Способ прогнозирования обострения бронхиальной астмы и/или муковисцидоза при гриппе у детей

Авторы патента:

Головачева Екатерина Георгиевна (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2522276:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и пульмонологии, и может быть использовано для прогнозирования обострения бронхиальной астмы и муковисцидоза у детей при гриппе. Сущность способа: определяют прогностические индексы, полученные в результате расчета соотношения показателей интерлейкинов IL-4, IL-10 и интерферона-гамма IFN-y, определяемых в сыворотке крови методом ИФА в первые и третьи сутки заболевания гриппом. Увеличение уровня интерлейкина IL-4, IL-10 и понижение IFN-γ в динамике с повышением коэффициента соотношения IL-4/IFN-γ к третьему дню как минимум в 5-6 раз, и IL-10/IFN-γ как минимум в 4-5 раз грипп может считаться триггером обострения сопутствующей хронической бронхолегочной патологии - бронхиальной астмы или муковисцидоза. Полученные коэффициенты определяют алгоритм раннего применения комбинированных схем терапии гриппа у детей с хроническими неспецифическими заболеваниями легких с использованием противовирусных, антибактериальных и иммунокорригирующих препаратов с целью устранения дисбаланса цитокиновых реакций и предотвращения вирус-индуцированной бронхообструкции в результате снижения гиперреактивности трахеобронхиального дерева. Прогностическая точность предложенного способа составляет 85-90%. Табл. 4, пр. 4.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и пульмонологии, и может найти применение для оптимизации терапии гриппа у пациентов с сопутствующими хроническими бронхолегочными заболеваниями.

Грипп особенно опасен для детей младшего возраста в связи с частыми осложнениями, приводящими к формированию хронической легочной патологии и других заболеваний. Для практического здравоохранения чрезвычайно важно раннее выявление пациентов, у которых имеется угроза тяжелого и осложненного течения гриппа для активного воздействия на «управляемые» факторы риска.

У пациентов, часто и длительно болеющих на фоне хронической и рецидивирующей патологии органов дыхания, нередко отмечается генетически детерминированный «поздний иммунологический старт», транзиторные энзимопатии («поздний старт энзимов»), изменения цитокинового статуса, предрасполагающие к обострению хронических неспецифических заболеваний легких (ХНЗЛ), в частности, бронхиальной астмы (БА) и муковисцидоза (MB).

По нашим данным хроническая бронхолёгочная патология является фоном для развития осложнений, но грипп не всегда являлся триггером обострения основного заболевания, что зависит от степени дисбаланса цитокиновых реакций.

Изучение характера цитокинового, особенно, интерферонового статуса позволило выявить показатели, предопределяющие развитие вирус-индуцированной бронхообструкции, обусловливающей неблагоприятное течение гриппа у детей с данной патологией, что определяет выбор рациональных схем терапии на раннем этапе гриппозной инфекции.

Известна диссертационная работа Беловой О.И. «Клинико-патогенетическое значение некоторых цитокинов (интерлейкин-4, 'гамма'-интерферон) при бронхиальной астме у детей» (2003), где показано, что увеличение содержания интерлейкина-4 и снижение уровня γ-интерферона в плазме крови у детей с бронхиальной астмой отражает участие этих цитокинов в развитии аллергического воспаления. Однако автором не уточняются уровни данных цитокинов и их соотношения, информативные для прогнозирования обострений БА при острых респираторных инфекциях.

Известен способ прогнозирования течения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы (патент РФ №2063044), в котором авторы показали, что при отсутствии эффекта регуляции цАМФ (циклоаденозинмонофосфатом) глутатионтрансферазы в эритроцитах крови прогнозируется фаза обострения заболевания, а наличие эффекта регуляции определяет фазу ремиссии заболевания. Сложность данного способа в исполнении ограничивает его применение.

Известен способ прогноза тяжести обострения атопической бронхиальной астмы (патент РФ №2190217), где в начале обострения заболевания в лимфоцитах больного определяют показатели активности ферментов глицерол-3-фосфатдегидрогеназы и НАД-зависимой малатдегидрогеназы и при показателях ниже 0,297 мкЕ/10000 клеток для ГЗФДГ и 0,638 мкЕ/10000 клеток для НАДМДГ прогнозируют тяжелую степень обострения заболевания.

Авторы патентов исследовали биохимические показатели, имеющие значение в прогнозировании обострения и ремиссии бронхиальной астмы, не касаясь иммунологических изменений, в частности, цитокиновых реакций, наиболее информативных при гриппе у детей с данной патологией.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ, описанный в работе (Л.А. Безрукова, М.В. Старикович, Ю.Б. Белан /Возможности ранней иммунокоррекции бронхообструктивных состояний у детей с отягощенным аллергологическим анамнезом //Лечащий врач. - №6. - 2011. - С.24-32). Авторами изучено влияние респираторных вирусов на иммунную систему с определением уровня IL-12, IL-4, спонтанного и стимулированного IFN-γ.

