СОСН₃, -CO₂CH₃, -CONHCH₃, -NHCOCH₃, -NH(SO)₂CH₃, -ОН, -ОСН₃, -S(О)₂N(СН₃)₂ и -S(O)₂СН₃; и R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из производных пиридина и пиримидина, указанных в п.1 формулы изобретения. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, способу ее получения и способу получения соединений формулы I. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 59 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Данная непродолженная заявка, внесенная в реестр 37 CFR § 1.53(b), заявляет приоритет по отношению 35 USC §119(e) предварительной заявки США серийный No. 61/057559, внесенной в реестр 30 мая 2008, которая вводится полностью с помощью ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ

В целом, настоящее изобретение относится к соединениям с противораковой активностью и, более конкретно, к соединениям, которые ингибируют активность PI3 киназы. Настоящее изобретение также относится к способам применения соединений для in vitro, in situ и in vivo диагностики или лечения клеток млекопитающих, или связанных с ними патологических состояний.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Фосфатидилинозитол (в настоящем изобретении сокращают до "PI") представляет собой один из ряда фосфолипидов, обнаруженных в клеточных мембранах. В последние годы стало ясно, что PI играет важную роль в передаче внутриклеточных сигналов. Сигнальная система клетки посредством 3'-фосфорилированных фосфоинозитидов связана с рядом клеточных процессов, например злокачественным перерождением, сигнализацией факторов роста, воспалением и иммунитетом (Rameh et al (1999) J. Biol Chem, 274:8347-8350). Фермент, отвечающий за синтез данных фосфорилированных сигнализирующих продуктов, фосфатидилинозитол 3-киназа (также называемая PI3 киназа, PI3-киназа или PI3K), первоначально была обнаружена с активностью, связанной с вирусными онкогенными белками и тирозинкиназами рецепторов факторов роста, которые фосфорилируют фосфатидилинозитол (PI) и его фосфорилированные производные по 3'-гидроксильной группе инозитольного кольца (Panayotou et al (1992) Trends Cell Biol 2:358-60).

Фосфоинозитид 3-киназы (PI3K) представляет собой липидные киназы, которые фосфорилируют липиды при 3-гидроксильном остатке инозитольного кольца фосфоинозитолов (Whitman et al (1988) Nature, 332:664). 3'-фосфорилированные фосфолипиды (PIP3), синтезированные PI3-киназами, действуют в качестве вторичных мессенджеров, пополняя число киназ с доменами, связывающими липиды (включая гомологичные плекстрину (PH) области), такими как Akt и фосфоинозитид-зависимая киназа-1 (PDK1). Связывание Akt с мембранными PIP3 вызывает перемещение Akt к плазматической мембране, приводя Akt в контакт с PDK1, который отвечает за активацию Akt. Фосфатаза с противоопухолевой активностью, PTEN, дефосфорилирует PIP3 и, следовательно, действует в качестве отрицательного регулятора Akt активности. PI3-киназы Akt и PDK1 являются важными в регуляции многих клеточных процессов, включая регуляцию клеточного цикла, пролиферацию, выживаемость, апоптоз и подвижность и являются важными компонентами молекулярных механизмов заболеваний, таких как рак, диабет и иммунное воспаление (Vivanco et al (2002) Nature Rev. Cancer 2:489; Phillips et al (1998) Cancer 83:41).

PI3 киназа представляет собой гетеродимер, состоящий из p85 и p110 субъединиц (Otsu et al (1991) Cell 65:91-104; Hiles et al (1992) Cell 70:419-29). Обнаружено четыре различных класса I PI3K, обозначенных PI3K α (альфа), β (бета), δ (дельта) и γ (гамма), каждая из которых состоит из различных 110 кДа каталитической субъединицы и регуляторной субъединицы. Более конкретно, три из каталитических субъединиц, т.е. p110 альфа, p110 бета и p110 дельта, каждая взаимодействует с одинаковой регуляторной субъединицей, p85; тогда как p110 гамма взаимодействует с отличной регуляторной субъединицей, p101. Способ экспрессии каждой из PI3K в клетках человека и тканях также различен.

Основной изоформой PI3-киназы при раке является PI3-киназа класса I, p110 α (альфа) (US 5824492; US 5846824; US 6274327). Другие изоформы учувствуют в сердечно-сосудистых и иммунно-воспалительных заболеваниях (Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396; Patel et al (2004) Proceedings of the American Association Cancer Research (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA; Ahmadi K and Waterfield MD (2004) Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier/Academic Press).

PI3 киназа/Akt/PTEN путь представляет собой привлекательную мишень для разработки противораковых лекарственных средств, т.к. ожидается, что данные агенты будут ингибировать пролиферацию, подавляя репрессию апоптоза и преодолевая устойчивость к цитотоксическим агентам в раковых клетках. Сообщают об ингибиторах PI3 киназ (Yaguchi et al (2006) Jour, of the Nat. Cancer Inst. 98(8):545-556; US 7173029; US 7037915; US 6608056; US 6608053; US 6838457; US 6770641; US 6653320; US 6403588; US 6703414; WO 97/15658; WO 2006/046031; WO 2006/046035; WO 2006/046040; WO 2007/042806; WO 2007/042810; WO 2004/017950; US 2004/092561; WO 2004/007491; WO 2004/006916; WO 2003/037886; US 2003/149074; WO 2003/035618; WO 2003/034997; US 2003/158212; EP 1417976; US 2004/053946; JP 2001247477; JP 08175990; JP 08176070). Определенные тиенопиримидиновые соединения обладают p110 альфа связывающей, ингибирующей PI3 киназу активностью и ингибируют рост раковых клеток (WO 2006/046031; WO 2007/122410; WO 2007/127183; WO 2007/129161; US 2008/0269210; US 2008/0242665). Определенные пуриновые соединения обладают p110 дельта связывающей, ингибирующей PI3 киназу активностью (WO 2009/053716).

СУЩНОСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

В целом, настоящее изобретение относится к пуриновым соединениям формулы I с противораковой активностью и, более конкретно, с модулирующей и ингибирующей PI3 киназу активностью. Определенные гиперпролиферативные заболевания характеризуются изменением функционирования PI3 киназы, например мутациями или повышенной экспрессией белков. Соответственно, соединения настоящего изобретения могут быть пригодны для лечения гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак. Соединения могут ингибировать рост ткани у млекопитающих и могут быть пригодны для лечения людей с раком.

Настоящее изобретение также относится к способам применения пуриновых соединений формулы I для in vitro, in situ и in vivo диагностики или для лечения клеток млекопитающих, организмов, или связанных с ними патологических состояний.

Соединения формулы I включают

и их стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры или фармацевтически приемлемые соли. Различные заместители R¹, R², R³, R⁴ представляют собой, как описано в настоящем изобретении.

Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей пуриновое соединение формулы I и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать один или несколько дополнительных терапевтических агентов.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам ингибирования активности PI3 киназы, включающим контакт PI3 киназы с эффективным ингибирующим количеством соединения формулы I, или его стереоизомером, геометрическим изомером, таутомером или фармацевтически приемлемой солью.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам предотвращения или лечения гиперпролиферативного заболевания или заболевания, модулируемого PI3 киназами, включающим введение млекопитающему, нуждающемуся в данном лечении, эффективного количества соединения формулы I, или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера или фармацевтически приемлемой соли. Примеры данных гиперпролиферативных заболеваний или расстройств включают, но не ограничиваются, рак.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам предотвращения или лечения гиперпролиферативного заболевания, включающим введение млекопитающему, нуждающемуся в данном лечении, эффективного количества соединения формулы I, или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера или фармацевтически приемлемой соли, одного или в комбинации с одним или несколькими дополнительными соединениями, обладающими анти-гиперпролиферативными свойствами.

Дополнительный аспект настоящего изобретения представляет собой применение соединения настоящего изобретения для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания или состояния, модулируемого PI3 киназой, у млекопитающего.

Другой аспект настоящего изобретения включает наборы, содержащие соединение формулы I, или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит или фармацевтически приемлемую соль, бокс, и необязательно листок-вкладыш в упаковке, содержащий информацию о лекарственном средстве, или этикетку с указаниями, как осуществлять лечение.

Другой аспект настоящего изобретения включает способы получения, способы выделения и способы очистки соединений формулы I.

Другой аспект настоящего изобретения включает новые промежуточные соединения, пригодные для получения соединений формулы I.

Дополнительные преимущества и новые особенности настоящего изобретения будут изложены частично в данном описании, представленным ниже, и частично будут ясны специалистам в данной области техники при ознакомлении с последующим описанием или могут быть усвоены при практическом осуществлении настоящего изобретения. Преимущества настоящего изобретения могут быть реализованы и достигнуты посредством технических средств, комбинаций, композиций и способов, частично указанных в прилагаемой формуле изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 показывает общий способ получения полифункционализированных пуринов.

Фиг. 2 показывает альтернативный способ синтеза полифункционализированных пуринов.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРИМЕРНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

В настоящее время будут приведены подробно определенные варианты осуществления настоящего изобретения, примеры которых сопровождаются структурами и формулами. Так как настоящее изобретение будет описано в соответствии с приведенными вариантами осуществления, ясно, что не предполагается, что они ограничивают настоящее изобретение данными вариантами осуществления. И наоборот, предполагается, что настоящее изобретение включает все альтернативные варианты, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения, как определено формулой изобретения. Специалистам известны многие способы и материалы, аналогичные или эквивалентные способам и материалам, описанным в настоящем изобретении, которые можно было бы применять при практическом осуществлении настоящего изобретения. Настоящее изобретение никоим образом не ограничивается описанными способами и материалами. В случае, если одна или несколько из введенных литературных ссылок, патентов и аналогичных материалов отличаются или противоречат данной заявке, включая, но не ограничиваясь, определенные термины, применение терминов, описанные методики или подобные, данная заявка определяет их.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Термин "алкил", как используют в настоящем изобретении, относится к моновалентному углеводородному радикалу с насыщенной линейной или разветвленной цепью, содержащему от одного до двенадцати атомов углерода (C₁-C₁₂), в котором алкильный радикал можно необязательно заместить независимо одним или несколькими заместителями, описанными ниже. В другом варианте осуществления алкильный радикал содержит от одного до восьми атомов углерода (C₁-C₈) или от одного до шести атомов углерода (C₁-C₆). Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются, метил (Me, -CH₃), этил (Et, -CH₂CH₃), 1-пропил (н-Pr, н-пропил, -CH₂CH₂CH₃), 2-пропил (изо-Pr, изопропил, -CH(CH₃)₂), 1-бутил (н-Bu, н-бутил, -CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-метил-1-пропил (изо-Bu, изобутил, -CH₂CH(CH₃)₂), 2-бутил (втор-Bu, втор-бутил, -CH(CH₃)CH₂CH₃), 2-метил-2-пропил (трет-Bu, трет-бутил, -C(CH₃)₃), 1-пентил (н-пентил, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-пентил (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃), 3-пентил (-CH(CH₂CH₃)₂), 2-метил-2-бутил (-C(CH₃)₂CH₂CH₃), 3-метил-2-бутил (-CH(CH₃)CH(CH₃)₂), 3-метил-1-бутил (-CH₂CH₂CH(CH₃)₂), 2-метил-1-бутил (-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃), 1-гексил (-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-гексил (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃), 3-гексил (-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)), 2-метил-2-пентил (-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃), 3-метил-2-пентил (-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃), 4-метил-2-пентил (-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂), 3-метил-3-пентил (-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂), 2-метил-3-пентил (-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂), 2,3-диметил-2-бутил (-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂), 3,3-диметил-2-бутил (-CH(CH₃)C(CH₃)₃, 1-гептил, 1-октил и подобные.

Термин "алкилен", как используют в настоящем изобретении, относится к дивалентному углеводородному радикалу с насыщенной линейной или разветвленной цепью, содержащей от одного до двенадцати атомов углерода (C₁-C₁₂), в котором алкиленовый радикал можно необязательно замещать независимо одним или несколькими заместителями, описанными ниже. В другом варианте осуществления алкиленовый радикал содержит от одного до восьми атомов углерода (C₁-C₈) или от одного до шести атомов углерода (C₁-C₆). Примеры алкиленовых групп включают, но не ограничиваются, метилен (-CH₂-), этилен (-CH₂CH₂-), пропилен (-CH₂CH₂CH₂-) и подобные.

Термин "алкенил" относится к моновалентному углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от двух до восьми атомов углерода (C₂-C₈) с по меньшей мере одним сайтом ненасыщенности, т.е. углерод-углерод sp² двойной связью, в котором алкенильный радикал можно необязательно замещать, и он включает радикалы, имеющие "цис" и "транс" ориентации, или альтернативно, "E" и "Z" ориентации. Примеры включают, но не ограничиваются, этиленил или винил (-CH=CH₂), аллил (-CH₂CH=CH₂) и подобные.

Термин "алкенилен" относится к дивалентному углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от двух до восьми атомов углерода (C₂-C₈) с по меньшей мере одним сайтом ненасыщенности, т.е. углерод-углерод sp² двойной связью, в котором алкенильный радикал можно необязательно замещать, и он включает радикалы, имеющие "цис" и "транс" ориентации, или альтернативно, "E" и "Z" ориентации. Примеры включают, но не ограничиваются, этиленилен или винилен (-CH=CH-), аллил (-CH₂CH=CH-) и подобные.

Термин "алкинил" относится к моновалентному углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, содержащей от двух до восьми атомов углерода (C₂-C₈) с по меньшей мере одним сайтом ненасыщенности, т.е. углерод-углерод sp тройной связью, в котором алкинильный радикал можно необязательно заместить. Примеры включают, но не ограничиваются, этинил (-C≡CH), пропинил (пропаргил, -CH₂C≡CH) и подобные.

Термин "алкинилен" относится к дивалентному углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, содержащий от двух до восьми атомов углерода (C₂-C₈) с по меньшей мере одним сайтом ненасыщенности, т.е. углерод-углерод sp тройной связью, в котором алкинильный радикал необязательно замещают. Примеры включают, но не ограничиваются, этинилен (-C≡C-), пропинилен (пропаргилен, -CH₂C≡C-) и подобные.

Термины "карбоцикл", "карбоциклил", "карбоциклическое кольцо" и "циклоалкил" относятся к моновалентному неароматическому, насыщенному или частично ненасыщенному кольцу, содержащему от 3 до 12 атомов углерода (C₃-C₁₂) в виде моноциклического кольца или от 7 до 12 атомов углерода в виде бициклического кольца. Бициклические карбоциклы, содержащие от 7 до 12 атомов, можно расположить, например, в виде бициклических [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] систем, и бициклические карбоциклы, содержащие 9 или 10 кольцевых атомов, можно расположить в виде бициклических [5,6] или [6,6] систем, или в виде систем с мостиковой связью, таких как бицикло[2,2,1]гептан, бицикло[2,2,2]октан и бицикло[3,2,2]нонан. Примеры моноциклических карбоциклов включают, но не ограничиваются, циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-3-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил, циклогексадиенил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил и подобные.

"Арил" относится к моновалентному ароматическому углеводородному радикалу, содержащему 6-20 атомов углерода (C₆-C₂₀), полученному удалением одного атома водорода с единственного атома углерода исходной ароматической кольцевой системы. Некоторые арильные группы представлены в примерных структурах в виде "Ar". Арил включает бициклические радикалы, содержащие ароматическое кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическое карбоциклическое кольцо. Стандартные арильные группы включают, но не ограничиваются, радикалы, полученные из бензола (фенил), замещенного бензола, нафталина, антрацена, бифенил, инденил, инданил, 1,2-дигидронафталина, 1,2,3,4-тетрагидронафтила и подобные. Арильные группы необязательно замещают.

"Арилен" относится к дивалентному ароматическому углеводородному радикалу, содержащему 6-20 атомов углерода (C₆-C₂₀), полученному при удалении двух атомов водорода при двух атомах углерода исходной ароматической кольцевой системы. Некоторые ариленовые группы представлены в примерных структурах в виде "Ar". Арилен включает бициклические радикалы, содержащие ароматическое кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом, или ароматическое карбоциклическое кольцо. Стандартные ариленовые группы включают, но не ограничиваются, радикалы, полученные из бензола (фенилен), замещенных бензолов, нафталина, антрацена, бифенилен, инденилен, инданилен, 1,2-дигидронафталина, 1,2,3,4-тетрагидронафтила и подобных. Ариленовые группы необязательно замещают.

Термины "гетероцикл", "гетероциклил" и "гетероциклическое кольцо" применяют в настоящем изобретении взаимозаменяемо, и они относятся к насыщенному или частично ненасыщенному (т.е. содержащему одну или более двойных и/или тройных связей в кольце) карбоциклическому радикалу, содержащему от 3 до приблизительно 20 кольцевых атомов, в котором по меньшей мере один кольцевой атом представляет собой гетероатом, выбранный из азота, кислорода, фосфора и серы, причем оставшиеся кольцевые атомы представляют собой C, в котором один или более кольцевых атомов необязательно замещают, например, оксо (=O), меркапто или амино и т.д. Гетероцикл может быть моноциклическим, содержащим от 3 до 7 кольцевых члена (2-6 атомов углерода и 1-4 гетероатома, выбранные из N, O, P и S), или бициклическим, содержащим 7-10 кольцевых члена (4-9 атома углерода и 1-6 гетероатома, выбранные из N, O, P и S), например: бициклическую [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] систему. Гетероциклы описываются в Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), в частности главы 1, 3, 4, 6, 7, и 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), в частности в томах 13, 14, 16, 19, и 28; и J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. "Гетероциклил" также включает радикалы, в которых гетероциклические радикалы конденсируют с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоциклическим или гетероциклическим кольцом. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваются, пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидино (пиперидинил), морфолино (морфолинил), тиоморфолино, тиоксанил, пиперазинил, гомопиперазинил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепенил, тиазепинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2H-пиранил, 4H-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидрофуранил, пиразолидинилимидазолил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3,1,0]гексанил, 3-азабицикло[4,1,0]гептанил, азабицикло[2,2,2]гексанил, 3H-индолил, хинолизинил, 1H-бензо[d]имидазол-2(3H)-он-5-ил и N-пиридилмочевины. Spiro группы также включены в объем данного определения. Примерами гетероциклической группы, замещенной одной или более оксо (=O) группой, являются пиримидинонил и 1,1-диоксотиоморфолинил.

Термин "гетероарил" относится к моновалентному ароматическому радикалу, содержащему 5-, 6- или 7- членные кольца, и он включает конденсированные кольцевые системы (по меньшей мере, одна из которых является ароматической), содержащие от 5 до приблизительно 20 кольцевых атомов, содержащие один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы. Примерами гетероарильных групп являются пиридинил (включая, например, 2-гидроксипиридинил), имидазолил, имидазопиридинил, пиримидинил (включая, например, 4-гидроксипиримидинил), пиразолил, триазолил, пиразинил, тетразолил, фурил, тиенил, изоксазолил, тиазолил, оксадиазолил, оксазолил, изотиазолил, пирролил, хинолинил, изохинолинил, тетрагидроизохинолинил, индолил, бензимидазолил, бензофуранил, циннолинил, индазолил, индолизинил, фталазинил, пиридазинил, триазинил, изоиндолил, птеридинил, пуринил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, тиадиазолил, фуразанил, бензофуразанил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксазолил, хиназолинил, хиноксалинил, нафтиридинил и фуропиридинил. Гетероарильные группы необязательно замещают.

