Кристаллические формы (r)-5-[3-хлор-4-(2, 3-дигидроксипропокси)бенз[z]илиден]-2-([z]-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она

Изобретение относится к кристаллическим формам (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, способам их получения, фармацевтической композиции, содержащей данные кристаллические формы, и применению данных форм в качестве соединений, улучшающих сосудистую функцию, и в качестве иммуномодулирующих агентов. 5 н. и 17 з.п. ф-лы, 5 ил.,5 табл., 7 пр.

 

Настоящее изобретение относится к кристаллическим формам (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (здесь далее как «СОЕДИНЕНИЕ»), способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим данные кристаллические формы, и к их применению в качестве соединений, улучшающих сосудистую функцию, и в качестве иммуномодулирующих агентов, самих по себе или в комбинации с другими активными соединениями или лекарственными средствами.

Предпосылки создания изобретения

Получение (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она и его медицинское использование описаны в заявке WO 2005/054215.

Неожиданно было установлено, что при определенных условиях могут быть обнаружены кристаллические формы (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она и данные кристаллические формы обладают преимущественными свойствами, особенно по сравнению с аморфным СОЕДИНЕНИЕМ, раскрытым в WO 2005/054215. Данные преимущества заключаются в лучшей текучести, более высокой термодинамической стабильности, меньшей гигроскопичности, иной растворимости, высокой чистоте, улучшенной воспроизводимости при получении (например, лучшими параметрами фильтрования и лучшей воспроизводимостью образования твердого вещества), определенной морфологии и/или лучшей стабильности во времени.

Описание фигур

На фиг.1 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма СОЕДИНЕНИЯ в аморфной форме.

На фиг.2 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме А, полученной в примере 1. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ: 4,2° (6,2%), 6,3° (6,3%), 7,0° (79,8%), 8,7° (5,9%), 11,2° (56,0%), 12,6° (100,0%), 14,9° (9,5%), 16,6° (59,0%), 17,4° (11,7%), 18,8° (59,5%), 21,3° (47,0%), 23,6° (52,0%), 24,8° (28,3%), 26,0° (45,5%), 27,1° (19,0%) и 28,5° (21,0%).

На фиг.3 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме С, полученной в примере 2. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ: 10,5° (36,3%), 11,1° (19,2%), 11,4° (47,9%), 13,6° (26,5%), 13,9 (34,2%), 16,3° (23,4%), 18,0° (12,3%), 18,2° (9,6%), 18,9° (16,7%), 20,8° (100,0%), 21,5° (18,5%), 22,2° (74,7%), 23,4° (63,2%), 24,1° (29,8%), 25,7° (37,3%), 26,8° (18,4%), 27,4° (17,4%), 27,7° (25,4%), 27,9° (24,1%), 28,7° (36,8%), 29,3° (19,6%) и 31,7° (21,8%).

На фиг.4 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма соединения, полученная с использованием способа 2, в кристаллической форме III, полученной в примере 3. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ (только избранные пики): 8,5° (30%), 10,7° (59%), 14,7° (37%), 15,2° (42%), 18,0° (52%), 22,4° (100%), 23,4° (85%) и 26,9° (62%).

На фиг.5 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма соединения в кристаллической форме II, полученной в примере 4. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ: 6,4° (92,3%), 8,9° (16,5%), 11,9° (19,3%), 13,2° (75,0%), 16,9° (28,0%), 18,6° (37,0%), 19,3° (70,1%), 20,8° (82,6%) и 25,3° (100,0%).

На рентгеновских порошковых дифрактограммах на фиг.1, 2, 3, 4 и 5 угол рефракции 2θ отображен на горизонтальной оси, а частота импульсов на вертикальной оси.

Подробное описание изобретения

i) Настоящее изобретение относится к кристаллической форме, такой как по существу чистая кристаллическая форма, (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, содержащей от 0 до 2 эквивалентов Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

ii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), содержащей от 0 до 1 эквивалента H₂O на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

iii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), содержащей от 0 до 0,5 эквивалента Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

iv) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), содержащей 0,5 эквивалента Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

v) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), в которой (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-он находится в безводной форме.

vi) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii), содержащей от 0,1 до 2 эквивалентов пропионовой кислоты на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

vii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 7,0°, 11,2° и 12,6°.

viii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,5°, 22,2° и 23,4°.

ix) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и vi), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,7°, 15,2° и 22,4°.

х) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 6,4°, 13,2° и 25,3°.

xi) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 7,0°, 11,2°, 12,6°, 16,6°, 18,8°, 21,3°, 23,6° и 26,0°.

xii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,5°, 11,1°, 11,4°, 13,6°, 13,9°, 16,3°, 20,8°, 22,2°, 23,4°, 24,1°, 25,7°, 27,7°, 27,9°, 28,7° и 29,3°.

xiii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и vi), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 8,5°, 19,7°, 14,7°, 15,2°, 18,9°, 22,4° и 23,4°.

xiv) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 6,4°, 13,2°, 16,9°, 18,6°, 19,3°, 29,8° и 25,3°.

xv) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.2.

xvi) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.3.

xvii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному i)-iii) и vi), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.4.

xviii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.5.

xix) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), vii), xi) и xv), имеющей температуру плавления около 113°С, определенной дифференциальной сканирующей калориметрии, с использованием методики, раскрытой в настоящей заявке.

хх) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii), v), viii), xii) и xvi), имеющей температуру плавления около 133°С, определенной дифференциальной сканирующей калориметрии, с использованием методики, раскрытой в настоящей заявке.

xxi) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii), v), x), xiv) и xviii), имеющей температуру плавления около 101°С, определенной дифференциальной сканирующей калориметрии, с использованием методики, раскрытой в настоящей заявке.

xxii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме А по одному из вариантов i)-iv), vii), xi), xv) и xix), полученной путем:

i) растворения аморфного (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (251,1 г) при нагревании в ацетонитриле (1,25 л);

ii) установления внутренней температуры на уровне 58°С при перемешивании лопастной мешалкой при 350 об/мин;

iii) добавления деонизированной воды (1 л) аликвотами по 250 мл (минимальная внутренняя температура = 45°С) с получением при перемешивании прозрачного раствора;

iv) доведения внутренней температуры до 55°С и добавления еще одной дополнительной аликвоты воды (250 мл) с получением при перемешивании прозрачного раствора;

v) установления температуры раствора на уровне 59,5-60°С;

vi) охлаждения раствора до 12°С около 2 ч (скорость охлаждения = 0,4°С/мин); и

vii) перемешивания суспензии при 12°С в течение 18 ч.

xxiii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме С по одному из вариантов i)-iii), v), viii), xii), xvi) и хх), полученной путем:

i) суспендирования кристаллической формы А (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (20,0 г) в метил-трет-бутиловом эфире (100 мл);

ii) перемешивания механической мешалкой при комнатной температуре с получением высоковязкой пасты, которую превращают в жидкотекущую суспензию четко выраженного желтого цвета при перемешивании в течение 40 ч; и

iii) отфильтровывания твердого вещества и высушивания его в течение 4 ч под вакуумом при комнатной температуре.

xxiv) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме III по одному из вариантов i)-iii), vi), ix), xiii) и xvii), полученной путем:

i) добавления 1 мл пропионовой кислоты к кристаллической форме A (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (0,5 г);

ii) встряхивания образца до полного растворения твердого вещества;

iii) выдерживания образца в течение ночи при комнатной температуре; и

iv) отфильтровывания твердого вещества.

xxv) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме II по одному из вариантов i)-iii), v), x), xiv), xviii) и xxi), полученной путем:

i) выдерживания кристаллической формы III (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она в глубоком вакууме (<0,1 мбар) в течение одной недели; и

ii) выдерживания продукта на открытом воздухе при комнатной температуре и относительной влажности около 40% в течение ночи.

Термин «по существу чистый» в контексте настоящего изобретения означает, что по крайней мере 90, предпочтительно по крайней мере 95 и более предпочтительно по крайней мере 99% по массе кристаллов соединения присутствуют в кристаллической форме настоящего изобретения, в частности в отдельной кристаллической форме настоящего изобретения.

При обозначении пиков, например на рентгеновской порошковой дифрактограмме, общим приближением является представление на основе соотношения S/N (S = сигнал, N = шум). Согласно этому определению, когда говорят о наличии пика на рентгенограмме, то под этим понимают, что данный пик на дифрактограмме определен соотношением S/N (где S = сигнал, N = шум), большим чем х (х представляет собой числовое значение более 1), обычно более 2, особенно более 3.

В данном контексте, если говорят, что кристаллическая форма по существу характеризуется на рентгеновской порошковой дифрактограмме, такой как показана на фиг.2, фиг.3, фиг.4 и фиг.5, соответственно, то под термином «по существу» подразумевают, что присутствуют, по меньшей мере, основные пики диаграммы, указанные на данных фигурах, то есть такие, которые имеют относительную интенсивность более 10%, в особенности более 20%, по сравнению с наиболее интенсивными пиками на дифрактограмме. Однако специалисту в области рентгеновского анализа должно быть понятно, что относительные интенсивности на рентгеновских порошковых дифрактограммах могут сильно изменяться из-за эффектов предпочтительной ориентации.

