Способ оценки риска развития канцерогенеза шейки матки у женщин, инфицированных вирусами папилломы


 


Владельцы патента RU 2522908:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х.М. Бербекова (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, гинекологии, биофизике, и касается способа оценки риска развития папилломавирус-ассоциированного канцерогенеза шейки матки. Сущность способа: в тканях биоптата шейки матки, взятых при кольпоскопическом исследовании, исследуют тип вируса папилломы человека (ВПЧ), показатели апоптоза (sFAS, TRAIL), генетических особенностей экспрессии генов, регулирующих процессы апоптоза, а также процессы радикалообразования (активность пиелопероксидазы, уровень нитрат-нитритов, общая антиоксидантная емкость ткани по реакции Фентона). Рассчитывают суммирующий коэффициент риска развития канцерогенеза шейки матки по формуле. Если суммарный коэффициент K менее 3, то прогнозируют низкий уровень риска канцерогенеза, если коэффициент K равен или более 3, то уровень риска канцерогенеза прогнозируют высокий. Изобретение обеспечивает возможность применения данного метода до формирования патологических процессов в тканях, что позволяет врачам назначить профилактический курс и предотвратить развитие РШМ при выявленной предрасположенности или при наличии одного из факторов риска. Также возможно применение данного метода у пациентов с выявленной патологией шейки матки с целью прогноза заболевания и мониторинга эффективности проводимой терапии. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, гинекологии, биофизике, и касается способа оценки риска развития папилломавирус-ассоциированного канцерогенеза шейки матки.

Несмотря на широкое применение современных методов диагностики, проблема смертности от рака шейки матки (РШМ) остается актуальной [Роговская С.И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки: руководство для практикующего врача. - М.: Гэотар-Медиа, 2005; Дмитриев Г.А., Биткина О.А. Папилломавирусная инфекция. - М.: Медицинская книга, 2006. -80 с]. Заболеваемость раком шейки матки растет и занимает второе место по распространенности среди онкологических заболеваний в мире и первое место среди причин женской смертности от рака в развивающихся странах. По данным Всемирной организации здравоохранения, в мире ежегодно регистрируется около 500000 новых случаев и более 250000 смертей от данного заболевания. Средний возраст больных по данным отечественной и зарубежной литературы колеблется от 38 до 50 лет. Как отмечают большинство исследователей, выявляемость начальных стадий рака шейки матки составляет от 42% до 58%. В возрасте 35-40 лет рак шейки матки является одной из основных причин смерти от злокачественных опухолей [Эпидемиологическая ситуация по папилломавирусной инфекции в США (выдержки из рекомендаций Консультативного совета по вакцинальной практике США, опубликованных в MMWR №56, март 2007 г.) // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2007. №2. С.30-35]. За последние десятилетия это онкологическое заболевание существенно помолодело, и его пик приходится на активный репродуктивный возраст фертильных женщин. По экспертным оценкам стоимость комплексного лечения одного случая РШМ составляет около 1,1 млн руб. [Лялина Л.В. Эпидемиологические закономерности злокачественных новообразований, ассоциированных с хроническими вирусными инфекциями, и развитие системы эпидемиологического надзора: Автореф. дис. докт. мед. наук. - СПб., 2005-45 с.; Киселев В.И., Киселев О.И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки. - М., 2003. - 90 с.; Сафронникова Н.Р. Мерабишвили В.М. Профилактика вирусзависимых онкологических заболеваний. Диагностика и лечение папилломавирусной инфекции: пособие для врачей. - СПб., 2007. -34 с]. В целом проблема ранней диагностики РШМ и оценки риска развития канцерогенеза шейки матки далека от разрешения.

В настоящее время результаты диагностики и прогнозирования течения папилломавирус-ассоциированной трансформации ткани шейки матки на сегодняшний день не удовлетворяют ни врача, ни пациента. Существующие на данные момент способы оценки риска развития канцерогенеза шейки матки относятся к двум группам:

- Кольпоскопическое исследование, позволяющее морфологически оценить степень изменения тканей. При данном методе возможна достаточно поздняя констатация трансформации тканей шейки матки [Винокуров В.Л. Рак шейки матки, тела матки и яичников: итоги и перспективы исследований в ЦНИРРИ Минздрава РФ // Вопросы онкологии. - 2003. - Т. 49, №5. - С.656-662; Гилязутдинова З.Ш., Михайлова М.К. Онкогинекология // Руководство для врачей. - М.: МЕДпресс, 2000. - С.384; Козаченко В.П. Современное состояние проблемы рака шейки матки / Заболевания шейки матки, влагалища и вульвы / Под ред. В.Н. Прилепской. - М.: МЕДпресс, 2000. - С.133-139].

