Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны


 


Владельцы патента RU 2523119:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к области биохимии. Проводят количественную оценку эффективности олеиновой кислоты как переносчика РНК через биологические мембраны. В качестве биологической мембраны используют клетки сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus. В качестве переносчика РНК используют олеиновую кислоту, содержащуюся в препарате Виталанг-2 в количестве 10,8% и составляющую комплекс с РНК. Для сравнения используют препарат Виталанг-1, содержащий чистую РНК. Клетки помело заливают раздельно водными растворами препаратов Виталанг-1, Виталанг-2 и дистиллированной водой в количестве по 4,8 мл в каждом флакончике. Инкубируют в течение 22 ч при комнатной температуре. С помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность растворов против дистиллированной воды, определяя содержание РНК в клетках помело и окружающем растворе. В результате сравнения полученных значений оптической плотности растворов делают вывод о том, что Виталанг-2 проникает через биологические мембраны в 4,7-4,9 раза эффективнее Виталанга-1. Устанавливают, что спектры поглощения извлеченной из сочных мешочков РНК идентичны таковым для исходных соединений. Изобретение позволяет оценить эффективность олеиновой кислоты, используемой в качестве переносчика РНК через биологические мембраны. 1 пр.

 

Изобретение относится к области биохимии и фундаментальной медицины, в частности к средствам, облегчающим первичный скрининг потенциальных лекарственных препаратов, и может быть использовано, например, для подбора эффективных переносчиков РНК через биологические мембраны.

Прогресс в области молекулярной биологии и биотехнологии в последние десятилетия позволил медицине вплотную приблизиться к лечению наследственных болезней путем управления экспрессией генов с помощью чужеродной РНК. Осталась нерешенной проблема направленной доставки этой РНК внутрь клеток через биологические мембраны. Предлагают использовать с этой целью наночастицы алмазов и окислов некоторых металлов, аполипопротеин А-1 и др. Выбрать лучшее из предложенного трудно, поскольку для регистрации трансмембранного переноса авторы используют качественные и полуколичественные методы. В частности, известен и широко применяется флуоресцентный метод, основанный на присоединении флуоресцирующего красителя к РНК, инкубации этого комплекса в присутствии переносчика с суспензией клеток и последующего наблюдения свечения в клетках с помощью микроскопа [см., напр. 1]. Результат анализа качественный.

Целью настоящего изобретения является создание простого, но полноценного количественного метода для оценки эффективности переносчиков РНК через биологические мембраны.

Цель достигается тем, что в качестве модели для такой оценки используются сочные мешочки спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus со спектрофотометрическим определением РНК в клетках и окружающем растворе.

Пример осуществления предлагаемого способа

Препарат Виталанг-1, представляющий собой чистую высокополимерную дрожжевую РНК с теоретической весовой экстинкцией 20,0 ОЕ260/мг, выделяли по методу [2].

Препарат Виталанг-2 с весовой экстинкцией 17,8 ОЕ260/мг выделяли по методу [3]. Препарат содержит в своем составе 10,8% олеиновой кислоты.

Для определения способности препаратов Виталанг-1 и Виталанг-2 проникать через биологические мембраны в 3 одинаковых стеклянных флакончика на 6 мл с завинчивающимися пробками помещали по 7 продолговатых сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus и заливали их:

1-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-1 (27,3 ОЕ260/мл),

2-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-2 (27,1 ОЕ260/мл),

3-й - 4,8 мл дистиллированной воды.

Через 22 ч инкубации при комнатной температуре замеряли оптическую плотность растворов в 1-ом и 2-ом флакончиках против 3-го. Получилось: в 1-ом - 26,4 ОЕ260/мл, во 2-ом - 22,9 ОЕ260/мл.