За исключением использования применительно к температурам, в рамках настоящей заявки термин «приблизительно», указанный перед числовым значением «X», соответствует интервалу от Х-10% от Х до Х+10% от X, предпочтительно интервалу от Х-5% от Х до Х+5% от X. В случае температур, в рамках настоящей заявки термин «приблизительно», указанный перед температурой Y, соответствует интервалу от Y-10°С до Y+10°С, предпочтительно интервалу от Y-5°С до Y+5°С.

Кристаллические формы настоящего изобретения могут быть использованы в качестве лекарственных средств, например, в форме фармацевтических композиций для энтерального или парентерального введения, в частности, такого как оральное введение, и пригодны для снижения количества циркулирующих лимфоцитов и для предотвращения и/или лечения заболеваний или расстройств, обусловленных активацией иммунной системы.

Получение фармацевтических композиций может быть осуществлено методами, известными любому специалисту в данной области (см., например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21^е издание (2005), часть 5, «Фармацевтическое производство» [опубликовано Lippincott Williams and Wilkins]), путем приведения кристаллических форм настоящего изобретения, необязательно в сочетании с другими терапевтически значимыми соединениями, в галенову форму введения вместе с подходящими нетоксичными, инертными, фармацевтически приемлемыми твердыми или жидкими носителями и, при желании, традиционными фармацевтическими вспомогательными средствами.

Кристаллические формы СОЕДИНЕНИЯ могут быть использованы как отдельные компоненты или как смеси с другими кристаллическими формами или аморфной формой СОЕДИНЕНИЯ.

Заболевания или расстройства, обусловленные активацией иммунной системы, которые могут подвергаться лечению и/или быть предотвращены кристаллическими формами настоящего изобретения, описаны, например в WO 2005/054215.

Предпочтительные заболевания или расстройства, подвергающиеся лечению и/или предотвращаемые кристаллическими формами настоящего изобретения, выбраны из отторжения трансплантированных органов, таких как почки, печень, сердце, легкие, поджелудочная железа, роговица и кожа; реакции «трансплантат против хозяина», обусловленной трансплантацией стволовых клеток; аутоиммунных синдромов, включая ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит, псориаз, псориатический артрит, тиреоидит, такой как тиреоидит Хашимото, и увеоретинит; атопических заболеваний, такие как ринит, конъюнктивит и дерматит; астмы; диабета типа I; постинфекционных аутоиммунных заболеваний, включая ревматический полиартрит и постинфекционный гломерулонефрит; твердых опухолей и опухолевых метастаз.

Особенно предпочтительные заболевания или расстройства, подвергающиеся лечению и/или предотвращаемые кристаллическими формами настоящего изобретения, выбраны из отторжения трансплантированных органов, выбранных из почек, печени, сердца и легких; реакции «трансплантат против хозяина», обусловленной трансплантацией стволовых клеток; аутоиммунных синдромов, выбранных из ревматоидного артрита, рассеянного склероза, псориаза, псориатического артрита, болезни Крона и тиреоидита Хашимото; атопического дерматита. Самые предпочтительные заболевания или расстройства, подвергающиеся лечению и/или предотвращаемые кристаллическими формами настоящего изобретения, выбраны из рассеянного склероза и псориаза.

Также настоящее изобретение относится к способу предотвращения или лечения заболевания или расстройства, упомянутого в данном описании или в WO 2005/054215, включающему введение субъекту фармацевтически активного количества кристаллической формы настоящего изобретения.

Кроме того, кристаллические формы настоящего изобретения пригодны в комбинации с одним или несколькими иммуномодулирующими агентами для предотвращения и/или лечения заболеваний или расстройств, упомянутых в данной заявке. В соответствии с предпочтительным воплощением изобретения данные агенты выбраны из иммунодепрессантов, кортикостероидов, нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, цитотоксичных лекарственных средств, ингибиторов адгезивных молекул, цитокинов, ингибиторов цитокина, антагонистов рецептора цитокина и рецепторов рекомбинантного цитокина.

Настоящее изобретение также относится к применению кристаллических форм настоящего изобретения для получения фармацевтической композиции, необязательно для применения в комбинации с одним или несколькими иммуномодулирующими агентами, для предотвращения или лечения заболеваний или расстройств, упомянутых в данной заявке или в WO 2005/054215.

(R)-5-[3-Хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-он может быть получен, например, так, как описано в опубликованной заявке WO 2005/054215 (в частности, см. пример 85), или при использовании методики, раскрытой в опубликованной заявке WO 2008/062376.

Экспериментальная часть

Следующие примеры более подробно иллюстрируют настоящее изобретение. Температуры даны в градусах Цельсия. Если не указано иное, комнатная температура находится в интервале 18-25°С, а проценты приведены по массе.

