Способ диагностики генерализации злокачественного новообразования

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики течения злокачественного роста. Способ включает получение сыворотки крови; подготовку, по крайней мере, 10 проб сыворотки путем ее нанесения на предметное стекло; их одновременное высушивание под покровным стеклом при комнатной температуре и относительной влажности 70-75% в течение 7-10 суток; последующее исследование при микроскопии в поляризованном свете и выявление анизотропных сферолитов. Причем при выявлении анизотропных микросферолитов с волнистой структурой диагностируют генерализацию злокачественного новообразования. При выявлении анизотропных микросферолитов с зернистой структурой или комбинации сферолита с включенным в него микросферолитом с зернистой структурой диагностируют отсутствие генерализации. Предлагаемый способ позволяет на разных стадиях заболевания своевременно диагностировать генерализацию опухолевого процесса и осуществлять целенаправленную коррекцию терапии, что повышает эффективность лечения больных и продолжительность их жизни. 13 ил., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики течения злокачественного роста.

Известен способ прогнозирования генерализации процесса при злокачественных опухолях костей, основанный на определении показателя концентрации витамина E в крови на этапах неоадъювантной аутоплазмохимиотерапии. При снижении концентрации витамина E в процессе лечения констатируют генерализацию процесса, а при повышении концентрации или отсутствии изменения этого показателя констатируют стабилизацию процесса (Патент РФ №2427323, МПК G01N 33/48, публ. 2011).

Однако данный способ имеет значительные ограничения, связанные с:

- видом и локализацией опухоли - оценивается течение заболевания только у больных со злокачественными опухолями костей (остеогенная саркома и саркома Юинга);

- возрастом больных - только для детей и подростков;

- видом проводимого лечения - неоадъювантной аутоплазмохимиотерапией.

Наиболее близким к заявленному способу является способ диагностики злокачественных новообразований (Патент РФ №2235323, МПК G01N 33/48, опубл. 2004), включающий исследование сыворотки крови, высушенной при комнатной температуре, при этом 0,01-0,02 мл сыворотки крови наносят на предметное стекло, а высушивание осуществляют под покровным стеклом при относительной влажности 55-60% в течение 72-96 часов, и исследование проводят при микроскопии в поляризованном свете. При выявлении анизотропных сферолитов с единичными мелкими разноцветными включениями в центральной части сферолита диагностируют доклиническую стадию злокачественного роста в организме, при выявлении анизотропных сферолитов с выраженными цветными включениями диагностируют раннюю стадию злокачественного новообразования.

Однако данный способ имеет тот недостаток, что он ограничен выявлением характера опухолевого процесса преимущественно на начальной стадии злокачественного роста.

Задачей изобретения являлось устранение указанных недостатков, сокращение сроков выявления изменений, происходящих в тканях опухоли в процессе или после проводимого комбинированного лечения (хирургическое вмешательство и лучевая или химиотерапия) или монотерапии (только лучевая или химиотерапия), за счет выявления маркера, свидетельствующего о трансформации опухолевых клеток в более агрессивный клон с последующей генерализацией злокачественной опухоли.

Для этого в способе диагностики генерализации злокачественного новообразования, включающем получение сыворотки крови, подготовку пробы путем нанесения сыворотки крови на предметное стекло, высушивание ее под покровным стеклом при комнатной температуре с последующим исследованием при микроскопии в поляризованном свете и выявлением анизотропных сферолитов, предложено осуществлять одновременное высушивание по меньшей мере 10 проб сыворотки крови при относительной влажности 70-75% в течение 7-10 суток. Причем при выявлении анизотропных микросферолитов с волнистой структурой диагностируют генерализацию злокачественного новообразования, а при выявлении анизотропных микросферолитов с зернистой структурой или комбинации сферолита с включенным в него микросферолитом с зернистой структурой диагностируют отсутствие генерализации.

В предлагаемом способе исходят из понятия, что генерализация злокачественного новообразования - это качественное изменение одного или нескольких свойств неоплазии, направленное в сторону увеличения уже имеющихся различий между нормальной и неопластической тканью. Для генерализации характерна нарастающая нестабильность генома, приводящая к анеуплоидиям и другим хромосомным аберрациям (Ганцев Ш.Х., Хуснутдинов Ш.М. Патология и морфологическая характеристика опухолевого роста. М.: «Медицинское информационное агентство», 2003. - 208 с.). В организме накапливается число клеток с указанными изменениями, что приводит к ускорению пролиферации, усилению инвазивности и метастазированию. Измененный геном опухолевых клеток обеспечивает выработку белковых молекул, имеющих специфическую конформацию, которая определяет активацию многих протоонкогенов и ряда ферментов, что лежит в основе роста агрессивности соответствующих клонов клеток. Значительная часть этих молекул выводится в общую циркуляцию и концентрируется в сыворотке крови. Именно эти молекулы при дегидратации сыворотки крови являются системными и локальными организаторами специфических онкомаркеров.