Гетероциклические или гетероарильные группы могут быть присоединенными через углерод (углерод-связанными) или азот (азот-связанными), где это возможно. Посредством примера и без ограничения, гетероциклы или гетероарилы, присоединенные через углерод, присоединяют в положении 2, 3, 4, 5 или 6 пиридина, в положении 3, 4, 5 или 6 пиридазина, в положении 2, 4, 5 или 6 пиримидина, в положении 2, 3, 5 или 6 пиразина, в положении 2, 3, 4, или 5 фурана, тетрагидрофурана, тиофурана, тиофена, пиррола или тетрагидропиррола, в положении 2, 4 или 5 оксазола, имидазола или тиазола, в положении 3, 4 или 5 изоксазола, пиразола или изотиазола, в положении 2 или 3 азиридина, в положении 2, 3 или 4 азетидина, в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 хинолина или в положении 1, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 изохинолина.

Посредством примера и без ограничения, гетероциклы или гетероарилы, присоединенные через азот, присоединяют в положении 1 азиридина, азетидина, пиррола, пирролидина, 2-пирролина, 3-пирролина, имидазола, имидазолидина, 2-имидазолина, 3-имидазолина, пиразола, пиразолина, 2-пиразолина, 3-пиразолина, пиперидина, пиперазина, индола, индолина, 1H-индазола, в положении 2 изоиндола или изоиндолина, в положении 4 морфолина и положении 9 карбазола или β-карболина.

Термин "моноциклический гетероарил" относится к пяти- или шестичленному, незамещенному или замещенному, моноциклическому гетероарильному радикалу, который содержит 1, 2, 3 или 4 кольцевых гетероатома, независимо выбранных из N, O и S. Моноциклический гетероарил можно присоединять в C-4 и C-6 положениях пиримидинового кольца, согласно формуле I при любом атоме углерода (углерод-связанный) R³ группы моноциклического гетероарила. Моноциклические гетероарильные радикалы включают, но не ограничиваются: 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, 3-пиразолил, 4-пиразолил, 2-пирролил, 3-пирролил, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, 3-пиридазинил, 4-пиридазинил, 5-пиридазинил, 2-пиримидинил, 5-пиримидинил, 6-пиримидинил, 2-пиразинил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 5-оксазолил, 2-фуранил, 3-фуранил, 2-тиенил, 3-тиенил, 3-триазолил, 1-триазолил, 5-тетразолил, 1-тетразолил и 2-тетразолил. Моноциклические гетероарилы необязательно замещают.

"Конденсированный бициклический C₄-C₂₀ гетероциклил" и "конденсированный бициклический C₁-C₂₀ гетероарил", содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, отличаются только своим ароматическим характером, и содержат два кольца, конденсированные между собой, т.е. имеют общую связь. Конденсированные бициклические гетероциклильные и гетероарильные радикалы можно не замещать или замещать и присоединять по C-4 и C-6 положениям пиримидинового кольца согласно формуле I при любом атоме углерода (углерод-присоединенный) R³ группы конденсированной бициклической C₄-C₂₀ гетероциклильной или конденсированной бициклической C₁-C₂₀ гетероарильной группы. Конденсированные бициклические гетероциклильные и гетероарильные радикалы включают, но не ограничиваются: 1H-индазол, 1H-индол, индолин-2-он, 1-(индолин-1-ил)этанон, 1H-бензо[d][1,2,3]триазол, 1H-пиразоло[3,4-b]пиридин, 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин, 1H-бензо[d]имидазол, 1H-бензо[d]имидазол-2(3H)-он, 1H-пиразоло[3,4-c]пиридин, 1H-пирроло[2,3-c]пиридин, 3H-имидазо[4,5-c]пиридин, 7H-пирроло[2,3-d]пиримидин, 7H-пурин, 1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин, 2-амино-1H-пурин-6(9H)-он, хинолин, хиназолин, хиноксалин, изохинолин, изохинолин-1(2H)-он, 3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-он, 3,4-дигидрохинолин-2(1H)-он, хиназолин-2(1H)-он, хиноксалин-2(1H)-он, 1,8-нафтиридин, пиридо[3,4-d]пиримидин, пиридо[3,2-b]пиразин, бензо[d][1,3]диоксол и 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин.

Термины "лечить" и "лечение" относится и к терапевтическому лечению и профилактическим или превентативным мерам, где цель заключается в предотвращении или замедлении(ослаблении) нежелательного физиологического изменения или заболевания, такого как развитие или распространение рака. Для целей настоящего изобретения положительные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются, ослабление симптомов, ослабление распространения заболевания, стабилизацию (т.е., отсутствие ухудшения) состояния заболевания, остановку или замедление развития заболевания, ослабление или временное ослабление болезненного состояния и ремиссию (частичную или полную), которые можно или нельзя обнаружить. "Лечение" также может относиться к продлению срока жизни по сравнению с ожидаемым сроком жизни при отсутствии лечения. Субъекты, нуждающиеся в лечении, включают субъектов, уже с состоянием или заболеванием, а также субъектов, склонных иметь состояние или заболевание, или субъектов, у которых состояние или заболевание нужно предотвратить.

Фраза "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения настоящего изобретения, которое (i) лечит или предотвращает конкретное заболевание, состояние или расстройство, (ii) смягчает, облегчает или устраняет один или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, или (iii) предотвращает или замедляет возникновение одного или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, описанных в настоящем изобретении. В случае рака терапевтически эффективное количество лекарственного средства может: снизить количество раковых клеток; уменьшить размер опухоли; ингибировать (т.е., замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) проникновение раковых клеток в периферические органы; ингибировать (т.е., замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) метастазы опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или облегчать до некоторой степени один или несколько симптомов, связанных с раком. До некоторой степени лекарственное средство может предотвращать рост и/или уничтожать существующие раковые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Что касается терапии рака эффективность можно измерить, например, оценкой времени до прогрессирования заболевания (TTP) и/или определением скорости ответа (RR).

Термины "рак" и "раковый" относится к или описывает физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым ростом клеток. "Опухоль" содержит одну или несколько раковых клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкемию или лимфонеоплазию. Более конкретно примеры данных видов рака включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого ("NSCLC"), аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшной полости, гепатоцеллюлярный рак, рак кишечника или желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак ободочной и прямой кишки, эндометриальную или маточную карциному, карциному слюнной железы, рак почек, рак простаты, рак наружных женских половых органов, рак щитовидной железы, гепатокарциному, карциному анального канала, карциному мужского полового члена, а также рак головы и рак шеи.

"Химиотерапевтический агент" представляет собой соединение, пригодное для лечения рака, независимо от механизма действия. Классы химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются: алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды веретенного дерева, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, антитела, фотосенсибилизаторы и ингибиторы киназ. Химиотерапевтические агенты включают соединения, применяемые в "направленной терапии" и стандартной химиотерапии. Примеры химиотерапевтических агентов включают: эрлотиниб (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), доцетаксел (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (фторурацил, 5-фторурацил, CAS No. 51-21-8), гемцитабин (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), цисплатин (цис-диамин, дихлорплатина(II), CAS No. 15663-27-1), карбоплатин (CAS No. 41575-94-4), паклитаксел (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), темозоломид (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло[4,3,0]нон-2,7,9-триен-9-карбоксамид, CAS No. 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), тамоксифен ((Z)-2-[4-(1,2-дифенилбут-1-енил)фенокси]-N,N-диметилэтанамин, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) и доксорубицин (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD и рапамицин.

Большее количество примеров химиотерапевтических агентов включают: оксаплатин (ELOXATIN®, Sanofi), бортезомиб (VELCADE®, Millennium Pharm.), сутент (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), летрозол (FEMARA®, Novartis), иматинибмезилат (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (MEK ингибитор, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (MEK ингибитор, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (PI3K ингибитор, Semafore Pharmaceiticals), BEZ-235 (PI3K ингибитор, Novartis), XL-147 (PI3K ингибитор, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), фульвестрант (FASLODEX®, AstraZeneca), леуковорин (фолиновая кислота), рапамицин (сиролимус, RAPAMUNE®, Wyeth), лапатиниб (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), сорафениб (NEXA VAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), гефитиниб (IRESSA®, AstraZeneca), иринотекан (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), типифарниб (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (без кремафора), композиции, содержащие наночастицы альбумина, связанные с паклитакселом (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), вандетаниб (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), хлорамбуцил, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), темсиролимус (TORISEL®, Wyeth), пазопаниб (GlaxoSmithKline), канфосфамид (TELCYTA®, Telik), тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN®, NEOSAR®); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметиломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекана); бриостатин; каллистатин; CC-1065 (включая его адозелезиновый, карзелезиновый и бизелезиновый аналоги); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, естрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид мехлоретаминоксида, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихимицин, калихимицин гамма 1I, калихимицин омега I1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33: 183-186); динемицин, динемицин A; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарзиностатиновый хромофор и родственные хромопротеиновые хромофоры энедииновых антибиотиков, аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-1-норлеуцин, морфолинодоксорубицин, цианоморфолинодоксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин и дозоксидоксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин C, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, гуеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; вещества, подавляющие деятельность надпочечников, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазихинон; элфорнитин; ацетат эллиптиния; эпотилон; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митокстантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидрозид; прокарбазин; PSK® полисахаридные комплексы (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазахинон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трикотеценены (особенно T-2 токсин, верракурин A, роридин A и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ara-C"); циклофосфамид; тиотепа; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; платиновые аналоги, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин (NAVELBINE®); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (XELODA®, Roche); ибандронат; CPT-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из вышеперечисленных.

Также включенными в определение "химиотерапевтический агент" являются: (i) противогормональные агенты, которые действуют, регулируя или ингибируя действие гормона на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы эстрогенового рецептора (SERM), включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX®; тамоксифен цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон и FARESTON® (торемифин цитрат); (ii) ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, который регулирует синтез эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, MEGASE® (мегестрол ацетат), AROMASIN® (эксеместан; Pfizer), форместан, фадрозол, RTVISOR® (ворозол), FEMARA® (летрозол; Novartis) и ARIMIDEX® (анастрозол; AstraZeneca); (iii) антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, леупролид и гозерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолановый нуклеозидный цитозиновый аналог); (iv) ингибиторы протеинкиназы, такие как MEK ингибиторы (WO 2007/044515); (v) ингибиторы липидной киназа; (vi) антисенс олигонуклеотиды, в частности олигонуклеотиды, которые ингибируют экспрессию генов сигнальных путей, связанные с отклонениями пролиферации клеток, например, PKC-альфа, Raf и H-Ras, такие как облимерсен (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) рибозимы, такие как ингибиторы VEGF экспрессии (например, ANGIOZYME®) и ингибиторы HER2 экспрессии; (viii) вакцины, такие как вакцины для генной терапии, например, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® и VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) анти-ангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из вышеуказанных.

Также включенными в определение "химиотерапевтический агент" являются терапевтические антитела, такие как алемтузумаб (Campath), бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); цетуксимаб (ERBITUX®, Imclone); панитумумаб (VECTIBIX®, Amgen), ритуксимаб (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idee), пертузумаб (OMNITARG™, 2C4, Genentech), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), тозитумомаб (Bexxar, Corixia), и нагруженное лекарственным средством антитело, гемтузумаб озогамицин (MYLOTARG®, Wyeth).

Гуманизированные моноклональные антитела с терапевтической активностью в качестве химиотерапевтических агентов в комбинации с PI3K ингибиторами настоящего изобретения включают: алемтузумаб, аполизумаб, азелизумаб, атлизумаб, бапинеузумаб, бевацизумаб, биватузумаб мертансин, кантузумаб мертансин, цеделизумаб, картолизумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклизумаб, экулизумаб, эфализумаб, эпратузумаб, эрлизумаб, фелвизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб, пасколизумаб, пекфузитузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселизумаб, раливизумаб, ранибизумаб, ресливизумаб, реслизумаб, ресивизумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сибротузумаб, сиплизумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, тализумаб, тефибазумаб, тоцилизумаб, торализумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкин, туцизитузумаб, умавизумаб, уртоксазумаб и визилизумаб.

"Метаболит" представляет собой продукт, полученный при метаболизме в теле конкретного соединения или его соли. Метаболиты соединения можно обнаружить, применяя стандартные методики, известные в данной области техники, и их активности можно определить, применяя тесты, такие как тесты, описанные в настоящем изобретении. Данные продукты могут образовываться, например, в результате окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления и подобных, вводимого соединения. Соответственно, настоящее изобретение включает метаболиты соединений настоящего изобретения, включая соединения, полученные в процессе, включающем контакт соединения настоящего изобретения с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения его продуктов метаболизма.

Термин "листок-вкладыш" применяют относительно инструкций, обычно содержащихся в торговых упаковках терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозах, введении, противопоказаниях и/или предостережениях, касающихся применения данных терапевтических продуктов.

Термин "хиральная" относится к молекулам, которые обладают свойством неналожимости зеркальных изображений молекулы, тогда как термин "ахиральная" относится к молекулам, зеркальные изображения которых можно наложить друг на друга.

Термин "стереоизомеры" относится к соединениям, которые имеют одинаковую химическую структуру, но отличаются в расположении атомов или групп в пространстве.

"Диастереомер" относится к стереоизомеру с двумя или несколькими хиральными центрами, и чьи молекулы не являются зеркальным отображением друг друга. Диастереомеры обладают различными физическими свойствами, например температурами плавления, температурами кипения, спектральными свойствами и реакционноспособностью. Смеси диастереомеров можно разделить аналитическими методиками с высоким разрешением, такими как электрофорез и хроматография.

"Энантиомеры" относятся к двум стереоизомерам соединения, которые не являются зеркальными изображениями, которые можно наложить друг на друга.

Стереохимические определения и условные обозначения, применяемые в настоящем изобретении, обычно соответствуют S. P.Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; и Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Соединения настоящего изобретения могут содержать асимметрические или хиральные центры и, следовательно, существовать в различных стереоизомерных формах. Подразумевается, что все стереоизомерные формы соединений настоящего изобретения, включая, но неограничиваясь, диастереомеры, энантиомеры и атропизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, образуют часть настоящего изобретения. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения приставки D и L, или R и S используют для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального центра (центров). Приставки d и l или (+) и (-) применяют для обозначения знака вращения плоскости поляризованного света соединением, причем (-) или l обозначает то, что соединение является левовращающим. Соединение с приставкой (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры данные стереоизомеры являются идентичными, за исключением того, что они являются зеркальными изображениями друг друга. Конкретный стереоизомер можно также называть энантиомер, и смесь данных изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 называют рацемической смесью или рацематом, которая может возникать при отсутствии стереоселективности, или стереоспецифичности химической реакции, или способа. Термины "рацемическая смесь" и "рацемат" относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных молекул, не обладающей оптической активностью.

Термин "таутомер" или "таутомерная форма " относится к структурным изомерам с различной энергией, которые являются взаимопревращающимися через барьер с низкой энергией. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимопревращение посредством миграции протона, такие как кето-енольная и имин-енаминовая изомеризация. Таутомеры валентности включают взаимопревращения при реорганизации некоторых из связывающих электронов.

Фраза "фармацевтически приемлемая соль", как используют в настоящем изобретении, относится к фармацевтически приемлемым органическим или неорганическим солям соединения настоящего изобретения. Примеры солей включают, но не ограничиваются, сульфатную, цитратную, ацетатную, оксалатную, хлоридную, бромидную, йодидную, нитратную, бисульфатную, фосфатную, кислую фосфатную, изоникотинатную, лактатную, салицилатную, кислую цитратную, тартратную, олеатную, таннатную, пантотенатную, битартратную, аскорбатную, сукцинатную, малеатную, гентизинатную, фумаратную, глюконатную, глюкуронатную, сахаратную, формиатную, бензоатную, глутаматную, метансульфонатную "мезилатную", этансульфонатную, бензолсульфонатную, п-толуолсульфонатную и памоатную (т.е. 1,1'-метиленбис(2-гидрокси-3-нафтоатную)) соли. Фармацевтически приемлемая соль может содержать включения другой молекулы, такой как ацетат ион, сукцинат ион или другой противоион. Противоион может быть органической или неорганической частицей, которая стабилизирует заряд исходного соединения. Кроме того, фармацевтически приемлемая соль может иметь более чем один заряженный атом в структуре. Примеры, в которых несколько заряженных атомов являются частью фармацевтически приемлемой соли, могут иметь несколько противоионов. Следовательно, фармацевтически приемлемая соль может иметь один или несколько заряженных атомов и/или один или несколько противоионов.

Если соединение настоящего изобретения является основанием, требуемую фармацевтически приемлемую соль можно получить любым подходящим способом, имеющимся в данной области техники, например обработкой свободного основания неорганической кислотой, такой как хлороводородная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, метансульфоновая кислота, фосфорная кислота и подобные, или органической кислотой, такой как уксусная кислота, трифторуксусная кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, миндальная кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, пиранозидильная кислота, такая как глукуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфа-гидроксикислотой, такой как лимонная кислота или винная кислота, аминокислотой, такой как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматической кислотой, такой как бензойная кислота или циннамовая кислота, сульфоновой кислотой, такой как п-толуолсульфоновая кислота или этансульфоновой кислотой или подобными.

Если соединение настоящего изобретения является кислотой, требуемую фармацевтически приемлемую соль можно получить подходящим способом, например, обработкой свободной кислоты неорганическим или органическим основанием, таким как амин (первичный, вторичный или третичный), гидроксидом щелочного металла или гидроксидом щелочноземельного металла или подобными. Иллюстративные примеры подходящих солей включают, но не ограничиваются, органические соли, полученные из аминокислот, таких как глицин и аргинин, аммиака, первичных, вторичных и третичных аминов и циклических аминов, таких как пиперидин, морфолин и пиперазин, и неорганические соли, поученные из натрия, кальция, калия, магния, марганца, железа, меди, цинка, алюминия и лития.

Фраза "фармацевтически приемлемый" обозначает то, что вещество или композиция должна быть совместимой химически и/или токсилогически с другими ингредиентами, содержащимися в составе, и/или с млекопитающим, которого нужно лечить.

"Сольват" относится к ассоциату или комплексу одной или нескольким молекулам растворителя и соединения настоящего изобретения. Примеры растворителей, которые образуют сольваты, включают, но не ограничиваются, воду, изопропанол, этанол, метанол, DMSO, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин. Термин "гидрат" относится к комплексу, в котором молекула растворителя является водой.

Термин "защитная группа" относится к заместителю, который обычно применяют для блокирования или защиты конкретной функциональной группы, в то время как другие функциональные группы соединения подвергаются реакции. Например, "защитная группа аминогруппы" представляет собой заместитель, присоединенный к аминогруппе, который блокирует или защищает аминофункцию в соединении. Подходящие защитные группы аминофункций включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (BOC), бензилоксикарбонил (CBZ) и 9-флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Аналогично "защитная группа гидроксифункции" относится к заместителю гидроксигруппы, который блокирует или защищает гидроксифункцию. Подходящие защитные группы включают ацетил и силил. "Защитная группа карбоксифункции" относится к заместителю карбоксигруппы, который блокирует или защищает карбоксифункцию. Стандартные защитные группы карбоксифункций включают фенилсульфонилэтил, цианоэтил, 2-(триметилсилил)этил, 2-(триметилсилил)этоксиметил, 2-(п-толуолсульфонил)этил, 2-(п-нитрофенилсульфенил)этил, 2-(дифенилфосфино)этил, нитроэтил и подобные. Что касается общего описания защитных групп и их применения, см. T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

Термины "соединение настоящего изобретения", "соединения настоящего изобретения" и "соединения формулы I" включают соединения формул I и их стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры, сольваты, метаболиты и фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.

ПУРИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к пуриновым соединениям и их фармацевтическим композициям, которые являются потенциально пригодными для лечения заболеваний, состояний и/или расстройств, модулируемых PI3 киназами. Более конкретно, настоящее изобретение относится к соединениям формулы I

и их стереоизомерам, геометрическим изомерам, таутомерам или фармацевтически приемлемым солям, в которых:

R¹ выбирают из H, C₁-C₁₂ алкила, C₂-C₈ алкенила, C₂-C₈ алкинила, C₆-C₂₀ арила, -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₃-C₁₂ карбоциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-C(=O)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₆-C₂₀ арила) и -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₁-C₂₀ гетероарила), в которых алкил, алкенил, алкинил, алкилен, карбоциклил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₃, -CH₂OH, -CN, -CF₃, -CO₂H, -COCH₃, -CO₂CH₃, -CONH₂, -CONHCH₃, -CON(CH₃)₂, -NO₂, -NH₂, -NHCH₃, -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -OH, -OCH₃, -S(O)₂N(CH₃)₂, -SCH₃, -CH₂OCH₃ и -S(O)₂CH₃;

R² выбирают из C₁-C₁₂ алкила, C₂-C₈ алкенила, C₂-C₈ алкинила, -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₃-C₁₂ карбоциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-C(=O)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₆-C₂₀ арила) и -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₁-C₂₀ гетероарила), в которых алкил, алкенил, алкинил, алкилен, карбоциклил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₃, -CH₂OH, -CN, -CF₃, -CO₂H, -COCH₃, -CO₂CH₃, -CONH₂, -CONHCH₃, -CON(CH₃)₂, -NO₂, -NH₂, -NHCH₃, -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -OH, -OCH₃, -S(O)₂N(CH₃)₂, -SCH₃, -CH₂OCH₃ и -S(O)₂CH₃;

R³ выбирают из C₆-C₂₀ арила, C₂-C₂₀ гетероциклила, присоединенного через атом углерода, и C₁-C₂₀ гетероарила, присоединенного через атом углерода, каждый из которых необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₃, -CN, -CF₃, -CH₂OH, -CO₂H, -CONH₂, -CON(CH₃)₂, -NO₂, -NH₂, -NHCH₃, -NHCOCH₃, -OH, -OCH₃, -SH, -NHC(=O)NHCH₃, -NHC(=O)NHCH₂CH₃ и -S(O)₂CH₃;

R⁴ выбирают из -NR¹⁰R¹³, -NR¹²C(=O)R¹⁰, -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкил)NR¹⁰R¹³, -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкилен)OR¹⁰, -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкилен)C(=O)NR¹⁰R¹³, -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₃-C₁₂ карбоциклила), -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₆-C₂₀ арила) и -NR¹⁰(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₁-C₂₀ гетероарила), в которых алкил, алкилен, карбоциклил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₃, -CH₂OH, -CN, -CF₃, -CO₂H, -COCH₃, -CONH₂, -CONHCH₃, -CON(CH₃)₂, -NO₂, -NH₂, -NHCH₃, -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -OH, -OCH₃, -S(O)₂N(CH₃)₂, -SCH₃, -CH₂OCH₃ и -S(O)₂CH₃;

R¹⁰, R¹¹ и R¹² независимо выбирают из H, C₁-C₁₂ алкила, C₂-C₈ алкенила, C₂-C₈ алкинила, C₃-C₁₂ карбоциклила, C₂-C₂₀ гетероциклила, C₆-C₂₀ арила и C₁-C₂₀ гетероарила, в которых алкил, алкенил, алкинил, карбоциклил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₂OH, -CH₂C₆H₅, -CN, -CF₃, -CO₂H, -CONH₂, -CONHCH₃, -NO₂, -N(CH₃)₂, -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -OH, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -S(O)₂NH₂, -SCH_3, -S(O)CH_3, -CH₂OCH₃, -CH₃ и -S(O)₂CH₃;

или R¹⁰ и R¹¹, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₂-C₂₀ гетероциклильное кольцо; и

R¹³ выбирают из C₁-C₁₂ алкила, C₂-C₈ алкенила, C₂-C₈ алкинила, C₃-C₁₂ карбоциклила, C₂-C₂₀ гетероциклила, C₆-C₂₀ арила и C₁-C₂₀ гетероарила, в которых алкил, алкенил, алкинил, карбоциклил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₂OH, -CH₂C₆H₅, -CN, -CF₃, -CO₂H, -CONH₂, -CONHCH₃, -NO₂, -N(CH₃)₂, -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -OH, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -S(O)₂NH₂, -SCH_3, -S(O)CH_3, -OCH₂CH₂-N(CH₃)₂ и -S(O)₂CH₃;

или R¹⁰ и R¹³, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют C₂-C₂₀ гетероциклильное кольцо.

При условии, что когда R¹ представляет собой -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклил), R³ не представляет собой индол, который не замещают или замещают.

Примеры вариантов осуществления R¹ включают H, C₁-C₁₂ алкил, такой как CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -CH₂CH₂CH₂CH₃ и -CH₂CH(CH₃)₂, C₁-C₁₂ алкил, замещенный одной или более -OH или F, такой как -C(CH₃)₂OH, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂CH₂OH и -CH₂CH₂CO₂H и 2-морфолиноэтил.

Примеры вариантов осуществления R¹ также включают необязательно замещенный фенил.

Примеры вариантов осуществления R¹ также включают -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклил), такой как -CH₂-(пиперазин-1-ил), в котором пиперазин-1-ил необязательно замещают, такой как -CH₂-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил).

Примеры вариантов осуществления R² включают C₁-C₁₂ алкил, такой как CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -CH₂CH₂CH₂CH₃ и -CH₂CH(CH₃)₂, C₁-C₁₂ алкил, замещенный одной или более -OH или F, такой как -C(CH₃)₂OH, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂CH₂OH и -CH₂CH₂CO₂H, и 2-морфолиноэтил.

Примеры вариантов осуществления R² также включают -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклил), такой как -CH₂-(пиперазин-1-ил), в котором пиперазин-1-ил необязательно замещают, такой как -CH₂-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил).

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ необязательно замещают C₆-C₂₀ арилом. C₆-C₂₀ арильные группы включают фенил, нафталин, антрацен, бифенил, инденил, инданил, 1,2-дигидронафталин и 1,2,3,4-тетрагидронафтил, такой как фенил, замещенный одной или более -OH.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из пиридила, изоксазолила, имидазолила, пиразолила, пирролила, тиазолила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила, оксазолила, оксадиазолила, фуранила, тиенила, триазолила и тетразолила.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из структур:

в которых волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из структур:

в которых волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из структур:

в которых волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой C₁-C₂₀ гетероарил, замещенный одной или несколькими группами, выбранными из F, -CF₃, -NH₂, -NHCH₃, -OH, -OCH₃, -NHC(O)CH₃, -NHC(=O)NHCH₃, -NHC(=O)NHCH₂CH₃, -CO₂H, -CH₂OH, -C(O)NH₂ и -CH₃.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой присоединенный через атом углерода, конденсированный бициклический C₄-C₂₀ гетероциклил или C₁-C₂₀ гетероарил, выбранный из:

в которых волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ выбирают из:

в которых волнистая линия показывает место присоединения, и R¹⁴ выбирают из F, Cl, Br, I, -CH₃, -CN, -CF₃, -CH₂OH, -CO₂H, -CONH₂, -CON(CH₃)₂, -NO₂, -NH₂, -NHCH₃, -NHCOCH₃, -OH, -OCH₃, -SH, -NHC(=O)NHCH₃ и -S(O)₂CH₃.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой присоединенный через атом углерода, конденсированный бициклический C₄-C₂₀ гетероциклил или C₁-C₂₀ гетероарил, выбранный из:

в которых волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R³ представляет собой 1H-индазол-4-ил или 1H-индол-4-ил.

Примеры вариантов осуществления включают те, в которых R⁴ представляет собой -NR¹⁰R¹³ и в котором -NR¹⁰R¹³ образует C₂-C₂₀ гетероциклильное кольцо, такое как морфолинил, 4-метилпиперазин-1-ил, 4-метилсульфонилпиперазин-1-ил или 4-(2-пиридил)пиперазин-1-ил.

Примеры вариантов осуществления включают структуру:

В которой R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из:

в которых волнистая линия показывает место присоединения и в которых R¹ выбирают из C₁-C₁₂ алкила, C₂-C₈ алкенила, C₂-C₈ алкинила, C₆-C₂₀ арила, -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₃-C₁₂ карбоциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-C(=O)-(C₂-C₂₀ гетероциклила), -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₆-C₂₀ арила) и -(C₁-C₁₂ алкилен)-(C₁-C₂₀ гетероарила), в которых алкил, алкенил, алкинил, алкилен, карбоциклил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, -CH₃, -CH₂OH, -CN, -CF₃, -CO₂H, -COCH₃, -CO₂CH₃, -CONH₂, -CONHCH₃, -CON(CH₃)₂, -NO₂, -NH₂, -NHCH₃, -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -OH, -OCH₃, -S(O)₂N(CH₃)₂, -SCH₃, -CH₂OCH₃ и -S(O)₂CH₃.

Соединения формулы I настоящего изобретения могут содержать асимметрические или хиральные центры и, следовательно, существовать в различных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений настоящего изобретения, включая, но не ограничиваясь, диастереомеры, энантиомеры и атропизомеры, а также их смеси, такие как рацемическое смеси, образуют часть настоящего изобретения.

Кроме того, настоящее изобретение включает все геометрические изомеры и изомеры положения. Например, если соединение формулы I содержит двойную связь или конденсированное кольцо, цис- и трансформы, а также их смеси, включены в объем настоящего изобретения. И отдельные изомеры положения, и смесь изомеров положения также включены в объем настоящего изобретения.

В структурах, показанных в настоящем изобретении, где стереохимия конкретного хирального атома не показана, предполагаются все стереоизомеры, и они включены в качестве соединений настоящего изобретения. В случае, где стереохимия показана «жирным клином» или пунктирной линией, представляющих конкретную конфигурацию, данный стереоизомер показан и определен таким образом.

Соединения настоящего изобретения могут существовать в несольватированной, а также в сольватированной формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и подобные, и подразумевается, что настоящее изобретение включает и сольватированные, и несольватированные формы.

Соединения настоящего изобретения могут также существовать в различных таутомерных формах, и все данные формы включены в объем настоящего изобретения. Термин "таутомер" или "таутомерная форма" относится к структурным изомерам различных энергий, которые взаимопревращаемы через барьер с низкой энергией. Например, протонные таутомеры (также известные, как прототропные таутомеры) включают взаимопревращение посредством миграции протона, такие как кето-енольную и имино-енаминовую изомеризации. Таутомеры валентности включают взаимопревращение реорганизацией некоторых из связывающих электронов.

Настоящее изобретение также включает изотопно-меченные соединения настоящего изобретения, которые являются идентичными соединениям, перечисленным в настоящем изобретении, не считая того факта, что один или несколько атомов замещают атомом, имеющим атомный вес или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа, обычно обнаруживаемого в природе. Все изотопы любого конкретного атома или элемента, как показано, включены в объем соединений настоящего изобретения, и их применения. Примеры изотопов, которые можно вводить в соединения настоящего изобретения, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора и йода, такие как ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸О , ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²³I и ¹²⁵I. Определенные изотопно-меченные соединения настоящего изобретения (например, соединения, меченные ³H и ¹⁴C) являются пригодными для анализов на распределение в тканях соединения и/или субстрата. Тритиевые (³H) и углерод-14 (¹⁴C) изотопы являются пригодными из-за легкости их получения и обнаружения. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е., ²H), может давать некоторые терапевтические преимущества благодаря большей метаболической стабильности (например, увеличенное время полураспада in vivo или уменьшенные количества требуемой дозы) и, следовательно, могут быть предпочтительными в некоторых обстоятельствах.

Позитронно-активные изотопы, такие как ¹⁵O, ¹³N, ¹¹C и ¹⁸F, являются пригодными для исследований с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) для изучения заполнения рецепторов субстратом. Изотопно-меченные соединения настоящего изобретения можно обычно получить методиками, аналогичными методикам, описанным на схемах и/или в примерах настоящего изобретения ниже, замещением изотопно-немеченного реагента изотопно-меченным реагентом.

ПОЛУЧЕНИЕ ПУРИНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I

Пуриновые соединения формулы I можно получить синтетическими способами, которые включают методики, аналогичные хорошо известным в химической области техники методикам, особенно с учетом описания, относящегося к настоящему изобретению. Исходные соединения обычно доступны из коммерческих источников, таких как Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI), или их легко получить, применяя способы, хорошо известные специалистам в данной области техники (например, получить способами, в общих чертах описанными в Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), или Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, включая приложения (также доступные в оперативной базе данных Beilstein).

В определенных вариантах осуществления соединения формулы I можно легко получить, применяя хорошо известные методики для получения пуринов (Hammarstrom et al (2007) Tetrahedron Lett. 48(16):2823-2827; Cerna et al (2006) Organic Letters 8(23):5389-5392; Chang et al (2006) J. Med. Chem. 49(10):2861-2867; Yang et al (2005) J. Comb. Chem. 7:474-482; Liu et al (2005) J. Comb. Chem. 7:627-636; Hocek et al (2004) Synthesis 17:2869-2876; Hammarstrom et al (2003) Tetrahedron Lett. 44:8361-8363; Hammarstrom et al (2002) Tetrahedron Lett. 43:8071-8073; Booth et al (1987) J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1: Organic and Bio-Organic Chem. 7: 1521-1526; Booth et al (1981) J. Chem. Soc, Chemical Communications 15:788-789; Yoneda et al (1976) J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1: Organic and Bio-Organic Chem. 14: 1547-1550; Taylor et al (1971) J. Org. Chem. 36(21):3211-3217; Lister, J. H.; Fenn, M. D. The Purines, Supplementary 1, John Wiley & Sons, 1996, Volume 54; The Chemisty of Heterocyclic Compounds, Editors Weissberger, A.; Taylor E. C, Wiley Interscience, 1971, Volume 24; Legraverend, M.; Grierson, D. S. (2006) Bioorg. Med. Chem. 14:3987-4006; Hocek, M. (2003) Eur. J. Org. Chem. 245-254;US 7122665; US 6743919; US 5332744; US 4728644; US 3016378; US 2008/0058297; US 2003/0139427; WO 2008/043031); и других гетероциклов, которые описываются в: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, например, Volume 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9); 1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41: 1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12); 1328-31, (1990), каждая из которых специально вводится с помощью ссылки. Превращения, осуществляемые в синтетической химии, и способы с применением защитных групп (защита и деблокирование), пригодные для получения пуриновых соединений, и необходимых реагентов и промежуточных соединений, известны в данной области техники и включают, например, те, что описаны в R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T. W. Greene and P. G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley и Sons (1999); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley и Sons (1995) и в последующих их изданиях.

Соединения формулы I можно получить отдельно или в виде библиотек соединений, содержащих по меньшей мере 2, например, от 5 до 1000 соединений, или от 10 до 100 соединений. Библиотеки соединений формулы I можно получить комбинаторным подходом 'разделение и смешение' или параллельным синтезом многих соединений, применяя или химические реакции в растворе, или твердофазную химию, методиками, известными специалистам в данной области техники. Таким образом, согласно следующему аспекту настоящего изобретения настоящее изобретение относится к библиотеке соединений, содержащей по меньшей мере 2 соединения, или их фармацевтически приемлемые соли.

Пуриновое соединение можно получить, применяя 2,4,8-трихлорпурин в качестве исходного соединения. Три хлоргруппы можно заместить различными заместителями. Более конкретно, самую реакционноспособную группу (т.е., хлор в положении 4) замещают морфолиновой группой для того, чтобы получить морфолинопурин.

С иллюстративными целями на Фиг. 1 и 2 показаны общие способы получения пуриновых соединений формула I, а также ключевых промежуточных соединений. Что касается более подробного описания отдельных реакционных стадий, смотри общие методики и часть с примерами. Специалистам в данной области техники ясно, что другие синтетические способы можно применять для получения соединений настоящего изобретения. Хотя конкретные исходные соединения и реагенты показаны и обсуждаются на Фиг. 1 и 2, в общих методиках и примерах можно легко применять другие исходные соединения и реагенты для получения ряда производных и/или условий реакций. Кроме того, многие соединения примеров, полученные описанными способами, можно дополнительно модифицировать с учетом данного описания, применяя стандартные химические реакции, хорошо известные специалистам в данной области техники.

При получении соединений формулы I может быть необходима защита реакционноспособной функции (например, первичного или вторичного амина) промежуточных соединений. Необходимость в данной защите будет изменяться в зависимости от природы реакционноспособной функции и условий способов получения. Подходящие защитные группы аминофункций включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (BOC), бензилоксикарбонил (CBz) и 9-флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Необходимость данной защиты легко определяется специалистами в данной области техники. Что касается общего описания защитных групп и их применения, см. T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

Фиг. 1 показывает общий способ получения полифункционализированных пуринов, начинающийся с защиты N-9 атома азота 2,6-дихлор-9H-пурина тетрагидропиранильной группой (THP). Замещение более реакционноспособной хлор-группы морфолином дает 4-(2-хлор-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин. C-8 протон удаляют сильным основанием и подвергают реакции с различными электрофилами (R¹). После деблокирования обработкой слабой кислотой N-9 алкилируют различными электрофилами (R²). Конденсация Сузуки по C-2 атому хлора по общей методике A с применением различных боронатных реагентов и палладиевых катализаторов дает C₆-C₂₀ арил, присоединенный через атом углерода C₂-C₂₀ гетероциклил и присоединенный через атом углерода C₁-C₂₀ гетероарил в качестве R³.

Фиг. 2 показывает альтернативный способ получения полифункционализированных пуринов. 2,6-дихлор-9H-пурин защищают по N-9 THP и более реакционноспособный хлор замещают морфолином для того, чтобы получить 4-(2-хлор-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин. Конденсация Сузуки с применением 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин-2-амина и палладиевых катализаторов дает 5-(6-морфолино-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин. Защита пиримидиновой аминогруппы в виде бис-Boc амино, и удаление THP группы гидролизом слабой кислотой позволяет проводить алкилирование N-9 различными электрофилами (R²). Обработка TFA приводит к удалению Boc группы.

СПОСОБЫ РАЗДЕЛЕНИЯ

В способах получения соединений настоящего изобретения может быть предпочтительно отделять продукты реакции друг от друга и/или от исходных соединений. Целевые продукты каждой стадии или серии стадий разделяют и/или очищают до требуемой степени однородности методиками, обычными в данной области техники. Обычно данное разделение включает многофазовую экстракцию, кристаллизацию из растворителя или смеси растворителей, перегонку, возгонку или хроматографию. Хроматография может включать любое количество способов, включая, например: способы и системы с обращенной и нормальной фазой; эксклюзионную хроматографию; ионнообменную хроматографию; жидкостную хроматографию высокого, среднего и низкого давления; аналитическую мелкомасштабную хроматографию; хроматографию с псевдодвижущимся слоем (SMB) и препаративную тонкослойную или толстослойную хроматографию, а также методики мелкомасштабной тонкослойной и флеш-хроматографии.

Другой класс способов разделения включает обработку смеси реагентом, селективно связывающимся с или, иначе, позволяющим отделить целевой продукт, непрореагировавшие исходные соединения, побочные продукты реакции или подобные. Данные реагенты включают адсорбенты или абсорбенты, такие как активированный уголь, молекулярные сита, ионообменные среды или подобные. Альтернативно, реагенты могут представлять собой кислоты в случае основных соединений, основания в случае кислых соединений, связывающие реагенты, такие как антитела, связывающие белки, селективные комплексоны, такие как краун эфиры, реагенты для ионной экстракции жидкость/жидкость (LIX) или подобные. Выбор подходящих способов разделения зависит от свойств исходных и получаемых соединений, таких как температура плавления и молекулярный вес при перегонке и сублимации, наличие или отсутствие полярных функциональных групп при хроматографии, стабильность соединений в кислой и основной среде в многофазовой экстракции и подобных.

