Способ оценки противовоспалительной активности препарата


 


Владельцы патента RU 2514651:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "СМОЛЕНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области фармакологии и касается способов оценки их противовоспалительной активности. Способ оценки противовоспалительной активности препарата включает введение исследуемого препарата экспериментальному животному, последующую индукцию воспаления каррагенином и исследование крови экспериментального животного спустя 3 часа после индукции воспаления. После чего оценивают лейкограмму крови и определяют соотношение суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I и при I>0,93 судят о наличии противовоспалительной активности, а при I≤0,93 - о ее отсутствии. Предлагаемый способ является простым, достаточно точным и информативным, и может быть использован как в экспериментальной медицине для проверки противовоспалительных свойств препарата, так и в клинических условиях для контроля проводимой терапии воспалительных процессов. 2 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к области фармакологии и касается лекарственных средств, обладающих противовоспалительной активностью, а именно способов оценки их противовоспалительной активности.

Показателями противовоспалительного эффекта служат антиэкссудативное, анальгезирующее и жаропонижающее действия. Известны способы оценки противовоспалительной активности препаратов онкометрическим методом, по изменению порога болевой чувствительности при контактно-тепловом раздражении, по способности исследуемых препаратов снижать температуру кожи конечности крысы над очагом воспаления. Для исследования противовоспалительной активности используют модель каррагенинового отека лапы у крыс: острую воспалительную реакцию (отек) воспроизводят субплантарным (под подошвенный или плантарный апоневноз) введением 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Выраженность воспалительной реакции оценивают через 3 часа после индукции воспаления по изменению объема лапы (онкометрически). Исследуемые вещества вводят зондом в желудок за час до каррагенина (Рейхарт Д.В., Фисенко В.П., Хабриев Р.У. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.234-241).

Данными методами сложно оценить противовоспалительную активность препаратов ввиду большого количества показателей, которые трудно интерпретировать однозначно.

Кроме этого для оценки противовоспалительной активности препаратов используются унифицированные биохимические и гематологические методы, где определяют активность воспалительного процесса по показателям крови: СОЭ, сиаловых кислот, фибриногена и содержание лейкоцитов (Рейхарт Д.В., Фисенко В.П., Хабриев Р.У. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.234-241).

По биохимическим и гематологическим показателям можно косвенно судить о наличии воспалительного процесса, то есть об эффективности противовоспалительного действия исследуемого препарата, однако, данные методы не обладают достаточной точностью ввиду индивидуальных особенностей и большого «разброса» данных, а также ввиду необходимости оценки значительного числа показателей.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышения точности и информативности, а также уменьшение количества регистрируемых показателей.

Сущность предлагаемого способа оценки противовоспалительной активности препарата состоит в том, что экспериментальному животному вводят исследуемый препарат, индуцируют острую воспалительную реакцию каррагенином и через 3 часа после индукции воспаления исследуют лейкограмму крови, определяют отношение суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I, и при I>0,93 судят о наличии противовоспалительной активности, а при I≤0,93 - о ее отсутствии.

При любом виде воспаления изменяется качественный и количественный состав крови ее форменных элементов, возрастает количество гранулоцитов, а количество агранулоцитов может уменьшаться.

Поэтому для оценки противовоспалительной активности препаратов можно использовать данные лейкоцитарной формулы крови.

Способ осуществляется следующим образом. Лабораторному животному внутрижелудочно вводят препарат, противовоспалительное действие которого необходимо исследовать. Спустя час после внутрижелудочного введения препарата вводят 0,1 мл 1% раствора каррагенина субплантарно в виде водного раствора для индукции воспаления. Затем, спустя 3 часа после индукции воспаления осуществляют забор крови, для исследования лейкограммы и расчета индекса соотношения Т агранулоциты суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I = а г р а н у л о ц и т ы г р а н у л о ц и т ы . При I>0,93 гранулоциты судят о наличии противовоспалительной активности у исследуемого препарата, а при I≤0,93 - противовоспалительная активность отсутствует.

