Способ диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями у детей


 


Владельцы патента RU 2522238:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр здоровья детей" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦЗД" РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно, к области биохимических исследований в нефрологии и может быть использовано для диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ). Способ включает оценку биологически значимых показателей у детей с первичным нефротическим синдромом без нарушения функций почек, для чего в моче методом твердофазного энзим-связанного иммуносорбентного анализа определяют содержание ИЛ-18. При его уровне от 74,7 до 540 пг на 1 мг креатинина диагностируют НСМИ у детей. Быстрая дифференциальная диагностика НСМИ с другими морфологическими формами гломерулопатий, позволит сразу проводить терапевтическое назначение более сильных, чем преднизолон иммуносупрессивных препаратов, например циклоспорина А. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к области биохимических исследований в нефрологии, и может быть использовано для диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ).

Нефротический синдром (НС) - современное обозначение группы поражений почек - был введен в номенклатуру болезней в 1968 году. НС - клинико-лабораторный симптомокомплекс, включающий массивную протеинурию (40 мг/м2/час или 1,0 г /м2 в сутки или более 50 мг /кг в сутки) и гипоальбуминемию (менее 25 г/л). Важнейшее клиническое проявление НС - отеки, вначале на лице, затем распространяющиеся на всю подкожную клетчатку. В связи с потерей белка с мочой и обменными нарушениями концентрация белка в крови снижается, развивается мышечная слабость, падает сопротивляемость инфекции. Резко возрастает содержание липидов в крови. Морфологической основой НС являются: нефротический синдром с минимальными изменениями (НСМИ), фокальный сегментарный гломерулосклероз, мембранозная нефропатия, мембранопролиферативный гломерулонефрит. Первоначальное лечение проводят глюкокортикоидными гормонами, причем преднизолон и метилпреднизолон являются первыми препаратами выбора при иммуносупрессивном лечении НС. В более тяжелых случаях назначают цитостатические препараты, ингибиторы кальциневрина. Варианты ответа на глюкокортикоидную терапию: стероидчувствительный НС или стероидрезистентный НС.

Нефротический синдром с минимальными изменениями (НСМИ) у детей и подростков характеризуется: стероидчувствительностью (нормализация анализов мочи в среднем через 2 недели после начала приема глюкокортикоидов и наступление полной клинико-лабораторной ремиссии).

Известен гистологический способ диагностики морфологических форм на основании исследования почечной ткани, полученной при нефробиопсии (Kidney Disease: Improving Global Outcomes (KDIGO) Glomerulonephritis Work Group.KDIGO Clinical Practice Guideline for Glomerulonephritis. Kidney inter., Suppl. 2012; 2: 139-274).

Недостатком этого способа является его инвазивность. Часто бывает трудно различить НСМИ и начальные стадии фокально-сегментарного гломерулосклероза и мембранозной нефропатии (Грене Г.-И., Кисс Е. Нефротический синдром: гистопатологическая дифференциальная диагностика. Часть 2: Болезнь минимальных изменений, фокально-сегментарный гломерулосклероз, мембранозный гломерулонефрит. Нефрология. - 2007. - Т. 11, №4. - С.88-94).

Диагностика основывается на выявленных изменениях в анализах крови и мочи (протеинурия, гипопротеинемия, гиперлипидемия) и на клинических данных.

Известен способ диагностики НСМИ у детей по стероидчувствительности, т.е. ответу на терапию преднизолоном. Максимальная доза преднизолона при стандартном курсе первоначальной терапии составляет для детей 2 мг/кг/сут, но не более 60-80 мг/сут, для подростков не более 80-100 мг/сут. Исследуют общий анализ мочи с определением содержания в ней белка. Стероидрезистентность устанавливают при отсутствии ответа на терапию через 6-8 недель, т.е. сохранении протеинурии (Habib R., Kleinknecht С. The primary nephrotic syndrome of childhood. Classification and clinicopathologic study of 406 cases // Pathol. Annu. - 1971. - Vol.6. - P.417-474).

К недостаткам этого метода относится длительный прием препарата, который может приводить к побочным эффектам терапии. Кроме того, часть пациентов с НСМИ стероидрезистентны.

Способ выбран нами в качестве прототипа.

Задачей изобретения является создание надежного и неинвазивного способа диагностики НСМИ.

Техническим результатом является создание экспресс-метода диагностики НСМИ.

Поставленная задача решается тем, что у больного с первичной гломерулопатией, проявляющейся нефротическим синдромом без нарушения функций почек, определяют содержания в моче уровня ИЛ-18.