- Определение инфицированности вирусами папилломы человека (ВПЧ) и типов ВПЧ (низкоонкогенные, среднеонкогенные и высокоонкогенные типы) методом ПЦР. Однако у части инфицированных женщин, в том числе высокоонкогенными типами вирусов папилломы человека, инфекционное заболевание проходит латентно и со временем вирус элиминируется из организма. В то же время доказано, что ассоциация нескольких типов ВПЧ, включающая не только высокоонкогенные типы, но и другие типы ВПЧ может способствовать более быстрому развитию онкогенеза шейки матки [Киселев В.И., Киселев О.И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки. - М., 2003. - 90 с.].

Известен способ, учитывающий возможность элиминации трансформированных клеток за счет апоптоза, по патенту РФ №2208789, описывающий прогнозирование клинического течения увеальной меланомы на основе изучения активности маркера апоптоза р53, автор Лихванцева В.Г. Данный способ предлагает учет данного маркера в прогнозе первичной злокачественной опухоли, занимающей первое место по частоте среди внутриглазных новообразований.

Известен способ прогнозирования клинического течения увеальной меланомы по патенту РФ №2208790 автор Лихванцева В.Г., который основан на исследовании на основе активности маркера апоптоза Вах.

Недостатками вышеназванных способов прогнозирования течения онкологического заболевания является оценка отдельных показателей, при этом отсутствует системный анализ происходящих в организме процессов, влияющих на известные в данное время патогенетические звенья канцерогенеза. В вышеназванных патентах не предложены способы оценки риска развития канцерогенеза, данные методы касаются только возможностей прогнозирования течения уже сформировавшейся опухоли. Кроме того, способы прогнозирования клинического течения онкологического заболевания относятся к другой локализации патологического процесса и неприменимы в области гинекологии.

Задача изобретения состоит в ранней оценке риска развития канцерогенеза шейки матки у женщин, инфицированных вирусами папилломы.

Сущность изобретения состоит в ранней оценке степени риска канцерогенеза шейки матки у женщин с выявленной методами ПЦР инфекцией, вызванной семейством вирусов папилломы.

Существенным отличием предлагаемого способа оценки степени риска развития канцерогенеза шейки матки является системный подход, учитывающий разные звенья патогенеза рака, в том числе тип вируса, интенсивность радикал-зависимого повреждения тканей шейки матки в процессе хронической инфекции высокого онкогенного риска и способности организма к элиминации раковых и вирус-инфицированных клеток за счет апоптоза. Преимуществом от всех известных аналогов является также возможность применения данного метода до формирования патологических процессов в тканях, что дает возможность врачам назначить профилактический курс и предотвратить развитие РШМ при выявленной предрасположенности или при наличии одного из факторов риска.

Оценка риска канцерогенеза шейки матки проводится на основании исследования типов ВПЧ, показателей апоптоза в тканях биопата шейки матки (sFAS, TRAIL), генетических особенностей экспрессии генов, регулирующих процессы апоптоза (sFAS, TRAIL), а также процессов радикалообразования (активность миелопероксидазы, уровень нитрат-нитритов, общая антиоксидантная емкость ткани по реакции Фентона), измеряемых в тканях биоптата, взятых при кольпоскопии из шейки матки.

Сущность изобретения состоит в систематизации и учете различных факторов риска развития канцерогенеза шейки матки. При этом рассчитывают суммарный коэффициент риска по формуле K=K1+K2+K3, где

K1 - коэффициент инфицированности вирусами папилломы человека. K1=0 - в случае отсутствия ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18 типы ВПЧ) при ПНР исследовании цервикального эпителия.

K1=1 - в случае обнаружения ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18 типы ВПЧ) при ПЦР исследовании цервикального эпителия.

К2 - коэффициент радикального повреждения тканей при ВПЧ, вычисляется следующим образом:

K2=k2a+k2b+k2c, где

К показатель активности миелопероксидазы в тканях, взятых при кольпоскопическом исследовании:

К=0 - в случае выявления значений меньше 0,054±0,005 ммоль/грамм белка;

К=1 - в случае выявления значений >0,054±0,005 ммоль/грамм белка.