Если онкомаркеры выявляются методом краевой дегидратации в стандартных условиях (относительная влажность 55-60% в течение 48-72 часов, прототип), то при замедленном структурировании сыворотки крови (7-10 суток), которое происходит в условиях повышенной относительной влажности - 70-75%, создаются оптимальные условия для полноценного перехода высокочувствительных жидкокристаллических структур систем «липид-вода», «липид-белок-вода» в кристаллическое состояние, при которых формируются локальные специфические онкомаркеры генерализации злокачественной опухоли - микросферолиты с волнистой структурой.

На фиг.1, 4, 7, 9, 11, 13 представлены микросферолиты с наличием зернистых структур; на фиг.2, 5, 8, 12 представлены комбинации сферолита и микросферолита с наличием зернистых структур; на фиг.3 представлена комбинация сферолита и микросферолита с наличием волнистых структур; на фиг.6, 10 представлены изолированные микросферолиты с наличием волнистых структур.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного с любой локализацией злокачественной опухоли до начала лечения, в процессе лучевой или химиотерапии берут кровь из вены или мякоти пальца утром, строго натощак и получают сыворотку крови путем ее отстаивания или центрифугирования. Можно также во время хирургического вмешательства по удалению опухоли брать кровь из раны и получать из нее сыворотку крови для исследования.

Далее сыворотку крови помещают между покровным и предметным стеклами. Высушивание осуществляют при относительной влажности 70-75% в течение 7-10 суток. Количество проб для микроскопии в поляризованном свете и выявления маркера генерализации злокачественного новообразования должно быть не менее 10.

Проведенные предварительные исследования на репрезентативном количестве больных (274 человека) показали, что 10 проб и более гарантированно позволяют выявить маркер генерализации злокачественного новообразования.

Проводимые далее микроскопические исследования проб сыворотки крови в поляризованном свете с выявлением анизотропных сферолитов и среди них микросферолитов с волнистой или с зернистой структурой позволяют выявить наличие или отсутствие процесса генерализации злокачественного новообразования. Одновременно с предлагаемыми исследованиями были проведены клинические наблюдения у контрольной группы больных и было получено подтверждение данных предлагаемого способа.

Пример 1.

Пациентка П., 57 лет. Диагноз: злокачественное новообразование левой молочной железы, ранняя стадия (T2N0M0). При поступлении в стационар по вышеописанной технологии были подготовлены 10 проб сыворотки крови, при исследовании в 10 из них были обнаружены отдельно расположенные зернистые микросферолиты (фиг.1), а также комбинации сферолита с зернистым микросферолитом (фиг.2).

Заключение: признаки генерализации злокачественного новообразования не выявлены.

Во время проведения операции осуществили забор крови из опухолевого очага. Повторно были проведены исследования по предлагаемому способу. Были подготовлены 10 проб сыворотки крови, в 3 из них были обнаружены микросферолиты с волнистой структурой в комбинации со сферолитом (фиг.3).

Заключение: в опухолевом очаге обнаружены признаки генерализации злокачественного новообразования.

После удаления опухоли и ежемесячном исследовании у больной в сыворотке крови из локтевой вены в течение 2,5 лет микросферолиты как изолированные, так и в комбинации со сферолитами не выявлялись, что свидетельствовало о благоприятном исходе заболевания.

Пример 2.

Пациент С., 69 лет. Диагноз: рак гортани, поздняя стадия (T3N2M0). При поступлении в стационар, аналогично примеру 1 были подготовлены 10 проб сыворотки крови, в 10 из них были обнаружены отдельно расположенные зернистые микросферолиты (фиг.4), а также комбинации сферолита с зернистым микросферолитом (фиг.5).

Лечащим врачом была назначена лучевая терапия. После окончания первого курса лучевой терапии (СОД 37 Гр - суммарной общей дозы) были подготовлены 10 проб сыворотки крови, в 4 из них были выявлены единичные микросферолиты с наличием волновых структур (фиг.6).

Заключение: у больного после получения СОД 37 Гр обнаружены признаки генерализации злокачественного новообразования.