Пример 1. Крысе массой 200 г внутрижелудочно вводили ацетилсалициловую кислоту (АСК) в дозе 100 мг/кг. Спустя час после введения АСК индуцировали острую воспалительную реакцию путем субплантарного введения в левую заднюю лапу 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Спустя 3 часа после индукции воспаления осуществляли забор крови для исследования лейкограммы (нейтрофилы: палочкоядерные - 1%, сегментоядерные - 35%; эозинофилы - 1%; моноциты - 4%; лимфоциты - 49%). После этого рассчитывали соотношение количества агранулоцитов (53) к гранулоцитам (37). Таким образом, получали значение индекса противовоспалительной активности I=53/37=1,43, т.е. 1,43>0,93, следовательно, препарат обладает противовоспалительной активностью.

Пример 2. Крысе массой 206 г внутрижелудочно ввели 2 мл изотонического раствора. Спустя час индуцировали острую воспалительную реакцию путем субплантарного введения в левую заднюю лапу 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Спустя 3 часа осуществляли забор крови для исследования лейкограммы (нейтрофилы: палочкоядерные - 1%, сегментоядерные - 51%; эозинофилы - 1%; моноциты - 4%; лимфоциты - 43%). После этого рассчитывали соотношение количества агранулоцитов (47) к гранулоцитам (53). Индекс противовоспалительной активности I=47/53=0,89, т.е. противовоспалительная активность отсутствует.

Исследование проведено на 70 крысах-самцах линии Wistar массой 160-220 г. Животные были разделены на 7 групп: интактная, контрольная и 5 опытных. Интактной группе (10 крыс) внутрижелудочно вводили 2 мл изотонического раствора без индукции воспаления. Контрольной группе (10 крыс) индуцировали воспаление без фармакологической коррекции. В 5 опытных группах по 10 крыс в каждой исследовали противовоспалительное действие следующих препаратов: ацетилсалициловая кислота (группа 1), диклофенак (группа 2), гипоксен (группа 3), метапрот (группа 4) и гесперидин (группа 5) на фоне каррагенин-индуцированного воспаления. Все исследуемые препараты вводились внутрижелудочно в дозах: ацетилсалициловая кислота - 100 мг/кг, диклофенак - 8 мг/кг, гипоксен, метапрот и гесперидин - 50 мг/кг за час до индукции воспаления. Во всех группах измеряли объем задней левой конечности дважды - до индукции воспаления и спустя 3 часа после индукции воспаления и рассчитывали прирост объема конечностей. В интактной группе воспаление не индуцировали. Острую воспалительную реакцию вызывали путем субплантарного введения 0,1 мл 1% раствора каррагенина в виде водного раствора в левую заднюю лапу крысе. После этого осуществляли забор крови у крыс всех 7 групп для последующего анализа и расчета индекса противовоспалительной активности. Подсчет общего числа лейкоцитов проводили стандартным методом в камере Горяева. В таблице представлены средние показатели индекса противовоспалительной активности и прироста объема конечности контрольной и опытных групп животных.

Из таблицы видно, что при наличии воспаления предлагаемый индекс уменьшается, его величина зависит от тяжести патологического процесса. Для подтверждения состоятельности индекса противовоспалительной активности его значения сопоставлялись с приростом объема конечности, который измеряли онкометрическим методом. Выявлено, что имеется обратная корреляционная зависимость между предложенным индексом противовоспалительной активности и приростом объема конечности (при r=-0,96, p<0,01). При этом наблюдается наибольший прирост объема конечности при каррагениновом воспалении в группе без фармакологической коррекции, а индекс противовоспалительной активности имеет наименьшее значение. Препараты проявляли различную противовоспалительную активность, что выражалось не только изменением объема конечности, но и изменением индекса.

Таким образом, данный способ позволяет судить о наличии воспалительной реакции и, следовательно, о противовоспалительной активности исследуемого препарата. Предлагаемый способ является простым, точным и информативным, и может быть использован как в экспериментальной медицине для проверки противовоспалительных свойств препарата, так и в клинических условиях для контроля проводимой терапии воспалительных процессов.

