Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283



Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283
Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283
Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283
Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283
Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283
Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283
Рекомбинантная плазмидная днк pmind-vapb, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую ген vapb msmeg_1283

 

C12N15/00 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2524148:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук (ИНБИ РАН) (RU)

Изобретение относится к микробиологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pMind-vapB, представляющую собой плазмиду pMind, в которую клонирована последовательность, представленная на рис.2. Рекомбинантная плазмидная ДНК pMind-vapB позволяет осуществлять гиперэкспрессию антитоксина VapB в штаммах Mycobacterium tuberculosis. 6 ил.

 

Изобретение относится к микробиологии и генной инженерии и может быть использовано при создании аттенуированной вакцины против Mycobacterium tuberculosis в медицине.

Проблема борьбы с туберкулезом, опережающим по уровню смертности другие инфекции и уносящим около 2 миллионов человеческих жизней ежегодно, существенно осложняется тем, что МТВ (Mycobacterium tuberculosis) - возбудители этой болезни - способны выживать в латентном (покоящемся) состоянии. По данным ВОЗ каждый третий житель Земли является носителем латентного туберкулеза, потенциально способного перейти в острую форму. Вакцинирование живой вакциной (BCG) также приводит к образованию латентных форм BCG, которые при ослаблении иммунитета способны реактивироваться и вызывать BCG-инфекции. Актуально получение живых вакцинных препаратов, не способных к переходу в латентное состояние. В переходе бактерий в покоящееся состояние участвуют бактериальные токсины, компоненты ТА систем (Gerdes K, Christensen SK, Lobner-Olesen A, Nat Rev Microbiol. (2005) May; 3(5):371-82). ТА система является двухкомпонентной, токсины нарушают такие важнейшие клеточные функции, как трансляция, репликация, синтез компонентов клеточной стенки, антитоксины контролируют активность токсинов, связывая его в комплексы (Makarova Kira S, Wolf Yuri I and Koonin Eugene V Biol Direc (2009)).

Наиболее распространены ТА семейства VapBC. Мишенью токсина VapC является тРНК (Winther KS, Gerdes K. Proc Natl Acad Sci USA (2011) 108(18):7403-7). Антитоксин VapB является ингибитором токсина VapC.

Задачей изобретения является рекомбинантная плазмидная ДНК pMind-vapB, представляющая фрагмент ДНК с геном vapB (MSMEG_1283), обеспечивающая гиперэкспрессию гена vapB в М. tuberculosis. Рекомбинантная плазмида pMind получена и описана ранее (Blokpoel MC, Murphy HN, O'Toole R, Wiles S, Runn ES, Stewart GR, Young DB, Robertson BD, Nucleic Acids Res. 2005 Feb 1;33(2):e22). Рекомбинантный штамм Mycobacterium tuberculosis-VapB, полученный путем введения в штамм М. tuberculosis Rv37 рекомбинантной плазмидной ДНК pMind-VapB, утрачивает способность образовывать латентные формы, что позволит обезопасить применение аттенуированных противотуберкулезных вакцин.

Получение рекомбинантной плазмидной ДНК pMind-vapB, содержащей ген антитоксина VapB