Диастереомерные смеси можно разделять на отдельные диастереомеры благодаря их физико-химическим различиям способами, известными специалистам в данной области техники, такими как хроматография и/или фракционная кристаллизация. Энантиомеры можно разделить превращением энантиомерной смеси в диастереомерную смесь реакцией с подходящим оптически активным соединением (например, хиральным вспомогательным веществом, таким как хиральный спирт или хлорангидрид кислоты Мошера), раделением диастереомеров и превращением (например, гидролизом) отдельных диастереоизомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Кроме того, некоторые соединения настоящего изобретения могут представлять собой атропоизомеры (например, замещенные биарилы) и считают, что они являются частью настоящего изобретения. Энантиомеры можно также разделить, применяя хиральную ВЭЖХ колонку.

Отдельный стереоизомер, например энантиомер, практически не содержащий второй стереоизомер, можно получить разделением рацемической смеси, применяя способ, такой как образование диастереомеров, применяя оптически активные реагенты для разделения (Eliel, E. и Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302). Рацемические смеси хиральных соединений настоящего изобретения можно разделить и выделить любым подходящим способом, включая: (1) образование ионных, диастереомерных солей с хиральными соединениями и разделение фракционной кристаллизацией или другими способами; (2) образование диастереомерных соединений с хиральными реагентами для получения производных, разделение диастереомеров и превращение в чистые стереоизомеры; и (3) разделение практически не содержащих или обогащенных стереоизомеров непосредственно в хиральных условиях. См.: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).

По способу (1) диастереомерные соли можно получить реакцией энантиомерно чистых хиральных оснований, таких как бруцин, хинин, эфедрин, стрихнин, α-метил-β-фенилэтиламин (амфетамин) и подобных, с асимметрическими соединениями, содержащими кислотную функцию, такими как карбоновая кислота и сульфоновая кислота. Разделение диастереомерных солей можно осуществить фракционной кристаллизацией или ионной хроматографией. Для разделения оптических изомеров аминосоединений добавление хиральной карбоновой или сульфоновой кислот, таких как камфорсульфокислота, винная кислота, миндальная кислота или молочная кислота, может приводить к образованию диастереомерных солей.

Альтернативно, по способу (2), субстрат, который нужно выделить, реагирует с одним энантиомером хирального соединения для того, чтобы образовать диастереомерную пару (E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322). Диастереомерные соединения можно получить реакцией асимметричных соединений с энантиомерно чистыми хиральными реагентами для получения производных, такими как производные ментола, с последующим разделением диастереомеров и гидролизом для получения чистого или обогащенного энантиомера. Способ определения оптической чистоты включает получение хиральных эфиров, таких как эфиры ментола, например (-) ментил хлороформиат в присутствии основания, или эфира Мошера, α-метокси-α-(трифторметил)фенилацетата (Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165), рацемической смеси, и анализ ¹H ЯМР спектра на присутствие двух атропизомерных энантиомеров или диастереомеров. Стабильные диастереомеры атропизомерных соединений можно разделить и выделить прямой- и обращенно-фазовой хроматографией, следуя способам разделения атропизомерных нафтилизохинолинов (WO 96/15111). По способу (3) рацемическую смесь двух энантиомеров можно разделить хроматографией, применяя хиральную стационарную фазу ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378). Обогащенные или очищенные энантиомеры можно различать способами, применяемыми для различения других хиральных молекул с асимметричными атомами углерода, такими как оптическое вращение и круговой дихроизм.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Определение активности PI3 киназной активности соединения формулы I можно осуществить рядом прямых и косвенных способов определения. Определенные примеры соединений, описанных в настоящем изобретении, можно исследовать на их PI3K связывающую активность (Пример 52) и in vitro активность относительно опухолевых клеток (Пример 53). Диапазон PI3K связывающих активностей составлял от меньше чем 1 нМ (наномолярный) до приблизительно 10 мкМ (мкмолярный). Определенные примеры соединений настоящего изобретения обладают IC₅₀ величиной PI3K связывающей активности меньшей, чем приблизительно 10 нМ. Определенные соединения настоящего изобретения обладают IC₅₀ величинами активности по отношению к опухолевым клеткам меньшими, чем приблизительно 100 нМ.

Цитотоксическую или цитостатическую активность соединений формулы I из примеров измеряли: помещением линии пролиферирующих опухолевых клеток млекопитающего в среду для клеточной культуры, добавлением соединения формулы I, выращиванием клеток в течение периода времени от приблизительно 6 часов до приблизительно 5 дней; и измерением жизнеспособности клеток (Пример 53). Анализы in vitro на основе клеток применяли для измерения жизнеспособности, т.е. пролиферации (IC₅₀), цитотоксичности (EC₅₀) и индукции апоптоза (активация каспазы).

Активность in vitro соединений формулы I из примеров измеряли анализом пролиферации клеток, CellTiter-Glo^® люминисцентным анализом жизнеспособности клеток, имеющимся в продаже у Promega Corp., Madison, WI (Пример 53). Данный способ гомогенного анализа основывается на рекомбинантной экспрессии люциферазы Coleoptera (US 5583024; US 5674713; US 5700670), и в нем определяют число живых клеток в культуре на основе количественной оценки присутствующего АТФ, индикатора метаболически активных клеток (Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). CellTiter-Glo^® анализ проводят в 96 или 384-луночном формате, делающим его пригодным для автоматического скрининга высокой производительности (HTS) (Cree et al (1995) Anticancer Drugs 6:398-404). Методики гомогенного анализа включают добавление одного реагента (CellTiter-Glo^® реагент) непосредственно к клеткам, выращенным в снабженной сывороткой среде. Промывка клеток, удаление среды и большое количество стадий с применением пипеток не требуются. Система позволяет обнаруживать минимум 15 клеток/лунка в 384-луночном формате через 10 минут после добавления реагента и смешивания.

Гомогенный формат "добавление-смешение-измерение" приводит в результате к лизису клеток и генерированию люминесцентного сигнала, пропорционального количеству присутствующего АТФ. Количество АТФ является прямо пропорциональным количеству клеток, присутствующих в культуре. Анализ CellTiter-Glo^® генерирует люминисцентный сигнал "типа свечения", получаемый при люциферазной реакции, который обладает периодом полузатухания, обычно большим чем пять часов, в зависимости от типа клеток и применяемой среды. Количество жизнеспособных клеток выражается в относительных люминесцентных единицах (RLU). Субстрат, люциферин светляков, подвергается окислительному декарбоксилированию рекомбинантной люциферазой светляков с сопутствующим превращением АТФ в АМФ и генерированием фотонов. Увеличенный период полузатухания устраняет необходимость применения дозаторов для реагентов и обеспечивает гибкость обработки большого количества планшетов в непрерывном или периодическом режиме. Данный анализ клеточной пролиферации можно применять в различных многолуночных форматах, например 96- или 384-луночном формате. Данные можно регистрировать на люменометре или CCD устройстве для проявления изображения, полученного с помощью фотокамеры. Выход люминесценции представляют в относительных световых единицах (RLU), измеренных с течением времени.

Антипролиферативное действие соединений формулы I из примеров измеряли CellTiter-Glo^® анализом (Пример 53) относительно нескольких линий опухолевых клеток, включая PC3, Detroit 562 и MDAMB361.1. Величины EC₅₀ определяли для тестируемых соединений. Диапазон активностей клеток in vitro был от приблизительно 100 нМ до приблизительно 10 мкМ.

Определенные свойства всасывания, распределения, метаболизма и выведения измеряли для определенных соединений из примеров анализом, включающим: Caco-2 проницаемость (Пример 54), клиренс гепатоцитами (Пример 55), ингибирование цитохрома P450 (Пример 56), индукцию цитохрома P450 (Пример 57), связывание белков плазмы (Пример 58) и блокирование hERG каналов (Пример 59).

Соединения формулы I из примеров №101-156 в Таблице, получали, охарактеризовывали и испытывали на PI3K активность согласно способам настоящего изобретения, и они имеют следующие структуры и соответствующие названия (ChemDraw Ultra, Version 9.0.1, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA).

Таблица 1
No	Структура	Наименование
101		2-(9-(2-гидроксиэтил)-2-(1H-индол-4-ил)-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
102		2-(2-(2-амино-4-метилпиримидин-5-ил)-9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
103		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-бутил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
104		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9-пропил-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол

105		3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
106		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
107		1-(4-((2-(аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)пиперидин-1-ил)этанон
108		1-(3-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)пирролидин-1-ил)этанон

109		(R)-3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пропан-1-он
110		(S)-3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пропан-1-он
111		1-(3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропаноил)-N-метилпиперидин-4-карбоксамид
112		3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(4-метилсульфонил)пиперазин-1-ил)пропан-2-он

113		3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-морфолинопропан-1-он
114		3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота
115		5-(9-(4-(метилсульфонил)бензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
116		метил 4-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)бензоат

117		5-(6-морфолино-9-(2-морфолиноэтил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
118		5-(9-(3-метоксибензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
119		метил 3-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)бензоат
120		3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропан-1-ол

121		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)этанол
122		1-(2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетил)-N-метилпиперидин-4-карбоксамид
123		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)этанон
124		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-морфолиноэтанон

125		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота
126		метил 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетат
127		5-(9-метил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
128		5-(9-метил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиридин-2-амин
129		4-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин

130		2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
131		2-(2-(6-аминопиридин-3-ил)-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
132		2-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол
133		4-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-(2-метоксиэтил)-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин
134		N-(4-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенил)ацетамид

135		5-(9-метил-8-((4-метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиридин-2-амин
136		4-(2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин
137		4-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-2-(пиридин-3-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин
138		4-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин
139		4-(2-(2-(3-гидроксифенил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетил)пиперазин-2-он

140		2-(2-(3-гидроксифенил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-N-метилацетамид
141		3-(6-морфолино-9-(пиридин-4-илметил)-9H-пурин-2-ил)фенол
142		3-(9-(4-фторбензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол
143		3-(9-бензил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол
144		3-(9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол

145		3-(9-изобутил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол
146		5-(8-((4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)метил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
147		5-(8-((4-(азетидин-1-ил)пиперидин-1-ил)метил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
148		5-(8-((4-(азетидин-1-ил)пиперидин-1-ил)метил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)-4-метилпиримидин-2-амин
149		2-(4-((2-(2-амино-4-метилпиперидин-5-ил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)-2-метилпропанамид

150		5-(8-((4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)метил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)-4-метилпиримидин-2-амин
151		5-(8-(1,4'-бипиперидин-1'-илметил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)-4-метилпиримидин-2-амин
152		5-(8-(1,4'-бипиперидин-1'-илметил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин
153		5-(9-этил-6-морфолино-8-((4-морфолинопиперидин-1-ил)метил)-9H-пурин-2-ил)-4-метилпиримидин-2-амин
154		5-(9-этил-6-морфолино-8-((4-морфолинопиперидин-1-ил)метил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин

155		N-(1-((2-(2-амино-4-метилпиримидин-5-ил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)метил)пиперидин-4-ил)-N-метилметансульфонамид
156		N-(1-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-этил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)метил)пиперидин-4-ил)-N-метилметансульфонамид

ВВЕДЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I

Соединения настоящего изобретения можно вводить любым путем, подходящим для состояния, которое нужно лечить. Подходящие пути включают пероральный, парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный), трансдермальный, ректальный, назальный, местный (включая буккальный и сублингвальный), вагинальный, внутрибрюшинный, внутрилегочный и интраназальный путь введения. Что касается локальной иммуносупрессивной терапии, соединения можно вводить внутрь пораженных тканей, включая опрыскивание или иначе контакт хозяина с ингибитором перед трансплантацией. Ясно, что предпочтительный путь введения будет изменяться, например, в зависимости от состояния пациента. Когда соединение вводят перорально, его можно получать в виде пилюль, капсул, таблеток и т.д. с фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным веществом. Когда соединение вводят парентерально, его можно смешивать с фармацевтически приемлемой для парентерального введения основой и получать в виде стандартной инъецируемой лекарственной формы, как описано ниже.

Доза, применяемая для лечения пациентов, являющихся людьми, может изменяться в диапазоне от приблизительно 10 мг до приблизительно 1000 мг соединения формулы I. Стандартная доза может составлять от приблизительно 100 мг до приблизительно 300 мг соединения. Дозу можно вводить один раз в день (QID), дважды в день (BID), или более часто, в зависимости от фармакокинетических и фармакодинамических свойств, включающих абсорбцию, распределение, метаболизм и выведение конкретного соединения. Кроме того, показатели токсичности могут влиять на дозировку и режим введения. При введении перорально пилюли, капсулы или таблетки можно принимать внутрь ежедневно или менее часто в течение оговоренного срока. Режим можно повторять для ряда циклов терапии.

СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЯМИ ФОРМУЛЫ I

Соединения настоящего изобретения являются пригодными для лечения гиперпролиферативных заболеваний, состояний и/или расстройств, включая, но не ограничиваясь, заболевания, состояния и расстройства, характеризующиеся повышенной экспрессией липидных киназ, например PI3 киназ. Соответственно, другой аспект настоящего изобретения включает способы лечения или предотвращения заболеваний или состояний, которые можно лечить или предотвращать ингибированием липидных киназ, включая PI3. В одном варианте осуществления способ включает введение нуждающемуся в лечении млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения формулы I, или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера или фармацевтически приемлемой соли. В одном варианте осуществления пациента, являющегося человеком, лечат соединением формулы I и фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным лекарственным веществом или основой, где упомянутое соединение формулы I содержится в количестве, достаточном для заметного ингибирования PI3 киназной активности.

Виды рака, которые лечат согласно способам настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются, рак груди, рак яичников, рак шейки матки, рак простаты, рак яичек, рак мочеполового тракта, рак пищевода, рак гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, рак кожи, кератоакантому, рак легкого, плоскоклеточную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легкого, рак костей, рак толстой кишки, аденому, рак поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, паппилярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчного протока, карциному почек, миелоидные заболевания, лимфоидные заболевания, рак «волосатых» клеток, рак полости рта и глотки, рак губ, рак языка, рак ротовой щели, рак тонкой кишки, рак ободочной и прямой кишки, рак толстой кишки, рак мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина и лейкемию.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению настоящего изобретения для применения для лечения заболевания или состояния, описанного в настоящем изобретении, у млекопитающего, например человека, страдающего от данного заболевания или состояния. Также он относится к применению соединения настоящего изобретения для получения лекарственного средства для лечения заболевания и состояния, описанного в настоящем изобретении, у теплокровных животных, таких как млекопитающее, например человека, страдающего от данного заболевания.

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ

Для того чтобы применять соединение настоящего изобретения для терапевтического лечения (включая профилактическое лечение) млекопитающих, включая человека, их обычно формулируют согласно стандартной фармацевтической практике в виде фармацевтической композиции.

Согласно данному аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение настоящего изобретения совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Стандартную композицию получают смешением соединения настоящего изобретения и носителя, разбавителя или вспомогательного вещества. Подходящие носители, разбавители и вспомогательные вещества являются хорошо известными специалистам в данной области техники и включают вещества, такие как углеводы, воски, растворимые в воде и/или поддающиеся разбуханию полимеры, гидрофильные или гидрофобные вещества, желатин, масла, растворители, воду и подобные. Конкретный применяемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество будет зависеть от пути и целей, для которых будет применяться соединение настоящего изобретения. Растворители обычно выбирают, исходя из растворителей, известных специалистам в данной области техники как безопасные (GRAS) для введения млекопитающему. Обычно, безопасные растворители являются нетоксичными водными растворителями, такими как вода, и другими нетоксичными растворителями, которые являются растворимыми или смешиваемыми с водой. Подходящие водные растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (например, PEG 400, PEG 300) и т.д., и их смеси. Композиции также содержат один или более буферов, стабилизаторов, поверхностно-активных веществ, смачивающих агентов, смазывающих агентов, эмульгаторов, суспендирующих веществ, консервантов, антиоксидантов, агентов для нанесения прозрачного покрытия, регуляторов сыпучести, вспомогательных веществ, используемых в производственном процессе, красителей, подсластителей, ароматизирующих агентов, вкусовых добавок и других известных добавок для придания лекарственному средству привлекательного вида (т.е. соединению настоящего изобретения или его фармацевтической композиции) или облегчения получения фармацевтического продукта (т.е. лекарственного средства).

Состав можно получить, применяя стандартные методики растворения и смешения. Например, нерасфасованное лекарственное вещество (т.е. соединение настоящего изобретения или стабилизированная форма соединения (например, комплекс с циклодекстриновым производным или другим известным комплексообразователем)) растворяют в подходящем растворителе в присутствии одного или более вспомогательных веществ, описанных выше. Соединение настоящего изобретения обычно формулируют в фармацевтические лекарственные формы для обеспечения легко контролируемого дозирования лекарственного средства и облегчения соблюдения пациентом предписанного режима.

Фармацевтическую композицию (или рецептуру) для применения можно упаковывать различными способами, в зависимости от применяемого способа для введения лекарственного средства. Обычно изделие для продажи включает контейнер, содержащий фармацевтическую композицию в подходящей форме. Подходящие упаковки являются хорошо известными специалистам в данной области техники и включают материалы, такие как флаконы (пластиковые и стеклянные), саше, ампулы, полиэтиленовые пакеты, металлические цилиндры и подобные. Упаковка может содержать наклейку для защиты от неумелого обращения для предотвращения несанкционированного доступа к содержимому упаковки. Кроме того, упаковка содержит внутри себя вкладыш, в котором описывается содержание упаковки. Вкладыш может также содержать подходящие меры предосторожности.

Фармацевтические композиции соединений настоящего изобретения можно получить для различных путей и типов введения. Например, соединение формулы I, имеющее требуемую степень чистоты, можно необязательно смешивать с фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed.) в форме лиофилизированных композиций, порошка, полученного размолом, или водного раствора. Получение рецептуры можно проводить смешением при комнатной температуре и при подходящем pH, и при требуемой степени чистоты, с физиологически приемлемыми носителями, т.е. носителями, которые являются нетоксичными для реципиентов при используемом дозировании и концентрациях. Величина pH композиции зависит от конкретного применения и концентрации соединения, но может изменяться от приблизительно 3 до приблизительно 8. Композиция в ацетатном буфере при pH 5 является подходящим вариантом осуществления.

Соединение обычно можно хранить в виде твердой композиции, лиофилизированной композиции или водного раствора.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения будут получать, дозировать и вводить некоторым образом, т.е. в количестве, при концентрациях, при режиме, курсе, среде и пути введения, согласующимися с надлежащей медицинской практикой. Факторы, которые нужно учитывать в данном контексте, включают конкретное заболевание, которое нужно лечить, конкретное млекопитающее, которое нужно лечить, клиническое состояние конкретного пациента, причину заболевания, место доставки агента, способ введения, режим введения и другие факторы, известные терапевтам. "Терапевтически эффективное количество" соединения, которое будут вводить, будет определяться данными факторами, и оно представляет собой минимальное количество, необходимое для предотвращения, облегчения или лечения гиперпролиферативного заболевания.

В качестве общей нормы первоначальное фармацевтически эффективное количество ингибитора, вводимого парентерально на дозу, будет находиться в диапазоне приблизительно 0,01-100 мг/кг, а именно приблизительно от 0,1 до 20 мг/кг веса тела пациента в день, причем стандартный первоначальный диапазон применяемого соединения составляет от 0,3 до 15 мг/кг/день.