Способ оценки противовоспалительной активности препарата

Таблица
Группа животных, n=10 Индекс противовоспалительной активности, усл. ед. Прирост объема конечности, мл
Интактная группа 3,07±0,11 0,01±0,001
Контрольная группа 0,95±0,02 1,06±0,04
АСК 1,55±0,03 0,38±0,02
Диклофенак 1,99±0,02 0,15±0,01
Гипоксен 1,29±0,01 0,71±0,01
Метапрот 1,16±0,02 0,82±0,02
Гесперидин 0,97±0,03 0,97±0,02

Способ оценки противовоспалительной активности препарата, включающий введение исследуемого препарата экспериментальному животному, индукцию воспаления каррагенином и исследование крови экспериментального животного спустя 3 часа после индукции воспаления, отличающийся тем, что оценивают лейкограмму крови и определяют соотношение суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I и при I>0,93 судят о наличии противовоспалительной активности, а при I≤0,93 - о ее отсутствии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу специфического отбора высокоаффинных молекул ДНК (ДНК-аптамеров) к рекомбинантному белку-мишени. Указанный способ включает синтез единой полипептидной цепи рекомбинантного белка, содержащего в своем составе фрагмент глютатион-S-трансферазы, целевой белок-мишень, пептидную последовательность, расщепляемую летальным фактором B.

Группа изобретений относится к соединениям - модификаторам хемосенсорных рецепторов и их лигандов, имеющим структурную формулу (IIIb), их подвидам и конкретным соединениям, съедобным композициям, содержащим модификаторы хемосенсорных рецепторов и их лигандов, имеющие структурную формулу (IIIb), их подвиды и конкретные соединения, а также к способам применения вышеуказанных соединений для улучшения сладкого вкуса съедобных композиций.

Настоящее изобретение относится к биологии и медицине и описывает способ отбора анальгетических средств, который позволяет осуществлять поиск биологически активных веществ с анальгетическим действием в рядах NH-замещенных антраниловых кислот (1), ариламидов NH-замещенных антраниловых кислот (2), ариламидов N-ацил-N-алкенил(алкил)антраниловых кислот (3), амидов и гидразидов NH-ацил(галоген)антраниловых кислот (4), имеющих общий фрагмент: карбонил, фенильный радикал и вторичная или третичная аминогруппы, у которых определяют параметры электронной структуры молекул соединений и выбирают дескрипторы: энергия Хартри-Фока (ЕHF), полная тепловая энергия (EТЕРМ), заряды на атомах азота (qN), углерода (qC) и кислорода (qO), затем с помощью трехпараметровых уравнений рассчитывают анальгетическую активность (ААрасч.) и отбирают соединения, у которых теоретически рассчитанная АА равна или превосходит таковую препарата сравнения, выбранные соединения синтезируют и подтверждают расчетные данные экспериментально на лабораторных животных (ААэксп.).

Изобретение относится к области биологии, медицины, ветеринарии и может быть использовано для проведения исследования биологической активности веществ в биологии, медицине и ветеринарии.

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для количественного определения лекарственных веществ - производных бигуанидов: глибутида, метформина, прогуанила ГХ, пиклоксидина и хлоргексидина в субстанциях в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях.

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано для извлечения пуриновых алкалоидов из водных сред с целью их последующего определения.
Изобретение относится к области аналитической химии и биохимической клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале.

Изобретение относится к области медицины и описывает способ определения содержания воды в таблеточной массе при промышленном производстве таблеток путем кулонометрического титрования, где в основе лежит взаимодействие воды, содержащейся в исследуемом образце, с кулонометрическим титрантом - электрогенерированным йодом, который образуется при электролизе органического или неорганического йодида (например, СН3I или KI), входящего в состав фонового электролита при постоянной силе тока 50 мА в течение времени, определяемого биопотенциометрически по достижению конечной точки титрования, содержание воды (X, г) в аликвоте исследуемого образца рассчитывается по формуле, и параллельно проводят определение воды в растворителе и по известным формулам рассчитывают содержание воды в таблеточной массе.
Изобретение относится к медицине, в частности к фармакогнозии и фармации, конкретно к способу определения содержания кальция в жидких экстрактах из растительного сырья.

