Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки



Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки
Производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества, обеспечивающие эффективную доставку днк в клетки

 


Владельцы патента RU 2513726:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (Новосибирский государственный университет, НГУ) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского научного центра Российской академии наук (ИОФХ им. А.Е. Арбузова КазНЦ РАН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Казанский институт биохимии и биофизики Казанского научного центра Российской академии наук (КИББ КазНЦ РАН) (RU)

Изобретение относится к cредству доставки ДНК в клетки, представляющему собой производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества (ГПАВ) формулы:

где m=4, 6, 12. Указанные соединения являются новыми низкотоксичными соединениями, обеспечивающими эффективную доставку ДНК в эукариотические клетки, и могут быть использованы для терапевтического лечения путем внутриклеточной доставки генов многих человеческих болезней. 6 ил., 1 табл., 13 пр.

 

Изобретение относится к ряду химических соединений, а именно к алкиламмонийным геминальным поверхностно-активным веществам (ГПАВ) формулы (I),

где m=4, 6, 12, обеспечивающих эффективную доставку ДНК в клетки.

Данные соединения являются электролитами и диссоциируют в воде с образованием мицеллообразующего иона, имеющего заряд +2, создаваемого двумя положительно заряженными атомами азота, и двух противоионов: бромид-анионов.

Генная терапия имеет значительный потенциал для терапевтического лечения путем внутриклеточной доставки генов многих человеческих болезней, которые в настоящее время считаются неизлечимыми. Вирусные векторы на основе аденовирусов или ретровирусов очень эффективны в доставке генов. Тем не менее развитие способов доставки ДНК в эукариотические клетки без применения вирусных векторов остается очень актуальным из-за возможности использовать только целевые последовательности ДНК и существенно более низкого риска отдаленных осложнений.

В качестве альтернативы вирусным векторам для доставки ДНК в клетки используются разнообразные катионные полимеры и структуры, такие как полиэтиленимин [Bagnacani V. et al. Macrocyclic nonviral vectors: high cell transfection efficiency and low toxicity in a lower rim guanidinium calix[4]arene. Org Lett. 2008; 10 (18), 3953-6], поли (L-лизин) [Baldini L. et al. Calixarene-based multivalent ligands, Chem Soc Rev. 2007, 36 (2), 254-66], полиамидоамин дендример [Sun X. et al. Cationic polymer optimization for efficient gene delivery. Mini Rev Med Chem. 2010, 10 (2), 108-25] и катионные липосомы [V. Geromel et al. Mitochondria Transfection by Oligonucleotides Containing a Signal Peptide and Vectorized by Cationic Liposomes, Antisense and Nucleic Acid Drug Development. 2001, 11 (3), 175-180]. Эти катионные агенты связываются с ДНК посредством электростатических взаимодействий и формируют комплексы наночастиц [Won Y.W. et al. Intracellular organdie-targeted non-viral gene delivery systems, J Control Release. 2011, 152 (1), 99-109]. В результате ДНК становится защищенной от деградации нуклеазой, в то же время катионные агенты являются посредником при проникновении в клетку и последующем освобождении из эндосом, что повышает эффективность трансфекции.

В литературе есть данные о трансфекции ДНК в присутствии монокатионных ПАВ - цетилтриметиламмоний бромида (ЦТАБ) и цетилгидроксиэтилдиметиламмоний бромида (ЦГАБ) [Mel'nikov S.M. et al. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 2401], [Mel'nikov, S.M. Et al. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 9951], [Clamme, J. P. et al. Biochim. Biophys. Acta 2000, 1467, 347], [Pinnaduwage, P. et al. Biochim. Biophys. Acta 1989, 985, 33], [Antara Dasgupta et al. J. Phys. Chem. B, Vol.111, No.29, 2007], которые являются монокатионными структурными аналогами заявляемых соединений и выбраны нами в качестве соединений сравнения.

К недостаткам использования вышеуказанных ПАВ в качестве средств доставки ДНК в клетки можно отнести (1) значительно более высокие величины критических концентраций мицеллообразования и более низкий поверхностный потенциал, что требует более высоких концентраций ПАВ для достижения сравнимых эффектов компактизации ДНК и перезарядки комплексов ПАВ/ДНК; (2) пониженную трансфекцию ДНК.