pMind-vapB плазмида была получена на основе вектора pMind, позволяющего осуществлять контролируемую, индуцированную экспрессию под контролем тетрациклин-зависимого промотора. Клонированный ген vapB кодирует антитоксин VapB Mycobacterium smegmatis. Клонирование vapB осуществлено следующим образом: Выделенная с помощью Genomic DNA Purification Kit (Fermentas) ДНК М. smegmatis использовалась в качестве матрицы для амплификации гена vapB. ПЦР проводилась с использованием праймеров (рис.1). В праймеры были введены сайты рестрикции BamHI и SpeI. Сайты выделены подчеркиванием. Амплификация проводилась в следующем режиме: шаг 1. 94°С - 5 минут, шаг 2. 94°С - 30 секунд, шаг 3. - 56°С - 30 секунд, шаг 4. - 72°С 60 секунд; далее цикл шаг 2, шаг 3, шаг 4 - 25 раз, далее 72°С - 5 минут. Продукт амплификации выделялся согласно протоколу с помощью Gel and PCR Clean-up System (Promega) и клонировался в вектор pGEM-T (Promega) с помощью Т4 ligase (Promega). Трижды отмытые стерильным 10% С3Н8О3 в деионизованной Н2О клетки E.coli (штамм BMHI) были трансформированы лигазной смесью методом электропорации согласно протоколу Bio-Rad. Трансформированные клетки высевались на селективную агаризованную среду NB (Nutrient broth) (Himedia), содержащую 50 мкг/мл ампициллина, 0,2 mM IPTG, 0,004% X-Gal. Через 20 часов отбирались белые колонии и анализировались вышеописанным методом ПЦР. ПЦР-позитивные колонии инокулировали в 4 мл NB среды, содержащей 50 мкг/мл ампициллина. Вектор pGEM-vapBC выделяли согласно протоколу с помощью DNA Purification Kit (Promega). Вектор pGEM-vapBC был гидролизован по сайту рестрикции BsaBI, в 1% агарозе электрофоретически была отделена часть, соответствующая гену vapC, вектор pGEM-vapB с удаленной большей частью гена vapC был выделен с помощью Gel and PCR Clean-up System (Promega), затем лигирован и трансформирован в, как описано выше, E.coli (штамм ВМHI). Трансформированные клетки высевались на селективную агаризованную среду NB, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, колонии отбирались так же, как описано выше, по размеру амплифицированного фрагмента. Выделение вектора pGEM-vapB из ПЦР-позитивных колоний проводили так же, как описано выше. Выделенный вектор гидролизовали по сайтам рестрикции BamHI и SpeI, вектор pMind гидролизовали по тем же сайтам. Продукты гидролиза разделяли электрофоретически в 1% агарозе, нужные фрагменты выделяли с помощью Gel and PCR Clean-up System. После чего фрагмент гена VapB лигировали в вектор pMind. Лигазную смесь трансформировали, как описано выше, в E.coli штамм (BMHI). Полученные колонии анализировались вышеописанным методом ПЦР. Выделение вектора pMind-vapB из ПЦР-позитивных колоний проводили так же, как описано выше. Полученный вектор при введении в М. tuberculosis обеспечивал гиперпродукцию антитоксина VapB указанными бактериями.

Клонированная в pMind VapB последовательность 636 пар оснований - рис.2.

Аминокислотная последовательность клонированного в pMind белка VapB (92 аминокислоты) - рис.3.

Трансформация штамма М. tuberculosis рекомбинантной плазмидной ДНК pMind-vapB

Трансформация штамма М. tuberculosis (MTB) генетической конструкцией pMind-vapB проводилась согласно протоколу (Parish Tanya and Stoker Neil G Human press, Totowa, New Jersey. (1998)). Рекомбинантная плазмидная ДНК pMind-vapB позволяет осуществлять гиперэкспрессию антитоксина VapB в штаммах Mycobacterium tuberculosis.

Описание гиперэкспрессии VapB М. tuberculosis

Полученный М. tuberculosis-vapB штамм был протестирован на способность образовывать покоящиеся формы в условиях культивирования при низких значениях рН (Shleeva МО, Kudykina YK, Vostroknutova GN, Suzina NE, Mulyukin AL, Tuberculosis. 2011 Mar;91(2):146-54). Полученный штамм потерял способность образовывать покоящиеся формы (Рис.4). Разность между количеством клеток, подсчитанных после реактивации бактерий методом предельных разведении (МПР), и количеством колониеобразующих единиц (КОЕ) демонстрирует образование покоящихся форм М. tuberculosis.

Штамм М. tuberculosis-vapB с введенной плазмидой pMind-vapB неспособен образовывать дормантные формы.

Существуют модели получения покоящихся форм M. smegmatis. В одной из моделей при культивировании на модифицированной питательной среде клетки M. smegmatis теряли способность культивироваться на твердых средах и переходили в состояние покоя (Рис. 5) (Shleeva M, Mukamolova GV, Young M, Williams HD, Kaprelyants AS Microbiology (2004) 150(Pt 6):1687-97).

Трансформация штамма M. smegmatis генетической конструкцией pMmd-vapB проводилась согласно протоколу (Parish Tanya and Stoker Neil G Human press, Totowa, New Jersey. (1998)). В результате введения вектора pMind-vapB, позволяющего осуществить гиперэкспрессию антитоксина VapB в M. smegmatis, получен штамм M. smegmatis - vapB, гиперэкспрессирующий антитоксин VapB. Было обнаружено, что гиперэкспрессия антитоксина VapB приводит к полной потере способности клетками штамма M. smegmatis - vapB образовывать покоящиеся некультивируемые формы (рис.6). Полученный результат свидетельствуют об отсутствие видовой специфичности действия антитоксина VapB для видов Smegmatis и Tuberculosis, и позволяет считать, что гиперэкспрессия антитоксина VapB в различных штаммах МТБ будет приводить к утрате способности образовывать дормантные формы.