По данным исследователей, для рецидивирующего течения вирус-индуцированной одышки характерно выраженное угнетение синтеза Th1-профиля цитокинов, при котором соотношение IL-4/гаммa-IFN_ст.=5,49, IL-4/IL-12=77,1, тогда как незначительные изменения цитокинообразования соответствовали при впервые возникшем эпизоде бронхиальной обструкции IL-4/гaммa-IFN_ст.=1,38, a IL-4/IL-12=21,1. Полученные показатели определяли необходимость иммунокоррекции у данной категории пациентов, но не являлись прогностическими критериями тяжести гриппа и/или обострения ХНЗЛ.

Изобретение направлено на разработку быстрого способа прогнозирования обострения бронхиальной астмы и/или муковисцидоза у детей на ранней стадии гриппа с целью своевременного назначения противовирусной и иммунокорригирующей терапии. Кроме того, способ обладает достаточной чувствительностью и специфичностью, точностью, сокращает сроки диагностики и упрощает методы лабораторных исследований.

Результат достигается с помощью определения коэффициентов IL-4/IFN-γ и IL-10/IFN-γ и исследовании их значений в динамике. Сущность изобретения заключается в следующем. Способ прогнозирования обострения бронхиальной астмы и/или муковисцидоза при гриппе у детей предусматривает определение прогностических коэффициентов. Прогностические коэффициенты получают расчетом соотношения показателей противовоспалительных интерлейкинов к интерферону-гамма. Авторами предложено в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа в первые и третьи сутки заболевания определить уровни IL-4, IL-10 и IFN-γ. Затем рассчитать два прогностических коэффициента путем деления показателей IL-4 и IL-10 на величину интерферона-гамма. Если значения полученных коэффициентов нарастают на третьи сутки IL-4/IFN-γ как минимум в 5-6 раз, a IL-10/IFN-γ как минимум в 2-3 раза, на фоне гриппа прогнозируют обострение бронхиальной астмы и/или муковисцидоза.

Значения коэффициентов получены в результате проведенных авторами исследований.

Обследованы 52 ребенка с бронхиальной астмой и 45 детей с муковисцидозом, находившихся в стационаре на плановом лечении основной патологии, для которых грипп являлся госпитальной инфекцией. Это позволило выявить некоторые клинические особенности развития гриппа у данной категории больных, с выявлением иммунологических факторов, предопределяющих обострение имеющихся хронических заболеваний (табл.1).

Таблица 1
Варианты течения гриппа у детей с фоновой патологией
Сопутствующая патология	Всего детей	Тяжелое (%)	Среднетяжелое (%)
С обострением ХНЗЛ	Без обострения ХНЗЛ
Бронхиальная астма	52	4/7,7	34/65,4	14/26,9
Муковисцидоз	45	2/4,4	30/66,7	13/28,9

У детей с муковисцидозом грипп являлся госпитальной инфекцией и отличался умеренной (37,5-38,5°С), хотя и продолжительной температурной реакцией (5,0±0,02 дня), протекая в 28,9% случаев в среднетяжелой форме, не способствуя обострению основного заболевания.

Несмотря на то, что для каждого из заболеваний описаны собственные патогенетические механизмы развития, сходными для них являются иммунологические и метаболические изменения в слизистой респираторного тракта, сопровождающиеся выраженными нарушениями мукоцилиарного клиренса и прогрессирующей бронхообструкцией, что, как правило, является причинным фактором развития осложнений и продолжительного течения гриппозной инфекции.

Несмотря на различия в патофизиологических механизмах этих заболеваний, общими моментами в происхождении бронхообструктивного синдрома вследствие вирусного воспаления являлись отек и инфильтрация бронхиальной стенки, гиперсекреция слизи и десквамация реснитчатого эпителия, ведущие к нарушению мукоцилиарного клиренса.

Поэтому, при наслоении гриппа у пациентов с данными заболеваниями наблюдались как тяжелые, так и осложненные формы заболевания, в зависимости от степени выраженности хронической патологии, патогенности возбудителя и иммунного дисбаланса в результате инфекционного процесса.

Под влиянием респираторных вирусов, эпителиальные клетки секретируют широкий спектр цитокинов и хемокинов, включая (IL-1β, IL-4, IL-8, IL -10, фактор некроза опухоли - TNFα, IFN-α, IFN -γ и др.), являющихся ключевыми факторами иммунопатогенеза гриппа. Интерфероны, являясь противовоспалительными цитокинами, осуществляют рекрутирование эффекторных клеток (нейтрофилов, макрофагов, натуральных киллеров), стимулируют их фагоцитарную, бактерицидную активность и запускают антигенспецифический иммунный ответ, что в совокупности способствует элиминации патогена.