Лучевая терапия была скорректированна и продолжена до СОД 70 Гр. После окончания лучевой терапии и при последующем ежемесячном наблюдении больного указанным способом в течение 1,5 лет микросферолиты во всех пробах сыворотки крови из локтевой вены отсутствовали. Таким образом, второй курс лучевой терапии до СОД 70 Гр оказался эффективным в отношении подавления особо злокачественного клона клеток опухоли.

Пример 3.

Пациент М., 45 лет. Диагноз: глиобластома головного мозга, поздняя стадия (T3N0M0). При поступлении в стационар были проведены исследования 10 проб сыворотки крови, в 10 из них были обнаружены отдельно расположенные зернистые микросферолиты (фиг.7), а также комбинации сферолита с зернистым микросферолитом (фиг.8).

После удаления опухоли была назначена лучевая терапия. После окончания первого курса лучевой терапии (СОД 37 Гр) повторно были проведены исследования по предлагаемому способу 10 проб сыворотки крови, в 6 из них были выявлены единичные микросферолиты с наличием зернистости (фиг.9). Заключение: признаки генерализации злокачественного новообразования не выявлены.

Лучевая терапия была продолжена до СОД 69 Гр. После окончания лучевой терапии также были подготовлены 10 проб сыворотки крови, в 2 из них были выявлены микросферолиты с наличием волновых структур (фиг.10). Заключение: выявлены признаки генерализации злокачественного новообразования.

Дальнейшее наблюдение за больным показало наличие у него метастазов в легких и через 6 месяцев после окончания курса лучевой терапии наступил летальный исход.

Пример 4.

Пациент В., 55 лет. Диагноз: рак гортани, поздняя стадия (T3N0M0). При поступлении в стационар по вышеописанной технологии были подготовлены 10 проб сыворотки крови, в 10 из них были обнаружены отдельно расположенные зернистые микросферолиты (фиг.11), а также комбинации сферолита с зернистым микросферолитом (фиг.12).

Лечащим врачом было назначено хирургическое лечение с последующей химиотерапией.. После окончания первого курса химиотерапии повторно были подготовлены 10 проб сыворотки крови, в 5 из них были выявлены микросферолиты с наличием зернистых структур (фиг.13). Заключение: признаки генерализации злокачественного новообразования не обнаружены.

Химиотерапия была продолжена. После окончания проведенных курсов химиотерапии и при последующем ежемесячном наблюдении больного указанным способом микросферолиты во всех пробах сыворотки крови из локтевой вены в течение 1,5 лет отсутствовали, что свидетельствовало о благоприятном исходе заболевания.

Выявление морфологических признаков генерализации злокачественного новообразования очень важно для оценки эффективности проводимой терапии и своевременной коррекции лечения с целью уничтожения измененного генома опухолевых клеток, приводящих к росту агрессивности определенных клонов клеток; выяснения причин отбора агрессивного клона опухолевых клеток и разработки новых способов лечения онкологических больных, не позволяющих переводить процесс в генерализацию злокачественного новообразования.

На этапе предварительных исследований при динамическом наблюдении 32 больных с раком гортани и 12 больных с различной локализацией было установлено, что у 9 больных в сыворотке крови был выявлен микросферолит с волнистой структурой, что свидетельствовало о генерализации злокачественного новообразования. Из 7 больных раком гортани у пяти человек продолженный рост злокачественного новообразования отмечен клиницистами на 1-3 месяца позже, чем это было установлено морфологически, т.е. предложенным способом. Из 44 наблюдаемых больных летальный исход прогнозировался только в группе с определением генерализации процесса по предлагаемому способу. В дальнейшем из 9 человек пять погибли в течение первого года наблюдения, двое - через полтора года, еще двое находятся под наблюдением.

Предлагаемый способ позволяет на разных стадиях заболевания своевременно диагностировать генерализацию опухолевого процесса и осуществлять целенаправленную коррекцию терапии, что повышает эффективность лечения больных и продолжительность их жизни.

Способ диагностики генерализации злокачественного новообразования, включающий получение сыворотки крови, подготовку пробы путем нанесения сыворотки крови на предметное стекло, высушивание ее под покровным стеклом при комнатной температуре с последующим исследованием при микроскопии в поляризованном свете и выявлением анизотропных сферолитов, отличающийся тем, что осуществляют одновременное высушивание по меньшей мере 10 проб сыворотки крови при относительной влажности 70-75% в течение 7-10 суток, и при выявлении анизотропных микросферолитов с волнистой структурой диагностируют генерализацию злокачественного новообразования, а при выявлении анизотропных микросферолитов с зернистой структурой или комбинации сферолита с включенным в него микросферолитом с зернистой структурой диагностируют отсутствие генерализации.