В литературе также имеются данные о применении в качестве трансфектантов геминальных ПАВ [Jagbir Singh et al. Current drug delivery, 2011, 8 (3), 299-306], [Peng Yang et al., European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 75 (2010) 311-320], [Marianna Foldvari et al., J. Experimental Nanoscience, 1, No.2, 2006, 165-176], [Cecilia Bombelli et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 6274-6278]. Однако в описанных примерах трансфекция ДНК в клетки животных достигается только при использовании смеси ПАВ с липидами, а в некоторых случаях еще и при добавлении производных полиэтиленгликоля. Существенным моментом является также то, что независимо от соотношения геминальное ПАВ-липид именно липиды являются структурообразующим компонентом: во всех приведенных источниках рассматриваются липосомы и везикулы, которые формируются по специальной методике в системах в присутствии липидов.

Задачей изобретения является создание новых эффективных средств доставки ДНК в эукариотические клетки, используемых в чистом виде (без вспомогательных агентов) и расширяющих арсенал известных средств указанного назначения.

Поставленная задача решается применением геминальных поверхностно-активных веществ (ГПАВ) формулы (I) с гидроксиэтилированной алкиламмонийной головной группой в качестве средств доставки ДНК в клетки.

Для сравнительного описания свойств ГПАВ, являющихся предметом изобретения, получены репрезентативные данные как для заявляемых соединений (3-5), различающихся между собой длиной спейсерного фрагмента (значением m), так и для незамещенных аналогов (1) и (2), где отсутствует гидроксиэтилированный фрагмент в головной группе.

m=4 (соединение 3)

m=6 (соединение 4)

m=12 (соединение 5)

Синтез геминальных алкиламмонийных ПАВ

Алканедил-α, ω-бис(метилдиалкиламмоний бромиды) получают кипячением в ацетоне смеси 2.2 моля метилдиалкиламина, в том числе содержащего гидроксиэтильную группу у атома азота, и 1.0 моля соответствующего α,ω-дибромалкана в течение 40-60-часов. Выпавший после окончания реакции солевой осадок отфильтровывают, промывают ацетоном, перекристаллизуют из смеси растворителей ацетон/метанол и высушивают в вакууме. Строение полученных соединений было подтверждено данными элементного анализа, ИК- и ЯМР-спектроскопии.

Пример 1. Гексанедил-1.6-бис(диметилгексадециламмоний бромид) (1)

получен кипячением 1.0 моли N,N,N',N'-тетраметилгексаметилендиамина в среде ацетонитрила с 2.2 молями гексадецилбромида в течение 40 часов. Выпавший после окончания реакции солевой осадок был отфильтрован, перекристаллизован из смеси растворителей - ацетон/этанол и высушен в вакууме.

1Н ЯМР (CDCl3, δ, м.д.; J, Гц): 0.89 [т, 6Н, 2х N+ CH2(CH2)13CH2 CH 3, J=7.0] 1.26-1.36 [уш.м, 52Н, 2х N+ CH2(CH 2)13CH2CH3] 1.60 [с, 4Н, 2х N+ CH2(CH2)13 CH 2CH3] 1.72-2.03 (м, 8Н, N+CH2(CH 2)4CH2N+) 3.39 [с, 12Н, 2х N+(CH 3)2] 3.45-3.56 [м, 4Н, 2х N+ CH 2(CH2)13CH2CH3N+ CH 2 sp.] 3.73-3.77 (м, 4Н, 2х N+ CH 2sp.)

ИК-спектр (KBr), ν/см-1: 2950, 2919, 2851, 1467, 1402, 1363, 1351, 1122, 1060, 974, 949, 900, 722.

Выход (84%). Формула: C42H90N2Br2. Вычислено (%): С 64.43, Н 11.58, N 3.58. Найдено (%): С 33, H 11.88, N 3.53.

Пример 2. Гексанедил-1.6-бис(диметилдециламмонимй бромид) (2)

получен кипячением 1.0 моли N,N,N',N'-тетраметилгексаметилендиамина в среде ацетонитрила с 2.2 молями децилбромида в течение 40 часов. Выпавший после окончания реакции солевой осадок был отфильтрован, перекристаллизован из смеси растворителей - ацетон/этанол и высушен в вакууме.