В наших исследованиях на фоне гриппа у пациентов с сопутствующими ХНЗЛ наблюдалась системная воспалительная реакция, которая при тяжелом течении гриппа сопровождалась высоким уровнем провоспалительных цитокинов. Снижение продукции IFN-γ иммунокомпетентными клетками в первые дни заболевания свидетельствовало о дефектности или истощенности процессов иммунорегуляции и являлось прогностическим фактором развития осложнений или обострения фонового заболевания. По нашим данным у 1/3 больных грипп протекал в средне-тяжелом варианте, не способствуя обострению имеющегося хронического заболевания.

Хронический воспалительный процесс при MB обусловлен активацией Т-лимфоцитов-хелперов 1и 2 типа, что проявляется повышением уровней IL-4 и IFN-γ, тогда как патогенетическая сущность БА - аллергическое воспаление, обусловленное иммунным ответом Th-2 типа. С данным фактом связаны некоторые особенности цитокинового профиля у больных с разными вариантами течения гриппозной инфекции.

Отмечены следующие особенности цитокинового профиля на фоне гриппа у детей с данной патологией:

Грипп без обострения ХНЗЛ: умеренное повышение IL-4, в большей степени на фоне бронхиальной астмы 67,4(56,3-82,3) - 93,0(51,6-114,5), р<0,05 и 44,6(38,0-55,9)-84,4(54,0-132,3) при MB, свидетельствовало о сенсибилизации организма в результате основного заболевания, а также дефицит в циркуляции IFN-γ - как на фоне муковисцидоза, так и на фоне бронхиальной астмы (табл.2).

Таблица 2
Уровень цитокинов в сыворотке крови у пациентов с гриппом (без обострения ХНЗЛ)
Цитокины пг/мл	Порядок исследования	Без фоновых заболеваний	Бронхиальная астма	Муковисцидоз
IL-4N=22,4 (12,5-34,2)	1	46,3 38,0-55,9	67,4 56,3-82,3	44,6 38,0-55,9
2	34,5 12,3-39,0	93,^0∗↑ 51,6-114,5	84,^∗↑ 54,0-132,3
IL-10	1	42,1 32,4-55,6	56,3 25,4-51,9	55,2 32,4-65,6
N=12,3 (6,2-18,5)	2	47,8 30,2-64,2	47,9 26,4-76,6	56,7 25,4-51,9
IFN-γ	1	45,2 32,4-58,3	40,7 13,8-42,7	46,3 32,4-58,3
N=25,6 (10,4-38,9)	2	67,9 53,4-98,6	34,81 12,9-43,0	42,3 10,9-46,4
IL-4/IFN-γ	1	1,0 0,7-1,3	1,5 1,2-1,7	0,5 0,4-1,0
2	0,7 0,5-1,4	2,5 2,2-3,6	1,91,4-2,3
IL-10/IFN-γ	1	0,9 0,7-1,3	1,4 0,8-1,9	1,2 0,9-1,5
2	0,7 0,5-1,2	1,4 0,9-2,0	1,4 1,0-1,9
↑ - сравниваемые показатели статистически значимо выше; ↓ - показатели статистически значимо ниже по отношению к группе детей без фоновых заболеваний ^∗ - статистическая достоверность между 1 и 2 исследованиями; Me(Q1-Q2)- медиана/интерквартильный размах N норма у здоровых

Прогностически информативным показателем, характеризующим поляризацию иммунного ответа с Тх-1 на Тх-2, является IL-10.

При коэффициенте IL-4/IFN-γ=1,5 при БА и 0,5 при MB в первые дни заболевания гриппом с повышением в динамике не более чем в 2 раза до 2,5 и 1,9 и соответственно, даже при тяжелых формах гриппа обострения данных нозологии не наблюдалось.

Коэффициент IL-10/IFN-γ не больше 2 у пациентов без обострения ХНЗЛ и у детей без фоновых заболеваний не изменялся, как в начале заболевания, так и в динамике, что свидетельствовало о возможности адекватного иммунного реагирования.

Грипп с обострением ХНЗЛ: изначально высокий уровень IL-4 с достоверно значимым нарастанием в динамике отмечался у пациентов на фоне бронхиальной астмы 67,4 (26,3-82,3) - 139,5 (89,7-158,6), р<0,05, что подтверждает наличие сенсибилизации и гиперреактивности бронхов и характеризует реакцию иммунной системы, как «поздно стартующую», по сравнению с MB, у которых нарастание этих показателей происходило в меньшей степени 64,6 (37,0 - 70,0).