Используемые в данном описании сокращения:

ДСК	дифференциальная сканирующая калориметрия
Фиг.	фигура
1Н-ЯМР	протонный магнитный резонанс
ВЭЖХ	высокоэффективная жидкостная хроматография
ПТФЭ	политетрафторэтилен
q.s.	по необходимости, сколько нужно
OB	относительная влажность
кт	комнатная температура
об/мин	обороты в минуту
RRT	относительное время удерживания, указывающее на отношение времени удерживания примесей к времени удерживания активного компонента
МТБЭ	метил-тирет-бутиловый эфир
ТФУК	трифторуксусная кислота
ТГА	термогравиметрический анализ
XRPD	рентгеновская порошковая дифракция

Порошковая рентгеновская дифракция

Рентгеновские порошковые дифрактограммы для аморфного СОЕДИНЕНИЯ и СОЕДИНЕНИЯ в кристаллических формах А, С и II (фиг.1-3 и 5) получают на дифрактометре Bruker ASX/Siemens D500, с использованием СuK_α-излучения (40 кВ, 40 мА), 6-9 гониометра, автоматических входной и выходной щелей, графитного вторичного монохроматора и сцинтилляционного детектора. Функционирование прибора проверяют по сертифицированному корундовому стандарту (NIST 1976). Для съемки в условиях окружающей среды готовят образцы порошка в виде плоских пластин. Примерно 35 мг образца аккуратно помещают в выемку полированной, имеющей нулевой фон (510), кремниевой пластинки. Во время съемки образец вращают в его плоскости. Снимают данные в диапазоне углов 2θ от 2° до 42° в непрерывном режиме с шагом 0,02° 2θ и экспозицией 1 с. Дифракционные данные получают с использованием Cu-K_α1 (λ=1,5404 Å) после того, как K_α2-компонент излучения был отсечен при помощи инструментального программного обеспечения (EVA). Точность полученных в настоящей заявке значений 2θ находится в интервале ±0,1-0,2°, что в целом соответствует рентгенограммам, записанным в обычных условиях.

Способ 2 рентгеновского порошкового анализа используют для получения дифрактограмм СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме III (фиг.4). Рентгенограммы получают на дифрактометре Broker D8 HTS, снабженном детектором GADDS HiStar, в отраженном CuK_α-излучении. Обычно рентгеновская лампа работает в режиме 40 кВ/40 мА. Функционирование прибора проверяют по сертифицированному корундовому стандарту (NIST 1976). Для съемки в условиях окружающей среды готовят образцы порошка в виде плоских пластин. Примерно 3 мг образца аккуратно спрессовывают на микроскопном предметном стекле. Снимают данные в интервале углов 2θ от 6° до 32° в 2 автоматически объединяемых и интегрируемых окнах программы Broker PILOT со временем накопления 180 с на каждое окно. Дифракционные данные представлены без вычета K_α2-компонента излучения и без удаления фонового сигнала. Точность полученных в настоящей заявке значений 2θ находится в интервале ±0,1-0,2°.

Дифференциальная сканирующая калориметрия

Данные дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) получают на ТА Instruments Q1000, снабженном 50-позиционным автоматическим держателем образцов. Инструмент калибруют по температуре и энергии по сертифицированному индиевому стандарту. Обычно 0,5-3 мг каждого образца в микроканальной алюминиевой чашке нагревают со скоростью 10°С в минуту, если не указано иное, от 25 до 250°С. Над образцом продувают азот со скоростью 30 мл в минуту. Температуры начала пика определяют как тангенциальные температуры пика, тогда как температуры плавления являются пиковыми температурами.

Термогравиметрический анализ

Данные термогравиметрического анализа (ТГА) получают при помощи ТА Instruments Q500 TGA, снабженного 16-позиционным автоматическим держателем образцов. Инструмент калибруют по температуре по сертифицированному алюмелю. Обычно по 3-10 мг каждого образца загружают в предварительно взвешенный платиновый тигель и алюминиевую чашку для ДСК и нагревают со скоростью 10°С в минуту от комнатной температуры до 350°С. Над образцом продувают азот со скоростью 60 мл в минуту.

Определение чистоты. ВЭЖХ

Чистоту образцов определяют при помощи системы серии Agilent HP 1100, снабженной диодным матричным детектором, используя 9 версию программного обеспечения ChemStation. Образцы защищают фольгой от света. Поддон автоматического держателя выдерживают при 4°С.

