Способ размножения цимбидиума in vitro


 


Владельцы патента RU 2523604:

Федеральное государственное бюджетное образоваельное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения цимбидиума in vitro включающий введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, где после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга,содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л, затем псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условия ex vitro в грунте с добавлением мха и древесной коры. Изобретение позволяет повысить выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб, при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.3 табл.

 

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений цимбидиума in vitro.

Известен способ размножения цимбидиума in vitro (См: Mohammad Musharof Hossain, Madhu Sharma, Promila Pathak Cost effective protocol for in vitro mass propagation of Cymbidium aloifolium (L.) Sw. a medicinally important orchid // Engineering in Life Sciences. 2009. - V. 9, №. 6. - P. 444-453). В качестве первичного экспланта использовали семена, которые стерилизовали последовательно в 0,1%-ном растворе сулемы (HgCL2) с 1-2 каплями 20% раствора детергента Teepol в течение 10 минут, затем в 70% этиловом спирте в течение 30 секунд, после чего высаживали на среду Mitra et al., дополненную сахарозой 30 г/л и регулятором роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина, и культивировали в световой комнате при температуре 25±2°C и 14/10-часовом фотопериоде с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000 лк до образования псевдобульб. Процесс ризогенеза индуцировали добавлением в питательную среду индолилуксусной кислоты в концентрации 0,5 мг/л. Растения-регенеранты высаживали в грунт для укоренения, состоящий из смеси керамзита, древесного угля, вермикулита и торфяного мха в соотношении 1:1:0.5:0.5, и выращивали при температуре 25-30°C и относительной влажности 60-70%.

Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения.

Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.

Технический результат достигается тем, что в способе размножения цимбидиума in vitro, включающем введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л. Псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из мха и древесной коры.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве первичного экспланта используют семена, которые стерилизуют последовательно в 0,1%-ном растворе сулемы (HgCl2) с 1-2 каплями 20% раствора детергента Teepol в течение 10 минут, затем в 70% этиловом спирте в течение 30 секунд, после чего высаживают на среду Мурасиге и Скуга и культивируют в световой комнате при температуре 25°C с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000 лк до образования псевдобульб. Отделяют псевдобульбы от эксплантов и высаживают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 30 г/л сахарозы и 0,001 мг/л эпибрассинолида. Состав среды, использованный при культивировании псевдобульб, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранных в предварительных опытах концентраций сахарозы (табл.1) и эпибрассинолида (табл.2). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 3000 лк и при температуре 25°C (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивирования эксплантов растений). При выращивании эксплантов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга используют 0,001 мг/л эпибрассинолида. В течение 4 недель культивирования образуется максимальное число псевдобульб - 17 штук/эксплант (табл.2).

В последующем псевдобульбы с корнепобегами отделяют от экспланта, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и переносят для укоренения в условия ex vitro в грунт, состоящий из смеси мха и древесной коры в соотношении 1:1. Данная обработка была выбрана как наиболее способствующая укоренению ex vitro пробирочных растений цимбидиума (табл.3). После укоренения размноженные растения выращивают обычным способом.

В результате использования данного способа клонального микроразмножения цимбидиума образовывалось 17 псевдобульб/эксплант независимо от сезонности взятия растения-донора. Процент укоренения в условиях ex vitro составил 80%, что приводит к высокой жизнеспособности растений-регенерантов.

Таким образом, данный способ размножения цимбидиума in vitro повышает выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.

Таблица 1
сахарозы, г/л Псевдобульбы, штук/эксплант
10 9,8±0,4
20 12,1±0,3
30 14,6±0,2
40 13,8±0,3
50 13,1±0,3
60 Концентрация 11,3±0,4
70 10,6±0,4
80 9,9±0,4
90 9,6±0,5
100 9,3±0,5
Таблица 2
Вариант среды
Псевдобульбы
Концентрация эпибрассинолида, мг/л
0,0001 0,001 0,01 0,1 1 10
Количество, штук/эксплант 15,0±0,6 17,5±0,8 13,2±0,5 12,9±0,7 12,3±0,8 10,2±0,5
Таблица 3
Режим обработки
Ризогенез X
Индолилуксусная кислота, мг/л
0,1 1
15 минут 30 минут 15 минут 30 минут
Процент укоренения 20,1±3,1 30,5±4,3 80,3±5,2 40,7±3,7