Получение гомогенатов. Образец ткани (биоптат) тщательно отмывали от эритроцитов (в 0,9% NaCl). К образцу весом 1-3 мг добавляли 600 мкл К-фосфатного буфера и растирали в ручном гомогенизаторе Поттера до получение однородной суспензии. Гомогенат центрифугировали в течение 30 минут при 900g (3000 об/мин, центрифуга ОПН-3 без охлаждения) и для дальнейших анализов отбирали прозрачный супернатант.

Оценка содержания белка по Лоури. Для оценки содержания белка в супернатанте гомогената использовали метод Лоури, в качестве калибратора использовали бычий сывороточный альбумин (БСА, Sigma). К 20 мкл образца добавляли 180 мкл воды, инкубировали в течение 10 минут с 1 мл реактива Лоури, а затем добавляли 100 мкл реактива Фолина (1:1). Через 40 минут измеряли поглощение пробы при 750 нм.

Оценка активности миелопероксидазы (МПО). Активность МПО оценивали в супернатантах гомогенатов на основании реакции с ортодианизидином. Аликвоты супертанатнов (50 мкл) смешивали с 50 мкл H2O и добавляли 100 мкл реакционной смеси, содержащей 100 мкг/мл о-дианизидина и 80 мкг/мл H2O2 в 0,1М натрий-цитратном буфере, рН 5,5. Пробы инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре и останавливали реакцию добавлением 1 мл 35%-ной ортофосфорной кислоты. Измеряли поглощение проб при 560 нм и рассчитывали активность МПО с использованием коэффициента экстинкции 20040 М-1см-1 [Andrews Р.С., Parens С, Krinsky N.I. Comparison of myeloperoxidase with respect to catalysis, regulation and bactericidal activity// Arch.Biochem.Biophys., 1984; 228: 439-442].

k2b - показатель активности оксид азот-зависимого окисления тканей;

k2b=0, в случае содержания нитратов и нитритов в гомогенатах тканей биоптатов<120,0±10,0 микромоль/г белка;

k2b=1, в случае содержания нитратов и нитритов в гомогенатах тканей биоптатов>120,0±10,0 микромоль/г белка.

Оценка содержания нитратов и нитритов. 80 мкл образца вносили в лунку 96-луночного планшета, затем вносили по 10 мкл раствора нитрат-редуктазы и кофактора и инкубировали смесь при комнатной температуре в течение 2 часов. По окончании инкубации в каждую лунку добавляли 50 мкл реактива Грисса (А), аккуратно перемешивали и через 5 минут вносили 50 мкл реактива Грисса (Б). Смесь перемешивали, оставляли на 10 минут при комнатной температуре и затем измеряли поглощение при 540 нм. Для расчета концентрации нитратов и нитритов использовали калибровочную кривую, полученную по той же схеме с использованием раствора нитрата. Для проведения измерений применяли набор "Nitrate/nitrite Assay Kit Colorimetric" Sigma (23479).

k2c - показатель общей антиоксидантной емкости ткани гомогената шейки матки;

k2c=0, в случае снижения хемилюминесценции (ХЛ) в реакции Фентона более (≥) чем на 50% при концентрации белка 1 мг/мл;

k2c=1, в случае снижения хемилюминесценции (ХЛ) в реакции Фентона менее чем на 50% при концентрации белка 1 мг/мл.

Оценка эффектов гомогенатов образцов в системе Фентона. Анализ проводили в кювете люминометра объемом 1 мл, в режиме постоянного перемешивания и непрерывной регистрации. В среду измерений (0,01М К-фосфатный буфер, рН 7,4, добавляли раствор FeS04 (17,7 мкМ), образец (20) и люминол (0,2 мМ). Реакцию Фентона инициировали внесением H2O2 (17,7 мкМ) через диспенсер и регистрировали интенсивность вспышки. Контролем служили пробы, не содержащие биологический образец.