Достоверно значимое повышение IL-10 в динамике у больных с MB 55,2(42,4-75,6) - 110,4(91,2-154,3), р<0,05.

Снижение уровня IFN-γ в динамике как при сопутствующей БА 40,7(13,8-42,7)-23,4(12,2-42,1), так и при MB 46,3(28,4-55,1) - 19,8(10,1-34,6), р<0,05, являлось предрасполагающим фактором к затяжному процессу.

Увеличение коэффициента IL-4/IFN-γ в динамике к третьему дню заболевания как минимум в 5-6 раз позволяло считать грипп триггером обострения ХНЗЛ.

Аналогичная динамика прослеживалась при расчете коэффициента IL-10/IFN-γ, который увеличивался как минимум в 4-5 раз, то есть при более выраженном дисбалансе цитокиновых реакций (табл.3).

При наличии подобной динамики данных коэффициентов у детей без фоновой патологии можно прогнозировать возможность развития осложнений при гриппе.

Клиническим проявлением наблюдаемого дисбаланса была продолжительная интоксикация в сочетании с бронхообструктивным синдромом, от степени выраженности которых зависела и тяжесть инфекционного процесса.

Таблица 3
Уровень цитокинов в сыворотке крови у пациентов с гриппом (с обострением ХНЗЛ)
Цитокины пг/мл	Порядок исследова ния	Без фоновых заболеваний	Бронхиальная астма	Муковисцидоз
IL-4	1	36,7 30,0-53,2	67,4↑26,3-89,3	64,6↑47,0-70,3
N=22,4 (12,5-34,2)	2	44,5 36,2-65,7	139,5∗↑89,7-158,6	94,0↑∗ 57,0-107,4
IL-10	1	42,1 32,4-55,6	56,3 25,4-61,9	55,2 42,4-75,6
N=12,3 (6,2-18,5)	2	57,0 42,3-72,4	72,3 45,3-98,6	110,4∗ 91,2-154,3
IFN-γ	1	36,922,4-48,9	40,7 13,8-42,7	46,3 28,4-55,1
N=25,6 (10,4-38,9)	2	42,9 33,2-59,7	23,4∗ 12,2-42,1	19,8∗ 10,1-34,6
IL-4/IFN-γ	1	1,0 0,8-1,4	1,5 1,3-1,7	1,4 1,2-1,9
2	1,2 0,7-1,6	6,3 5,9-7,8	4,8 4,5-5,9
IL-10/IFN-γ	1	1,3 0,8-1,9	1,4 1,1-1,7	1,1 0,9-1,5
2	1,4 1,1-2,1	3,1 2,8-4,2	5,6 4,8-6,4
↑ - сравниваемые показатели статистически значимо выше;
↓ - показатели статистически значимо ниже по отношению к группе детей без фоновых заболеваний
∗ - статистическая достоверность между 1 и 2 исследованиями;
Me(Q1-Q2)- медиана/интерквартильный размах N норма у здоровых

Таким образом, наряду с общими изменениями в организме при выраженном токсикозе, обусловленном гриппозной инфекцией, у пациентов с наличием ХНЗЛ отмечались характерные изменения цитокинового профиля, которые могли, как усугублять течение гриппа, так и не оказывать существенного влияния на прогрессирование сопутствующего хронического заболевания.

Несмотря на снижение обструкции, гиперреактивность бронхов сохранялась, на что указывает резкое нарастание IL-4, что при условии низкого интерферонообразования (IFN-γ) позволяло считать грипп этиологическим и патогенетическим фактором обострения бронхиальной астмы.

Данный способ прогнозирования являлся чувствительным и специфичным (табл.4).

Таблица 4
Диагностическая ценность прогнозирования с учетом
Показатели метода	Диагностическая ценность прогностических критериев	Всего
Чувствительность	88,2% ("+" у 30 с обострением БА)	100% (34)
Специфичность	77,8% ("-" у 14 без обострения БА)	100%(18)
Чувствительность	86,7% ("+" у 26 с обострением MB)	100% (30)
Специфичность	80,0% ("-" у 12 без обострения MB)	100%(15)

Таким образом, полученные данные позволяют своевременно прогнозировать варианты течения гриппа у детей с ХНЗЛ и обеспечить рациональные подходы к терапии с индивидуальным назначением лекарственных средств, позволяющих предупредить как обострение сопутствующей патологии, так и осложнения гриппа.

Изобретение реализуется следующим образом.

Пример 1. Больной А., 4 г. 5 мес., (в анамнезе атопическая бронхиальная астма) поступил в инфекционно-боксовое отделение в первые сутки заболевания. Жалобы на температуру до 39,5°С, выраженный интоксикационный синдром (адинамия, снижение аппетита), боль в горле, слизисто-серозный ринит, сухой лающий кашель. По данным иммунофлуоресцентного исследования зарегистрирован грипп A(H1N1).