Приемлемые разбавители, носители, вспомогательные вещества и стабилизаторы являются нетоксичными для пациентов при применяемых дозировках и концентрациях, и они включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включающие аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметанийхлорид; бензалконийхлорид, бензэтонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкильные парабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол; низкомолекулярные (меньше чем приблизительно 10 остатков аминокислот) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (PEG). Активные фармацевтические ингредиенты можно также включать в микрокапсулы, полученные, например, методиками накапливания или полимеризацией на границе фаз, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли-(метилметакрилатные) микрокапсулы, соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственного средства (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Данные методики описывают в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

Можно получить составы с замедленным высвобождением соединения формулы I. Подходящие примеры составов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матриксы твердых гидрофобных полимеров, содержащих соединение формулы I, где матриксы находятся в виде формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриксов с замедленным высвобождением включают полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат), или поли(виниловый спирт)), полиактиды (US 3773919), сополимеры L-глютаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата, неразлагающиеся этилен-винил ацетат, разлагающиеся сополимеры молочная кислота-гликолевая кислота, такие как LUPRON DEPOT™ (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной-гликолевой кислоты и лейпролидацетата) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляную кислоту.

Композиция включает составы, подходящие для путей введения, подробно рассмотренные в настоящем изобретении. Удобно получать составы в стандартной лекарственной форме, и их можно получить любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. Методики и составы обычно можно найти в Remington 's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Данные способы включают стадию смешения активного ингредиента и носителя, который состоит из одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. Обычно состав получают равномерным и тщательным смешением активного ингредиента с жидкими носителями или мелкоизмельченными твердыми носителями, или обоими, и, затем, в случае необходимости, формованием продукта.

Составы соединения формулы I, подходящие для перорального введения, можно получить в виде дискретных единичных форм, таких как пилюли, капсулы, саше или таблетки, причем каждая содержит предварительно определенное количество соединения формулы I. Прессованные таблетки можно получить прессованием на подходящей машине активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим, смазывающей добавкой, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки можно получить формованием в подходящей машине смеси порошкообразного активного ингредиента, смоченного инертным жидким разбавителем. Таблетки можно необязательно покрывать или на них можно наносить риски и необязательно формулировать так, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение из них активного ингредиента. Таблетки, формованные пастилки, пастилки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, например желатиновые капсулы, сиропы или эликсиры можно получить для перорального применения. Составы соединения формулы I, предназначенные для перорального применения, можно получить согласно любому способу, известному в области получения фармацевтических композиций, и данные композиции могут содержать один или более агентов, включая подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, для того чтобы придать привлекательный вид. Таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, которое является подходящим для получения таблеток, являются приемлемыми. Данные вспомогательные вещества могут представлять собой, например: инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактозу, фосфат кальция или натрия; агенты для гранулирования и разрыхлители, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие, такие как крахмал, желатин или камедь; и смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки можно не покрывать или покрывать известными способами, включая микрокапсулирование для замедления разрушения и адсорбции в желудочно-кишечном тракте и посредством этого обеспечить замедленное действие в течение более продолжительного периода времени. Например, можно применять материал, замедляющий скорость высвобождения активного ингредиента, такой как моностеарат глицерина или дистеарат глицерина отдельно или с воском.

Для лечения глаз или других внешних тканей, например, глотки и кожи, составы предпочтительно применять в виде мази для местного применения или крема, содержащего активный ингредиент(ингредиенты) в количестве, например, 0,075-20% в/в. При получении мази активные ингредиенты можно применять или с парафиновой, или смешиваемой с водой мазевой основой. Альтернативно, активные ингредиенты можно формулировать в виде крема с кремовой основой масло в воде. При желании водная фаза кремовой основы может содержать многоатомный спирт, т.е., спирт, содержащий две или более гидроксильные группы, такой как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (включая PEG 400) и их смеси. Желательно, чтобы составы для местного применения содержали соединение, которое увеличивает абсорбцию или проникновение активного ингредиента через кожу или другие подвергаемые воздействию поверхности. Примеры данных агентов, усиливающих проникновение через кожу, включают диметилсульфоксид и родственные ему аналоги. Масляная фаза эмульсий настоящего изобретения может состоять из известных ингредиентов в известном соотношении. В то время как фаза может содержать только эмульгатор, желательно, чтобы она содержала смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом либо и жиром, и маслом. Предпочтительно добавлять гидрофильный эмульгатор вместе с липофильным эмульгатором, который действует в качестве стабилизатора. Также предпочтительно добавлять и масло, и жир. Вместе, эмульгатор(эмульгаторы) с или без стабилизатора(стабилизаторов) составляют так называемый неионный эмульгированный воск, и воск вместе с маслом и жиром образует так называемою эмульгированную мазевую основу, которая образует масляную дисперсную фазу кремовых композиций. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсий, подходящие для применения в композициях настоящего изобретения, включают Tween® 60, Span® 80, цетостеариновый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, моностеарат глицерина и лаурилсульфат натрия.

Водные суспензии соединений формулы I содержат активные вещества в смеси с вспомогательными веществами, подходящими для получения водных суспензий. Данные вспомогательные вещества включают суспендирующие агенты, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, кроскармелоза, повидон, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь, и диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природные фосфатиды (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации этиленоксида с алифатическим спиртом с длинной углеводородной цепью (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с неполным эфиром, полученным из жирной кислоты и гекситолангидрида (например, моноолеат полиоксиэтиленсорбитан). Водная суспензия может также содержать один или более консервантов, таких как этил или н-пропил п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подсластителей, таких как сахароза или сахарин.

Фармацевтические композиции соединений формулы I могут быть в форме инъецируемого препарата, такого как стерильная инъецируемая водная или масляная суспензия. Данную суспензию можно формулировать согласно известному уровню техники, применяя подходящие диспергирующие или смачивающие агенты, и суспендирующие агенты, которые упоминались выше. Стерильные инъецируемые препараты могут также представлять собой стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксичном разбавителе или растворителе, приемлемом для парентерального введения, таком как раствор в 1,3-бутандиоле, или их можно получать в виде лиофилизированного порошка. К числу приемлемых носителей и растворителей, которые можно применять, относится вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла можно обычно применять в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этих целей можно применять любое асептическое жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, можно применять жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, для получения инъецируемых препаратов.

Количество активного ингредиента, которое можно смешивать с носителем для получения единичной лекарственной формы, будет изменяться в зависимости от пациента, подвергающегося лечению, и конкретного способа введения. Например, композиция с постепенным высвобождением, предназначенная для перорального введения людям, может содержать от приблизительно 1 до 1000 мг активного вещества, смешанного с подходящим и пригодным количеством носителя, которое может изменяться от приблизительно 5 до приблизительно 95% суммарного веса композиции (вес:вес). Фармацевтическую композицию можно получить для того, чтобы обеспечить легкость измерения количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенного вливания, может содержать от приблизительно 3 до 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора для того, чтобы наблюдалась инфузия подходящего объема при скорости приблизительно 30 мл/час.

Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъецируемые растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и жидкие фазы, которые делают композицию изотонической крови предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие агенты и загустители.

Композиции, подходящие для местного введения на глаза, также включают глазные капли, в которых активный ингредиент растворяют или суспендируют в подходящем носителе, особенно водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент предпочтительно присутствует в данной композиции при концентрации приблизительно 0,5-20% в/в, например приблизительно 0,5-10% в/в, например приблизительно 1,5% в/в.

Композиции, подходящие для местного введения в полость рта, включают таблетки для рассасывания, содержащие активный ингредиент в ароматизированной основе, обычно сахарозе и камеди или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахарозе и камеди; и жидкость для полоскания рта, содержащую активный ингредиент в подходящем жидком носителе.

Композиции для ректального введения могут быть представлены суппозиторием с подходящим основанием, содержащим, например, масло какао или салицилат.

Композиции, подходящие для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, например, в диапазоне 0,1-500 микрон (включая размеры частиц в диапазоне от 0,1 до 500 микрон с шагом, таким как 0,5, 1, 30 микрон, 35 микрон и т.д.), которые вводят быстрой ингаляцией через носовой канал или ингаляцией через полость рта так, чтобы достичь альвеолярных мешочков. Подходящие композиции включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Композиции, подходящие для введения с помощью аэрозоля или сухого порошка, можно получить согласно стандартным способам и можно доставлять с различными терапевтическими агентами, такими как соединения, ранее применяемые для лечения или профилактики заболеваний, как описано ниже.

Композиции, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены композициями в виде пессарий, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спрея, содержащих в добавление к активному ингредиенту носители, о которых известно, что они являются подходящими в данной области техники.

Композиции можно упаковывать в упаковки для одной дозы или для большего количества доз, например запаянные ампулы и пробирки, и их можно хранить в лиофилизированном состоянии, требующем только добавления стерильного водного носителя, например воды, для инъекции непосредственно перед применением. Растворы и суспензии, приготовленные для немедленного инъецирования, получают из стерильных порошков, гранул и таблеток описанного ранее типа. Предпочтительными композициями для единичного дозирования являются композиции, содержащие дневную дозу или единичную дневную поддозу, как перечислено выше в настоящем изобретении, или их подходящие части, активного ингредиента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к ветеринарным композициям, содержащим по меньшей мере один активный ингредиент, как определено выше, вместе с пригодным для ветеринарных целей носителем. Пригодные для ветеринарных целей носители являются веществами, пригодными для целей введения композиции, и они могут быть твердыми, жидкими или газообразными веществами, которые, иначе, являются инертными или приемлемыми в области ветеринарии и являются совместимыми с активным ингредиентом. Данные ветеринарные композиции можно вводить парентерально, перорально или любым другим требуемым путем.

КОМБИНАЦИОННАЯ ТЕРАПИЯ

Соединения формулы I можно применять отдельно или в комбинации с другими терапевтическими агентами для лечения заболевания или расстройства, описанного в настоящем изобретении, такого как гиперпролиферативное заболевание (например, рак). В определенных вариантах осуществления соединение формулы I смешивают со вторым соединением, которое обладает противогиперпролиферативной активностью или активностью, которая является пригодной для лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), для получения фармацевтической композиции для комбинационной терапии или осуществления режима дозирования, как в комбинационной терапии. Второе соединение фармацевтической композиции для комбинированной терапии или для режима дозирования, как в комбинационной терапии, предпочтительно обладает активностью, дополняющей активность соединения формулы I так, что они не оказывают неблагоприятное действие друг на друга. Предпочтительно, чтобы данные соединения присутствовали при комбинационной терапии в количестве, которое является эффективным для предполагаемой цели. В одном варианте осуществления композиция настоящего изобретения содержит соединение формулы I или его стереоизомер, геометрический изомером, таутомер, сольват, метаболит, или фармацевтически приемлемую соль, или пролекарство в комбинации с химиотерапевтическим агентом, таким как описано в настоящем изобретении.

Комбинационную терапию можно осуществлять в режиме одновременного или последовательного введения. При последовательном введении композицию для комбинационной терапии можно вводить двумя или более введениями. Комбинированное введение включает совместное введение, применяя разные композиции или одну фармацевтическую композицию, и последовательное введение в любом порядке, при котором предпочтительно имеется период времени, когда оба (или все) активные агенты одновременно проявляют биологическую активность.

Подходящие дозы любого из вышеупомянутых совместно вводимых агентов являются дозами, применяемыми в настоящее время, и они могут быть снижены, благодаря комбинированному действию (эффекту синергии) нового обнаруженного агента и других химиотерапевтических агентов или лекарственных средств.

Комбинационная терапия может обеспечивать "эффект синергии" и оказаться "синергичной", т.е. эффект, достигаемый при применении активных ингредиентов вместе, является бóльшим, чем сумма эффектов, которые являются результатом отдельного применения соединений. Синергический эффект можно достигнуть, когда активные ингредиенты: (1) смешивают в одной композиции и вводят или доставляют одновременно в смешанной, единичной, дозированной композиции; (2) доставляют чередованием или параллельно в виде отдельных композиций; или (3) некоторыми другими режимами. При доставке при терапии с чередующимся введением синергический эффект можно достичь, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например, различными инъекциями в отдельных шприцах, в отдельных пилюлях или капсулах, или отдельными вливаниями. Обычно, в течение терапии с чередующимся введением эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, т.е. периодически, тогда как в комбинационной терапии, эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят вместе.

В конкретном варианте осуществления противораковой терапии соединение формулы I или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит или фармацевтически приемлемую соль или пролекарство можно смешивать с другими химиотерапевтическими, гормональными агентами или агентами на основе антител, такими как агенты, описанные в настоящем изобретении, также как комбинировать его с хирургической терапией и радиотерапией. Таким образом, комбинационная терапия согласно настоящему изобретению включает введение по меньшей мере одного соединения формулы I или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера, сольвата, метаболита или фармацевтически приемлемой соли, или пролекарства, и применение по меньшей мере одного другого способа лечения рака. Количества соединения(соединений) формулы I и другого фармацевтически активного химиотерапевтического агента(агентов) и режимы их введения будут выбираться для того, чтобы достигнуть требуемого эффекта комбинационной терапии.

МЕТАБОЛИТЫ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I

Также включены в объем настоящего изобретения продукты метаболизма in vivo формулы I, описанные в настоящем изобретении. Данные продукты могут образовываться, например, в результате окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, этерификации, деэтерификации, ферментного расщепления и подобных вводимого соединения. Соответственно, настоящее изобретение включает метаболиты соединений формулы I, включая соединения, полученные способом, включающим контакт соединения настоящего изобретения с млекопитающим в течение промежутка времени, достаточного для получения продуктов его метаболизма.

Продукты метаболизма обычно идентифицируют получением радиомеченного (например, ¹⁴C или ³H) изотопа соединения настоящего изобретения, введением его парентерально в дозе, которую можно обнаружить (например, большей, чем приблизительно 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна, или человеку, обеспечением достаточным временем для протекания метаболизма (обычно приблизительно от 30 секунд до 30 часов) и выделением продуктов его превращения из мочи, крови или других биологических образцов. Данные продукты легко выделить, т.к. они являются мечеными (другие выделяют применением антител, способных связываться с эпитопами на поверхности метаболитов). Структуры метаболитов определяют стандартными способами, например MS, LC/MS или ЯМР-анализом. Обычно анализ метаболитов проводят тем же способом, как стандартные исследования метаболизма лекарственных средств, хорошо известные специалистам в данной области техники. Продукты метаболизма, поскольку они не обнаруживаются иначе in vivo, являются пригодными в диагностических анализах для терапевтического дозирования соединений настоящего изобретения.

ГОТОВЫЕ ИЗДЕЛИЯ

В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивают готовым изделием или "набором", содержащим вещества, пригодные для лечения заболеваний и расстройств, описанных выше. В одном варианте осуществления набор содержит контейнер, содержащий соединение формулы I или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит или фармацевтически приемлемую соль или пролекарство. Набор может дополнительно содержать этикетку на упаковке или листовку-вкладыш внутри упаковки. Термин "листовка-вкладыш" применяют относительно инструкций, обычно включаемых в продаваемые упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозах, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения данных терапевтических продуктов. Подходящие упаковки включают, например, флаконы, пробирки, шприцы, блистерную упаковку и т.д. Упаковку можно получить из различных материалов, таких как стекло или пластик. Упаковка может содержать соединение формулы I или его композицию, которая является эффективной для лечения состояния и может содержать стерильное отверстие (например, упаковка может представлять собой резервуар с раствором для внутривенного введения или флакон, имеющий пробку, проницаемую для иглы для подкожной инъекции). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой соединение формулы I. Этикетку или листовка-вкладыш показывают, что композиция применяется для лечения выбранного состояния, такого как рак. Кроме того, этикетка или листовка-вкладыш могут показывать, что пациент, которого надо лечить, является пациентом, имеющим заболевание, такое как гиперпролиферативное заболевание, нейродегенеративное заболевание, гипертрофия сердца, боль, мигрень или нейротравматическое заболевание или осложнение. В одном варианте осуществления этикетка или листок-вкладыш показывают, что композицию, содержащую соединение формулы I, можно применять для лечения заболевания, появившегося в результате аномального роста клеток. Этикетка или листовка-вкладыш могут также показывать, что композицию можно применять для лечения других заболеваний. Альтернативно, или дополнительно, готовое изделие может дополнительно содержать вторую упаковку, содержащую фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера и раствор декстрозы. Оно также может дополнительно содержать другие вещества, желательные с коммерческой точки зрения и с точки изрения потребителя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Набор может дополнительно содержать указания по введению соединения формулы I и, при наличии, вторую фармацевтическую композицию. Например, если набор содержит первую композицию, содержащую соединение формулы I, и вторую фармацевтическую композицию, набор может дополнительно содержать указания по одновременному, последовательному или раздельному введению первой и второй фармацевтических композиций нуждающемуся в лечении пациенту.

В другом варианте осуществления наборы являются подходящими для доставки твердых пероральных форм соединения формулы I, таких как таблетки или капсулы. Данный набор предпочтительно содержит ряд единичных доз. Данные наборы могут содержать блистер, содержащий дозы, ориентированные в порядке их предполагаемого применения. Примером такого набора является "блистерная упаковка". Блистерные упаковки являются хорошо известными в упаковочной промышленности и широко применяются для упаковки фармацевтических единичных лекарственных форм. При желании можно предоставлять памятку, например, в виде чисел, букв или других меток или с вкладышем-календарем, в котором указаны дни в курсе лечения, в которые вводят дозы.

Согласно одному варианту осуществления набор может содержать (a) первую упаковка с содержащимся в ней соединением формулы I; и необязательно (b) вторую упаковку с содержащимся в ней второй фармацевтической композицией, в которой вторая фармацевтическая композиция содержит второе соединение с противогиперпролиферативной активностью. Альтернативно, или дополнительно, набор может дополнительно содержать третью упаковку, содержащую фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера и раствор декстрозы. Он может дополнительно содержать другие вещества, желательные с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

В определенных других вариантах осуществления, в которых набор содержит композицию формулы I и второй терапевтический агент, набор может содержать контейнер для отдельных композиций, такой как разделенный на части флакон или пакет с делениями, сделанный из фольги, однако отдельные композиции могут также содержаться в одной, неразделенной упаковке. Обычно, набор содержит указания по введению отдельных компонентов. Набор является особенно предпочтительным, когда отдельные компоненты предпочтительно вводить в различных лекарственных формах (например, пероральной и парентеральной), когда они вводятся при различных интервалах дозирования или когда титрование отдельных компонентов комбинации требуется лечащим врачом.

ОБЩИЕ МЕТОДИКИ ПОЛУЧЕНИЯ

Общая методика A. Реакция сочетания Судзуки

Реакция сочетания типа Судзуки является пригодной для присоединения моноциклического гетероарила, конденсированного бициклического гетероцикла, конденсированного бициклического гетероарила или фенила во втором положении пиримидинового кольца 2-хлорпурина 21. Например, 21 можно смешать с 1,5 эквивалентами 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 24 и растворить в 3 эквивалентах карбоната натрия в виде 1 молярного раствора в воде и равном объеме ацетонитрила. Добавляют каталитическое количество или более, реагента, содержащего низковалентный палладий, такого как дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия (II). Вместо указанного индазольного эфира бороновой кислоты можно применять ряд бороновых кислот или бороновых эфиров. Также альтернативно, можно защищать атом азота индазола, например, N-THP-защищенное соединение 41. В некоторых случаях можно применять ацетат калия вместо карбоната натрия для регулирования pH водного слоя. Затем, реакционную смесь нагревают до приблизительно 140-150°C под давлением в микроволновом реакторе, таком как Biotage Optimizer (Biotage, Inc.) в течение 10-30 минут. Содержимое экстрагируют этилацетатом или другим органическим растворителем. После упаривания органического слоя продукты реакции сочетания Судзуки, 6,8,9-замещенный 2-(1H-индазол-4-ил)пурин 22 или 6,8,9-замещенный 2-(5-пиримидин-2-амин)пурин 23 можно очищать на силикагеле или обращенно-фазовой ВЭЖХ. Заместители R^1', R^2', R^4' могут представлять собой R¹, R², R⁴, как определено, или их защищенные формы, или предшественники.