Сущность изобретения состоит в том, что в моче определяют содержание ИЛ-18 у детей с нефротическим синдромом без нарушения функций почек и при его уровне от 74,7 до 540 пг на 1 мг креатинина диагностируют НСМИ у детей.

Интерлейкин 18 (англ. interleukin 18, IL-18) - провоспалительный цитокин, структурно подобный IL-1, оказывающий сильный эффект на активацию Т-клеток. Синтезируется макрофагами и другими клетками организма. Играет значительную роль в инфекционных и аутоиммунных заболеваниях.

Способ осуществляют следующим способом. Для исследования производится забор второй утренней порции мочи. Мочу центрифугируют при 10.000 об/мин в течение 15 мин для получения супернатанта, который затем замораживают при -70°С. ИЛ-18 определяют в моче методом твердофазного энзим-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA) с использованием иммуноферментного набора (Bender MedSystems GmbH, Vienna, Austria). Для устранения влияния разведения оценивают соотношение уровня ИЛ-18 к креатинину в той же порции мочи. ИЛ-18, присутствующий в образцах, при внесении в ячейки планшета связывается с антителами к ИЛ-18, адсорбированными в ячейках. Затем в лунки добавляют конъюгат моноклональных анти-ИЛ-18 антител с биотином, который связывается с молекулами ИЛ-18, захваченными первыми антителами. После инкубации и промывки из ячеек удаляют не связавшийся конъюгат биотин-ИЛ-18, и в ячейки добавляется конъюгат стрептавидин-HRP, который связывается с биотином, конъюгированным с ИЛ-18, реакцию останавливают добавлением кислоты. Интенсивность окраски, измеренная на длине волны 450 нм, прямо пропорциональна концентрации ИЛ-18, присутствующего в образцах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывают концентрацию ИЛ-18 в определяемых образцах.

Предлагаемым способом диагностики НСМИ обследовано 32 ребенка с нефротическим синдромом в активной стадии без нарушения функций почек.

Данные обследования были использованы для построения графиков зависимости чувствительности и специфичности способа от содержания ИЛ-18. Было выявлено, что точка оптимального порога отсечения (optimal cut-off value), т.н. «точка баланса» между специфичностью и чувствительностью способа, соответствует значению уровня ИЛ-18, равному 74,7 пг/мг креатинина у детей с нефротическим синдромом без нарушения функций почек (Рис.1). Специфичность и чувствительность диагностического теста составляет 81%.

При уровне ИЛ-18 в моче от 74,7 до 540 пг на 1 мг креатинина диагностируют НСМИ, при более низком уровне этот диагноз исключают. Качество диагностической модели по данным ROC анализа оценивают как отличное (AUC=0,91).

Клинические примеры

Пример 1. Больная В., 6 лет. Поступила в нефрологическое отделение с отеками на лице, стопах и голенях. При обследовании протеинурия - более 6 г/л, гипоальбуминемия 21 г/л. Уровни сывороточных креатинина и мочевины были в пределах нормы (47 мкмоль/л и 3,0 ммоль/л, соответственно), максимальный удельный вес в пробе по Зимницкому составил 1025, клубочковая фильтрация 109 мл/мин (формула Шварца), что свидетельствовало об отсутствии нарушений функций почек. На основании клинико-лабораторных данных был установлен диагноз: нефротический синдром, хроническая болезнь почек 1 стадия. Назначен ежедневный прием преднизолона в дозе 2 мг/кг/сут (40 мг/сут). До наступления ремиссии у больной был исследован ИЛ-18 в моче. Для исследования производился забор 2-й утренней порции мочи. ИЛ-18 определялся в моче методом твердофазного энзим-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA). Для устранения влияния разведения (концентрирования) оценивалось соотношение уровня ИЛ-18 к креатинину в той же порции мочи. Уровень ИЛ-18 у больной составил 420 пг на 1 мг креатинина. Что позволило предположить у ребенка морфологический диагноз «нефротический синдром с минимальными изменениями». Была продолжена терапия преднизолоном в дозе 2 мг/кг/сут (40 мг/сут) до достижения ремиссии. При проведении нефробиопсии диагноз НСМИ подтвердился.

