Способ получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается способа получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота. Представленный способ включает приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, при этом инактивацию вируссодержащей жидкости проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ и при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости, причем инактивацию вируссодержащей жидкости проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250-500 мг/л в течение 60-70 мин и при температуре 37-38˚С при рН 7,2-7,4. Представленное решение позволяет получить эффективный, качественный продукт при уменьшении концентрации инактивирующего средства и при сокращении времени обработки. 1 з.п. ф-лы, 4 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, вирусологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота.

Известен способ получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3, сбор вируссодержащей жидкости, инактивирование ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (Патент РФ №2378014 «Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная», опубл. 10.01.2010, МКИ A61K 39/205).

Недостатком известного технического решения является использование при инактивации вируса формалина, обладающего канцерогенной активностью. Известно, что при незначительном превышении рабочей концентрации формалин вызывает быструю гибель культур клеток для выращивания вирусов и подавление инфекционной активности вирусов, что нередко сопровождается существенным снижением иммуногенности. При приготовлении вакцины не исключается возможность попадания остатков формальдегида вместе с вакциной в организм иммунизируемых животных), что крайне нежелательно.

Задачей заявленного технического решения является повышение качества целевого продукта за счет возможности использования в качестве инактивирующего агента раствора оксидантов, полученного электролизом раствора хлорида натрия, а также ускорение способа.

Поставленная задача решается в способе получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота, включающем приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, отличающемся тем, что инактивацию вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250-500 мг/л в течение 60-70 мин при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости.

Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота тем, что в качестве штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота используют штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП или штамм ЗКСМ.

Известен штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП (Патент РФ №2378014 «Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная», опубл. 10.01.2010, МКИ A61K 39/205).

Известен штамм парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм ЗКСМ (Патент РФ №2371726 «Комплексная тест-система иммуноферментного анализа (ИФА) для определения уровня антител к вирусным респираторным заболеваниям крупного рогатого скота», опубл. 27.10.2009, МКИ G01N 33/569).

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма ЗКСМ вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 6,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°C в течение 60 минут при pH 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 1, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log₂), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:512 (9 log₂).

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 2. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма ЗКСМ вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицируют посевным материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 7,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=500 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см на 1,0 л вируссодержащей жидкости при температуре 38°C в течение 70 минут при pH 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 2, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log₂), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:1024 (10 log₂).

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 3. Приготовливают вируссодержащий материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП, инфицируют посевным материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 5,5 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см³ на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°C в течение 60 минут при pH 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 3, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log₂), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:1024 (10 log₂). Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 4. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza vims 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 7,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=500 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см на 1,0 л вируссодержащей жидкости конечной концентрации при температуре 38°C в течение 60 минут при pH 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 4, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log₂), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:1024 (10 log₂). Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Таким образом, заявленное техническое решение позволяет ускорить процесс получения целевого продукта за счет снижения времени инактивации с 72 часов до 60-70 минут (почти на трое суток). Кроме того, получаемая согласно заявляемому способу вакцина имеет срок хранения до 1 года.

Техническим результатом, достигаемым при применении предлагаемого изобретения является повышение эффективности инактивационной обработки вируссодержащих материалов при уменьшении концентрации инактивирующего средства, сокращение экспозиции обработки до 60-70 минут против 72 часов у прототипа; установлено, что раствор оксидантов относится к IV классу опасности, в соответствующих концентрациях не вызывает токсического действия на перевиваемую культуру клеток почки теленка «ПТ-80», используемую для выращивания и накопления вируссодержащего материала, быстро разлагается после воздействия на вирус, исключая тем самым попадание в организм животных с биопрепаратом, обеспечивает снижение затрат на приобретение препарата до 6 раз и повышение безопасности труда обслуживающего персонала, отсутствует вредное влияние на окружающую среду. Вакцина имеет достаточную антигенную активность. Способ обработки вируссодержащего материала предложенным инактивантом обеспечивает безопасность продукции, получаемой от сельскохозяйственных животных (мясо, молоко).

1. Способ получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, отличающийся тем, что инактивацию вируссодержащей жидкости проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ и при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости, причем инактивацию вируссодержащей жидкости проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250-500 мг/л в течение 60-70 мин и при температуре 37-38˚С при рН 7,2-7,4.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота используют штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП или штамм ЗКСМ.