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для фотоэлектроколориметрического определения сульфаниламидных препаратов - стрептоцида, сульфадимезина, этазола, сульфалена, фталазола, сульфатиазола, сульфадиметоксина, сульфамонометоксина в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях.

Изобретение относится к химической и фармацевтической промышленности и может быть использовано для извлечения новокаина из водных сред с целью его дальнейшего определения. Способ экстракции новокаина из водных сред смесью фенетола и этилацетата, характеризуется тем, что готовят водно-солевой раствор новокаина, для чего водный раствор новокаина с известной концентрацией помещают в мерную колбу, доводят до метки насыщенным раствором высаливателя, в качестве которого используют сульфат аммония, экстрагируют новокаин смесью фенетола и этилацетата, взятых в соотношении 1:1, для этого к полученному водно-солевому раствору новокаина добавляют в качестве экстрагента смесь фенетола и этилацетата (1:1) при соотношении объемов фаз водно-солевого раствора новокаина и экстрагента 5:1, экстрагируют на вибросмесителе до установления межфазного равновесия, после расслаивания системы водно-солевой раствор отделяют от органической фазы и анализируют методом УФ-спектрофотометрии, измеряют оптическую плотность водно-солевого раствора на УФ-спектрофотометре при длине волны 291 нм и по градуировочному графику, построенному в координатах оптическая плотность водно-солевого раствора - концентрация новокаина, находят содержание новокаина в водной среде; зная концентрацию, рассчитывают коэффициент распределения и степень извлечения новокаина. Способ позволяет полностью извлечь новокаин из водных сред, интенсифицировать процесс извлечения, обеспечить экспрессность и надежность значений определения концентрации новокаина. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Готовят растворы определяемого вещества (бендазола) и образца сравнения. В качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1М раствор хлористоводородной кислоты. В качестве образца сравнения используют кислоту бензойную или фенолфталеин. Измеряют оптическую плотность раствора определяемого вещества (бендазола) и образца сравнения на спектрофотометре при аналитической длине волны 270 нм. Расчет результатов проводят по формуле, вводя в нее коэффициент пересчета 0,181 при определении по кислоте бензойной и 0,293 при определении по фенолфталеину. Способ позволяет повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить стоимость, трудоемкость, погрешность анализа, унифицировать методику анализа. 4 пр.

Настоящее изобретение относится к аналитической химии ауксинов, в частности к способам определения индолил-уксусной кислоты в верхушках концевых приростов побегов и листьев яблони, груши, сливы, черешни, винограда и проростков пшеницы. Способ предусматривает экстракционную подготовку пробы биологического материала, центрифугирование и выполнение анализа на системе капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре, эффективной длиной 0,5 м, внутренним диаметром 75 мкм, при этом для анализа используют водный ведущий электролит, содержащий 0,28% борной кислоты и 0,04% тетрабората натрия при положительной полярности напряжения и длине волны детектирования - 254 нм. Изобретение обеспечивает экспрессность и достоверность количественного определения индолил-уксусной кислоты методом капиллярного электрофореза с применением нетоксичных и доступных реактивов для проведения анализа. 6 пр., 1 таб., 1 ил.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Способ касается количественного определения пикамилона. Готовят растворы определяемого вещества (концентрация 0,00002 г/мл) и образца сравнения. В качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида. В качестве образца сравнения используют метиловый оранжевый. Измеряют оптическую плотность раствора определяемого вещества и образца сравнения на спектрофотометре при аналитической длине волны 261 нм. Расчет результатов проводят по формуле, вводя в нее коэффициент пересчета 0,7505. Способ позволяет повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить стоимость, трудоемкость, погрешность анализа, унифицировать методику анализа. 4 пр.