K3 - коэффициент экспрессии генов апоптоза в тканях биопататов шейки матки (FAS, TRAIL), вычисляется следующим образом:

K3=k3a+k3b

k3a=0 - в случае выявления нормального показателя экспрессии FAS.

k3a=1 - в случае снижения уровня экспрессии FAS относительно уровня доноров

более чем на 25%.

k3b=0 - в случае выявления нормального показателя экспрессии TRAIL.

k3b=1 - в случае снижения уровня экспрессии TRAIL относительно уровня доноров более чем на 25%.

Оценку экспрессии генов апоптоза (sFAS, TRAIL) проводили методом количественного Real-time ПЦР по технологии TaqMan с использованием прибора ICycler IQ (BioRad), в соответствии с основными рекомендациями протокола EAC (European Anti Cancer Program, 2003). Оценка экспрессии проводилась в три этапа: на первом этапе проводили выделение РНК из тканей биоптата пациенток.

Требования к биоптатам. Для анализа экспрессии генов могли использоваться свежие или замороженные ткани. Размер ткани должен был быть 4-5 мм - для оптимальной заморозки и пропитывания (в случае необходимости) стабилизирующим раствором RNA-later (Ambion). Обработку RNA-later проводили сразу после взятия. Замороженный биоптат хранили при температуре -20°С не более 3 месяцев. Повторное замораживание было недопустимо.

Для выделения РНК из свежих или замороженных тканей использовали iPrepPureLink™ Total RNA Kit, основанный на методике P. Chomczynsky, N. Sacchi (метод кислой гуанидин-тиоцинат-фенол-хлороформ-экстракции). К 10 млг гомогената образца ткани добавляли 100 мкл лизирующего буфера, затем центрифугировали при 12 000g 5 минут при комнатной температуре. Супернатант переносили в iPrep™ Sample Tube и производили выделение РНК согласно инструкции к iPrepPureLink™ Total RNA Kit (Invitrogen, USA).

На втором этапе с помощью реакции обратной транскрипции синтезировали копии ДНК на матрице мРНК. Для синтеза кДНК использовали комплект реагентов «Реверта-L» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ). Для этого в пробирку с RT-mix вносили 5 мкл RT-G-mix-1, тщательно перемешивали на вортексе, осаждали капли с крышки кратковременным центрифугированием. К полученному раствору добавляли 6 мкл ревертазы (MMlv), пипетировали 5 раз и перемешивали на вортексе. Вносили в микропробирки по 10 мкл готовой реакционной смеси. Используя наконечники с аэрозольным барьером, добавляли по 10 мкл РНК-пробы в пробирки с реакционной смесью. Осторожно перемешивали пипетированием. Полученную в реакции обратной транскрипции кДНК для последующей постановки ПЦР разводили в 2 раза ДНК-буфером. Готовый препарат кДНК использовали либо сразу для ПЦР, либо замораживали и хранили при -68°С. Не допускали хранения необработанных образцов кДНК более 3 месяцев.

На третьем этапе проводили полимеразную цепную реакцию на амплификаторе. ПЦР-амплификация была выполнена в соответствии с методикой, предложенной Gelder. В работе были использованы пары праймеров генов апоптоза sFAS, TRAIL. В качестве контрольного (housekeeping) гена использовали ген β2 микроглобулина ф2М). Экспрессия генов sFAS, TRAIL и β2 микроглобулина определялась в виде числа копий транскрипта. Количество копий в исследуемых образцах определяли по отношению к стандартной калибровочной кривой, построение которой производилось с помощью прибора Real-time ПЦР на основании серии 10-кратных разведений плазмиды с известным количеством копий в 1 мкл. Уровень экспрессии исследуемых генов рассчитывали относительно контроля, используя 2-ΔΔCt, метод позволяет оценить во сколько раз изменяется экспрессия изучаемого гена в пораженной ткани по сравнению с непораженной тканью. ΔΔCt рассчитывали как ΔΔCt=ΔCt (пораженная ткань)- ΔCt (непораженная ткань), где каждое значение ΔCt=ΔCt (исследуемый ген)- ΔCt ф2 микроглобулин). Отрицательный контроль, необходимый для определения контаминации, содержал все компоненты для ПЦР кроме матрицы ДНК (ОКП). Положительный контроль, использованный для оценки эффективности работы реактивов, содержал все компоненты для ПЦР и контрольные ДНК-матрицы (ПКП).

На завершающем этапе проводили вычисление суммарного коэффициента риска развития канцерогенеза шейки матки: K=K1+K2+K3.