Ряд палладиевых катализаторов можно применять на стадии реакции сочетания Судзуки для получения соединений, включая примеры вариантов осуществления 22 и 23. Реакция сочетания Судзуки представляет собой реакцию кросс-сочетания, катализируемую палладием, арилгалида, такого как 21, с бороновой кислотой, такой как 24 или 25. Низковалентные, Pd(II) и Pd(O), катализаторы можно применять в реакции сочетания Судзуки, включая PdC1₂(PPh₃)₂, Pd(трет-Bu)₃, PdCl₂ dppf CH₂Cl₂, Pd(PPh₃)₄, Pd(OAc)/PPh₃, Cl₂Pd[(Pet₃)]₂, Pd(DIPHOS)₂, Cl₂Pd(Bipy), [PdCl(Ph₂PCH₂PPh₂)]₂, Cl₂Pd[P(o-tol)₃]₂, Pd₂(dba)₃/P(o-tol)₃, Pd₂(dba)/P(фурил)₃, Cl₂Pd[P(фурил)₃]₂, Cl₂Pd(PMePh₂)₂, Cl₂Pd[P(4-F- Ph)₃]₂, Cl₂Pd[P(C₆F₆)₃]₂, Cl₂Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)₂]₂, Cl₂Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)₂]₂, и инкапсулированные катализаторы Pd EnCat™ 30, Pd EnCat™ TPP30 и Pd(II)EnCat™ BINAP30 (US 2004/0254066).

Общая методика B. Замещение C-6 азота

К 2,6-дихлорпуриновому промежуточному соединению 27 в растворителе, таком как этанол, добавляют первичный или вторичный амин (R¹⁰R¹³NH, 1,1 экв.) и ненуклеофильное основание, такое как триэтиламин (NEt₃, 1,5 экв., 63 мкл). Альтернативно, можно применять в качестве растворителя ацетонитрил, и карбонат калия можно добавлять в качестве основания. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно 1 часа или в течение ночи, летучие компоненты удаляют в вакууме, и остаток распределяют между DCM и солевым раствором. Если смесь является нерастворимой, ее можно обработать ультразвуком, и твердый продукт собирали фильтрацией. Высушивание над сульфатом магния и упаривание растворителя дает N'-(2-хлорпурин-6-ил)амин-замещенное промежуточное соединение 28, часто в виде кристаллического вещества, или растиранием. Заместители R^1' и R^2' могут представлять собой R¹ и R², как определено, или их защищенные формы, или предшественники.

Общая методика C. Алкилирование N-9 азота

9-H Пуриновое промежуточное соединение 29 растворяют в DMF и добавляют к реакционной смеси 2 эквивалента карбоната цезия. Реакцию нагревают до 50°C, после чего добавляют к реакционной смеси 3 эквивалента алкилгалида R^2'-X. Реакцию контролируют ТСХ или LC/MS и перемешивают до ее завершения, обычно несколько часов. Реакционную смесь экстрагируют EtOAc и водой, и органический слой сушат, фильтруют и концентрируют, получая неочищенный 9-алкилированный пурин 30, который применяют непосредственно в следующей стадии или очищают обращенно-фазовой ВЭЖХ. Заместители R^1', R^3' и R^4' могут представлять собой R¹, R³ и R⁴, как определено, или их защищенные формы, или предшественники.

Общая методика D. Удаление THP

Обычно, N-9-тетрагидропиранил-замещенное соединение 31 можно обрабатывать каталитическим количеством пара-толуолсульфоновой кислоты (PTSA) в растворе метанола и нагревать до приблизительно 50°C для удаления тетрагидропиранильной (THP) группы для получения соединения 32. Реакцию можно контролировать LC-MS или ТСХ. Заместители R^1' и R^3' могут представлять собой R¹ и R³, как определено, или их защищенные формы, или предшественники.

Общая методика E. Удаление Boc

Обычно, Boc-замещенное соединение 33 обрабатывают TFA или 4N HCl для удаления трет-бутоксикарбонильной группы (групп), и реакцию контролируют LC-MS до ее завершения. Затем, неочищенный продукт концентрируют и очищают обращенно-фазовой ВЭЖХ для получения продукта 34 в виде чистого твердого остатка. Заместители R^1' и R^2' могут представлять собой R¹ и R², как определено, или их защищенные формы, или предшественники.

Общая методика F. Сочетание с образованием амида

2,6,8-замещенный, 9-алкилкарбоксилпурин 35, в котором n равно 1-12, обрабатывают 1,5 экв. HATU (2-(7-аза-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфатом, избытком (таким как 3 экв.) алкиламина (HNR¹⁰R¹¹) и избытком (таким как 3 экв.) карбоната цезия в диметилформамиде (DMF). Альтернативно, можно применять другие конденсирующие реагенты. Реакцию перемешивают до завершения и экстрагируют в этилацетат насыщенным раствором бикарбоната. Органический слой сушат, фильтруют и концентрируют для получения ацилированного, неочищенного промежуточного соединения, которое очищают обращенно-фазовой ВЭЖХ для получения продукта 36. Заместители R^1' и R^3' могут представлять собой R¹ и R³, как определено, или их защищенные формы, или предшественники.

ПРИМЕРЫ

Химические реакции, описанные в примерах, можно легко приспособить для получения ряда других PI3K ингибиторов настоящего изобретения, и подразумевается, что альтернативные способы получения соединений настоящего изобретения включены в объем настоящего изобретения. Например, синтез отсутствующих в примерах соединений согласно настоящему изобретению можно успешно проводить с помощью модификаций, очевидных специалистам в данной области техники, например, соответствующей защитой реакционноспособных функциональных групп, применением других подходящих реагентов, известных в данной области техники, отличных от описанных, и/или осуществляя стандартные изменения условий реакций. Альтернативно, другие реакции, описанные в настоящем изобретении или известные в данной области техники, будут считаться, как обладающие применимостью для получения других соединений настоящего изобретения.

В примерах, описанных ниже, если не указано особо, все температуры приводятся в градусах Цельсия. Реагенты получали из коммерческих источников, таких как Sigma Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI или Maybridge, и их применяли без дополнительной очистки, если не указано особо. Реакции, приведенные ниже, обычно проводили при избыточном давлении азота или аргона или с осушающей трубкой (если не указано особо) в безводных растворителях, и реакционные колбы обычно снабжали резиновой мембраной для введения субстратов и реагентов через шприц. Изделия из стекла сушили в печи и/или сушили нагреванием. Колоночную хроматографию проводили на Biotage системе (производитель: Dyax Corporation), содержащей колонку силикагеля или на SEP PAK® картридже с силикагелем (Waters). ¹H-ЯМР спектры регистрировали при 400 МГц в растворах дейтерированного CDCl₃, d₆-DMSO, CH₃OD или d₆-ацетона (представлены в ppm), применяя хлороформ в качестве внутреннего стандарта (7,25 ppm). Что касается мультиплетности пиков, применяют следующие сокращения: с (синглет), д (дуплет), т (триплет), м (мультиплет), уш (уширенный), дд (дуплет дуплетов), дт (дуплет триплетов). Константы спин-спинового взаимодействия, когда они приводятся, представлены в Герцах (Гц).

ПРИМЕР 1. 2,6-дихлор-9-метил-9H-пурин 4

ПРИМЕР 2. 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индазол 24 - способ 1

К раствору 3-бром-2-метиланилин (5,0 г, 26,9 ммоль) в хлороформе (50 мл) добавляли ацетат калия (1,05 экв., 28,2 ммоль, 2,77 г). Добавляли при одновременном охлаждении в смеси вода-лед уксусный ангидрид (2,0 экв., 53,7 ммоль, 5,07 мл). Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут, после которых образуется белый гелеобразный остаток. Добавляли 18-краун-6 (0,2 экв., 5,37 ммоль, 1,42 г) с последующим добавлением изоамилнитрила (2,2 экв., 59,1 ммоль, 7,94 мл) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждали и распределяли между хлороформом (3×100 мл) и насыщенным водным бикарбонатом натрия (100 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (100 мл), отделяли и сушили (MgSO₄).

Неочищенный продукт упаривали на силикагеле и очищали хроматографией, элюируя 20%-40% EtOAc-петролейный эфир для того, чтобы получить 1-(4-броминдазол-1-ил)этанон A (3,14 г, 49%) в виде оранжевого твердого остатка, и 4-бром-1H-индазол B (2,13 г, 40%) в виде бледно-оранжевого твердого остатка. A: ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 2,80 (3H, с), 7,41 (1H, т, J=7,8Гц), 7,50 (1H, д, J=7,8Гц), 8,15 (1H, с), 8,40 (1H, д, J=7,8Гц). B: ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 7,25 (1H, т, J=7,3Гц), 7,33 (1H, д, J=7,3Гц), 7,46 (1H, д, J=7,3Гц), 8,11 (1H, с), 10,20 (1H, уш.с).

К раствору 1-(4-броминдазол-1-ил)этанона A (3,09 г, 12,9 ммоль) в MeOH (50 мл) добавляли 6N водную HCl (30 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 7 часов. MeOH упаривали, и смесь распределяли между EtOAc (2×50 мл) и водой (50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), отделяли и сушили (MgSO₄). Растворитель удаляли упариванием при пониженном давлении для того, чтобы получить 4-бром-1H-индазол B (2,36 г, 93%).

К раствору 4-бром-1H-индазола B (500 мг, 2,54 ммоль) и бис(пинаколато)дибора (1,5 экв., 3,81 ммоль) в DMSO (20 мл) добавляли ацетат калия (3,0 экв., 7,61 ммоль, 747 мг; сушили в сушильном пистолете) и PdCl₂(dppf)₂ (3 мол%, 0,076 ммоль, 62 мг). Смесь дегазировали продувкой аргоном и грели при 80 ⁰C в течение 40 часов. Реакционную смесь охлаждали и распределяли между водой (50 мл) и эфиром (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), отделяли и сушили (MgSO₄). Неочищенное вещество очищали хроматографией, элюируя 30%-40% EtOAc-петролейный эфир для получения неразделимой 3:1 смеси 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 24 (369 мг, 60%) и индазола (60 мг, 20%), выделенных в виде желтой смолы, которая затвердевает при стоянии, давая грязно-белый твердый остаток. ¹H ΝMR (400 МГц, d₆-DMSO) 1,41 (12H, с), 7,40 (1H, дд, J=8,4Hz, 6,9Гц), 7,59 (1H, д, J=8,4Гц), 7,67 (1H, д, J=6,9Гц), 10,00 (1H, уш.с), 8,45 (1H, с), и индазол: 7,40 (1H, т), 7,18 (1H, т, J=7,9Гц), 7,50 (1H, д, J=9,1Гц), 7,77 (1H, д, J=7,9Гц), 8,09 (1H, с); примесь при 1,25.

ПРИМЕР 3. 4-(4,4,5,5-Тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индазол 24 - способ 2

К раствору 2-метил-3-нитроанилина (2,27 г, 14,91 ммоль) в уксусной кислоте (60 мл) добавляли раствор нитрита натрия (1,13 г, 1,1 экв.) в воде (5 мл). Через 2 часа темно-красный раствор выливали на лед/воду, и полученный в результате осадок собирали фильтрацией для того, чтобы получить 4-нитро-1H-индазол C (1,98 г, 81%).

Смесь 4-нитро-1H-индазола C (760 мг, 4,68 ммоль), палладия на угле (10%, кат.) и этанола (30 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 4 часов. Затем, реакционную смесь фильтровали через целит, и растворитель удаляли в вакууме для того, чтобы получить 1H-индазол-4-иламин D (631 мг, 100%).

Водный раствор нитрита натрия (337 мг, 4,89 ммоль) в воде (2 мл) добавляли по каплям к суспензии 1H-индазол-4-иламина D (631 мг, 4,74 ммоль) в 6M хлороводородной кислоте (7,2 мл) при температуре ниже 0°C. После перемешивания в течение 30 минут добавляли к реакционной смеси тетрафторборат натрия (724 мг). Получали вязкий раствор, который фильтровали и промывали быстро водой для того, чтобы получить тетрафторборатную соль 1H-индазол-4-диазония E (218 мг, 20%) в виде темно-красного твердого остатка.

Сухой метанол (4 мл) продували аргоном в течение 5 минут. К нему добавляли тетрафторборатную соль 1H-индазол-4-диазония (218 мг, 0,94 ммоль), бис(пинаколато)дибор (239 мг, 1,0 экв.) и хлорид [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия (II) (20 мг).

Реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов и, затем, фильтровали через целит. Остаток очищали, применяя флеш-хроматографию для того, чтобы получить 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индазол 24 (117 мг).

ПРИМЕР 4. 1-(Тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазол 41 (способ A)

Стадия A: Получение 4-хлор-1H-индазола: В 250 мл колбу с магнитной мешалкой добавляли 2-метил-3-хлоранилин (8,4 мл, 9,95 г, 70,6 ммоль), ацетат калия (8,3 г, 84,7 ммоль) и хлороформ (120 мл). Данную смесь охлаждали до 0°C при перемешивании. К охлажденной смеси добавляли по каплям в течение 2 минут уксусный ангидрид (20,0 мл, 212 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 25°C и перемешивали в течение 1 часа. На данном этапе реакционную смесь нагревали до 60°C. Добавляли изоамилнитрит (18,9 мл, 141 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 60°C. После завершения добавляли воду (75 мл) и TΗF (150 мл), и реакционную смесь охлаждали до 0°C. Добавляли LiOH (20,7 г, 494 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 3 часов. Добавляли воду (200 мл), и продукт экстрагировали EtOAc (300 мл, 100 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄ и концентрировали в вакууме для того, чтобы получить 4-хлор-1H-индазол 11,07 г (100%) в виде оранжевого твердого остатка. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,18 (д, J=1Гц, 1H), 7,33 (д, J=8Гц, 1H), 7,31 (т, J=7Гц, 1H), 7,17 (дд, J=7Гц, 1Гц, 1H). LCMS (ESI полож.) m/e 153 (M+1).

Стадия B: Получение 4-хлор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола: В 1 л колбу с механической мешалкой добавляли 4-хлор- 1H-индазол (75,0 г, 0,492 моль), п-толуолсульфонат пиридиния (1,24 г, 4,92 ммоль), CH₂Cl₂ (500 мл) и 3,4-дигидро-2H-пиран (98,6 мл, 1,08 моль). При перемешивании данную смесь грели при 45°C в течение 16 часов. Анализ реакционной смеси показал образование обоих изомеров продукта. Охлаждали реакционную смесь до 25°C и добавляли CH₂Cl₂ (200 мл). Промывали раствор водой (300 мл) и насыщенным NaHCO₃ (250 мл). Сушили органический слой над MgSO₄ и концентрировали досуха. Очищали неочищенный продукт растворением в смеси EtOAc/гексан (4:6, 1 л) и добавлением SiO₂ (1,2 л). Смесь фильтровали, и остаток на фильтре промывали смесью EtOAc/гексан (4:6, 2 л). Органические слои концентрировали в вакууме для того, чтобы получить 4-хлор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазол 110,2 г (95%) в виде оранжевого твердого остатка. Изомер 1: ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,10 (д, J=1 Гц, 1H), 7,50 (дд, J=9Гц, 1 Гц, 1H), 7,29 (дд, J=9 Гц, 8 Гц, 1H), 7,15 (дд, J=8 Гц, 1 Гц, 1H) 5,71 (дд, J=9 Гц, 3 Гц, 1H) 4,02 (м, 1H) 3,55 (м, 1H) 2,51 (м, 1H) 2,02 (м, 2H) 1,55 (м, 3H). LCMS (ESI полож.) m/e 237 (M+1); Изомер 2: ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,25 (д, J=1 Гц, 1H), 7,62 (дд, J=9 Гц, 1 Гц, 1H), 7,20 (дд, J=9 Гц, 8 Гц, 1H), 7,06 (дд, J=8 Гц, 1 Гц, 1H) 5,69 (дд, J=9 Гц, 3 Гц, 1H) 4,15 (м, 1H) 3,80 (м, 1H) 2,22 (м, 2H) 2,05 (м, 1H) 1,75 (м, 3H). LCMS (ESI полож.) m/e 237 (M+1).

Стадия C: Получение 1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 41: В 500 мл колбу с магнитной мешалкой добавляли 4-хлор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазол (10,0 г, 42,2 ммоль), DMSO (176 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (6,2 г, 8,86 ммоль), трициклогексилфосфин (0,47 г, 1,69 ммоль), бис(пинаколато)дибор (16,1 г, 63,4 ммоль) и ацетат калия (12,4 г, 0,127 моль). При перемешивании смесь грели при 130°C в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до 25°C, добавляли EtOAc (600 мл) и промывали водой (2×250 мл). Органический слой сушили над MgSO₄ и концентрировали в вакууме досуха. Неочищенный продукт очищали пропусканием через слой SiO₂ (120 г), элюируя 10% EtOAc/гексан (1 л) и 30% EtOAc/гексан (1 л). Фильтрат концентрировали в вакууме для того, чтобы получить 13,9 г (100%) продукта 41 в виде 20% (вес/вес) раствора в этилацетате. ¹H ЯМР показал наличие приблизительно 20% (вес/вес) бис(пинаколато)дибора. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,37 (с, 1H), 7,62 (дд, J=14 Гц, 2 Гц, 1H), 7,60 (дд, J=7 Гц, 1 Гц, 1H), 7,31 (дд, J=8 Гц, 7 Гц, 1H) 5,65 (дд, J=9 Гц, 3 Гц, 1H) 4,05 (м, 1H) 3,75 (м, 1H) 2,59 (м, 1H) 2,15 (м, 1H) 2,05 (м, 1H) 1,75 (м, 3H) 1,34 (с, 12H). LCMS (ESI полож.) m/e 245 (M+1).

ПРИМЕР 5. 1-(Тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазол 41 (способ B)

Стадия A: Получение 4-нитро-1H-индазола: Смесь 2-метил-3-нитроанилина (200 г, 1,315 моль), уксусной кислоты (8000 мл) охлаждали до 15-20°C, и медленно добавляли в течение 30 минут раствор нитрита натрия (90,6 г, 1,315 моль) в воде (200 мл). После добавления температуру реакционной смеси повышали до 25-30°C, и реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 2-3 часов. Протекание реакции контролировали ТСХ, и после завершения реакции продукт фильтровали, и остаток промывали уксусной кислотой (1000 мл). Уксусную кислоту отгоняли в вакууме (550 мМ Hg) при температуре ниже 80°C, добавляли воду (8000 мл), охлаждали до 25-30°C и перемешивали в течение 30 минут. Суспензию фильтровали и промывали водой (1000 мл). Неочищенный продукт сушили при нагревании до 70-80°C в течение 2 часов, затем растворяли в смеси 5% этилацетат/н-гексан (100:2000 мл) и перемешивали в течение 1-1,5 часов при температуре окружающей среды. Суспензию фильтровали и промывали смесью 5% этилацетат/н-гексан (25:475 мл). Полученный продукт сушили в вакууме при температуре ниже 80°C в течение 10-12 часов для того, чтобы получить 4-нитро-1H-индазол в виде коричневого твердого остатка (150 г, 70%); Т_пл: 200-203°C; ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃) δ 13,4 (уш, 1H), 8,6 (с, 1H), 8,2-7,95 (дд, 2H), 7,4 (м, 1H). ESMS m/z 164 (M+1). Чистота: 95% (ВЭЖХ).