Краткое описание рисунков:

На рис.1 приведены последовательности праймеров, которые использовались для проведения ПЦР. В праймеры были введены сайты рестрикции BamHI и SpeI. Сайты выделены подчеркиванием.

На рис.2 приведена клонированная в вектор pMind VapB последовательность 636 пар оснований.

На рис.3 приведена аминокислотная последовательность клонированного в вектор pMind белка VapB (92 аминокислоты).

На рис.4 показана способность штаммов M. tuberculosis и M. tuberculosis-vapB к образованию дормантных форм. КОЕ (колония образующая единица) отражает количество активных клеток в ростовой среде, НВЧ (наиболее вероятное число) отражает реактивацию дормантных клеток + количество активных клеток. Математическая разность между КОЕ и НВЧ - количество дормантных клеток в культуре.

На рис.5 показана динамика роста и образования покоящихся некультивированных форм клетками контрольного рекомбинантного штамма Wt - pMind M. smegmatis.

На рис.6 показана динамика роста клеток рекомбинантных штаммов Wt - pMind и Wt - pMind-vapB M. smegmatis. () - динамика образования некультивируемых покоящихся форм рекомбинантным штаммом Wt - pMind; () - динамика роста клеток рекомбинантного штамма Wt - pMind-vapB.

Рекомбинантная плазмидная ДНК pMind-vapB, обеспечивающая гиперэкспрессию гена vapB в клетках M.tuberculosis, представляющая собой плазмиду pMind, в которую клонирована нуклеотидная последовательность



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к микробиологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pMind-vapC, представляющую собой плазмиду pMind, в которую клонирована последовательность, представленная на фиг.2.

Изобретение относится к биотехнологии. Заявлены экспрессионные векторы, предназначенные для экспрессии человеческого дарбэпоэтина.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения наноструктурированного материала на основе рекомбинантных жгутиков архей H.

Изобретение относится к области генетической инженерии, молекулярной биологии и медицины. Предложен носитель для направленной доставки нуклеиновых кислот в клетки, экспрессирующие рецептор CXCR4, состоящий из последовательности-лиганда к рецептору CXCR4 с последовательностью аминокислот KPVSLSYRSPSRFFESH, линкерного участка из двух молекул ε-аминогексановой кислоты, соединяющей последовательность-лиганд с последовательностью для компактизации нуклеиновых кислот, последовательности, обеспечивающей компактизацию нуклеиновых кислот и выход комплекса из эндосом CHRRRRRRHC.

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pESAT6-DBD, состоящую из искусственного бактериального оперона химерного белка, включающего промоторную область раннего промотора бактериофага Т5, гена химерного белка, состоящего из последовательности белкового антигена ESAT6 из Mycobacterium tuberculosis, слитого с последовательностью декстрансвязывающего домена (DBD) декстрансукразы Leuconostoc citreum KM20 и терминатора транскрипции; бактериального оперона бета-лактамазы и бактериального участка инициации репликации типа ColEl.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ модульного конструирования ДНК аптамеров, способных специфически и высокоаффинно связывать тромбин, имеющих стабилизированную основную субструктуру, предусматривает сборку их структуры моделированием из комбинации трех структурных модулей, содержащих квадруплексный модуль нуклеиновой кислоты, дуплексный модуль нуклеиновой кислоты и соединяющий их модуль нуклеиновой кислоты, имеющий неканоническую структуру, путем определения третичной структуры его спектральным методом кругового дихроизма с подтверждением факта образования более стабильного G-квадруплекса, отличного от квадруплексной структуры исходного структурного квадруплексного модуля.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, предусматривает однократное введение эффективного количества антигена PCV2 животным, нуждающимся в таком лечении или профилактическом лечении.