1Н ЯМР (CDCl3, δ, м.д.; J, Гц): 0.89 [т, 6Н, 2х N+CH2(CH2)7CH2 CH 3, J=7.0] 1.26-1.36 [уш.м, 28Н, 2х N+СН2(СН 2)7СН2СН3] 1.59 [с., 4Н, 2х N+СН2(CH2)7 CH 2CH3] 1.72-2.01 (м, 8Н, N+CH2(CH 2)4CH2N+) 3.38 [с, 12Н, 2х N+(CH 3)2] 3.46-3.56 [м, 4Н, 2х N+ СН 2(СН2)7СН2СН3] 3.72-3.76 (м., 4Н, 2х N+ CH 2sp.)

ИК-спектр (KBr), ν/см-1: 2953, 2922, 2853, 1485, 1467, 1401, 1377, 1128, 1062, 948, 898, 806, 724.

Выход (95%). Формула: C30H66N2Br2. Вычислено (%): С 58.62, Н 10.82, N 4.56. Найдено (%): С 58.31, Н 10.58, N 4.36.

Пример 3. Бутанедил-1.4-бис(гидроксиэтилметилгексадециламмоний бромид) (3)

получен кипячением 2.2 молей гидроксиэтилметилгексадециламина в среде ацетонитрила с 1.0 молем соответствующего α,β-дибромбутана в течение 50-60-часов. Выпавший после окончания реакции солевой осадок был отфильтрован, промыт ацетоном, перекристаллизован из смеси растворителей - ацетон/метанол и высушен в вакууме.

1Н ЯМР (CDCl3, δ, м.д.; J, Гц): 0.89 [т. 6Н, 2х N+ СН2(CH2)13CH2 CH 3, J=6.75] 1.27-1.36 [уш.м., 52Н, 2х N+ СН2(СН 2)13СН2СН3] 1.75 (с., 4Н, 2х N+ CH2(CH2)13 CH 2CH3] 2.12 (с., 4Н, N+CH2(CH 2)2CH2N+) 3.27 (с, 6Н, 2х N+ CH 3) 3.43-3.88 (м., 12Н, 2х N+ CH 2)3 4.12 (с., 4Н, 2х CH2 CH 2OH) 5.0 (с., 2Н, 2х CH2CH2OH).

ИК-спектр (KBr), ν/см-1: 3264, 2959, 2920, 2851, 1469, 1404, 1378, 1101, 1085, 1055, 721.

Выход (83%). Формула: C42H90O2N2Br2. Вычислено (%): С 61.89, Н 11.13, N 3.43. Найдено (%): С 61.72, Н 11.62, N 3.27.

Пример 4. Гексанедил-1.6-бис(гидроксиэтилметилгексадециламмоний бромид) (4)

получен кипячением 2.2 молей гидроксиэтилметилгексадециламина в среде ацетонитрила с 1.0 молем соответствующего α,β-дибромгексана в течение 50-60-часов. Выпавший после окончания реакции солевой осадок был отфильтрован, промыт ацетоном, перекристаллизован из смеси растворителей - ацетон/метанол и высушен в вакууме.

1Н ЯМР (CDCl3, δ, м.д.; J, Гц): 0.89 [т, 6Н, 2х N+ CH2(CH2)13CH2 CH 3, J=6.97] 1.27-1.367 [уш.м., 52Н, 2х N+ СН2(СН 2)13СН2СН3] 1.57 (с, 4Н, 2х N+ СН2(СН2)13 СН 2СН3] 1.73-1.98 (м, 8Н, N+CH2(CH 2)4CH2N+) 3.31 (с, 6Н, 2х N+ CH 3,) 3.50-3.73 (м, 12Н, 2х N+ CH 2)3 4.11 (с, 4Н, 2х CH2 CH 2OH) 5.06 (с, 2Н, 2х CH2CH2OH).

ИК-спектр (KBr), ν/см-1: 3227, 2918, 2850, 1468, 1377, 1095, 1058, 721.

Выход (87%). Формула: C44H94O2N2Br2. Вычислено (%): С 62.70, Н 11.16, N 3.33. Найдено (%): С 62.85, Н 11.73, N 3.35.

Пример 5. Додеканедил-1.12-бис(гидроксиэтилметилгексадециламмоний бромид) (5)

получен кипячением 2.2 молей гидроксиэтилметилгексадециламина в среде ацетонитрила с 1.0 молем соответствующего α,β-дибромдодекана в течение 50-60-часов. Выпавший после окончания реакции солевой осадок был отфильтрован, промыт ацетоном, перекристаллизован из смеси растворителей - ацетон/метанол и высушен в вакууме.

