Способ получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота


 


Владельцы патента RU 2509571:

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается способа получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота. Представленный способ включает приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, при этом инактивацию вируссодержащей жидкости проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ и при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см3 на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости, причем инактивацию вируссодержащей жидкости проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250-500 мг/л в течение 60-70 мин и при температуре 37-38˚С при рН 7,2-7,4. Представленное решение позволяет получить эффективный, качественный продукт при уменьшении концентрации инактивирующего средства и при сокращении времени обработки. 1 з.п. ф-лы, 4 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, вирусологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота.

Известен способ получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3, сбор вируссодержащей жидкости, инактивирование ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (Патент РФ №2378014 «Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная», опубл. 10.01.2010, МКИ A61K 39/205).

Недостатком известного технического решения является использование при инактивации вируса формалина, обладающего канцерогенной активностью. Известно, что при незначительном превышении рабочей концентрации формалин вызывает быструю гибель культур клеток для выращивания вирусов и подавление инфекционной активности вирусов, что нередко сопровождается существенным снижением иммуногенности. При приготовлении вакцины не исключается возможность попадания остатков формальдегида вместе с вакциной в организм иммунизируемых животных), что крайне нежелательно.

Задачей заявленного технического решения является повышение качества целевого продукта за счет возможности использования в качестве инактивирующего агента раствора оксидантов, полученного электролизом раствора хлорида натрия, а также ускорение способа.

Поставленная задача решается в способе получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота, включающем приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, отличающемся тем, что инактивацию вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250-500 мг/л в течение 60-70 мин при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см3 на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости.

Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота тем, что в качестве штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота используют штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП или штамм ЗКСМ.

Известен штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП (Патент РФ №2378014 «Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная», опубл. 10.01.2010, МКИ A61K 39/205).

Известен штамм парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм ЗКСМ (Патент РФ №2371726 «Комплексная тест-система иммуноферментного анализа (ИФА) для определения уровня антител к вирусным респираторным заболеваниям крупного рогатого скота», опубл. 27.10.2009, МКИ G01N 33/569).

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма ЗКСМ вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 6,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°C в течение 60 минут при pH 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 1, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log2), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:512 (9 log2).

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 2. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма ЗКСМ вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицируют посевным материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 7,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=500 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см на 1,0 л вируссодержащей жидкости при температуре 38°C в течение 70 минут при pH 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 2, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log2), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:1024 (10 log2).

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 3. Приготовливают вируссодержащий материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП, инфицируют посевным материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 5,5 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см3 на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°C в течение 60 минут при pH 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 3, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log2), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:1024 (10 log2). Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 4. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza vims 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота до достижения титра 7,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=500 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см на 1,0 л вируссодержащей жидкости конечной концентрации при температуре 38°C в течение 60 минут при pH 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 4, которая имеет антигенную активность в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), 1:1024 (10 log2), в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:1024 (10 log2). Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Таким образом, заявленное техническое решение позволяет ускорить процесс получения целевого продукта за счет снижения времени инактивации с 72 часов до 60-70 минут (почти на трое суток). Кроме того, получаемая согласно заявляемому способу вакцина имеет срок хранения до 1 года.

Техническим результатом, достигаемым при применении предлагаемого изобретения является повышение эффективности инактивационной обработки вируссодержащих материалов при уменьшении концентрации инактивирующего средства, сокращение экспозиции обработки до 60-70 минут против 72 часов у прототипа; установлено, что раствор оксидантов относится к IV классу опасности, в соответствующих концентрациях не вызывает токсического действия на перевиваемую культуру клеток почки теленка «ПТ-80», используемую для выращивания и накопления вируссодержащего материала, быстро разлагается после воздействия на вирус, исключая тем самым попадание в организм животных с биопрепаратом, обеспечивает снижение затрат на приобретение препарата до 6 раз и повышение безопасности труда обслуживающего персонала, отсутствует вредное влияние на окружающую среду. Вакцина имеет достаточную антигенную активность. Способ обработки вируссодержащего материала предложенным инактивантом обеспечивает безопасность продукции, получаемой от сельскохозяйственных животных (мясо, молоко).

