Способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro

Изобретение относится к области биотехнологии растений, в частности к микроклональному размножению in vitro. В способе культивируют каллусные культуры из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков. Используют базовые питательные среды Мурасиге-Скуга, Вуди Плант Медиум с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин - 0,2-1,5 мг/л, α-нафтилуксусная кислота - 0,2-0,5 мг/л, индолилмасляная кислота - 2 мг/л. Далее проводят адаптацию при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице с получением посадочного материала для лесных культур. Способ позволяет получать посадочный материал с высокими наследственными свойствами. 2 табл.

 

Изобретение относится к области биотехнологии растений.

Ольха черная (Alnus glutinosa (L.) Gaertn.) перспективна для лесного хозяйства страны, она способна выдерживать длительное затопление и произрастать на переувлажненных экотопах там, где другие древесные породы расти не могут, способна произрастать на бедных и бесплодных сухих почвах (гравий, песок) с близко залегающими грунтовыми водами, способна обогащать почву азотом через опад и корневые выделения (до 780 кг/га за 5 лет). Благодаря этому качеству черная ольха при совместных посадках с более ценными породами оказывает на них положительное влияние. Уникальна биосферная роль ольхи черной в болотной экосистеме, что делает ее привлекательной для экологов, лесоводов, селекционеров. Незаменима она при разработке моделей устойчивого и ускоренного повышения продуктивности насаждений, при плантационном лесоводстве для ускоренного получения древесины.

В связи с важностью выращивания селекционных форм и сортов ольхи черной существует необходимость получения посадочного материала с высокими наследственными свойствами. В уровне техники не выявлен способ решения поставленной задачи.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания наиболее эффективного способа размножения ольхи черной - микроклональное размножение in vitro.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro включает культивирование каллусных культур из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков, используя базовые питательные среды Мурасиге-Скуга (MS), Вуди Плант Медиум (WPM) с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин (6-БАП) - 0,2÷1,5 мг/л, α-нафтилуксусная кислота (НУК) - 0,2÷0,5 мг/л, индолилмасляная кислота (ИМК) - 2 мг/л, и дальнейшей адаптацией при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице, и получением посадочного материала для лесных культур.

Осуществляют способ следующим образом.

Для каллусных культур эксплантами служат стеблевые сегменты без почек, листья, листовые черешки.

В качестве базовых сред используют MS или WPM и их модификации с различным содержанием и соотношением регуляторов роста (6-БАП, ИУК, НУК, ИМК). При прямой регенерации используют 6-БАП (0,2-1,5 мг/л), индукции множества почек и побегов - 6-БАП в сочетании с НУК (0,2-0,5 мг/л). Каллусные культуры получают с помощью ИМК (2 мг/л) в сочетании с 6-БАП (0,2-0,5 мг/л). Исключение ИМК в дальнейшем и увеличение концентрации 6-БАП до 1 мг/л используют для получения морфогенных каллусных культур. Для пролиферации каллуса ольхи черной в питательную среду вносят ИМК (2 мг/л) в сочетании с 6-БАП (0,2-0,5 мг/л). Развитие, удлинение побегов достигается согласно следующим приемам: солевой состав питательной среды разбавляют в 2-3 раза, дополняют ее активированным углем (10-20 г/л), обрабатывают базальные концы побегов раствором ИМК (25 мг/л в течение 10-15 минут).

Адаптационный этап развития регенерированного материала предусматривает следующие варианты:

1 - лабораторный (открытые пробирки в течение 3-5 дней, затем высаживают в грунт стаканчики, доращивают в микротеплице с последующей высадкой в открытый грунт).

2 - прямая высадка в открытый грунт с использованием временного укрытия (пленочные микротеплицы).

В первом варианте экологические условия контролируемые (t 25-26°C, освещенность 2000 люкс при 16-часовом фотопериоде); во втором - естественные условия освещения и температуры. Повышенная влажность достигается поливом и пленочным укрытием.

Эффективность каллусогенеза разных органов ольхи на питательной среде MS+ИМК (2 мг/л) отражена в таблице 1.