1Н ЯМР (CDCl3, δ, м.д.; J, Гц): 0.85 [т, 6Н, 2х N+CH2(CH2)13CH2 CH 3, J=7.13] 1.23-1.34 {уш.м., 68Н, [52Н, 2х N+CH2(CH 2)13CH2CH3+16H, (CH 2)8sp.]} 1.71 {с, 8Н [4Н, 2х N+CH2(CH2)13 CH 2CH3+4Н, 2х N+CH2 CH 2sp.]} 3.27 (с, 6Н, 2x N+ CH 3) 3.45-3.51 [м, 8H, 2x N+(CH 2)2] 3.65 (с, 4Н, 2х N+CH2 CH 2OH) 4.07 (с, 4Н, 2х N+ CH 2CH2OH) 5.06 (с, 2Н, 2х N+CH2CH2OH).

ИК-спектр (KBr), ν/см-1: 3261, 2919, 2850, 1469, 1379, 1085, 1053, 720.

Выход (92%). Формула: C50H106O2N2Br2. Вычислено (%): С 64.75, Н 11.52, N 3.02. Найдено (%): С 64.42, Н 11.17, N 3.05.

Биологическая активность (цитотоксичность, доставка ДНК в клетки)

Пример 6. Определение цитотоксичности соединений к клеткам линии 293Т

Цитотоксичность определяли с помощью 3-4,5-диметилтиазол-2-ил-2,5-дифенилтераразола (МТТ реагента). Культуру клеток человека линии НЕК293Т рассаживают по 40 тыс клеток на лунку 96-луночного планшета за день до определения цитотоксичности из расчета получить на следующий день 50-70% монослоя. За час до добавления МТТ-реагента клеткам дают свежую среду DMEM без сыворотки и антибиотика. Делают серию последовательных разведений потенциальных трансфектантов в фосфатно-солевом буфере (ФСБ×1) рН 7.0 с конечной концентрацией 10-3, 10-2, 0,1 и 1 мг/мл, добавляют к раствору плазмидной ДНК и аккуратно пипетируют один раз. По истечении 15 минут инкубирования липокомплексы с 0.6 мкг плазмидной ДНК в суммарном объеме 20 мкл добавляют к клеткам без значительного перемешивания. Параллельно к клеткам добавляют индивидуальные вещества без ДНК в соответствующем количестве. По истечении 48 часов инкубации с соединениями к пробам добавляют по 20 мкл р-ра МТТ (5 мг/мл). После 3 часов инкубации с МТТ удаляют среду из лунок, стараясь не затрагивать кристаллы, растворяют кристаллы формазана в 200 мкл ДМСО. Далее определяют оптическую плотность на приборе Тесал Sunrise Basic при длине волны 492 нм с вычитанием фона. По полученным данным определяется CD50 (концентрация соединения, при которой гибнет 50% популяции клеток). На диаграмме Фиг.1 представлены результаты определения цитотоксичности потенциальных трансфектантов методом МТТ-теста.

Штриховкой отмечены данные, соответствующие пробам ДНК+ исследуемые соединения, ромбами - пробы только с исследуемыми соединениями.

Как видно из диаграммы, заявляемые соединения (3-5) в комплексах с ДНК проявляют цитотоксичность, сравнимую с незамещенными аналогами (1) и (2). Все исследуемые соединения с ДНК оказывают менее токсичное воздействие на клетки, чем без ДНК. Полученные концентрации, при которых наблюдается 50% гибель клеток, оказываются ниже, чем требуется для эффективной доставки ДНК.

Пример 7. Проведение трансфекции с помощью соединения (5)