Вид метода	Обращенная фаза, градиентный
Колонка	Phenomenex Luna c18 (2), 5 мкм 150×4,6 мм
Температура колонки (°С)	35
Инъекция (мкл)	10
Детектируемая длина волны (нм)	250
Скорость элюирования (мл/мин)	1,0
Фаза А	Вода: ацетонитрил: ТФУК, 950:50:1 об/об/об
Фаза В	Вода: ацетонитрил: ТФУК, 50:950:1 об/об/об
Распределение по времени	Время (мин)	% фазы А	% фазы В
	0	80	20
	25	50	50
	40	25	75
	45	10	10
	45,2	80	20
50	80	20

Пример 1: Получение формы А

Аморфное соединение (251,1 г) растворяют в ацетонитриле (1,25 л) при нагревании и внутреннюю температуру поддерживают на уровне около 58°С при перемешивании лопастной мешалкой при 350 об/мин. После этого аликвотами по 250 мл добавляют деионизированную воду (1,0 л) (минимальная внутренняя температура = 45°С), получая при перемешивании прозрачный раствор. Внутреннюю температуру увеличивают до 55°С и добавляют одну дополнительную аликвоту воды (250 мл): раствор при перемешивании становится прозрачным. Температуру раствора доводят до равновесной на уровне 59,5-60°С и затем раствор охлаждают до 12°С в течение примерно 2 ч (скорость охлаждения = 0,4°С/мин). Полученную суспензию перемешивают при 12°С в течение 18 ч и образец анализируют XRPD. Продукт представляет собой форму А.

Таблица 1.
Характеристические данные формы А
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество: проявляется предпочтительная ориентация благодаря наличию крупных кристаллов	см. фиг.2
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Значительного количества остаточного растворителя не обнаружено
ДСК	Широкий эндотермичный пик с началом около 33,6°С (около 51 Дж/г), остроконечный эндотермичный пик с началом около 108°С (около 65 Дж/г), соответствующий плавлению. Температура плавления около 113°С	см. пояснение 1) к Таблице
ТГА	Потеря 1,9% массы между температурой окружающей среды и примерно 60°С (эквивалентно 0,5 молям воды на моль СОЕДИНЕНИЯ), и потеря 19,6% массы между 225 и 340°С из-за разложения	см. пояснение 1) к Таблице
Микроскопия	Двоякопреломляющие столбчатые кристаллы длиной вплоть до са. 70 мкм и иррегулярные двоякопреломляющие частицы. Также наблюдается некоторое количество агломератов и/или конденсированных частиц	г
Высокотемператур- ная микроскопия	Плавление наблюдается между 104-119°С
Чистота, ВЭЖХ	Чистота 98,7% по площади поверхности с примесями при RRT 0,73 (0,17%), 0,96 (0,36%), 1,02 (0,35%) и 1,19 (0,22%)

Пояснения к Таблице 1

I) ТГА термограмма формы А демонстрирует потерю 1,9% массы между температурой окружающей среды и около 60°С (эквивалентно 0,5 молям воды на моль соединения) и потерю 19,6% массы между 225 и 340°С из-за разложения. Первая потеря массы соответствует широкому эндотермическому пику на ДСК с началом около 33,6°С. Вторая - остроконечному эндотермическому пику с началом около 108°С, соответствующему плавлению.

Аморфное соединение

Аморфное соединение получают способом, описанным в примере 85 опубликованной заявки WO 2005/054215. Как вариант, СОЕДИНЕНИЕ в кристаллической форме А (501 мг) растворяют в дихлорметане (5 мл). Полученный раствор фильтруют через 0,45 мкм ПТФЭ-фильтр и растворитель удаляют на роторном испарителе, получая бледно-желтую пену. Образовавшееся твердое вещество сушат при 40°С в глубоком вакууме в течение одного дня, получая продукт: NB-174-6-1 (в данном описании также как «Аморфное СОЕДИНЕНИЕ»).

Таблица 2.
Характеристические данные NB-174-6-1
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Аморфное вещество	см. фиг.1
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Содержит около 0,5% масс./масс. дихлорметана	-

Пример 2: Получение формы С

Соединение в кристаллической форме А (20,0 г) суспендируют в МТБЭ (100 мл) и перемешивают механической мешалкой при КТ. Получают высоковязкую пасту, которую превращают в жидкотекущую суспензию ярко выраженного желтого цвета после перемешивания в течение 40 ч. Твердое вещество отфильтровывают и сушат в течение 4 ч под вакуумом при КТ. Продукт идентифицируют XRPD как форму С.

Таблица 3.
Характеристические данные формы С
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество: проявляется предпочтительная ориентация благодаря наличию больших кристаллов	см. фиг.3
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Содержит следы МТБЭ
ДСК	Эндотермический пик (плавление): начало около 128°С (около 92 Дж/г). Температура плавления около 133°С
ТГА	Потери массы: температура окружающей среды - 250°С (0,4%), 250-340°С (15,0% - разложение)

Метод	Сводные данные	Примечания
Микроскопия	Двоякопреломляющие столбчатые/призмовидные кристаллы длиной вплоть до са. 200 мкм и небольшие иррегулярные двоякопреломляющие частицы
Высокотемператур- ная микроскопия	Плавление наблюдается в интервале 127-138°С
Чистота, ВЭЖХ	Чистота 98,3% по площади поверхности с примесями при RRT 0,73 (0,21%), 0,96 (0,39%), 1,02 (0,37%) и 1,19 (0,52%)

Пример 3: Получение формы III

Соединение в кристаллической форме А (0,5 г) растворяют в пропионовой кислоте (1 мл). При кт в течение нескольких часов образуется твердый продукт. Твердое вещество выделяют фильтрованием, и полученное соединение представляет собой кристаллическую форму III.