Способ размножения цимбидиума in vitro, включающий введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, отличающийся тем, что после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л, затем псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из мха и древесной коры.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения подвоев яблони, где на этапах введения в культуру и собственно микроразмножения в среду Мурасиге-Скуга в качестве стимулятора роста добавляется препарат фуролан в концентрации 0,004 мг/л.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ хранения растений осины в условиях in vitro, включающий культивирование микропобегов осины на питательной среде WPM с добавлением сахарозы 10-20 г/л, агар-агара 9 г/л и витаминов MS 1 мл/л, сорбитола 5-10 г/л и маннитола 5-10 г/л, причем хранение растений осуществляют при температуре +4°С в режиме освещения 8 ч день/16 ч ночь с интенсивностью 2000 люкс.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает микроразмножение пробирочных растений и высадку их на жидкую питательную среду с добавлением макроэлементов, витаминов и биопрепаратов.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, включающий в себя введение эксплантов в культуру, размножение и укоренение вновь образованных in vitro побегов, где в качестве эксплантов используют фрагменты цветоложа и цветоножки из цветов земляники, взятых в фазе бутонизации, которые промывают под проточной водой в течение 15-25 минут, стерилизуют 0,1% раствором сулемы 10 минут, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм и помещают срезом на питательную среду, цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм и также помещают на питательную среду.
Изобретение относится к области биотехнологии растений, в частности к микроклональному размножению in vitro. В способе культивируют каллусные культуры из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение каллуса на питательной среде Мурасиге-Скуга, доведенной до 1 литра водой, в течение одного пассажа, где в питательную среду добавляют 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту с концентрациями 4-8 мг/л, культивируют семена льна многолетнего, в питательную среду Гамборга добавляют 6-бензиламинопурин с концентрацией 1-2 мг/л и α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и затем на питательную среду Гамборга пересаживают полученные каллусы для регенерации и культивируют в течение 2-4 пассажей, в жидкую питательную среду Мурасиге-Скуга с концентрацией всех компонентов 50% добавляют α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и на нее пересаживают растения-регенеранты и культивируют их в течение 2-4 пассажей.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro.
Изобретение относится к способу укоренения черенков сенполии узамбарской и может быть использовано для цветочной рассады. .
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, семеноводству картофеля, картофелеводству. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе клонального микроразмножения яблони и груши на этапе собственно микроразмножения. .
(57) Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Листовые экспланты, вычлененные из тридцатидневных асептических растений исходных сортов, выращенных в сосудах 1 л, помещают в чашки Петри с жидкой средой определенного состава и прединкубируют, кокультивируют и культивируют на питательных средах определенного состава. При появлении регенерантов размером не менее 10 мм их срезают и переносят на среду определенного состава. Проводят первый этап отбора форм, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, путем культивирования срезанных регенерантов на среде МС с 50 мл/л канамицина сульфата в течение 30-45 дней при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк при 16-часовом фотопериоде с последующим отбором укоренившихся регенерантов картофеля с зелеными листьями и стеблями. Проводят второй этап отбора форм, устойчивых к возбудитялям фитофтороза и альтернариоза, включающий проверку укоренившихся растений методом ПЦР на наличие целевой ДНК и размножение регенерантов с подтвержденной ПЦР вставкой целевой ДНК микрочеренкованием. Использование заявленного способа позволяет получить устойчивые к возбудителям фитофтороза и альтернариоза формы картофеля. 5 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения растений лапчатки белой (Potentilla alba) методом культуры in vitro, включающий отделение вегетативных почек от корневища, стерилизацию, высаживание на питательные среды, микроразмножение побегов, укоренение побегов, адаптацию растений-регенерантов к нестерильным условиям. Использование заявленного способа позволяет получить более 150 тысяч саженцев в год от одного экспланта. 5 ил., 1 табл.