Монослойную культуру клеток человека линии НЕК293Т рассаживают по 40 тыс клеток на лунку за день до трансфекции из расчета получить на следующий день конфлуэнтность 50-70%. Для трансфекции НЕК293Т используют концентрацию 50-100 тыс клеток на лунку 96-луночного планшета. За час перед трансфекцией клеткам дают свежую среду DMEM без сыворотки и антибиотика. Трансфекции проводят также в 96-луночном планшете, эксперименты проводят в тройном повторе. Сначала делают серию последовательных разведений потенциальных трансфектантов в ФСБ (×1) рН 7.0 с конечной концентрацией 10-3, 10-2, 0,1 и 1 мг/мл, добавляют к раствору ДНК и аккуратно пипетируют один раз. По истечении 15 минут инкубирования липокомплексы с 0,6 мкг плазмидной ДНК peGFP-N1 (Clontech) в суммарном объеме 20 мкл добавляют к клеткам без значительного перемешивания. На следующие сутки флуоресценцию популяции клеток в планшете наблюдают на флуоресцентном микроскопе с обращенной оптикой. Через 48 часов после трансфекции проводят анализ методом проточной цитометрии, как описано далее. Получив результаты о предварительной функциональности новых соединений как трансфектантов, проводят оптимизацию соотношения количества трансфектанта к количеству плазмидной ДНК вблизи значений, при которых наблюдается максимальная трансфекционная эффективность. Используемый шаг в выбранном диапазоне составляет последовательное двукратное увеличение концентрации. Также оптимизируют продолжительность инкубации клеток с трансфекционной смесью и возможность комбинирования трансфекции. Оптимальное время инкубации с трансфектантом составляет 4 часа, по истечении которых среду в клетках меняют на полную среду DMEM с сывороткой и антибиотиком.

Определение эффективности трансфекции клеток методом проточной цитометрии

В исследовании степени трансфекции клеток используют метод проточной цитометрии. Каждую лунку планшета с клетками после инкубации с экспериментальными препаратами в течение 48 часов отмывают 200 мкл ФСБ (×1), обрабатывают трипсином, определяют цитотоксичность и фиксируют в 0,5% формалине. В полученной таким образом клеточной суспензии определяют методом проточной цитометрии процент клеток, экспрессирующих eGFP. Эта величина является мерой эффективности трансфекции. Клетки, инкубируемые без экспериментальных препаратов при тех же условиях, используют в качестве отрицательного контроля. Для сравнения проводится измерение процента eGFP положительных клеток, трансфицированных с помощью коммерческого препарата Metafectene easy по протоколу, предлагаемому производителем (Biontex, EU). Далее из полученных данных рассчитывают процент флуоресцентных клеток с использованием программы FACS Diva («Becton Dickinson», США), средние значения и стандартные отклонения для популяций. Результаты представляют как среднее значение и ошибку среднего для анализируемого соединения.

Микрофотография культуры трансфицированных клеток в флуоресцентном свете и данные эффективности трансфекции представлены на фигуре 2. Для соединения (5) наибольший процент трансфицированных клеток составляет 52±10% при концентрации 0.01 мг/мл (11 мкмоль/л). Эта рабочая концентрация ниже уровня CD50 (концентрации, при которой гибнет 50% популяции клеток), что говорит о малой токсичности соединения.

Пример 8. Проведение трансфекции с помощью соединения ЦТАБ

По указанному в примере 7 протоколу проводят тестирование трансфекционной эффективности соединения ЦТАБ. Получены результаты количества трансфицированных клеток на уровне контроля.

Пример 9. Проведение трансфекции с помощью соединения (1)

По указанному в примере 7 протоколу проводят тестирование трансфекционной эффективности соединения (1). Полученные результаты представлены на фигуре 3.

Для соединения (1) наибольший процент трансфицированных клеток составляет 6.2±1.2% при концентрации 0.01 мг/мл (130 мкмоль/л).

Пример 10. Проведение трансфекции с помощью соединения (2)

По указанному в примере 7 протоколу проводят тестирование трансфекционной эффективности соединения (2). Полученные результаты представлены на фигуре 4.

Для соединения (2) наибольший процент трансфицированных клеток составляет 1.6±0.6% при концентрации 0.1 мг/мл (160 мкмоль/л).

Сравнение результатов по исследованию трансфекции при помощи соединений (2) и (1) показывает, что увеличение гидрофобности (длины алкильного радикала) существенно улучшает эффективность трансфекции (процент трансфицированных клеток). Аналогичная корреляция прослеживается и для гидроксиэтилированных ГПАВ. Поэтому в качестве заявляемых соединений предлагаются наиболее активные гексадецильные производные (3-5)

Пример 11. Проведение трансфекции с помощью соединения ЦГАБ

По указанному в примере 7 протоколу проводят тестирование трансфекционной эффективности соединения ЦГАБ. Получены результаты количества трансфицированных клеток на уровне негативного контроля.

Пример 12. Проведение трансфекции с помощью соединения (3)

По указанному в примере 7 протоколу проводят тестирование трансфекционной эффективности соединения (3). Полученные результаты представлены на фигуре 5.