Таблица 4.
Характеристические данные формы III
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество	см. фиг.4

Пример 4: Получение формы II

Соединение в кристаллической форме III выдерживают в глубоком вакууме (<0,1 мбар) в течение 1 недели, а затем выдерживают на открытом воздухе при 0 В около 40% и КТ в течение ночи, получая СОЕДИНЕНИЕ в кристаллической форме II.

Таблица 5.
Характеристические данные формы II
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество	см. фиг.5
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Содержит 0,04 моля пропионовой кислоты на моль СОЕДИНЕНИЯ
ДСК	Эндотермические пики: начало около 82°С (около 4,5 Дж/г) и около 96°С (около 58 Дж/г). Температура плавления около 101°С
ТГА	Потери массы: температура окружающей среды - 75°С (0,3%), 75-90°С (0,3%), 90-250°С (0,6%) и 250-340°С (27,2% - разложение)

Метод	Сводные данные	Примечания
Микроскопия	Двоякопреломляющие столбчатые/игольчатые кристаллы длиной вплоть до са. 40 мкм и агломераты длиной вплоть до са. 300 мкм
Высокотемператур- ная микроскопия	Плавление наблюдается в интервале 96-106°С
Чистота, ВЭЖХ	Чистота 98,4% по площади поверхности с примесями при RRT 0,73 (0,27%), 0,96 (0,30%), 1,02 (0,36%), 1,19 (0,17%) и 1,37 (0,16%)

Пример 5: Гигроскопичность соединения в кристаллических формах А. С и II по сравнению с аморфным соединением

Метод: Гравиметрическая сорбция пара (ГСП)

Изотермы сорбции получают с использованием анализатора поглощения влаги, контролируемого программным обеспечением CFRSorp. Температуру образца поддерживают на уровне 25°С на водяной бане Huber с рециркуляцией. Контролирование влажности осуществляют путем смешения потоков сухого и влажного азота, при общей скорости потока 250 мл/мин. Относительную влажность измеряют градуированным датчиком OB Vaisala (динамический интервал OB 0-95%), расположенным ниже образца. Изменение массы образца как функцию % OB постоянно контролируют при помощи микровесов (точность ±0,001 мг).

Как правило, 10-20 мг образца при температуре окружающей среды помещают в тарированную корзину с ячейками из нержавеющей стали. Образец загружают и выгружают при OB 40% и 25°С (обычные комнатные условия).

Изотермы поглощения влаги получают так, как показано ниже (2 прогона дают 1 полный цикл). Стандартную изотерму снимают при 25°С, OB 10% в интервале ОВ 0-90%.

Параметры	Значения
Адсорбция - 1 прогон	40-90
Десорбция/Адсорбция - 2 прогон	85 - сухой, сухой - 40
Интервалы (% OB)	10
Число прогонов	2
Скорость потока (мл/мин)	250
Температура (°С)	25

Параметры	Значения
Стабильность (°С/мин-1)	0,05
Минимальное время сорбции (часы)	1
Максимальное время сорбции (часы)	6
Режим	AF2
Точность (%)	98

При программной обработке для предварительного определения асимптотического значения используют минимизацию по методу наименьших квадратов наряду с моделью масс-релаксаций. Измеренное значение масс-релаксаций должно находиться в пределах 5% от значения, предварительно определенного программой, перед тем, как будет выбрано следующее значение % ОВ. Минимальное время установления равновесия принимают равным 1 ч, а максимальное 4 ч.

Гигроскопичность твердых форм

Классификация дана в соответствии с European Pharmacopea Technical Guide (издание 1999) (например, слабо гигроскопичное соединение: увеличение массы менее чем на 2% - равна или более 0,2% масс./масс.; гигроскопичное соединение: увеличение массы менее чем на 15% - равна или более 2% масс./масс.). Учитывают изменение массы между OB 40% и OB 80% при первом адсорбционном прогоне.