При исследовании показателей цитокинов в первый день госпитализации определены уровни IL-4 - 65,4 пг/мл, IL-10 - 52,3 пг/мл, IFN-y - 46,2 пг/мл и рассчитано соотношение IL-4/IFN-γ=1,4; IL-10/IFN-γ=1,1. На третий день в динамике существенного изменения данных коэффициентов не наблюдалось (IL-4 - 68,9 пг/мл, IL-10 - 57,8 пг/мл, IFN-γ - 44,9 пг/мл и рассчитано соотношение IL-4/IFN-γ=1,5; IL-10/IFN-y=1,3), что позволило прогнозировать гладкое течение гриппа без обострения основного заболевания и позволяло использовать только противовирусные средства.

Пример 2. Больная Д., 8 лет (в анамнезе атопическая бронхиальная астма), поступила в первые сутки с выраженным симптомокомплексом гриппа (температура 40,0°С, головная боль, миалгия, артралгия, боль в горле). По данным иммунофлуоресцентного исследования зарегистрирован грипп A(H3N2).

При исследовании показателей цитокинов при поступлении определены уровни IL-4 - 65,3 пг/мл, IL-10 - 58,5 пг/мл, IFN-γ - 45,2 пг/мл и рассчитано соотношение IL-4/IFN-γ=1,4; IL-10/IFN-γ=l,3. В динамике уровни IL-4 и IL-10 повысились до 152,1 пг/мл и 113,5 пг/мл соответственно, сопровождаясь снижением IFN-γ до 20,5 пг/мл. Получены коэффициенты IL-4/IFN-γ=7,4 и IL-10/IFN-γ=5,5, т.е. увеличение в 5,3 и 4,2 раза, соответственно. Данный факт позволил считать грипп триггером обострения бронхиальной астмы, что клинически выражалось в развитии вирусиндуцированной бронхообструкции, появлении экспираторной одышки, разнокалиберных хрипов в легких без четкой локализации, дыхательная недостаточность 1 степени, на фоне температуры 38,0°С. На рентгенограмме легких инфильтрации не выявлено. Назначена как противовирусная, так и ингаляционная терапия, с применением гормонов с последующим назначением иммунокорригирующих препаратов.

Пример 3. Больной К., 1 г. 3 мес., поступил на пульмонологическое отделение на плановое лечение муковисцидоза (смешанная форма, стадия ремиссии). В эпидемический период на 7-ой день нахождения на отделении поднялась температура до 38,5°С, выраженный интоксикационный синдром (отказ от еды, однократные судороги на высоте температуры, рвота), сухой лающий кашель. По данным иммунофлуоресцентного исследования зарегистрирован грипп A(H1N1)pdm 2009.

При исследовании показателей цитокинов в первый день гриппозной инфекции определены уровни IL-4 - 46,2 пг/мл, IL-10 - 50,6 пг/мл, IFN-γ - 45,5 пг/мл и рассчитано соотношение IL-4/IFN-γ=1,0; IL-10/IFN-γ=l,l. На третий день в динамике существенного изменения данных коэффициентов не наблюдалось (IL-4 - 55,4 пг/мл, IL-10 - 67,2 пг/мл, IFN-γ - 40,2 пг/мл и рассчитано соотношение IL-4/IFN-γ=1,4; IL-10/IFN-y=l,7), что обусловливало гладкое течение гриппа без обострения основного заболевания и позволяло использовать только противовирусные препараты.

Пример 4. Больная П., 2 г., (в анамнезе смешанная форма муковисцидоза) поступила на второй день заболевания ОРВИ, с жалобами на температуру 37,8-38,0°С, приступообразный кашель, насморк, носовое кровотечение. По данным иммунофлуоресцентного исследования зарегистрирован грипп В.

При исследовании показателей цитокинов при поступлении определены уровни IL-4 - 56,3 пг/мл, IL-10 - 63,4 пг/мл, IFN-γ - 40,1 пг/мл и рассчитано соотношение IL-4/IFN-γ=1,4; IL-10/IFN-γ=1,6. В динамике уровни IL-4 и IL-10 повысились до 115,2 пг/мл и, 107,2 пг/мл соответственно, сопровождаясь существенным снижением IFN-y до 16,5 пг/мл. Полученное соотношение IL-4/IFN-γ=5,8; IL-10/IFN-γ=6,5, (увеличение коэффициентов в 7 и 4 раза соответственно), что являлось прогностическим критерием обострения муковисцидоза или осложненного течения гриппозной инфекции. Клинически наблюдалось появление дыхательной недостаточности 1 степени, усиление малопродуктивного кашля, продолжительное сохранение лихорадочной реакции (38,2°С). Изменения на рентгенограмме соответствовали поражению нижней доли левого легкого, что расценено как осложнение гриппа и обострение хронического заболевания, назначены специфическая антибактериальная и иммуномодулирующая терапии.