Т.е. клетки поглотили Виталанга-2 в 4,7 раза больше, чем Виталанга-1. Далее растворы из флакончиков сливали и промывали каждый 5-ю порциями по 5 мл дистиллированной воды. Замерив оптическую плотность 5-й порции из 1-го и 2-го флакончика против 3-го, получили:

в 1-ом - 0,024 ОЕ260/мл,

во 2-ом - 0,019 ОЕ260/мл.

Сочные мешочки во всех 3-х флакончиках измельчали стеклянной палочкой, из полученных суспензий отбирали по 100 мкл раствора и, разбавив его в 50 раз дистиллированной водой, замеряли оптическую плотность растворов из 1-го и 2-го флакончика против 3-го. Получилось:

в 1-ом - 0,065 ОЕ260/мл,

во 2-ом - 0,318 ОЕ260/мл.

Т.е. Виталанг-2 проникает через биологические мембраны минимум в 4,9 раза эффективнее Виталанга-1, при этом спектры поглощения извлеченной из сочных мешочков РНК идентичны таковым для исходных соединений.

Таким образом, предложенный метод позволяет количественно оценить способность переносчика (в нашем случае олеиновой кислоты) транспортировать РНК через биологические мембраны. Для более точной количественной оценки эффективности переносчика нетрудно снять и соответствующие кинетические кривые.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Зубжицкий Ю.Н. Метод люминесцентной микроскопии в микробиологии, вирусологии и иммунологии, Л., 1964.

2. Патент RU 2392328 С2, 10.10.2009.

3. Патент RU 2403288 С1, 10.11.2010.

Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика РНК через биологические мембраны, представляющие собой клетки сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus, характеризующийся тем, что в качестве переносчика РНК используют олеиновую кислоту, содержащуюся в препарате Виталанг-2 в количестве 10,8 %, для чего указанные клетки заливают раздельно водными растворами препаратов Виталанг-1, Виталанг-2 и дистиллированной водой в равных количествах, инкубируют в течение 22 ч при комнатной температуре, с помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность РНК в указанных клетках и окружающем растворе с последующей оценкой эффективности.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии и касается синтетических олигонуклеотидов-праймеров. Представленные праймеры фланкируют участки генов PB2, PB1, PA, NP, MP, NS низкопатогенных вирусов гриппа птиц и не дают перекрестных реакций с родственными видам.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ определения уровня экспрессии гена МСР1 (CCL2) предусматривает оценку количества его мРНК методом полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с детекцией сигнала в реальном времени в образцах клеток, тканей и биологических жидкостей человека.

Изобретение относится к области медицины, генетической инженерии и молекулярной биологии. Предложен способ мониторинга рака молочной железы у субъекта.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к применению QTL аллеля, ассоциированного с устойчивостью к Bemisia для придания устойчивости к Bemisia растения Capsicum annuum.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ определения у спортсмена состояния утомления и состояния «перетренированности» по повышенной экспрессии гена триптофинил-тРНК-синтетазы (ТРСазы).

Изобретение относится к области микробиологии и паразитологии микроорганизмов. Способ предусматривает рестрикционный анализ бактериальной ДНК бластоцист с использованием комбинации эндонуклеаз рестрикции - Нае III, Pst I и Hind III, позволяющих идентифицировать простейших с различной степенью вирулентности.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ оценки воспаления и/или резистентности к инсулину у животного путем количественного определения присутствия анализируемого вещества в сыворотке или плазме.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины и ветеринарии. Предложен биокомпозит для обеспечения восстановительных процессов после повреждения у млекопитающего, содержащий носитель, по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, содержащую гены, кодирующие VEGF и/или SDF-1, и клетки, обеспечивающие репаративную регенерацию.