Таблица 1
Экспланты Эффективность каллусогенеза
Количество культур Темп каллусогенеза (сутки) Объем ткани (см3)
общее С каллусом, %
Ольха черная
стеблевые сегменты 15 100 21 1,5-2
черешки 10 40,0 30 следы
листья 11 9,9 30 следы

В таблице 2 отражена эффективность морфогенеза у культур различного происхождения (каллусные, стеблевые сегменты) на среде WPM в зависимости от содержания БАП мг/мм:

Таблица 2
БАП мг/мм Ольха черная
каллусная культура почки
общее количество общее количество
0,1 5 - 10 -
0,2 5 - 10 -
0,5 6 1/16,6 10 4/40,0
0,6 5 2/40,0 10 7/70,0
1,0 5 - 10 2/20,0
1,5 5 - 10 -
2,0 - - 10 -

Продолжительность жизни морфогенных культур ольхи по сравнению с другими лиственными (береза) значительно ниже и ограничена 2-3 неделями.

Для их сохранения необходимо повторное рекультивирование. В противном случае независимо от происхождения в культурах отмечен интенсивный рост каллусной ткани, как правило, подавляющий развитие побега.

Способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, включающий культивирование каллусных культур из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков, используя базовые питательные среды Мурасиге-Скуга, Вуди Плант Медиум с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин - 0,2-1,5 мг/л, α-нафтилуксусная кислота - 0,2-0,5 мг/л, индолилмасляная кислота - 2 мг/л, и дальнейшей адаптацией при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице, и получением посадочного материала для лесных культур.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение каллуса на питательной среде Мурасиге-Скуга, доведенной до 1 литра водой, в течение одного пассажа, где в питательную среду добавляют 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту с концентрациями 4-8 мг/л, культивируют семена льна многолетнего, в питательную среду Гамборга добавляют 6-бензиламинопурин с концентрацией 1-2 мг/л и α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и затем на питательную среду Гамборга пересаживают полученные каллусы для регенерации и культивируют в течение 2-4 пассажей, в жидкую питательную среду Мурасиге-Скуга с концентрацией всех компонентов 50% добавляют α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и на нее пересаживают растения-регенеранты и культивируют их в течение 2-4 пассажей.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro.
Изобретение относится к способу укоренения черенков сенполии узамбарской и может быть использовано для цветочной рассады. .
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, семеноводству картофеля, картофелеводству. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе клонального микроразмножения яблони и груши на этапе собственно микроразмножения. .
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой питательную среду для укоренения побегов яблони и груши in vitro. .
Изобретение относится к адаптации растений к нестерильным условиям. .
Изобретение относится к цветоводству и биотехнологии, может быть использовано для массового размножения ценных декоративных сортов и гибридов ириса сибирского, освобождения их от системных патогенов, а также в селекционной практике для создания новых улучшенных сортов.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к семеноводству картофеля при подготовке оздоровленного посадочного материала. .
Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства. .

Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства. В способе растения обрабатывают раствором биологически активного вещества, в качестве которого используют 24-эпибрассинолид.
Способ относится к области сельского хозяйства, в частности к плодоводству и селекции. Способ включает промораживание однолетних побегов в период покоя в камере искусственного климата.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, преимущественно к агрохимии. Способ включает листовую диагностику на потребность в минеральных элементах путем отбора проб листьев, определения отклика в виде разницы фотохимической активности суспензии хлоропластов из средней пробы свежих листьев при добавлении в нее диагностируемого элемента в концентрации 10-4-10-10 М и без добавления элемента.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к микробиологии почв. Способ включает инокуляцию семян измельченными корнями тех же видов и смешивание их с минеральной водой.
Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ включает оптимизацию площади питания.
Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ включает оптимизацию площади питания с посевом сортов овса по черному пару рядовым способом.
Изобретение относится к области сельского хозяйства и эрозии почв. В способе на склоновых землях выращивают овес, многолетние травы, озимую рожь, картофель.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к плодоводству. При выращивании саженцев плодовых культур промежуточную слаборослую вставку прививают на 3-4 год после закладки сада.
Изобретение относится к области селекции и первичного семеноводства, в частности, к способам размножения посадочного материала. Cпособ включает стимуляцию роста этиолированных ростков посредством надрезов апикальной части и обработку раствором тиомочевины.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства лечебно-профилактических продуктов. Способ производства лечебно-профилактических продуктов включает следующие стадии: получение водяного пара, конденсацию пара с получением легкой воды - содержание дейтерия не более 110 ppm и передачей энергии конденсации пара на жидкий теплоноситель, использование легкой воды для выращивания растений или совместного выращивания растений и животных, подачу теплоносителя на устройство отопления или устройство охлаждения помещения, в котором выращивают растения, или растения совместно с животными и вентиляцию этого помещения с извлечением из удаляемого воздуха воды.

Способ совместного выращивания дубово-хвойных пород с качественной древесиной включает полосную обработку почвы глубоким рыхлением и высаживание рядами главных пород с чередованием кустарника и сопутствующих пород.
Наверх