Способ прогнозирования обострения бронхиальной астмы и/или муковисцидоза при гриппе у детей путем определения прогностических коэффициентов, полученных расчетом соотношения показателей противовоспалительных интерлейкинов к интерферону-гамма, отличающийся тем, что в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа в первые и третьи сутки заболевания определяют уровни IL-4, IL-10 и IFN-γ, рассчитывают два прогностических коэффициента путем деления показателей IL-4 и IL-10 на величину интерферона-гамма, и при нарастании коэффициентов на третьи сутки IL-4/IFN-γ как минимум в 5-6 раз, a IL-10/IFN-γ как минимум в 4-5 раза, на фоне гриппа прогнозируют обострение бронхиальной астмы и/или муковисцидоза.

Изобретение относится к медицине, а именно, к области биохимических исследований в нефрологии и может быть использовано для диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ).

Способ диагностики онкологических заболеваний и иммуноферментный набор для его осуществления // 2522231

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний.

Способ диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы // 2522223

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии и ортопедии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы.

Способ иммунологического анализа белка cxcl1 человека // 2521669

Изобретение относится к биохимии. Описан способ иммунологического анализа белка CXCL1 человека.

Способ прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом // 2521372

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом.

Способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности // 2521367

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и касается способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности.

Способ ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников // 2521331

Изобретение относится к медицине, а именно к способу ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников. Сущность способа состоит в том, что у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников и неуточненной олигоменореей определяют методом ИФА в сыворотке крови уровень неоптерина.

Способ получения референс-панели образцов сывороток, предназначенной для оценки специфичности результатов серологической диагностики социально значимых заболеваний // 2521232

Изобретение относится к медицине и касается способа получения референс-панели образцов сывороток, предназначенной для оценки специфичности результатов серологической диагностики социально значимых заболеваний, включающего: исследование образцов доноров и пациентов на наличие инфекционного материала, отбор для отрицательной части референс-панели образцов, не содержащих антитела к вирусу гепатита С (ВГС), поверхностного антигена HBsAg вируса гепатита В (ВГВ), раннего белка р24 и антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), а также антитела к Treponema pallidum, отбор для положительной части референс-панели образцов, содержащих антитела к ВИЧ, ВГС, HBsAg и Treponema pallidum и введение в отобранные образцы стабилизирующего состава.

Способ получения противоопухолевого препарата, предназначенного для лечения солидных опухолей // 2521193

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно способу получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей. Способ получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей, заключающийся в том, что производят отбор первоначального опухолевого материала, смешение и гомогенизацию в буферном растворе, неоднократное центрифугирование с отбором образующего осадка, осадок суспендируют в кислом буфере, перемешивают, нейтрализуют, центрифугируют, супернатат собирают, осуществляют обогащение и очистку полученного супернатата с помощью комбинации солевого осаждения и хроматографии на иммобилизованном протеине А или G, полученный раствор пропускают через колонки с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, получившиеся антитела подвергают ферментативной обработке для получения Fab- или F(ab)2-фрагментов, которыми иммунизируют животных, получают иммунные антисыворотки, выделяют из них суммарную фракцию иммуноглобулинов, пропускают ее через колонки, с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, прошедший через колонки раствор подвергают иммуноаффинной хроматографии на колонках с иммобилизованными иммуноглобулинами, полученными ранее на этапе очистки и обогащения, целевые продукты, специфически связываемые последними видами колонок, элюируют раствором, диссоциирующим комплексы антиген-антитело, концентрируют, фильтруют через антимикробные фильтры, смешивают с адьювантом.

Способ прогнозирования развития осложненного системного воспалительного ответа у пациентов с инфекционным эндокардитом // 2520753

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для прогнозирования развития системного воспалительного ответа у больных с инфекционным эндокардитом.

Способ прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом с с генотипом 1b // 2522500

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и может использоваться для прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом C с генотипом 1b. Для этого определяют относительные количества содержания субпопуляций лимфоцитов крови и рассчитывают прогностический показатель, при этом подсчет процента субпопуляций лимфоцитов осуществляют методом проточной цитофлуориметрии. При значении показателя ПП<350 прогнозируют достижение быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию ХГС, при значении показателя ПП>350 прогнозируют отсутствие быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию хронического гепатита C с генотипом вируса 1b. Использование данного способа позволяет получить точный прогноз быстрого вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом C с генотипом вируса 1b на противовирусную терапию 2 пр., 1 ил.