Пример 2. Больная К., 11 лет. Поступила в нефрологическое отделение по поводу рецидива нефротического синдрома. При обследовании протеинурия - 2,4 г/л (3,3 г/сут), гипопротеинемия 50 г/л, гипоальбуминемия 24 г/л. Креатинин в сыворотке крови 60 мкмоль/л, клубочковая фильтрация 119 мл/мин (формула Шварца). На основании клинико-лабораторных данных был установлен диагноз: нефротический синдром, хроническая болезнь почек 1 стадия. Назначен ежедневный прием преднизолона в дозе 60 мг/сут. До наступления ремиссии у больной был исследован ИЛ-18 во 2-й утренней порции мочи методом ELISA. Оценивалось соотношение уровня ИЛ-18 к креатинину в той же порции мочи. Уровень ИЛ-18 у больной составил 133 пг на 1 мг креатинина. Предположен морфологический диагноз: «нефротический синдром с минимальными изменениями». Была продолжена терапия преднизолоном в дозе 60 мг/сут до достижения ремиссии. При проведении нефробиопсии диагноз НСМИ подтвердился.

Изобретение является новым, т.к. способ диагностики НСМИ на основании определения уровня ИЛ-18 в моче в мировой медицинской литературе неизвестен.

Изобретение носит изобретательский уровень, так как для врача-нефролога данный способ явным образом не следует из известного уровня техники в области биохимических исследований в нефрологии.

Быстрая дифференциальная диагностика НСМИ с другими морфологическими формами гломерулопатий позволит сразу проводить терапевтическое назначение более сильных, чем преднизолон, иммуносупрессивных препаратов, например циклоспорина А.

Способ диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями у детей, включающий оценку биологически значимых показателей у детей с первичным нефротическим синдромом без нарушения функций почек, отличающийся тем, что в моче методом твердофазного энзим-связанного иммуносорбентного анализа определяют содержание ИЛ-18 и при его уровне от 74,7 до 540 пг на 1 мг креатинина диагностируют НСМИ у детей.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний.

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии и ортопедии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ иммунологического анализа белка CXCL1 человека.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и касается способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников. Сущность способа состоит в том, что у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников и неуточненной олигоменореей определяют методом ИФА в сыворотке крови уровень неоптерина.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения референс-панели образцов сывороток, предназначенной для оценки специфичности результатов серологической диагностики социально значимых заболеваний, включающего: исследование образцов доноров и пациентов на наличие инфекционного материала, отбор для отрицательной части референс-панели образцов, не содержащих антитела к вирусу гепатита С (ВГС), поверхностного антигена HBsAg вируса гепатита В (ВГВ), раннего белка р24 и антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), а также антитела к Treponema pallidum, отбор для положительной части референс-панели образцов, содержащих антитела к ВИЧ, ВГС, HBsAg и Treponema pallidum и введение в отобранные образцы стабилизирующего состава.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно способу получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей. Способ получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей, заключающийся в том, что производят отбор первоначального опухолевого материала, смешение и гомогенизацию в буферном растворе, неоднократное центрифугирование с отбором образующего осадка, осадок суспендируют в кислом буфере, перемешивают, нейтрализуют, центрифугируют, супернатат собирают, осуществляют обогащение и очистку полученного супернатата с помощью комбинации солевого осаждения и хроматографии на иммобилизованном протеине А или G, полученный раствор пропускают через колонки с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, получившиеся антитела подвергают ферментативной обработке для получения Fab- или F(ab)2-фрагментов, которыми иммунизируют животных, получают иммунные антисыворотки, выделяют из них суммарную фракцию иммуноглобулинов, пропускают ее через колонки, с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, прошедший через колонки раствор подвергают иммуноаффинной хроматографии на колонках с иммобилизованными иммуноглобулинами, полученными ранее на этапе очистки и обогащения, целевые продукты, специфически связываемые последними видами колонок, элюируют раствором, диссоциирующим комплексы антиген-антитело, концентрируют, фильтруют через антимикробные фильтры, смешивают с адьювантом.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для прогнозирования развития системного воспалительного ответа у больных с инфекционным эндокардитом.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике предрака и рака шейки матки иммунологическими методами. Способ прогнозирования прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (ЦИН), ассоциированных с папилломавирусной инфекции, заключающийся в определении иммунологических показателей в крови и цервикальном секрете пациента, включает применение значения коэффициента Р, и если значение коэффициента Р больше 0,5, - группа риска прогрессии заболевания, при значении коэффициента Р меньше или равном 0,5 -отсутствие риска прогрессии заболевания.
Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и пульмонологии, и может быть использовано для прогнозирования обострения бронхиальной астмы и муковисцидоза у детей при гриппе. Сущность способа: определяют прогностические индексы, полученные в результате расчета соотношения показателей интерлейкинов IL-4, IL-10 и интерферона-гамма IFN-y, определяемых в сыворотке крови методом ИФА в первые и третьи сутки заболевания гриппом. Увеличение уровня интерлейкина IL-4, IL-10 и понижение IFN-γ в динамике с повышением коэффициента соотношения IL-4/IFN-γ к третьему дню как минимум в 5-6 раз, и IL-10/IFN-γ как минимум в 4-5 раз грипп может считаться триггером обострения сопутствующей хронической бронхолегочной патологии - бронхиальной астмы или муковисцидоза. Полученные коэффициенты определяют алгоритм раннего применения комбинированных схем терапии гриппа у детей с хроническими неспецифическими заболеваниями легких с использованием противовирусных, антибактериальных и иммунокорригирующих препаратов с целью устранения дисбаланса цитокиновых реакций и предотвращения вирус-индуцированной бронхообструкции в результате снижения гиперреактивности трахеобронхиального дерева. Прогностическая точность предложенного способа составляет 85-90%. Табл. 4, пр. 4.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и может использоваться для прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом C с генотипом 1b. Для этого определяют относительные количества содержания субпопуляций лимфоцитов крови и рассчитывают прогностический показатель, при этом подсчет процента субпопуляций лимфоцитов осуществляют методом проточной цитофлуориметрии. При значении показателя ПП<350 прогнозируют достижение быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию ХГС, при значении показателя ПП>350 прогнозируют отсутствие быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию хронического гепатита C с генотипом вируса 1b. Использование данного способа позволяет получить точный прогноз быстрого вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом C с генотипом вируса 1b на противовирусную терапию 2 пр., 1 ил.