Предложенная группа изобретений относится к области ветеринарии. Предложена иммуногенная композиция для собак, содержащая эффективное количество вирионов парвовируса с белком типа VP-2, содержащим нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:4.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и медицины. Предложена L-нуклеиновая кислота - антагонист MCP-1 и способ её детектирования.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой лекарственный препарат для лечения заболеваний, вызванных вирусом простого герпеса 1-го типа и цитамегаловирусом, включающий рекомбинантный человеческий интерферон 2α, лизоцим, ликопид, левокарнитин 20%, витамин Е и жировую основу.
Изобретение относится к средству наружной терапии для больных атопическим дерматитом. Средство включает цинк пиритона 0,2%, эмульгатор, эмолент - изопропилмиристат и растворитель.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой крем для наружного лечения синдрома Пиккарди-Грехема-Литтла-Лассьюэра, включающий ланолин, масло персиковое, дистиллированную воду, отличающийся тем, что он дополнительно содержит хлорохин, причем компоненты в креме находятся в определенном соотношении в г%.

Предложены: применение соли налбуфина в виде суппозиторий на гидрофильной эмульсионной основе для лечения болевого синдрома умеренной и высокой интенсивности, фармацевтическая композиция того же назначения в форме суппозиториев, включающая в качестве действующего вещества налбуфина гидрохлорид и гидрофильную эмульсионную основу при следующем соотношении компонентов, г/100 г композиции: налбуфина гидрохлорид 0,0125-5,00, гидрофильная эмульсионная основа до 100 г и способ ее получения.
Изобретение относится к области фармацевтики и медицины, а именно к мягкой лекарственной форме в виде маслянистого геля для наружного применения при лечении кожных гнойных инфекций, содержащего в своем составе фузидин натрия, метилурацил (диоксометилтетрагидропиримидин), маслянистую гелевую основу (минеральное масло и полиэтилен) и дополнительно гидроксиметилхиноксалиндиоксид.
Изобретение относится к средствам для лечения заболеваний, связанных с дефицитом кальция в организме. Заявленные средства представлены в виде суппозиториев и содержат механоактивированную аморфную или аморфно-кристаллическую кальциевую соль глюконовой кислоты в качестве действующего вещества и вспомогательные вещества в качестве основы.
Композиция для лечения окислительного стресса содержит шарики липоевой кислоты или одной из ее солей и, по меньшей мере, одну липофильную окружающую среду. Шарики липоевой кислоты представляют собой частицы, состоящие из инертной сердцевины (ядра), покрытой липоевой кислотой, которая в свою очередь покрыта первым слоем изолирующего полимерного вещества и вторым полимерным слоем, резистентным (устойчивым) при желудочном значении рН.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию для применения в лечении новообразований, содержащую: артемизинин, артеметер, артеэтер, артенимол или артесунат; и фармацевтически приемлемый эксципиент, выбранный из группы, состоящей из: среднецепочечных триглицеридов; короткоцепочечных триглицеридов; омега-3-морских триглицеридов; и рыбьего жира, богатого омега-3-кислотами, где указанная композиция приготовлена в виде препарата для трансмукозального сублингвального, буккального или назального дозирования.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и пульмонологии, и касается лечения рака легкого. До проведения лечебной процедуры из крови больного производят забор лимфоцитов методом лимфоцитафереза, из которых готовят лейкоцитарную массу.
Изобретение относится к противотуберкулезным лекарственным средствам для перорального применения. Данное средство выполнено в форме гранулы с кишечнорастворимым покрытием и содержит: пара-аминосалицилат натрия - 500 до 900 мг; изониазид от 19 до 26 мг; масло растительное гидрогенизированное - 1,1-1,5 мг; кросповидон - 22-31 мг; дисульфит натрия - 4-12 мг; метилцеллюлоза - 11-19 мг, при этом плотность гранулы варьирует от 0,9 до 1,05 г/мл, толщина кишечно-растворимого покрытия составляет 0,2-0,3 мм, размер частиц изониазида в 2-3 раза превышает размер частиц пара-аминосалицилата, размер частиц кросповидона в 2-3 раза превышает размер частиц пара-аминосалицилата натрия и дисульфита натрия.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, рефлексотерапии и пелоидотерапии. Способ включает проведение курса антибактериальной и/или противовирусной терапии, который начинают на 5-7 день менструального цикла.
Наверх