Если суммарный коэффициент K<3, то уровень риска канцерогенеза низкий, если K≥3, то уровень риска канцерогенеза высокий.

Способ позволяет определить степень риска развития канцерогенеза шейки матки у клинически здоровых женщин (но инфицированных ВПЧ), а также при выявленной патологии шейки матки с целью прогноза заболевания и мониторинга эффективности проводимой профилактики и терапии.

Предлагаемый способ прогнозирования риска канцерогенеза шейки матки у женщин, инфицированных вирусами папилломы человека, осуществляют следующим образом.

- При кольпоскопическом исследовании пациенток выявляют женщин с признаками вирусной инфекции и проводят гистологическое исследование биоптатов, а также отправляют материал на выявление ВПЧ-инфекции (с определением типа вируса).

- По данным ПЦР анализа с выявлением типа ВПЧ-инфекции вычисляют первую составляющую суммарного коэффициента риска: Ki=l при выявлении ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18 типы ВПЧ); Ki=0 при отсутствии ВПЧ 16,18 типов.

- Для вычисления коэффициента радикального повреждения тканей исследуют образцы тканей биоптатов. Биоптаты вручную гомогенизируют, определяют количество белка по Лоури и используют для исследования:

- активности миелопероксидазы (k2a-k2a=0 - в случае выявления значений <0,054±0,005 ммоль/грамм белка; k2a=1 - в случае выявления значений >0,054±0,005 ммоль/грамм белка);

- концентрации нитрат-нитритов в тканях (k2b=0, в случае содержания нитратов и нитритов в гомогенатах тканей биоптатов <120,0±10,0 микромоль/г белка; k2b=1, в случае содержания нитратов и нитритов в гомогенатах тканей биоптатов >120,0±10,0 микромоль/г белка).

- Определения общей антиоксидантной емкости ткани гомогената шейки матки (k2c=0, в случае снижения хемилюминесценции (ХЛ) в реакции Фентона более (>) чем на 50% при концентрации белка 1 мг/мл; k2c=1, в случае снижения хемилюминесценции (ХЛ) в реакции Фентона менее чем на 50% при концентрации белка 1 мг/мл).

- Вычисляют вторую составляющую суммарного риска K2=k2a+k2b+k2c, демонстрирующую активность радикальной нагрузки в тканях шейки матки.

- Проводят оценку экспрессии генов апоптоза sFAS и TRAIL в тканях биоптата шейки матки методом количественного Real-time ПЦР по технологии TaqMan с использованием прибора ICycler IQ (BioRad), в соответствии с основными рекомендациями протокола EAC (European Anti Cancer Program, 2003). По результатам вычисляют третью составляющую суммарного коэффициента риска - K3=k3a+k3b (k3a=0 - в случае выявления нормальный показателей экспрессии генов FAS, k3a=1 - в случае снижения уровня экспрессии FAS относительно уровня доноров более чем на 25%; k3b=0 - в случае выявления нормальный показателей экспрессии TRAIL, k3b=1 - в случае снижения уровня экспрессии TRAIL относительно уровня доноров более чем на 25%).

- Вычисляют суммарный коэффициент риска развития рака шейки матки у пациентки K=K1+K2+K3.

- При выявлении значений выше 3 пациентку выделяют в группу риска и назначают курс терапии ВПЧ инфекции и профилактики рака шейки матки.

Пример 1. Пациентка 35 лет. Диагноз - ВПЧ-инфекция 16, 18 типа. При кольпоскопическом исследовании выявлены изменения шейки матки (лейкоплакия). Проведено исследование радикальной нагрузки в ткани биоптата шейки матки и исследована экспрессия генов апоптоза (FAS, TRAIL). Суммарный коэффициент риска=5. Больная отнесена в группу высокого риска развития канцерогенеза. Назначены укороченные интервалы между визитами к врачу. Назначена противовирусная терапия и иммунотерапия.

Пример 2. Пациентка 38 лет. Диагноз - ВПЧ-инфекция 10, 13 типа. Проведено исследование радикальной нагрузки в ткани шейки матки и оценка экспрессии генов апоптоза (FAS, TRAIL). Суммарный коэффициент риска=2. Больная отнесена в группу низкого риска развития канцерогенеза. Больной предложены визиты к врачу 1 раз в год. Наблюдение на протяжении 8 лет не выявило патологий шейки матки.