Изобретение относится к медицине и касается способа выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора HNF4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека. Способ представляет собой иммуногистохимический способ исследования с использованием моноклональных антител к группам изоформ HNF4α и характеризуется тем, что для выявления антигенов используют двухступенчатую высокочувствительную полимерную пероксидазную систему. Демаскировку осуществляют в цитратном буфере при рН 6,0 и t=95°, при инкубации с первичными антителами используют высокое разведение антител HNF4αP2 и HNF4αP1 - 1,5 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно. Изобретение обеспечивает высокую специфичность и чувствительность способа, высокую точность оценки интенсивности окрашивания ядер опухолевых клеток, оценку степени дифференцировки опухолевых клеток и их злокачественности по уровню экспрессии групп изоформ HNF4α, сокращение времени исследования до 4 часов. 3 пр., 4 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, гинекологии, биофизике, и касается способа оценки риска развития папилломавирус-ассоциированного канцерогенеза шейки матки. Сущность способа: в тканях биоптата шейки матки, взятых при кольпоскопическом исследовании, исследуют тип вируса папилломы человека (ВПЧ), показатели апоптоза (sFAS, TRAIL), генетических особенностей экспрессии генов, регулирующих процессы апоптоза, а также процессы радикалообразования (активность пиелопероксидазы, уровень нитрат-нитритов, общая антиоксидантная емкость ткани по реакции Фентона). Рассчитывают суммирующий коэффициент риска развития канцерогенеза шейки матки по формуле. Если суммарный коэффициент K менее 3, то прогнозируют низкий уровень риска канцерогенеза, если коэффициент K равен или более 3, то уровень риска канцерогенеза прогнозируют высокий. Изобретение обеспечивает возможность применения данного метода до формирования патологических процессов в тканях, что позволяет врачам назначить профилактический курс и предотвратить развитие РШМ при выявленной предрасположенности или при наличии одного из факторов риска. Также возможно применение данного метода у пациентов с выявленной патологией шейки матки с целью прогноза заболевания и мониторинга эффективности проводимой терапии. 2 пр.

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено однодоменное мини-антитело, специфически связывающее белок-рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu человека, полученное при иммунизации двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток SKBR3, и охарактеризованное аминокислотной последовательностью. Также рассмотрен способ детекции белка HER2/ERBB2/neu и экспрессирующих его клеток. Антитело по настоящему изобретению способно проникать внутрь клетки-мишени, на поверхности которой экспонирован HER2/ERBB2/neu, и может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии заболеваний, связанных с повышенной экспрессией HER2/ERBB2/neu. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.

Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа. В основе метода лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы. Интенсивность окраски метки, связавшейся в аналитической зоне, детектируется визуально. Предложенная система предназначена для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител или антигенов. Отличительной особенностью предлагаемого способа проведения иммунохроматографического анализа является то, что мультимембранный композит тест-полоски содержит дополнительную мембрану с нанесенным на нее веществом, медленно растворяющимся в воде, например бычьим сывороточным альбумином (БСА), которая прикрепляется к тест-полоске сразу за мембраной с нанесенным коллоидным конъюгатом. Фронт жидкой пробы, преодолевая мембрану с коллоидным золотом, конъюгированным с реагентом для связывания аналита, останавливается, попадая на мембрану с БСА, до тех пор, пока БСА не растворится. В течение этого времени проба инкубируется с коллоидным конъюгатом, что приближает реакцию связывания аналита к положению равновесия и, таким образом, приводит к снижению предела обнаружения анализа. 2 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в результате лечения методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сущность способа заключается в том, что перед программой ЭКО у пациентки в лютеиновую фазу цикла проводят биопсию эндометрия и определяют относительное содержание CD95+макрофагов в лейкоцитарном инфильтрате эндометрия. При значении относительного содержания CD95+макрофагов, равном 48,8% или более, прогнозируют наступление беременности, а при значении менее 48,8% - отсутствие наступления беременности. Заявляемый способ расширяет арсенал прогностических средств, повышает точность, чувствительность и специфичность прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием перед проведением программы ЭКО. Использование способа позволит определять дальнейшую тактику ведения пациентки, своевременно назначить дополнительные лечебные мероприятия. 1 табл., 3 пр.,
Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита. Способ диагностики по настоящему изобретению заключается в определении содержания Anti-MCV в ротовой жидкости (в смешанной слюне), использовании для обработки полученных показателей Anti-MCV в ротовой жидкости математического выражения: F=0,17×Anti-MCV-0,2537, диагностировании при положительном значении F наличия ревматоидного артрита, при отрицательном значении функции F ревматоидный артрит сомнителен. Заявленное изобретение предлагает малоинвазивный и достоверный способ диагностики ревматоидного артрита.

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия фенола, поступающего из среды обитания, на здоровье населения. Для оценки нарушений клеточного иммунитета при воздействии фенола производят отбор пробы крови и ее исследование с использованием опытного и контрольного образцов с предварительным введением в опытный образец токсиканта - фенола в концентрации, соответствующей его региональному фоновому уровню. В качестве критериальных показателей в способе используют индекс специфической чувствительности клеток для цитокина фактора некроза опухолей ФНО-α и индекс специфической чувствительности клеток для цитокина Интерлейкина-10 ИЛ-10, которые определяют следующим образом: опытную и контрольную пробы крови вносят во флакон со стерильной питательной средой ДМЕМ с гепарином и гентамицином в объемном соотношении 1:4 соответственно (в преимущественном варианте содержание в стерильной питательной среде ДМЕМ гепарина составляет 2,5 Ед/мл и гентамицина - 100 мкг/мл), осуществляют при 37°C в течение суток инкубацию этих проб, а затем центрифугирование в течение 3 минут при 1000 об/мин и в отобранном супернатанте опытной пробы определяют уровень фенол-индуцированной продукции цитокинов, а именно уровень ИПЦИЛ-10 фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень ИПЦФНО-α фенол-индуцированной продукции цитокина - фактора некроза опухолей ФНО-α, а в отобранном супернатанте контрольной пробы определяют уровень спонтанной продукции цитокинов, а именно уровень СПЦИЛ-10 спонтанной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень СПЦФНО-α спонтанной продукции цитокина ФНО-α, далее рассчитывают индекс ИСЧфно-α специфической чувствительности клеток для цитокина ФНО-α, а также рассчитывают индекс ИСЧИЛ-10 специфической чувствительности клеток для цитокина ИЛ-10 по следующим формулам: ИСЧФНО-α=(ИПЦФНО-α-СПЦФНО-α):СПЦФНО-α, ИСЧИЛ-10=(ИПЦИЛ-10-СПЦИЛ-10):СПЦИЛ-10, где ИПЦИЛ-10 - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10; ИПЦФНО-α - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ФНО-α; СПЦИЛ-10 - уровень спонтанной продукции цитокина ИЛ-10; СПЦФНО-α - уровень спонтанной продукции цитокина ФНО-α; и при выполнении одновременного условия ИСЧФНО-α более 10 и ИСЧИЛ-10 более 2 судят о нарушении клеточного иммунитета организма под воздействием фенола. Изобретение обеспечивает повышение достоверности установления оценки влияния фенола на нарушение клеточного иммунитета организма человека. 1 з.п. ф-лы, 8 табл.
Наверх