Наибольший процент трансфицированных клеток составляет 32±5% при концентрации 0.01 мг/мл (25 мкмоль/л). Таким образом, эта рабочая концентрация ниже уровня CD50 (концентрации, при которой гибнет 50% популяции клеток), что говорит о малой токсичности соединения.

Пример 13. Проведение трансфекции с помощью соединения (4)

По указанному в примере 7 протоколу проводят тестирование трансфекционной эффективности соединения (4). Полученные результаты представлены на фигуре 6.

Наибольший процент трансфицированных клеток составляет 6.2±0.2% при концентрации 0.1 мг/мл (120 мкмоль/л).

Данные эффективности трансфекции по результатам проточной цитометрии клеток НЕК293Т через 48 часов после трансфекции объединены в таблице 1.

Таблица 1
Соединение Конц., мг/мл % GFP(+) Среднее значение Станд. Откл. Конц., мкмоль/л
1 0.001 1 1.2 1.4 1.2 0.2 1
1 0.01 3.6 4.8 4.1 4.2 0.6 13
1 0.1 7.2 6.6 4.9 6.2 1.2 128
1 1 2.9 4.6 2.7 3.4 1.0 640
2 0.001 0.2 1 0.6 0.6 0.4 2
2 0.005 0.6 0.9 0.5 0.7 0.2 7
2 0.01 0.6 1.5 2 1.4 0.7 13
2 0.1 1.2 2.3 1.2 1.6 0.6 163
3 0.001 28 30 37 31.7 4.7 3
3 0.01 18 10 12 13.3 4.2 25
3 0.1 5 6.2 3.7 5.0 1.3 250
3 1 8.2 5.1 10.1 7.8 2.5 2500
4 0.2 4.8 6 5.8 5.5 0.6 238
4 0.1 6.1 6.1 6.4 6.2 0.2 119
4 0.05 4.4 6.2 6.3 5.6 1.1 59
5 0.002 0.6 1 0.6 0.8 0.3 2.3
5 0.004 44 37 50 43.7 6.5 5.5
5 0.01 52 41 61 51.3 10.0 11
5 0.02 6.9 8 5 6.6 1.5 22
ЦТАБ 0.001-0.1 0
ЦГАБ 0.001-0.1 0

Данные табл.1 показывают, что

1. Гидроксиэтильные геминальные ПАВ проявляют более высокую трансфекционную эффективность при более низких концентрациях, чем соединения сравнения (монокатионные ПАВ ЦТАБ и ЦГАБ и незамещенные геминальные аналоги (1) и (2).

2. Среди заявляемых соединений наиболее высокий процент трансфицированных клеток получен для соединений (3) (m=4) и (5) (m=12).

3. Даже незначительное изменение структуры заявляемых ПАВ (изменение количества метиленовых звеньев в спейсере) приводит к значительному, в 5-9 раз, изменению эффективности трансфекции.

Таким образом, заявляемые гидроксиэтильные производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества обладают способностью эффективно доставлять ДНК в клетки без вспомогательных агентов и низкой токсичностью.

Средство доставки ДНК в клетки, представляющее собой производные алкиламмонийного геминального поверхностно-активного вещества формулы:

где m=4, 6, 12.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к улучшенному способу получения 3-(3,4-диоксифенил)этиламина гидрохлорида, который является субстанцией лекарственного препарата дофамина, осуществляющего регуляцию функции эндокринных желез и передачу нервных импульсов.

Изобретение относится к устойчивым и стабильным при хранении новым солевым кластерам соли аммония и минеральной соли с анионами двухосновных кислот общей формулы (I), которые могут найти применение для обезболивания при воспалении нервных волокон.

Изобретение относится к конъюгату хризофанола или его производного, характеризующемуся общей формулой (I), в которой R1-R8 представляют собой группу, выбранную из групп -Н, -ОН, -ОСН3, -СН3, при условии, что не менее двух групп из R1-R8 означают -Н и при условии, что одна или две группы R2, R3, R6, R7 является группой -СООН, М представляет собой азотное органическое основание, выбранное из группы, состоящей из хитозамина, глюкозамина, или основную аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аргинина, лизина, карнитина, и группа М связана с хризофаноловой частью в конъюгат.

Изобретение относится к новому химическому соединению из группы четвертичных аммониевых солей янтарной кислоты, а именно 1-дезокси-1-N-метиламмония-D-глюцитола сукцинату (меглюмина сукцинату), обладающему антидиабетическим действием при низкой токсичности и позволяющему воздействовать на комплекс патологических изменений, сопутствующих сахарному диабету, за счет проявления диуретической и антиагрегантной активностей.