Таким образом, предлагаемый способ оценки риска развития канцерогенеза шейки матки позволяет прогнозировать течение заболевания и своевременно назначать адекватное лечение.

Преимуществом от всех известных аналогов является возможность применения данного метода до формирования патологических процессов в тканях, что дает возможность врачам назначить профилактический курс и предотвратить развитие рака шейки матки при выявленной предрасположенности или при наличии факторов риска. Также возможно применение данного метода у пациентов с выявленной патологией шейки матки с целью прогноза заболевания и мониторинга эффективности проводимой терапии.

Способ прогнозирования риска развития канцерогенеза шейки матки у женщин, инфицированных вирусами папилломы, отличающийся тем, что в тканях биоптата шейки матки, взятых при кольпоскопическом исследовании, исследуют тип вируса папилломы человека (ВПЧ), показатели апоптоза (sFAS, TRAIL), генетических особенностей экспрессии генов, регулирующих процессы апоптоза, а также процессы радикалообразования (активность миелопероксидазы, уровень нитрат-нитритов, общая антиоксидантная емкость ткани по реакции Фентона), рассчитывают суммирующий коэффициент риска развития канцерогенеза шейки матки по формуле:
K=K1+K2+K3,
где K1 - коэффициент инфицированности ВПЧ,
K2 - коэффициент радикального повреждения тканей при ВПЧ,
K3 - коэффициент экспрессии генов апоптоза в тканях биоптатов шейки матки, при этом:
K1=0 в случае отсутствия ВПЧ высокого онкогенного риска при ПЦР исследовании цервикального эпителия, K1=1 в случае обнаружения ВПЧ высокого онкогенного риска при ПЦР исследовании цервикального эпителия;
K2=K2a=K2b=K2c,
где K2a - показатель активности миелопероксидазы в тканях, взятых при кольпоскопическом исследовании, причем K2a=0 в случае выявления значений меньше 0,054±0,005 ммоль/г белка; K2a=1 в случае выявления значений более 0,054±0,005 ммоль/г белка;
K2b - показатель активности оксид азотзависимого окисления тканей, причем K2b=0 в случае содержания нитратов и нитритов в гомогенатах тканей биоптатов менее 120,0±10,0 мкмоль/г белка, причем K2b=1 в случае содержания нитратов и нитритов в гомогенатах тканей биоптатов более 120,0±10,0 мкмоль/г белка;
K2c - показатель общей антиоксидантной емкости ткани гомогената шейки матки, причем K2c=0 в случае снижения хемилюминесценции (ХЛ) в реакции Фентона на 50% или более при концентрации белка 1 мг/мл, K2c=1 в случае снижения хемилюминесценции (ХЛ) в реакции Фентона менее чем на 50% при концентрации белка 1 мг/мл;
K3=K3a+K3b,
где K3a=0 в случае выявления нормального показателя экспрессии F AS, K3a=1 в случае снижения уровня экспрессии F AS относительно уровня доноров более чем на 25%;
K3b=0 в случае выявления нормального показателя экспрессии TRAIL, K3b=1 в случае снижения уровня экспрессии TRAIL относительно уровня доноров более чем на 25%;
если суммарный коэффициент K менее 3, то прогнозируют низкий уровень риска канцерогенеза, если коэффициент K равен или более 3, то уровень риска канцерогенеза прогнозируют высокий.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и касается способа выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора HNF4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и может использоваться для прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом C с генотипом 1b.
Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и пульмонологии, и может быть использовано для прогнозирования обострения бронхиальной астмы и муковисцидоза у детей при гриппе.

Изобретение относится к медицине, а именно, к области биохимических исследований в нефрологии и может быть использовано для диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ).

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний.

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии и ортопедии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ иммунологического анализа белка CXCL1 человека.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и касается способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников. Сущность способа состоит в том, что у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников и неуточненной олигоменореей определяют методом ИФА в сыворотке крови уровень неоптерина.

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено однодоменное мини-антитело, специфически связывающее белок-рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu человека, полученное при иммунизации двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток SKBR3, и охарактеризованное аминокислотной последовательностью. Также рассмотрен способ детекции белка HER2/ERBB2/neu и экспрессирующих его клеток. Антитело по настоящему изобретению способно проникать внутрь клетки-мишени, на поверхности которой экспонирован HER2/ERBB2/neu, и может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии заболеваний, связанных с повышенной экспрессией HER2/ERBB2/neu. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.

Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа. В основе метода лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы. Интенсивность окраски метки, связавшейся в аналитической зоне, детектируется визуально. Предложенная система предназначена для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител или антигенов. Отличительной особенностью предлагаемого способа проведения иммунохроматографического анализа является то, что мультимембранный композит тест-полоски содержит дополнительную мембрану с нанесенным на нее веществом, медленно растворяющимся в воде, например бычьим сывороточным альбумином (БСА), которая прикрепляется к тест-полоске сразу за мембраной с нанесенным коллоидным конъюгатом. Фронт жидкой пробы, преодолевая мембрану с коллоидным золотом, конъюгированным с реагентом для связывания аналита, останавливается, попадая на мембрану с БСА, до тех пор, пока БСА не растворится. В течение этого времени проба инкубируется с коллоидным конъюгатом, что приближает реакцию связывания аналита к положению равновесия и, таким образом, приводит к снижению предела обнаружения анализа. 2 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в результате лечения методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сущность способа заключается в том, что перед программой ЭКО у пациентки в лютеиновую фазу цикла проводят биопсию эндометрия и определяют относительное содержание CD95+макрофагов в лейкоцитарном инфильтрате эндометрия. При значении относительного содержания CD95+макрофагов, равном 48,8% или более, прогнозируют наступление беременности, а при значении менее 48,8% - отсутствие наступления беременности. Заявляемый способ расширяет арсенал прогностических средств, повышает точность, чувствительность и специфичность прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием перед проведением программы ЭКО. Использование способа позволит определять дальнейшую тактику ведения пациентки, своевременно назначить дополнительные лечебные мероприятия. 1 табл., 3 пр.,
Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита. Способ диагностики по настоящему изобретению заключается в определении содержания Anti-MCV в ротовой жидкости (в смешанной слюне), использовании для обработки полученных показателей Anti-MCV в ротовой жидкости математического выражения: F=0,17×Anti-MCV-0,2537, диагностировании при положительном значении F наличия ревматоидного артрита, при отрицательном значении функции F ревматоидный артрит сомнителен. Заявленное изобретение предлагает малоинвазивный и достоверный способ диагностики ревматоидного артрита.

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия фенола, поступающего из среды обитания, на здоровье населения. Для оценки нарушений клеточного иммунитета при воздействии фенола производят отбор пробы крови и ее исследование с использованием опытного и контрольного образцов с предварительным введением в опытный образец токсиканта - фенола в концентрации, соответствующей его региональному фоновому уровню. В качестве критериальных показателей в способе используют индекс специфической чувствительности клеток для цитокина фактора некроза опухолей ФНО-α и индекс специфической чувствительности клеток для цитокина Интерлейкина-10 ИЛ-10, которые определяют следующим образом: опытную и контрольную пробы крови вносят во флакон со стерильной питательной средой ДМЕМ с гепарином и гентамицином в объемном соотношении 1:4 соответственно (в преимущественном варианте содержание в стерильной питательной среде ДМЕМ гепарина составляет 2,5 Ед/мл и гентамицина - 100 мкг/мл), осуществляют при 37°C в течение суток инкубацию этих проб, а затем центрифугирование в течение 3 минут при 1000 об/мин и в отобранном супернатанте опытной пробы определяют уровень фенол-индуцированной продукции цитокинов, а именно уровень ИПЦИЛ-10 фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень ИПЦФНО-α фенол-индуцированной продукции цитокина - фактора некроза опухолей ФНО-α, а в отобранном супернатанте контрольной пробы определяют уровень спонтанной продукции цитокинов, а именно уровень СПЦИЛ-10 спонтанной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень СПЦФНО-α спонтанной продукции цитокина ФНО-α, далее рассчитывают индекс ИСЧфно-α специфической чувствительности клеток для цитокина ФНО-α, а также рассчитывают индекс ИСЧИЛ-10 специфической чувствительности клеток для цитокина ИЛ-10 по следующим формулам: ИСЧФНО-α=(ИПЦФНО-α-СПЦФНО-α):СПЦФНО-α, ИСЧИЛ-10=(ИПЦИЛ-10-СПЦИЛ-10):СПЦИЛ-10, где ИПЦИЛ-10 - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10; ИПЦФНО-α - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ФНО-α; СПЦИЛ-10 - уровень спонтанной продукции цитокина ИЛ-10; СПЦФНО-α - уровень спонтанной продукции цитокина ФНО-α; и при выполнении одновременного условия ИСЧФНО-α более 10 и ИСЧИЛ-10 более 2 судят о нарушении клеточного иммунитета организма под воздействием фенола. Изобретение обеспечивает повышение достоверности установления оценки влияния фенола на нарушение клеточного иммунитета организма человека. 1 з.п. ф-лы, 8 табл.