Стадия B: Получение 4-амино-1H-индазола: Смесь 4-нитро-1H- индазола (200 г, 1,22 моль) и 10% палладия на угле (20,0 г) в EtOH (3000 мл) гидрировали при температуре окружающей среды (реакция была экзотермическая, и температура повышалась до 50°C). После завершения реакции катализатор удаляли фильтрацией. Растворитель упаривали в вакууме при температуре ниже 80°C, охлаждали до комнатной температуры, добавляли к остатку н-гексан (1000 мл) и перемешивали в течение 30 минут. Выпавший твердый остаток фильтровали и промывали н-гексаном (200 мл). Продукт сушили при 70-80°C в течение 10-12 часов для того, чтобы получить 4-амино-1H-индазол в виде коричневого твердого остатка (114 г, 70%), Т_пл: 136-143°C. ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃) δ 12 (уш, 1H), 8,0 (с, 1H), 7,1-7,0 (дд, 2H), 6,5 (д, 1H), 3,9 (м, 2H). ESMS m/z 134 (M+1). Чистота: 90-95% (ВЭЖХ).

Стадия C: Получение 4-йод-1H-индазола: Смесь 4-амино-1H-индазола (50,0 г, 0,375 моль) в воде (100 мл) и конц. хлороводородную кислоту (182 мл) охлаждали до -10°C. К данной смеси добавляли по каплям при -10°C в течение приблизительно 30-60 минут раствор нитрита натрия (51,7 г, 0,75 моль) в воде (75 мл) (в процессе добавления наблюдали образование пены). В другой колбе получали при комнатной температуре смесь йодида калия (311 г, 1,87 моль) в воде (3000 мл), и к данному раствору добавляли в течение приблизительно 30-40 минут при 30-40°C охлажденную диазониевую соль. Температуру реакции поддерживали равной 30°C в течение 1 часа, после завершения реакции добавляли этилацетат (500 мл) и реакционную смесь фильтровали через целит. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×500 мл). Объединенные органические слои промывали 5% раствором hypo (2×500 мл), солевым раствором (500 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией (силикагель, гексан, 15-20% этилацетат/гексан) для того, чтобы получить 4-йод-1H-индазол в виде оранжевого твердого остатка (23,0 г, 25%). Т_пл: 151-177 C: ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃) δ 12,4 (уш, 1H), 8,0 (с, 1H), 7,6 (дд, 2H), 7,1 (д, 1H). ESMS m/z 245 (M+1). Чистота: 95-98% (ВЭЖХ).

Стадия D: Получение 4-йод-1-(2-тетрагидропиранил)индазола: Смесь 4-амино-1H-индазола (250,0 г, 1,024 моль), 3,4-дигидро-2Η-пирана (126,0 г, 1,5 моль) и PPTS (2,57 г, 0,01 моль) в CH₂Cl₂ (1250 мл) грели при 50°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду (625 мл), слои разделяли, и водный слой экстрагировали CH₂Cl₂ (250 мл). Объединенные органические слои промывали водой (625 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали. Неочищенный остаток очищали хроматографией (силикагель, гексан, 5-10% этилацетат/гексан) для того, чтобы получить 4-йод-1-(2-тетрагидропиранил)индазол в виде масла (807,0 г, 60%). ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃) δ 8,5 (с, 1H), 7,8 (м, 1H), 7,6 (д, 1H), 7,25 (м, 1H), 5,7 (дд, 1H), 4,2-3,8 (дд, 1H), 2,2-2,0 (м, 4H) 2,0-1,8 (м, 4H). ESMS m/z 329 (M+1).

Стадия E: Получение 1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 41: Смесь 4-йод-1-(2-тетрагидропиранил)индазола (100 г, 0,304 моль), бис(пинаколато)дибора (96,4 г, 0,381 моль), PdCl₂ (dppf) (8,91 г, 0,012 моль) и ацетата калия (85,97 г, 0,905 моль) в DMSO (500 мл) грели при 80°C в течение 2-3 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (1500 мл). Реакционную массу экстрагировали в этилацетат (3×200 мл), и объединенные органические слои упаривали, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель, гексан, 5-10% этилацетат/гексан) для того, чтобы получить 41 в виде вязкого коричневого масла (70,0 г, 70%). ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,5 (с, 1H), 7,8 (м, 1H), 7,6 (д, 1H), 7,25 (м, 1H), 5,7 (дд, 1H), 4,2-3,8 (дд, 1H), 2,2-2,0 (м, 4H) 2,0-1,8 (м, 4H) 1,4-1,2 (с, 12H). ESMS m/z 329 (M+1).

ПРИМЕР 6. 4-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил (1,3,2-диоксаборолан-2-ил))пиримидин-2-иламин 42

К раствору 4-метилпиримидин-2-иламина (8,0 г, 0,073 моль) в хлороформе (320 мл) добавляли N-бромсукцинимид (13,7 г, 0,077 моль). Реакционную смесь перемешивали в темноте в течение 18 часов. LC/MS показало, что реакция завершилась. Смесь разбавляли DCM, затем промывали 1N водным раствором NaOH и солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали для того, чтобы получить 5-бром-4-метилпиримидин-2-иламин (12 г, выход: 86%)

Смесь 5-бром-4-метилпиримидин-2-иламина (5,0 г, 26 ммоль), ацетата калия (7,83 г, 79,8 ммоль), 4,4,5,5-тетраметил-2-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1,3,2-диоксаборолана (7,43 г, 29,2 ммоль) в диоксане (140 мл) перемешивали в течение 20 минут в атмосфере азота. Добавляли к реакционной смеси аддукт хлорида 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладия (II) и дихлорметана (1,08 г, 1,33 ммоль). Реакционную смесь грели при 115°C в течение 18 часов в атмосфере азота. После завершения смесь охлаждали и добавляли EtOAc. Полученную в результате смесь обрабатывали ультразвуком и фильтровали. Дополнительное количество EtOAc применяли для промывки твердого остатка. Объединенные органические экстракты промывали водой, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный остаток очищали хроматографией, элюируя 20-100% EtOAc/гексан для того, чтобы получить 4,5 г 42 (выход: 74%). ¹H-ЯМР (DMSO, 400 МГц); δ 8,28 (с, 1H), 6,86 (уш.с, 2H), 2,35 (с, 3H), 1,25 (с, 12H). MS (ESI) m/e (M+H⁺) 236,15, 154,07.

ПРИМЕР 7. 2-(9-(2-гидроксиэтил)-2-(1H-индол-4-ил)-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 101

2-(2-Хлор-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)этилацетат (165 мг) обрабатывали индол-4-бороновой кислотой по общей методике A и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 21 мг 101 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 423,2 (M)⁺

ПРИМЕР 8. 2-(2-(2-амино-4-метилпиримидин-5-ил)-9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 102

2-(2-Хлор-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)этилацетат (300 мг) обрабатывали 4-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин-2-амином по общей методике A и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 107 мг 102 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 415,2 (M)⁺

ПРИМЕР 9. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-бутил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 103

2-(2-Хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 100 мг обрабатывали бромбутаном по общей методике C для того, чтобы получить неочищенное промежуточное соединение 2-(9-бутил-2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол, которое обрабатывали 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 55 мг 103 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 413,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 10. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9-пропил-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 104

2-(2-Хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол (100 мг) обрабатывали йодпропаном по общей методике C для того, чтобы получить неочищенное промежуточное соединение 2-(2-хлор-6-морфолино-9-пропил-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол, которое обрабатывали 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 34 мг 104 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 399,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 11. 3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропан-1-ол 105

100 мг 2-(2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ола обрабатывали TBDMS-защищенным бромпропанолом по общей методике C. Неочищенное промежуточное соединение 2-(9-(3-(трет-бутилдиметилсилилокси)пропил)-2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол обрабатывали 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 36 мг 105 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 415,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 12. 3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропан-1-ол 106

2,6-Дихлорпурин (3 г) растворяли в 20 мл EtOAc и добавляли 100 мг PTSA. Медленно добавляли к гетерогенной смеси дигидропиран (3 мл) при нагревании до того момента, когда реакционная смесь не становилась гомогенной. Затем реакционную смесь экстрагировали насыщенным раствором бикарбоната натрия три раза. Органический слой сушили, фильтровали и концентрировали досуха. Неочищенный 2,6-дихлор-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин растворяли в MeOH, после чего добавляли морфолин (3 экв.). 4-(2-Хлор-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин медленно выпадал из раствора в течение следующих 3 часов, затем его отфильтровывали, собирали и сушили для того, чтобы получить 4,26 г в виде белого твердого соединения

4-(2-Хлор-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (2,76 г) охлаждали в THF до -78°C. Добавляли по каплям в течение 20 минут 2,5 M раствор н-BuLi в THF (1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 30 минут, после чего добавляли ацетон (1,56 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов, медленно нагревая до 0°C. Затем реакционную смесь гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Неочищенный продукт 2-(2-хлор-6-морфолино-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол концентрировали и растворяли в MeOH. Затем, THP группу удаляли по общей методике D. Реакционную смесь концентрировали, и неочищенный остаток растворяли в воде, фильтровали, собирали и сушили в течение ночи для того, чтобы получить 2,23 г 2-(2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ола в виде светло-желтого твердого остатка

100 мг 2-(2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ола обрабатывали 2-бромэтилацетатом по общей методике C. Неочищенное промежуточное соединение 2-(2-хлор-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)этилацетат обрабатывали 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 54 мг 106 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 401,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 13. 1-(4-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)пиперидин-1-ил)этанон 107

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (400 мг) реагировал с трет-бутил 4-(бромметил)пиперидин-1-карбоксилатом по общей методике C для того, чтобы получить трет-бутил 4-((2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (554 мг), из которого удаляли Boc-защитную группу по общей методике D для того, чтобы получить 5-(6-морфолино-9-(пиперидин-4-илметил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин (454 мг) в виде желтого твердого остатка.

5-(6-Морфолино-9-(пиперидин-4-илметил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин (75 мг) реагировал с избытком уксусной кислоты, 2 экв. HOBT, 5 экв. диизопропилэтиламина и 2 экв. гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида в 1 мл DMF. После завершения реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органический слой концентрировали и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 18,9 мг 107 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 438,3 (M)⁺

ПРИМЕР 14. 1-(3-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)пирролидин-1-ил)этанон 108

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (400 мг) реагировал с трет-бутил 3-(бромметил)пирролидин-1-карбоксилатом по общей методике C для того, чтобы получить трет-бутил 3-((2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)пирролидин-1-карбоксилат (496 мг), из которого удаляли Boc-защитную группу по общей методике D для того, чтобы получить 352 мг 5-(6-морфолино-9-(пирролидин-3-илметил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амина в виде желтого твердого остатка.

5-(6-Морфолино-9-(пирролидин-3-илметил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин (75 мг) реагировал с избытком уксусной кислоты, 2 экв. HOBT, 5 экв. диизопропилэтиламина и 2 экв. гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида в 1 мл DMF. После завершения реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органический слой концентрировали и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 40,1 мг 108 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 424,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 15. (R)-3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пропан-1-он 109

3-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота (50 мг) реагировала с (R)-пирролидин-3-олом по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 10,9 мг 109 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 440,2 (M)⁺

ПРИМЕР 16. (S)-3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пропан-1-он 110

3-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота (50 мг) реагировала с (S)-пирролидин-3-олом по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике для того, чтобы получить 10,1 мг 110 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 440,2 (M)⁺

ПРИМЕР 17. 1-(3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропаноил)-N-метилпиперидин-4-карбоксамид 111

3-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота (50 мг) реагировала с N-метилпиперидин-4-карбоксамидом по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 10,9 мг 111 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 495,3 (M)⁺

ПРИМЕР 18. 3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)пропан-1-он 112

3-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота (50 мг) реагировала с 1-(метилсульфонил)пиперазином по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 33,8 мг 112 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 517,2 (M)⁺

ПРИМЕР 19. 3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-морфолинопропан-1-он 113

3-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота (50 мг) реагировала с морфолином по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 24,9 мг 113 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 440,2 (M)⁺

ПРИМЕР 20. 3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановая кислота 114

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (400 мг) реагировал с метил 3-бромпропионатом по общей методике C. Продукт, 468 мг неочищенного метил 3-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропионата, реагировал с 3 экв. гидроксида лития в растворе 1:1 THF/вода. После завершения THF удаляли в вакууме, и водный раствор подкисляли до pH 2, применяя концентрированный раствор HCl. Продукт выпадал в виде белого твердого соединения, и его фильтровали для того, чтобы получить 388 мг 3-(2-(2-(трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропановой кислоты, из 88 мг которой удаляли Boc-защитную группу по общей методике E для того, чтобы получить 15,5 мг 114 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 371,2 (M)⁺

ПРИМЕР 21. 5-(9-(4-(метилсульфонил)бензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин 115

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (100 мг) реагировал с 1-(хлорметил)-4-(метилсульфонил)бензолом по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 25,4 мг 115 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 467,2 (M)⁺

ПРИМЕР 22. Метил 4-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)бензоат 116

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (100 мг) реагировал с метил 4-(бромметил)бензоатом по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 10,2 мг 116 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 447,2 (M)⁺

ПРИМЕР 23. 5-(6-морфолино-9-(2-морфолиноэтил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин 117

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (100 мг) реагировал с 4-(2-бромэтил)морфолином по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 15,9 мг 117 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 412,2 (M)⁺

ПРИМЕР 24. 5-(9-(3-метоксибензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин 118

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (75 мг) реагировал с 1-(бромметил)-3-метоксибензол по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 50,2 мг 118 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 419,2 (M)⁺

ПРИМЕР 25. Метил 3-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)метил)бензоат 119

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (75 мг) реагировал с метил 3-(бромметил)бензоатом по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 27,6 мг 119 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 447,2 (M)⁺

ПРИМЕР 26. 3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)пропан-1-ол 120

2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (75 мг) реагировал с 3-бромпропан-1-олом по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 19,6 мг 120 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 357,2 (M)⁺

ПРИМЕР 27. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)этанол 121

2-(2-(2-(Бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил (75 мг) реагировал с 2-бромэтилацетатом по общей методике C, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E для того, чтобы получить 22 мг 121 в виде белого твердого остатка после обращенно-фазовой очистки. MS (Q1) 343,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 28. 1-(2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетил)-N-метилпиперидин-4-карбоксамид 122

2-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота (35 мг) реагировала с N-метилпиперидин-4-карбоксамидом по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 10,3 мг 122 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 481,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 29. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)этанон 123

2-(2-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота (35 мг) реагировала с 1-(метилсульфонил)пиперазином по общей методике E, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике D, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 9 мг 123 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 503,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 30. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-1-морфолиноэтанон 124

2-(2-(2-(Трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота (35 мг) реагировала с морфолином по общей методике F, с последующим удалением Boc-защитной группы по общей методике E, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 3,2 мг 124 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 426,2 (M)⁺

ПРИМЕР 31. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота 125

Неочищенный 2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетат (240 мг) реагировал с 3 экв. гидроксида лития в 1:1 растворе THF/вода. После завершения THF отгоняли в вакууме, и водный раствор подкисляли до pH 2, применяя концентрированный раствор HCl. Продукт выпадал в виде мелкого белого твердого остатка, и его фильтровали для того, чтобы получить 2-(2-(2-(трет-бутоксикарбониламино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусную кислоту (145 мг), 40 мг которой подвергали общей методике E и очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 19,5 мг 125 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 357,2 (M)⁺

ПРИМЕР 32. Метил 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетат 126

4-(2-Хлор-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (4,05 г) реагировал с 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A для того, чтобы получить 4,75 г 5-(6-морфолино-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин, который кипятили с обратным холодильником в присутствии каталитического количества диметиламинопиридина, 4 экв. Boc-ангидрида и 3 экв. триэтиламина в 60 мл ацетонитрила. После завершения реакционную смесь охлаждали, концентрировали досуха и очищали хроматографией с прямой фазой для того, чтобы получить 6,11 г 2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-2-ила в виде светло-желтого твердого остатка.

2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-2-ил (2 г) подвергали общей методике D для селективного удаления THP защитной группы, и 300 мг 2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ила реагировали с метил 2-бромацетатом по общей методике C для того, чтобы получить метил 2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетат. Boc группы неочищенного метил 2-(2-(2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиримидин-5-ил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетата (60 мг) удаляли по общей методике E, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 39 мг 126 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 371,2 (M)⁺

ПРИМЕР 33. 5-(9-метил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амин 127

4-(2-Хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин (95 мг) реагировал с 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 26,1 мг 127 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 313,2 (M)⁺

ПРИМЕР 34. 5-(9-метил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиридин-2-амин 128

4-(2-Хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин (20 мг) реагировал с 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-амином по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 9,3 мг 128 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 312,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 35. 4-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин 129

4-(2-Хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин (20 мг) реагировал с 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазолом по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 13,8 мг 129 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 336,2 (M)⁺

ПРИМЕР 36. 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 130

2-(2-Хлор-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол (100 мг) обрабатывали йодметаном по общей методике C для того, чтобы получить неочищенное промежуточное соединение 2-(2-хлор-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол, который обрабатывали 2-аминопиримидин-5-бороновой кислотой, пинаколовым эфиром по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 44 мг 130 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 371,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 37. 2-(2-(6-аминопиридин-3-ил)-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 131

2-(2-Хлор-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол (95 мг) реагировал с 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-амином по методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 89,3 мг 131 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 370,3 (M)⁺

ПРИМЕР 38. 2-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол 132

4-(2-Хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин (233 мг) охлаждали в 5 мл безводного THF до -78°C перед добавлением 2 экв. 2,5 M раствора н-бутила лития. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при -78°C, после чего добавляли 3 экв. ацетона. Затем реакционную смесь нагревали до 0°C через 30 минут. Реакцию гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой концентрировали для того, чтобы получить неочищенный 2-(2-хлор-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол (95 мг).

Неочищенный 2-(2-хлор-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-ил)пропан-2-ол реагировал с 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазолом по методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 56,6 мг 132 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 394,3 (M)⁺

ПРИМЕР 39. 4-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-(2-метоксиэтил)-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин 133

4-(2-хлор-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (250 мг) обрабатывали пара-толуолсульфоновой кислотой по общей методике D для того, чтобы получить 4-(2-хлор-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин.

4-(2-хлор-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (215 мг) реагировал с 2-бромэтилметиловым эфиром по общей методике C для того, чтобы получить 4-(2-хлор-9-(2-метоксиэтил)-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (207 мг), который реагировал с 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазолом по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 21,6 мг 133 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 556,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 40. N-(4-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенил)ацетамид 134

4-(2-Хлор-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (50 мг) реагировал с 4-ацетамидофенилбороновой кислотой по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 25,9 мг 134 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 529,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 41. 5-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиридин-2-амин 135

4-(2-Хлор-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (50 мг) реагировал с 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-амином по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 29,1 мг 135 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 488,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 42. 4-(2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин 136

4-(2-Хлор-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (50 мг) реагировал с 2-метоксипиримидин-5-илбороновой кислотой по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 5,5 мг 136 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 504,3 (M)⁺.

ПРИМЕР 43. 4-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-2-(пиридин-3-ил)-9H-пурин-6-ил)морфолин 137

4-(2-Хлор-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин (50 мг) реагировал с пиридин-3-илбороновой кислотой по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 33,4 мг 137 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 473,3 (M)⁺

ПРИМЕР 44. 4-(2-(1H-индазол-4-ил)-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин 138

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (510 мг) реагировал с метилйодидом по общей методике C для того, чтобы получить 4-(2-хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин. 4-(2-Хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)морфолин (100 мг) охлаждали в 1,5 мл безводного THF до -78 °C перед добавлением 2 экв. 2,5 M раствора н-бутиллития. Реакцию перемешивали в течение 1 часа при -78°C, после чего добавляли 3 экв. DMF. Затем реакционную смесь нагревали до 0°C через 30 минут. Реакцию гасили выливанием в охлажденный 0,25 M водный раствор HCl, и оранжевое твердое вещество фильтровали, собирали и сушили для того, чтобы получить 48 мг неочищенного промежуточного соединения 2-хлор-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-карбальдегида.