Способ регенерации адвентивных микропобегов Hyssopus officinalis L. в условиях in vitro включает отделение листьевых дисков от микропобегов после 4-5 пассажа, полученных в культуре in vitro, дальнейшее культивирование их на модифицированной питательной среде Мурасиге и Скуга с половинной концентрацией макроэлементов и дополненной веществом цитокининового типа действия, а именно тидиазуроном, при этом культивирование проводят при пониженной интенсивности освещения. 4 табл.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к селекции. Изобретение представляет собой способ повышения коэффициента размножения капусты белокочанной в условиях in vitro, включающий выращивание эксплантов, культирование их на питательной среде Мурасиге-Скуга, внесение в нее регуляторов роста тидиазурон в концентрации 1 мг/л в сочетании с индолил-3-уксусной кислотой - 0,5 мг/л, при использовании цветолож размером 0,2-0,3 мм, изолированных из бутонов длиной 0,5-0,7 мм, где цветоложе используют за 1-2 дня до распускания цветков и после выращивания их на питательных средах культивируют до образования почек в течение 14-21 суток. Способ позволяет получить большое количество растений-регенерантов с признаками ЦМС и получить генетически стабильный урожай селекционных образцов. 3 табл.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения гречихи in vitro, включающий размножение гречихи из асептических проростков семян. Семена предварительно стерилизуют концентрированной серной кислотой и культивируют на среде Мурасиге и Скуга без фитогормонов. Субкультивируют, используя верхнюю часть побега проростка с пазушной почкой с получением микрорастений на питательной среде Мурасиге и Скуга с фитогормонами с содержанием сернокислой меди в количестве от 9,2 до 23,0 мг/л, которые делят на черенки, культивируют, субкультивируют и укореняют на этой среде. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность процесса размножения микрорастений гречихи в условиях in vitro за счет его упрощения, ускорения, снижения затрат и увеличения выхода пробирочных растений. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на питательную среду в присутствии ростовых веществ и культивирование, где высадку и культивирование осуществляют на твердой питательной среде Мурасиге и Скуга, содержащей в качестве росторегулирующего вещества препарат Мелафен в концентрации 10-7-10-11%. Заявляемый способ позволяет увеличить выход растений за счет эффективной приживаемости микрочеренков, хорошей регенерации, улучшения качественных показателей растений. 6 табл.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro с деконтаминацией от микоплазменной инфекции, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга без ростовых веществ и с уменьшенным количеством макроэлементов. При этом в состав питательной среды дополнительно вводится антибиотик гентамицин в два этапа: при первом субкультивировании гентамицин вводится в концентрациях 0,05-0,3 мл/л; при втором - в концентрациях 0,01-0,04 мл/л одновременно с введением препарата эмистим в разведении 10-6-10-12 мл/л. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность клонального микроразмножения растений винограда в культуре in vitro, повысить приживаемость и выход оздоровленных от микоплазм растений с улучшенным морфогенезом и качественными характеристиками. 7 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения копеечника чайного, где вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS, затем образовавшиеся конгломераты микропобегов делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л. Растения-регенеранты размножают, укореняют и адаптируют к нестерильным условиям. Изобретение позволяет повысить эффективность процесса, тиражируемости, адаптации в условиях гидропоники и получить стандартные саженцы копеечника чайного. 4 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений гвоздики in vitro. Изобретение представляет собой способ размножения гвоздики in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, отличающийся тем, что при микроразмножении экспланты укореняют на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л, и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%. Изобретение позволяет упростить процесс микроразмножения. 1 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения подвоев яблони ММ 106, СК 2, СК 3, СК 4, СК 7, где на этапах введения в культуру в среду Мурасиге-Скуга добавляется в качестве санирующего агента антибиотик гризеофульвин 500 мг/л. Изобретение позволяет повысить выход оздоровленных подвоев яблони, полученных меристемным методом in vitro за счет снижения доли погибших от заражения грибной и дрожжевидной инфекцией эксплантов. 1 табл., 7 пр.
Наверх