1. Способ получения вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, отличающийся тем, что инактивацию вируссодержащей жидкости проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ и при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см3 на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости, причем инактивацию вируссодержащей жидкости проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250-500 мг/л в течение 60-70 мин и при температуре 37-38˚С при рН 7,2-7,4.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве штамма вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота используют штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, сем. Paramyxoviridae, рода Parainfluenza, подтипа Parainfluenza virus 3, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВГНКИ-4» ДЕП или штамм ЗКСМ.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицинской вирусологии. Предложен вакцинный штамм вируса гриппа A/17/mallard/Нидерланды/00/95(H7N3), характеризующийся температурочувствительностью и высокой степенью холодоадаптированности.

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к штамму бактериофага. Штамм обладает литической активностью в отношении Staphylococcus aureus.

Представленная группа изобретений относится к области биотехнологии и касается новых нуклеотидных последовательностей вируса Torque teno (TTV) и векторов, содержащих такие последовательности.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, микробиологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке средств специфической профилактики, и, в частности, для получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается штамма бактериофага Escherichia coli ECD4. Штамм бактериофага Escherichia coli ECD4 выделен из фекалий бройлерных кур на культуре бактерий штамма Escherichia coli О104:Н4 RKI№112027 и депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск» под номером Рh63.

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса Коксаки В6. Описанный штамм получен посредством проведения серии адаптационных пассажей родительского штамма вируса ЖЭВ-15 Коксаки В6 на высокочувствительной к данному вирусу культуре клеток НЕК293 и неопластической клеточной линии С33А (HPV-негативная карцинома шейки матки человека), с получением нового штамма ЖЭВ-15L вируса Коксаки В6.
Изобретение относится к области микробиологии и касается штамма вируса гриппа H16N3-субтипа. Описан штамм вируса гриппа птиц A/common gull/Altai/804/2011/H16N3-субтипа, депонирован в Государственной Коллекции вирусных инфекций и риккетсиозов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером V-583.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. В настоящем изобретении раскрывается кодон-оптимизированный ген, кодирующий главный капсидный белок L1 вируса папилломы человека, который способен, после трансдукции в клетку дрожжей, к эффективной экспрессии главного капсидного белка L1 вируса папилломы человека.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие геномы двух новых штаммов свиного цирковируса типа 2В.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Новый штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур получен путем многократных пассажей материнского вируса на развивающихся эмбрионах кур.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит активное вещество и целевую добавку.

Изобретение относится к ветеринарии и касается вакцины ассоциированной против ньюкаслской болезни (НБ), реовирусного теносиновита (РВТ) и метапневмовирусной инфекции (МПВИ) птиц инактивированной эмульсионной, содержащей активное вещество и целевую добавку.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. .

Изобретение относится к области ветеринарии. .

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, ветеринарии и касается профилактики респираторных болезней. .

Изобретение относится к области ветеринарии. .

Изобретение относится к области ветеринарии. .

Представленная вакцина содержит концентрированные антигенные материалы из штамма «Adeno III WBR-1-ДЕП» 3-го серотипа I подгруппы, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы, из штамма «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» 4-го серотипа II подгруппы, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почки теленка Taurus-1, из штамма «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы, из штамма «SF-4-ДЕП» вируса парагриппа-3, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток легких эмбриона коровы и из штамма «ВК-1-ДЕП» вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы. Концентрированные и авирулентные антигенные материалы, инактивированные формалином, соединяют с адъювантом в эффективном соотношении. Вакцина индуцирует высокий уровень антител против указанных инфекций и обеспечивает надежную защиту новорожденных телят, молодняка периода доращивания и откорма. 2 з.п. ф-лы, 7 табл., 9 пр.
Наверх