2-Хлор-9-метил-6-морфолино-9H-пурин-8-карбальдегид обрабатывали 1,1 экв. 1-(метилсульфонил)пиперазина, 7 экв. триметилортоформиата, 1 экв. уксусной кислоты в 2 мл дихлопентана в течение 6 часов, после которых добавляли к реакционной смеси 1,1 экв. триацетоксиборгидрида натрия. Реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном и водой для того, чтобы получить неочищенное промежуточное соединение 4-(2-хлор-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9H-пурин-6-ил)морфолин, который затем реагировал с 1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазолом по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 41,8 мг 138 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 512,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 45. 4-(2-(2-(3-гидроксифенил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетил)пиперазин-2-он 139

Неочищенная 2-(2-(3-гидроксифенил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота (50 мг) реагировала с пиперазин-2-оном по общей методике F, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 1,9 мг 139 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 438,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 46. 2-(2-(3-гидроксифенил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)-N-метилацетамид 140

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (75 мг) реагировал с метил 2-бромацетатом по общей методике C. Метил 2-(2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)ацетат реагировал с 150 мг трет-бутил 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенилкарбоната по общей методике A. Неочищенная 2-(2-(3-гидроксифенил)-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)уксусная кислота (50 мг) реагировал с метиламином по общей методике F, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 5,6 мг 140 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 369,2 (M)⁺

ПРИМЕР 47. 3-(6-морфолино-9-(пиридин-4-илметил)-9H-пурин-2-ил)фенол 141

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (75 мг) реагировал с 4-(бромметил)пиридином по общей методике C для того, чтобы получить 4-(2-хлор-9-(пиридин-4-илметил)-9H-пурин-6-ил)морфолин, который реагировал с 150 мг трет-бутил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенилкарбоната по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 28,1 мг 141 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 389,2 (M)⁺

ПРИМЕР 48. 3-(9-(4-фторбензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол 142

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (75 мг) реагировал с 1-(бромметил)-4-фторбензолом по общей методике C для того, чтобы получить 4-(2-хлор-9-(4-фторбензил)-9H-пурин-6-ил)морфолин, который реагировал с 150 мг трет-бутил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенилкарбоната по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 50 мг 142 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 406,2 (M)⁺.

ПРИМЕР 49. 3-(9-бензил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол 143

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (75 мг) реагировал с (бромметил)бензолом по общей методике C для того, чтобы получить 4-(9-бензил-2-хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин, который реагировал с 150 мг трет-бутил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенилкарбоната по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 92,2 мг 143 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 388,2 (M)⁺

ПРИМЕР 50. 3-(9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол 144

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (75 мг) реагировал с 2-бромэтилацетатом по общей методике C для того, чтобы получить 2-(2-хлор-6-морфолино-9H-пурин-9-ил)этилацетат, который реагировал с 150 мг трет-бутил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенилкарбоната по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 59,4 мг 144 в виде белого твердого остатка. MS (Q1) 342,2 (M)⁺

ПРИМЕР 51. 3-(9-изобутил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)фенол 145

4-(2-Хлор-9H-пурин-6-ил)морфолин (75 мг) реагировал с 1-йод-2-метилпропаном по общей методике C. 4-(2-Хлор-9-изобутил-9H-пурин-6-ил)морфолин реагировал с 150 мг трет-бутил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенилкарбоната по общей методике A, и продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить 62,6 мг 145 в виде белого твердого соединения. MS (Q1) 354,2 (M)⁺

ПРИМЕР 52. p110α (альфа) PI3K Анализ связывания

Анализы связывания: эксперименты по первичной поляризации проводили на Analyst HT 96-384 (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA.). Образцы для измерения сродства с помощью флуоресцентной поляризации получали добавлением растворов 1:3 последовательного разведения p110 альфа PI3K (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA), начиная с конечной концентрации 20 мкг/мл в буфере для поляризации (10 мМ Tris pH 7,5, 50 мМ NaCl, 4 мМ MgCl₂, 0,05% Chaps и 1 мМ DTT) до 10 мМ PIP₂ (Echelon-Inc, Salt Lake City, UT.) конечной концентрации. После выдерживания в течение 30 минут при комнатной температуре реакции прекращали добавлением GRP-1 и PIP3-TAMRA зонда (Echelon-Inc, Salt Lake City, UT.) 100 нМ и 5 нМ конечных концентрациях, соответственно. Зарегистрированные со стандартными фильтрами с ограниченной полосой пропускания для родаминового флуорофора (λex=530 нм; λem=590 нм) в 384-луночных темных Proxiplates с низким объемом (PerkinElmer, Wellesley, MA.) величины флуоресцентной поляризации использовали для построения графика функции концентрации белка, и EC₅₀ величины получали приведением данных к уравнению с 4 параметрами, применяя программное обеспечение KaleidaGraph (Synergy software, Reading, PA). С помощью данного эксперимента также была установлена подходящая концентрация белка для применения в последующих конкурентных экспериментах с ингибиторами.

Величины IC₅₀ ингибитора определяли добавлением 0,04 мг/мл p110 альфа PI3K (конечная концентрация), смешанного с PIP₂ (10 мМ конечная концентрация) в лунки, содержащие растворы 1:3 последовательного разведения антагонистов при конечной концентрации 25 мМ АТФ (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) в буфере для поляризации. После выдерживания в течение 30 минут при комнатной температуре реакции прекращали добавлением GRP-1 и PIP3-TAMRA зонда (Echelon-Inc, Salt Lake City, UT.) 100 нМ и 5 нМ конечных концентрациях, соответственно. Зарегистрированные со стандартными фильтрами с ограниченной полосой пропускания для родаминового флуорофора (λex=530 нм; λem=590 нм) в 384-луночных темных Proxiplates с низким объемом (PerkinElmer, Wellesley, MA.) величины флуоресцентной поляризации использовали для построения графика функции концентрации антагониста, и IC₅₀ величины получали приведением данных к уравнению с 4 параметрами, применяя программное обеспечение Assay Explorer (MDL, San Ramon, CA.).

Альтернативно, ингибирование PI3K определяли радиометрическим анализом, применяя очищенный, рекомбинантный фермент и АТФ при концентрации 1 мкМ. Соединение формулы I последовательно разбавляли в 100% DMSO. Киназную реакцию выдерживали в течение 1 часа при комнатной температуре, и реакцию прекращали добавлением PBS. Затем IC₅₀ величины определяли, применяя аппроксимацию сигмоидальной кривой «доза-эффект» (переменная крутизна).

ПРИМЕР 53. Анализ пролиферации клеток in vitro

Эффективность соединений формулы I измеряли анализом пролиферации клеток, применяя следующий протокол (Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488):

1. Аликвоту 100 мкл клеточной культуры, содержащей приблизительно 10⁴ клеток (PC3, Detroit562 или MDAMB361,1) в среде наносили в каждую лунку 384-луночного планшета с непрозрачными стенками.

2. Получали контрольные лунки, содержащие среду без клеток.

3. Соединение добавляли к экспериментальным лункам и выдерживали в течение 3-5 дней.

4. Планшеты уравновешивали до комнатной температуры в течение приблизительно 30 минут.

5. Добавляли объем CellTiter-Glo реагента, равный объему среды с клеточной культурой, присутствующей в каждой лунке.

6. Содержимое смешивали в течение 2 минут на орбитальном шейкере для того, чтобы вызвать лизис клеток.

7. Планшет выдерживали при комнатной температуре в течение 10 минут для того, чтобы стабилизировать сигнал люминесценции.

8. Люминесценцию регистрировали и приводили на кривых в виде RLU=относительные единицы люминесценции.

Альтернативно, клетки высевали при оптимальной плотности в 96-луночном планшете и выдерживали в течение 4 дней в присутствии испытуемого соединения. Затем к среде для анализа добавляли Alamar Blue™, и клетки выдерживали в течение 6 часов перед регистрацией при 544 нм возбуждении, 590 нм эмиссии. EC50 величины рассчитывали, применяя аппроксимацию сигмоидальной кривой «доза-эффект».

ПРИМЕР 54. Caco-2 проницаемость

Caco-2 клетки высевали на Millipore Multiscreen планшетах при 1×10⁵ клеток/см² и выращивали в течение 20 дней. Затем проводили оценку проницаемости соединений. Соединения применяли на апикальной поверхности (A) клеточных монослоев, и измеряли проникновение соединения в базолатеральный (B) участок. То же самое проводили в обратном направлении (B-A) для исследования активного транспорта. Рассчитывали величину коэффициента проницаемости, P_app, для каждого соединения, величину скорости прохождения соединений через мембрану. Соединения группировали на группы с низким (P_app</=1,0×10⁶см/с) или высоким (P_app>/=1,0×10⁶см/с) абсорбционным потенциалом на основании сравнения с контрольными соединениями с установленной для человека абсорбцией.

Для оценки способности соединений подвергаться активному оттоку определяли отношение базолатерального (B) к апикальному (A) транспорту, сравненные с A-B. Величины B-A/A-B>/=1,0 показывают наличие активного оттока из клеток.

ПРИМЕР 55. Клиренс гепатоцитами

Применяли суспензии замороженных человеческих гепатоцитов. Инкубирование проводили при концентрации соединения 1 мМ или 3 мкМ при плотности клеток 0,5×10⁶ жизнеспособных клеток/мл. Конечная концентрация в DMSO при инкубировании составляла приблизительно 0,25%. Контрольное инкубирование также проводили в отсутствии клеток для того, чтобы выявить любое неферментативное разложение. Дубликат выборки (50 мкл) удаляли из смеси для инкубирования через 0, 5, 10, 20, 40 и 60 минут (контрольный образец только при 60 минутах) и добавили к MeOH, содержащему внутреннему стандарту (100 мкл), для прекращения реакции. В качестве контрольных соединений можно применять толбутамид, 7-гидроксикумарин и тестостерон. Образцы центрифугировали, и надосадочную жидкость в каждый момент времени объединяли для анализа LC-MSMS. Из графика ln отношения площадей пиков (площадь пика для исходного соединения/площадь пика для внутреннего стандарта) относительно времени рассчитывали собственный клиренс (CL_int) следующим образом: CL_mt (мкл/мин/миллион клеток)=V×k, в которой k представляет собой константу скорости элиминации, полученную из градиента ln концентрации, построенного относительно времени; V представляет собой объемный компонент, полученный из объема инкубирования и выраженный в мкл 10⁶ клетки^-1.

ПРИМЕР 56. Ингибирование цитохрома P450

Соединения формулы I могут быть проверены относительно CYP450 мишеней (1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4) при приблизительно 10 концентрациях в двух экземплярах, с максимальной концентрацией, равной приблизительно 100 мкМ. Стандартные ингибиторы (фурафуллин, сульфафеназол, транилципромин, хинидин, кетоконазол) можно применять в качестве контроля. Планшеты можно считывать, применяя BMG LabTechnologies PolarStar в флуоресцентном режиме.

ПРИМЕР 57. Индукция Цитохрома P450

Свежевыделенные человеческие гепатоциты от одного донора можно выращивать в течение 48 часов перед добавлением соединения формулы I при трех концентрациях и выдерживанием в течение 72 часов. Маркерные субстраты для CYP3A4 и CYP1A2 добавляют за 30 минут и 1 час до окончания выдерживания. Через 72 часа клетки и среду удаляют, и степень метаболизма каждого маркерного субстрата количественно определяют LC-MS/MS. Эксперимент контролируют применением индукторов конкретных P450, выдерживаемых при одной концентрации в трех экземплярах.

ПРИМЕР 58. Связывание белков плазмы

Растворы соединений формулы I (5 мкм, 0,5% конечная DMSO концентрация) получали в буфере и 10% плазме (об/об в буфере). 96-луночный HT планшет для диализа собирали так, что каждая лунка была разделена на две полупроницаемой целлюлозной мембраной. Буферный раствор добавляют к одной стороне мембраны, и раствор плазмы к другой стороне; затем проводили инкубирование при 37°C в течение 2 часов в трех экземплярах. Затем клетки удаляли, и растворы для каждой группы соединений комбинировали в две группы (без плазмы и содержащую плазму), затем анализировали LC-MSMS, применяя два набора калибровочных стандартов для растворов без плазмы (6 точек) и содержащих плазму (7 точек). Рассчитывали величину несвязанной фракции для соединения.

ПРИМЕР 59. Блокирование hERG каналов

Соединения формулы I оценивали на способность модулировать отток рубидия из HEK-294 клеток, стабильно экспрессирующих hERG калиевые каналы, применяя стандартный способ для исследования истечения. Клетки получали в среде, содержащей RbCl, высеянный в 96-луночные планшеты и выращенный в течение ночи для получения монослоев. Эксперимент по истечению начинали отсасыванием среды и промывкой каждой лунки 3×100 мкл предварительно выдержанного буфера (содержащего низкую концентрацию [K⁺]) при комнатной температуре. После последнего отсасывания добавляют к каждой лунки 50 мкл рабочего раствора (2×) соединения и выдерживали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем к каждой лунке добавляли 50 мкл буфера для стимулирования (содержащего высокую концентрацию [K+]), давая конечные концентрации испытуемых соединений. Затем планшеты с клетками выдерживали при комнатной температуре в течение дополнительных 10 минут. Затем 80 мкл надосадочной жидкости из каждой лунки переносили в эквивалентные лунки 96-луночного планшета и анализировали с помощью атомной эмиссионной спектроскопии. Соединение исследовали в виде IC₅₀ кривых с 10 точками, полученными в двух экземплярах, n=2, с максимальной концентрацией 100 мкМ.

Предшествующее описание рассматривается только как иллюстрирующее принципы настоящего изобретения. Кроме того, т.к. многочисленные модификации и изменения будут очевидны специалистам в данной области техники, нежелательно ограничивать настоящее изобретение точным толкованием и способом, показанным, как описано выше. Соответственно, все подходящие модификации и эквиваленты можно рассматривать включенными в объем настоящего изобретения, как определено формулой изобретения, представленной ниже.

Предполагается, что слова "включают", "включающий", "содержат", "содержащий" и "содержит", при применении в данном описании и в последующей формуле изобретения, указывают на наличие заданных свойств, целых, компонентов или стадий, но они не исключают наличия или добавления одного или более других свойств, целых, компонентов, стадий или их групп.

1. Соединение формулы I

и его фармацевтически приемлемые соли,
где R¹ выбирают из Н, C₁-C₁₂алкила и -(C₁-C₁₂алкилен)-(C₅-C₆ гетероциклила), где гетероциклил может содержать 1-2 гетероатома в цикле, выбранных из азота, и в которых алкил и гетероциклил необязательно замещены одной или несколькими группами, независимо выбранными из -NHCOCH₃, -NHS(O)₂CH₃, -ОН, -S(О)₂N(СН₃)₂ и -S(O)₂СН₃;
R² выбирают из C₁-C₁₂алкила, -(C₁-C₆алкилен)-(C₅-С₆ гетероциклила) или -(C₁-C₆алкилен)-С(=O)-(C₅-C₆гетероциклила), в каждой из которых гетероциклил содержит 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода, -(C₁-C₆алкилен)-(C₆арила), где арил выбран из фенила, и -(C₁-C₆алкилен)-(C₅-C₆гетероарила), где гетероарил содержит 1 атом азота, в которых алкил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещают одной или несколькими группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, СН₃, -CF₃, -CO₂H, -СОСН₃, -CO₂CH₃,
-CONHCH₃, -NHCOCH₃, -NH(SO)₂CH₃, -ОН, -ОСН₃, -S(О)₂N(СН₃)₂, и -S(O)₂СН₃; и
R³ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из:

в которых волнистая линия показывает место присоединения.

2. Соединение по п.1, в котором R¹ выбирают из СН₃, -СН₂СН₃,
-СН₂СН₂СН₃, -СН(СН₃)₂, -СН₂СН₂СН₂СН₃, -СН₂СН(СН₃)₂, -С(СН₃)₂OH,
-CH₂CH₂OH, -CH₂CH₂CH₂OH, -(C₁-C₆алкилен)-(С₅-С₆гетероциклил), -СН₂-(пиперазин-1-ил), где пиперазин-1-ил необязательно замещают, и -CH₂-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил).

3. Соединение по п.1, в котором R² выбирают из СН₃, -СН₂СН₃,
-СН₂СН₂СН₃, -СН(СН₃)₂, -СН₂СН₂СН₂СН₃, -СН₂СН(СН₃)₂, C₁-C₁₂алкил, замещенный одной или более -F, -(C₁-C₆алкилен)-(C₅-C₆гетероциклил),
-СН₂-(пиперазин-1-ил), где пиперазин-1-ил необязательно замещают, и -СН₂-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил).

4. Соединение по п.1, выбранное из:
2-(2-(2-амино-4-метиопиримидин-5-ил)-9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)пропан-2-ола;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-бутил-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)пропан-2-ола;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9-пропил-9Н-пурин-8-ил)пропан-2-ола;
3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-8-(2-гидроксипропан-2-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)пропан-1-ола;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-(2-гидроксиэтил)-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)пропан-2-ола;
1-(4-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)этанона;
1-(3-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)метил)пирролидин-1-ил)этанона;
(R)-3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)-1-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пропан-1-она;
(S)-3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)-1-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пропан-1-она;
1-(3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)пропаноил)-N-метилпиперидин-4-карбоксамида;
3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)-1-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)пропан-1-она;
3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)-1-морфолинопропан-1-она;
3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)пропановой кислоты;
5-(9-(4-(метилсульфонил)бензил)-6-морфолино-9Н-пурин-2-ил)пиримидин-2-амина;
метил 4-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)метил)бензоата;
5-(6-морфолино-9-(2-морфолиноэтил)-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амина;
5-(9-(3-метоксибензил)-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амина;
метил 3-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)метил)бензоата;
3-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)пропан-1-ол;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)этанола;
1-(2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)ацетил)-N-метилпиперидин-4-карбоксамида;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)-1-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)этанона;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)-1-морфолиноэтанона;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил)уксусной кислоты;
метил 2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-6-морфолино-9Н-пурин-1-ил) ацетата;
5-(9-метил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиримидин-2-амина;
5-(9-метил-6-морфолино-9H-пурин-2-ил)пиридин-2-амина;
2-(2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-метил-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)пропан-2-ола;
2-(2-(6-аминопиридин-3-ил)-9-метил-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)пропан-2-ола;
5-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-морфолино-9Н-пурин-2-ил)пиридин-2-амина;
4-(2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-9Н-пурин-6-ил)морфолина;
4-(9-метил-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)морфолина;
N-(1-((2-(2-амино-4-метиопиримидин-5-ил)-9-этил-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)метил)пиперидин -4-ил)-N-метилметансульфонамида; и
N-(1-((2-(2-аминопиримидин-5-ил)-9-этил-6-морфолино-9Н-пурин-8-ил)метил)пиперидин-4-ил)-N-метилметансульфонамида.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая антипролиферативной активностью, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель, регулятор сыпучести, разбавитель или вспомогательное вещество.

6. Способ получения фармацевтической композиции, включающий смешение соединения по п.1 с фармацевтически приемлемым носителем.

7. Способ получения соединения формулы I по п.1, включающий взаимодействие соединения формула II:

с боронатным соединением, содержащим моноциклический гетероарил, с образованием соединения формулы I.