Изобретение относится к органической химии, а именно к синтезу неизвестных ранее N-[алкилфеноксиполи(этиленокси)карбонилметил]-морфолиний хлоридов. .
Изобретение относится к улучшенному способу получения водного раствора N,N-диметилдиаллиламмонийхлорида (ДМДААХ), полимеризацией которого получают высокоэффективные полиэлектролиты, применяемые в химической, нефтехимической, нефтеперерабатывающей, бумажной и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к области технологии получения органических соединений, в частности к способу и аппаратурному оформлению технологического процесса получения дидецилдиметиламмония бромида, обладающего высокой фунгицидной, антисептической и бактерицидной активностью.

Изобретение относится к улучшенному способу получения формы V гидрохлорида сертралина, который обладает антидепрессивным действием. .

Изобретение относится к улучшенному способу получения соединения - гидрохлорида 2-(1-аминоэтил)бицикло[2.2.1]гептана, используемого в качестве активной субстанции лекарственного препарата «дейтифорин», проявляющего высокую активность против вирусов гриппа типа А и В, а также парагриппа.

Изобретение относится к способу получения 50-60%-ного водного раствора четвертичной аммонийной соли формулы: [(CH 3)2N(CH2-CH=CHCl 2]+Cl- или [(CH3CH2) 2N(CH2-CH=CHCl)2 ]+Cl- и к применению его в качестве антистатика для стекловолокон.

Изобретение относится к способу получения метокарбоната четвертичного аммония, имеющего формулу (CH3NR 1R2R3) +(ОСО2СН3) -, где R1 и R2 независимо представляют собой алкил C1 -С30, а R3 представляет собой алкил С8-С30 , к способу получения бикарбоната четвертичного аммония, имеющего формулу (CH3N+R 1R2R3) 2СО3Н-, где R1, R2 и R 3 независимо представляют собой алкил C 1-С30, и к способу получения смеси бикарбоната четвертичного аммония и карбоната четвертичного аммония, где катион четвертичного аммония имеет формулу N +(CH3)R1R 2R3, где R1 , R2 и R3 независимо представляют собой алкил C1-С 30.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии в условиях редуцированного кровообращения.
Изобретение относится к области медицины, а именно к проктологии, может быть использовано для регионарной лимфотропной терапии парапроктита. Для этого осуществляют вскрытие, дренирование, санацию гнойного очага.
Изобретение относится к медицине, а именно к спортивной медицине и физиологии, и может быть использовано для улучшения физического состояния организма у молодых лиц женского пола.

Изобретение обеспечивает кристаллическую твердую форму (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты или кристаллический гидрохлорид (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему адаптогенной активностью. Средство, обладающее адаптогенной активностью, содержащее измельченные корни элеутерококка колючего, корни родиолы розовой, корни солодки уральской, побеги черники обыкновенной, траву тимьяна ползучего в определенном соотношении.

Изобретение относится к соединению формулы Ia где W представляет собой -C(U1)(U2)-C≡CH, U1 и U2, которые являются независимо выбранными из водорода; А выбран из группы, содержащей незамещенный фенил, незамещенный гетероарил, такой как фуранил, G1, G2 и G3 в формуле Ia являются независимо и по отдельности, в каждом случае, выбранными из группы, содержащей водород, (С1-С4)алкил, предпочтительно метил, L и (С1-С6)алкил-L, при условии, что именно один из G1-G3 в формуле Iа выбран из L и (С1-С6)алкил-L, и L представляет собой метилсульфонилокси группу, или L представляет собой F, предпочтительно 18F, n=0, m=0, и к его фармацевтически приемлемой соли.
Предложено применение бромида 1-(β-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия в качестве активной основы лекарственных средств для коррекции нарушений функционирования нитроксидергической системы.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для лечения и профилактики артериальной гипертонии с метаболическим синдромом.
(57) Изобретение относится к области биотехнологии и предназначено для пермебиализации мембран первичных гепатоцитов. Способ включает обработку клеток печени пороформирующим гемолизином Hlyll Bacillus cereus, увеличивающим эффективность проникновения внутрь клеток низкомолекулярных веществ, при котором воздействуют на гепатоциты Hlyll из В.cereus в диапазоне концентраций 0,1-1 мкг/мл.
Наверх