Аморфное соединение: прирост массы 2,1%: Гигроскопично

Форма А: прирост массы <0,2%: Негигроскопична

Форма С: прирост массы <0,2%: Негигроскопична

Форма II: прирост массы 2%: Слабо гигроскопична

Пример 6: Капсулы, содержащие 10 мг, 20 мг или 40 мг СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме А или С

Ингредиенты	Количество на капсулу [мг]
Интрагранулярные компоненты
СОЕДИНЕНИЕ в кристаллической форме А или С	10,00 мг	20,00 мг	40 мг
Прежелатинизированный крахмал	168,00 мг	158,00 мг	138,00 мг
Поливипилпирролидон	6,25 мг (2,5% масс./масс.)
Микрокристаллическая целлюлоза	50,00 мг (20% масс./масс.)

Ингредиенты	Количество на капсулу [мг]
Натрия крахмалгликолят	5,00 мг (2% масс./масс.)
Лаурилсульфат натрия	2,50 мг (1% масс./масс.)
Гранулирующая жидкость
Очищенная вода	q.s.
Экстрагранулярные компоненты
Натрия крахмалгликолят	5,00 мг (2% масс./масс.)
Безводный коллоидный диоксид кремния	0,75 мг (0,3% масс./масс.)
Стеарат магния	2,50 (1% масс./масс.)
Итого	250 мг

Интрагранулярные компоненты просеивают в смесителе с большими сдвиговыми усилиями, например Diosna, в котором они смешиваются друг с другом на стадии сухого смешивания. Затем к сухой смеси интрагранулярных компонентов добавляют воду, продолжая перемешивание до образования на стадии мокрого гранулирования подходящих гранул соответствующего размера. После этого гранулы сушат в сушильном аппарате с псевдоожиженным слоем и размалывают с использованием сита подходящей пористости. Все экстрагранулярные компоненты, кроме стеарата магния, пропускают через 1000 мкм сито и смешивают с гранулами. Стеарат магния просеивают с определенным количеством полученной смеси и добавляют к оставшейся части порошкообразной смеси. Полученную смесь еще раз перемешивают. Образовавшейся порошкообразной смесью наполняют матово-белые желатиновые капсулы размера "0".

Пример 7: Таблетки, содержащие соединение в кристаллической форме С

Эксципиенты	Состав (% масс./масс.)
Интрагранулярные компоненты
Соединение в кристаллической форме С	16,0
Лактоза	35,0
Микрокристаллическая целлюлоза	17,5
Поливинилпирролидинон	3,0
Лаурилсульфат натрия	1,0
Кроскармеллоза натрия (Ac-di-sol)	4,0
Гранулирующая жидкость
Лаурилсульфат натрия	1,0
Очищенная вода	q.s.

Эксципиенты	Состав (% масс./масс.)
Экстрагранулярные компоненты
Микрокристаллическая целлюлоза	17,5
Кроскармеллоза натрия (Ac-di-sol)	4,0
Стеарат магния	0,5
Коллоидный диоксид кремния	0,5
Итого	100,0

Интрагранулярные компоненты просеивают в смесителе с большими сдвиговыми усилиями, например Diosna, в котором они смешиваются друг с другом на стадии сухого смешивания. Затем к сухой смеси интрагранулярных компонентов добавляют воду, продолжая перемешивание до тех пор, пока на стадии мокрого гранулирования не образуются подходящие гранулы соответствующего размера. После этого гранулы сушат в сушильном аппарате с псевдоожиженным слоем и размалывают с использованием сита подходящей пористости. Все экстрагранулярные компоненты, кроме стеарата магния, пропускают через 1000 мкм сито и смешивают с гранулами. Затем стеарат магния просеивают с определенным количеством полученной смеси и добавляют к оставшейся части порошкообразной смеси. Полученную смесь еще раз перемешивают. Затем порошкообразную смесь переносят для прессования в подходящее таблетировочное устройство. После этого полученные таблетки покрывают красителем Opadry II коричневый (прирост 4% масс./масс.в ходе покрытия).

1. Кристаллическая форма (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, содержащая от 0 до 0,5 эквивалентов Н₂O на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, характеризующаяся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 7,0°, 11,2° и 12,6°, при этом порошковую рентгенограмму получают с использованием CuKα1-излучения (λ=1,5406 Ǻ).

2. Кристаллическая форма по п.1, характеризующаяся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 7,0°, 11,2°, 12,6°, 16,6°, 18,8°, 21,3°, 23,6° и 26,0°, при этом порошковую рентгенограмму получают с использованием CuKα1-излучения (λ=1,5406 Ǻ).

3. Кристаллическая форма по п.1, имеющая температуру плавления около 113°C по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.

4. Кристаллическая форма по п.2, имеющая температуру плавления около 113°C по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.