Способ выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора hnf4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека // 2522859

Изобретение относится к медицине и касается способа выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора HNF4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека. Способ представляет собой иммуногистохимический способ исследования с использованием моноклональных антител к группам изоформ HNF4α и характеризуется тем, что для выявления антигенов используют двухступенчатую высокочувствительную полимерную пероксидазную систему. Демаскировку осуществляют в цитратном буфере при рН 6,0 и t=95°, при инкубации с первичными антителами используют высокое разведение антител HNF4αP2 и HNF4αP1 - 1,5 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно. Изобретение обеспечивает высокую специфичность и чувствительность способа, высокую точность оценки интенсивности окрашивания ядер опухолевых клеток, оценку степени дифференцировки опухолевых клеток и их злокачественности по уровню экспрессии групп изоформ HNF4α, сокращение времени исследования до 4 часов. 3 пр., 4 ил.

Способ оценки риска развития канцерогенеза шейки матки у женщин, инфицированных вирусами папилломы // 2522908

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, гинекологии, биофизике, и касается способа оценки риска развития папилломавирус-ассоциированного канцерогенеза шейки матки. Сущность способа: в тканях биоптата шейки матки, взятых при кольпоскопическом исследовании, исследуют тип вируса папилломы человека (ВПЧ), показатели апоптоза (sFAS, TRAIL), генетических особенностей экспрессии генов, регулирующих процессы апоптоза, а также процессы радикалообразования (активность пиелопероксидазы, уровень нитрат-нитритов, общая антиоксидантная емкость ткани по реакции Фентона). Рассчитывают суммирующий коэффициент риска развития канцерогенеза шейки матки по формуле. Если суммарный коэффициент K менее 3, то прогнозируют низкий уровень риска канцерогенеза, если коэффициент K равен или более 3, то уровень риска канцерогенеза прогнозируют высокий. Изобретение обеспечивает возможность применения данного метода до формирования патологических процессов в тканях, что позволяет врачам назначить профилактический курс и предотвратить развитие РШМ при выявленной предрасположенности или при наличии одного из факторов риска. Также возможно применение данного метода у пациентов с выявленной патологией шейки матки с целью прогноза заболевания и мониторинга эффективности проводимой терапии. 2 пр.

Комплексный способ определения циркулирующих опухолевых клеток в крови больных раком молочной железы // 2522923

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.

Однодоменное мини-антитело aher2/askbr3-1, специфически связывающее рецептор эпидермального фактора роста her2/erbb2/neu и способное через это взаимодействие проникать внутрь клетки-мишени (интернализоваться), способ получения данного антитела и способ детекции белка her2/erbb2/neu и клеток, экспрессирующих этот белок в повышенном количестве, с помощью мини-антитела aher2/askbr3-1 // 2522929

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено однодоменное мини-антитело, специфически связывающее белок-рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu человека, полученное при иммунизации двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток SKBR3, и охарактеризованное аминокислотной последовательностью. Также рассмотрен способ детекции белка HER2/ERBB2/neu и экспрессирующих его клеток. Антитело по настоящему изобретению способно проникать внутрь клетки-мишени, на поверхности которой экспонирован HER2/ERBB2/neu, и может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии заболеваний, связанных с повышенной экспрессией HER2/ERBB2/neu. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.

Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа // 2523393

Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа. В основе метода лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы. Интенсивность окраски метки, связавшейся в аналитической зоне, детектируется визуально. Предложенная система предназначена для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител или антигенов. Отличительной особенностью предлагаемого способа проведения иммунохроматографического анализа является то, что мультимембранный композит тест-полоски содержит дополнительную мембрану с нанесенным на нее веществом, медленно растворяющимся в воде, например бычьим сывороточным альбумином (БСА), которая прикрепляется к тест-полоске сразу за мембраной с нанесенным коллоидным конъюгатом. Фронт жидкой пробы, преодолевая мембрану с коллоидным золотом, конъюгированным с реагентом для связывания аналита, останавливается, попадая на мембрану с БСА, до тех пор, пока БСА не растворится. В течение этого времени проба инкубируется с коллоидным конъюгатом, что приближает реакцию связывания аналита к положению равновесия и, таким образом, приводит к снижению предела обнаружения анализа. 2 ил., 1 пр.