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для получения костного мозга (КМ) от доноров-трупов. Для этого пунктируют крылья подвздошных костей в передней и задней трети крыльев, устанавливая в каждое по два троакара. Сбор КМ выполняют методом простой аспирации, аспирации-промыванием или их комбинированием при разряжении 0,6 Атм при помощи устройства. Устройство для заготовки КМ включает одноразовую многоканальную закрытую систему, модуль аспирации-накопления и модуль перфузии. Группа изобретений также относится к способу оценки заготовленного костного мозга. Использование данного способа получения костного мозга (КМ) обеспечивает заготовку стерильного богатого жизнеспособными мультипотентными мезенхимальными стромальными и гемопоэтическими прогенеторными клетками КМ, при этом результат достигается за счет автоматизации миелоаспирации, путем заготовки биоматериала специальным разработанным устройством для сбора КМ. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил., 1табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для лечения респираторного дистресс-синдрома у новорожденных детей, находящихся на искусственной вентиляции легких (ИВЛ). Для этого на фоне медикаментозной терапии дополнительно определяют уровень глютатионпероксидазы (GSH-Px-3) и, если ее значение менее 2,41 мкмоль/л, в комплекс лечения включают препарат «Селеназа» из расчета 10 мкг/кг/сут, 1 раз/день внутривенно струйно медленно, в течение 10 дней. Способ позволяет повысить выживаемость при снижении числа осложнений и сокращении сроков лечения за счет снижения тяжести течения оксидативного стресса и повышения антиоксидантной защиты организма.1 табл.,3 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к области лабораторной диагностики рака молочной железы, и описывает набор реагентов для иммунногистохимической диагностики рака молочной железы, который позволяет одновременно или раздельно выявлять рецепторы эстрогена, прогестерона и HER2-рецепторы. Набор реагентов включает в себя раствор для обеспечения биодоступности антигена, блокирующий раствор пероксидазы хрена, белковый блокирующий раствор, промывочный раствор, раствор первичных антител HER2-рецепторам, раствор первичных антител к рецепторам эстрогена, раствор первичных антител к рецепторам прогестерона, раствор антивидовых вторичных антител к первичным антителам, раствор стрептавидин-пероксидазы хрена, диаминбензидин, субстратный раствор, отрицательный контрольный образец, три положительных контрольных образца рака молочной железы для определения HER2, рецепторов эстрогена, рецепторов прогестерона. Набор реагентов по данному изобретению обладает повышенной чувствительностью и специфичностью. Изобретение может быть использовано в медицинских лабораториях и научно-исследовательских институтах. 3 пр., 4 табл.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен L-фукоза α1→6-специфичный лектин, экстрагируемый из базидиального гриба или сумчатого гриба, характеризующийся пиковым значением молекулярной массы около 4500 m/z, определяемым при масс-спектрометрическом анализе MALDI-TOF. Новый L-фукоза α1→6-специфичный лектин обладает высоким сродством к L-фукоза α1→6 сахарной цепи, определяемым константой ассоциации 1,0×104 М-1 или более (при 25ºС), и имеет константу ассоциации 1,0×103 М-1 или менее (при 25ºС) с высокоманнозными сахарными цепями и/или гликолипидами, не содержащими L-фукоза α1→6 сахарную цепь. В одном варианте предложенный L-фукоза α1→6 специфичный лектин представляет собой белок или пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:2-6. L-фукоза α1→6-специфичный лектин используют для специфического обнаружения L-фукоза α1→6 сахарной цепи и эффективной очистки L-фукоза α1→6 сахарной цепи или сахарной цепи, не содержащей L-фукозу α1→6. 6 н. и 10 з.п. ф-лы, 38 ил., 8 табл., 4 пр.
Наверх