5. Кристаллическая форма по одному из пп.1-4, полученная путем:
i) растворения аморфного (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (251,1 г) при нагревании в ацетонитриле (1,25 л);
ii) установления внутренней температуры на уровне 58°C с перемешиванием лопастной мешалкой при 350 об/мин;
iii) добавления деонизированной воды (1,0 л) аликвотами по 250 мл (минимальная внутренняя температура = 45°C) с получением при перемешивании прозрачного раствора;
iv) доведения внутренней температуры до 55°C и добавления еще одной дополнительной аликвоты воды (250 мл) с получением при перемешивании прозрачного раствора;
v) установления температуры раствора на уровне 59,5-60°C;
vi) охлаждения раствора до 12°C около 2 ч (скорость охлаждения = 0,4°C/мин); и
vii) перемешивания суспензии при 12°C в течение 18 ч.

6. Кристаллическая форма по одному из пп.1-4, содержащая 0,5 эквивалента Н₂O на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

7. Кристаллическая форма (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, содержащая от 0 до 0,5 эквивалентов Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, характеризующаяся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,5°, 22,2° и 23,4°, при этом порошковую рентгенограмму получают с использованием CuKα1-излучения (λ=1,5406 Ǻ).

8. Кристаллическая форма по п.7, характеризующаяся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,5°, 11,1°, 11,4°, 13,6°, 13,9°, 16,3°, 20,8°, 22,2°, 23,4°, 24,1°, 25,7°, 27,7°, 27,9°, 28,7° и 29,3°, при этом порошковую рентгенограмму получают с использованием CuKα1-излучения (λ=1,5406 Ǻ).

9. Кристаллическая форма по п.7, имеющая температуру плавления около 133°C по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.

10. Кристаллическая форма по п.8, имеющая температуру плавления около 133°C по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.

11. Кристаллическая форма по одному из пп.7-10, полученная путем:
i) суспендирования кристаллической формы (20,0 г) по одному из пп.1-6 в метил-трет-бутиловом эфире (100 мл);
ii) перемешивания механической мешалкой при комнатной температуре с получением высоковязкой пасты, с последующим превращением в жидкотекущую суспензию четко выраженного желтого цвета после перемешивания в течение 40 ч; и
iii) отфильтровывания твердого вещества и его высушивания в течение 4 ч под вакуумом при комнатной температуре.

12. Кристаллическая форма по одному из пп.7-10, в которой (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-он находится в безводной форме.

13. Кристаллическая форма (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, содержащая от 0 до 0,5 эквивалентов Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, характеризующаяся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 6,4°, 13,2° и 25,3°, при этом порошковую рентгенограмму получают с использованием CuKα1-излучения (λ=1,5406 Ǻ).

14. Кристаллическая форма по п.13, характеризующаяся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 6,4°, 13,2°, 16,9°, 18,6°, 19,3°, 20,8° и 25,3°, при этом порошковую рентгенограмму получают с использованием CuKα1-излучения (λ=1,5406 Ǻ).

15. Кристаллическая форма по п.13, имеющая температуру плавления около 101°C по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.

16. Кристаллическая форма по п.14, имеющая температуру плавления около 101°C по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.

17. Кристаллическая форма по одному из пп.13-16, полученная путем:
i) добавления 1 мл пропионовой кислоты к кристаллической форме (0,5 г) по одному из пп.1-6;
ii) встряхивания образца до полного растворения твердого вещества;
iii) выдерживания образца в течение ночи при комнатной температуре;
iv) отфильтровывания полученного твердого вещества;
v) выдерживания полученного твердого вещества в глубоком вакууме (<0,1 мбар) в течение одной недели; и
vi) выдерживания продукта на открытом воздухе при комнатной температуре и относительной влажности около 40% в течение ночи.

18. Кристаллическая форма по одному из пп.13-16, в которой (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-он находится в безводной форме.

19. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения заболеваний или расстройств, обусловленных активацией иммунной системы, содержащая кристаллическую форму по одному из пп.1-18 и фармацевтически приемлемый носитель.

20. Кристаллическая форма по одному из пп.1-4, 7-10 и 13-16 для применения в качестве лекарственного средства для предотвращения или лечения заболеваний или расстройств, обусловленных активацией иммунной системы.

21. Применение кристаллической формы по одному из пп.1-18 для получения фармацевтической композиции для предотвращения или лечения заболеваний или расстройств, обусловленных активацией иммунной системы.

22. Применение по п.21 для предотвращения или лечения заболеваний или расстройств, выбранных из отторжения трансплантированных органов, таких как почки, печень, сердце, легкие, поджелудочная железа, роговица и кожа; реакции «трансплантат против хозяина», обусловленной трансплантацией стволовых клеток; аутоиммунных синдромов, включая ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит, псориаз, псориатический артрит, тиреоидит, такой как тиреоидит Хашимото, и увеоретинит; атопических заболеваний, таких как ринит, конъюнктивит и дерматит; астмы; диабета типа I; постинфекционных аутоиммунных заболеваний, включая ревматический полиартрит и постинфекционный гломерулонефрит; твердых опухолей и опухолевых метастаз.