Способ прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в программе экстракорпорального оплодотворения // 2523401

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в результате лечения методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сущность способа заключается в том, что перед программой ЭКО у пациентки в лютеиновую фазу цикла проводят биопсию эндометрия и определяют относительное содержание CD95+макрофагов в лейкоцитарном инфильтрате эндометрия. При значении относительного содержания CD95+макрофагов, равном 48,8% или более, прогнозируют наступление беременности, а при значении менее 48,8% - отсутствие наступления беременности. Заявляемый способ расширяет арсенал прогностических средств, повышает точность, чувствительность и специфичность прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием перед проведением программы ЭКО. Использование способа позволит определять дальнейшую тактику ведения пациентки, своевременно назначить дополнительные лечебные мероприятия. 1 табл., 3 пр.,

Способ диагностики ревматоидного артирита по наличию антител к модифицированному цинтруллинированному виментину (anti-mcv) в ротовой жидкости // 2523413

Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита. Способ диагностики по настоящему изобретению заключается в определении содержания Anti-MCV в ротовой жидкости (в смешанной слюне), использовании для обработки полученных показателей Anti-MCV в ротовой жидкости математического выражения: F=0,17×Anti-MCV-0,2537, диагностировании при положительном значении F наличия ревматоидного артрита, при отрицательном значении функции F ревматоидный артрит сомнителен. Заявленное изобретение предлагает малоинвазивный и достоверный способ диагностики ревматоидного артрита.

Способ оценки нарушений клеточного иммунитета при воздействии фенола // 2523418

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия фенола, поступающего из среды обитания, на здоровье населения. Для оценки нарушений клеточного иммунитета при воздействии фенола производят отбор пробы крови и ее исследование с использованием опытного и контрольного образцов с предварительным введением в опытный образец токсиканта - фенола в концентрации, соответствующей его региональному фоновому уровню. В качестве критериальных показателей в способе используют индекс специфической чувствительности клеток для цитокина фактора некроза опухолей ФНО-α и индекс специфической чувствительности клеток для цитокина Интерлейкина-10 ИЛ-10, которые определяют следующим образом: опытную и контрольную пробы крови вносят во флакон со стерильной питательной средой ДМЕМ с гепарином и гентамицином в объемном соотношении 1:4 соответственно (в преимущественном варианте содержание в стерильной питательной среде ДМЕМ гепарина составляет 2,5 Ед/мл и гентамицина - 100 мкг/мл), осуществляют при 37°C в течение суток инкубацию этих проб, а затем центрифугирование в течение 3 минут при 1000 об/мин и в отобранном супернатанте опытной пробы определяют уровень фенол-индуцированной продукции цитокинов, а именно уровень ИПЦИЛ-10 фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень ИПЦФНО-α фенол-индуцированной продукции цитокина - фактора некроза опухолей ФНО-α, а в отобранном супернатанте контрольной пробы определяют уровень спонтанной продукции цитокинов, а именно уровень СПЦИЛ-10 спонтанной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень СПЦФНО-α спонтанной продукции цитокина ФНО-α, далее рассчитывают индекс ИСЧфно-α специфической чувствительности клеток для цитокина ФНО-α, а также рассчитывают индекс ИСЧИЛ-10 специфической чувствительности клеток для цитокина ИЛ-10 по следующим формулам: ИСЧФНО-α=(ИПЦФНО-α-СПЦФНО-α):СПЦФНО-α, ИСЧИЛ-10=(ИПЦИЛ-10-СПЦИЛ-10):СПЦИЛ-10, где ИПЦИЛ-10 - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10; ИПЦФНО-α - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ФНО-α; СПЦИЛ-10 - уровень спонтанной продукции цитокина ИЛ-10; СПЦФНО-α - уровень спонтанной продукции цитокина ФНО-α; и при выполнении одновременного условия ИСЧФНО-α более 10 и ИСЧИЛ-10 более 2 судят о нарушении клеточного иммунитета организма под воздействием фенола. Изобретение обеспечивает повышение достоверности установления оценки влияния фенола на нарушение клеточного иммунитета организма человека. 1 з.п. ф-лы, 8 табл.

Технология получения костного мозга от доноров-трупов с бьющимся и не бьющимся сердцем // 2523563

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для получения костного мозга (КМ) от доноров-трупов. Для этого пунктируют крылья подвздошных костей в передней и задней трети крыльев, устанавливая в каждое по два троакара. Сбор КМ выполняют методом простой аспирации, аспирации-промыванием или их комбинированием при разряжении 0,6 Атм при помощи устройства. Устройство для заготовки КМ включает одноразовую многоканальную закрытую систему, модуль аспирации-накопления и модуль перфузии. Группа изобретений также относится к способу оценки заготовленного костного мозга. Использование данного способа получения костного мозга (КМ) обеспечивает заготовку стерильного богатого жизнеспособными мультипотентными мезенхимальными стромальными и гемопоэтическими прогенеторными клетками КМ, при этом результат достигается за счет автоматизации миелоаспирации, путем заготовки биоматериала специальным разработанным устройством для сбора КМ. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил., 1табл.