Изобретение относится к медицине и описывает способ тестирования предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства для активации Т-клеток, который включает стадию приведения в контакт культуры мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) с предварительно определяемым количеством предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства in vitro и наблюдение активации Т-клеток в культуре РВМС, используя систему считывания, при контакте с предполагаемым или известным иммуномодулирующим лекарственным средством, где плотность клеток культуры РВМС во время стадии предварительного культивирования составляет по меньшей мере 2×106/мл, предпочтительно по меньшей мере 5×106/мл, более предпочтительно по меньшей мере 107/мл, или по меньшей мере 4×105/cм2, предпочтительно по меньшей мере 106/см2, наиболее предпочтительно по меньшей мере 2×106/cм2, при этом предварительную культуру РВМС культивируют в течение по меньшей мере 12 ч. Изобретение обеспечивает улучшенное средство для тестирования иммуномодулирующих лекарственных средств in vitro. 9 з.п. ф-лы, 16 ил., 13 пр.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство для вовлечения мезенхимальной стволовой клетки костного мозга в периферическую кровь из костного мозга, которое вводят в кровеносный сосуд или мышцу и которое содержит любой из компонентов: (a) белок HMGB1; (b) клетка, которая секретирует белок HMGB1; (c) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB1; (d) белок HMGB2; (e) клетка, которая секретирует белок HMGB2; (f) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB2; (g) белок HMGB3; (h) клетка, которая секретирует белок HMGB3; и (i) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB3. 3 н. п. ф-лы, 6 пр., 1 табл., 14 ил.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах. Способ определения кодеина включает разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, при этом количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм. Изобретение обеспечивает сокращение времени обнаружения и количественного определения кодеина, уменьшение трудоемкости процесса, уменьшение вероятности потерь целевого компонента. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума. Мышечное дегенеративное заболевание у пациента обнаружено, если концентрация или содержание тетранор-PGDM в образце, выделенном у пациента, превышает концентрацию или содержание тетранор-PGDM в образце, выделенном у здорового индивидуума. Определяют эффективность терапевтического средства и/или способа терапии мышечного дегенеративного заболевания путем сравнения содержания тетранор-PGDM в образце, выделенном у пациента с мышечным дегенеративным заболеванием до и после введения терапевтического средства. Если измеренное содержание тетранор-PGDM в образце значительно или незначительно уменьшается после введения терапевтического средства, то способ терапии является эффективным. Изобретение также относится к набору для диагностики мышечных дегенеративных заболеваний, который включает антитело к тетранор-PGDM, меченный тетранор-PGDM и, необязательно, по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из антитела к иммуноглобулину, разбавляющего раствора для образца, разбавляющего раствора для антитела и меченного тетранор-PGDM, стандарта тетранор-PGDM известной концентрации, субстрата для иммуноферментного анализа и останавливающего раствора для иммуноферментного анализа. Изобретение является эффективным и простым в исполнении. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр., 2 ил.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. Способ заключается в использовании в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы и каталазы для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, причем предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла пихты сибирской разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1. Достигается повышение точности определения. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к вольтамперометрическому способу определения молочной кислоты, используемой во многих областях пищевой промышленности, ветеринарии, косметологии и играющей огромную роль в физиологическом процессе человека. Задачей заявляемого изобретения является определение концентрации молочной кислоты методом вольтамперометрии. Молочную кислоту переводят из пробы в раствор и проводят вольтамперометрическое накопление молочной кислоты в перемешиваемом растворе при барботировании инертным газом в течение 30 с при потенциале электронакопления 1,2÷1,4 В, относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода на фоновом электролите - 0,1 М Na2HPO4 с последующей регистрацией катодных пиков в дифференциальном режиме съемки вольтамперограмм при скорости развертки потенциала 30÷40 мВ/с, концентрацию молочной кислоты определяют по высоте пика в диапазоне потенциалов 0,25÷0,40 В методом добавок аттестованных смесей. Предложенный способ прост, не требует большого количества реактивов и трудозатрат. 2 пр., 1 табл.
Наверх