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии и представляет собой штамм Escherichia coli M15 [pREP4, pAg85A-DBD] - продуцент химерного белка Ag85A-DBD, а также способ иммобилизации, концентрирования и очистки полученного белка на декстране.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу селекции аптамеров к клеточным рецепторам и поверхностным белкам, который включает проведение раундов селекции, каждый из которых включает стадии: позитивной селекции с дальнейшим удалением несвязавшаяся ДНК; негативной селекции с последующим отделением связавшихся с негативной мишенью последовательностей; амплификацию полученных в ходе селекции аптамеров с получением ПЦР-продукта.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и медицины. Предложена L-нуклеиновая кислота - антагонист MCP-1 и способ её детектирования.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к молекулярной биологии и онкологии, и может быть использовано для диагностики терминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к раку щитовидной железы (РЩЖ). Набор последовательностей олигонуклеотидов имеет следующий нуклеотидный состав: 5'-CATGGCCACTCCCAGTGC-3', 5'-CACAGGGACTCCTCAGCAC-3', 5'-CACCCCCACCCACAG-3',5'-GAGATGGGTGGCTTGTG-3', 5'-GGCTAGTGCTGTCAGGCC-3', 5'-CTAAGCACCCTAGACGCG-3', 5'-CAGGGATAGGGCCTGG-3', 5'-CCCCAAGAGAGCAACACC-3', TACGAGCCGTGCCT, GATGGGCTGCGCAG, CACGTGCTGGGCCT, TAGAAGCTGTACAT, CACGAGAAGTGGAG, TACGAGCTGAGCTG, GGAAATGGATGGGATTTG, CCATATGGACGGCAATTC. Изобретение позволяет провести эффективную диагностику герминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к РЩЖ, исходя из частот мутаций среди пациентов в российской популяции. 4 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии и представляет собой плазмиду 40NaGal, определяющую синтез α-N-ацетилгалактозаминидазы α-AlNaGal, включающую NcoI/SalI-фрагмент плазмиды pET-40b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК размером 1299 пар оснований, содержащий химерный ген, состоящий из структурной части гена α-AlNaGal, адаптированной по N-концу для экспрессии в клетках E.coli, и нуклеотиды, кодирующие специфическую последовательность для протеазы TEV. Изобретение относится также к штамму E.coli Rosetta(DE3), трансформированному указанной плазмидой, - продуценту химерного белка, включающего аминокислотную последовательность рекомбинантной α-N-ацетилгалактозаминидазы α-AlNaGal. Предложен также способ получения рекомбинантной α-N-ацетилгалактозаминидазы α-AlNaGal с использованием штамма согласно изобретению. Изобретение позволяет получать α-N-ацетилгалактозаминидазу с высокой степенью эффективности. 3 н.п. ф-лы, 1 ил., 3 пр.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pEst877, детерминирующей экспрессию полипептида с активностью эстеразы P. cryohalolentis К5Т на поверхности клеток, с мол. массой 3,64 Md (5,519 т.п.о.), состоящей из NcoI/XhoI - фрагмента ДНК плазмиды pET20b(+) длиной 3,654 т.п.о., включающего промотор T7lac, терминатор транскрипции бактериофага Т7, ген bla β-лактамазы, определяющий устойчивость трансформированных плазмидой pEst877 клеток к ампициллину, участок ori инициации репликации, сигнальную последовательность pelB пектатлиазы В Erwinia carotovora; и NcoI/XhoI - фрагмента ДНК размером 1,865 т.п.о., содержащего гибридный ген Est877, кодирующий аминокислотные последовательности эстеразы P. cryohalolentis К5Т с дополнительным аминокислотным остатком аспарагиновой кислоты после сайта отщепления сигнального пептида и аутотранспортера P. cryohalolentis K5T в единой рамке считывания. Изобретение также касается штамма бактерий Е. coli BL21(DE3)pLysS/pEst877 - продуцента полипептида с активностью эстеразы P. cryohalolentis К5Т на поверхности клеток. Изобретение позволяет получать высокоактивную эстеразу с широкой субстратной специфичностью. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицины. Предложена генетическая конструкция на основе векторной плазмиды pEGFP-N1 с геном устойчивости к неомицину, содержащая под контролем терморегулируемого промотора гена белка теплового шока hsp70 Drosophila melanogaster ген человеческого нейротрофического фактора GDNF с элементами теплового шока HSE 4-8 и ген зеленого флуоресцентного белка GFP. Изобретение может быть использовано при терапии нейродегенеративных заболеваний, травматических нарушениях иннервации, а также при ишемическом инсульте головного мозга млекопитающих (в том числе и человека), поскольку понижение температурного порога активации (от 39 до 42 градусов цельсия) экспрессии терапевтического гена GDNF позволяет снизить негативное воздействие высоких температур на человеческий организм при применении для лечения нейродегенеративных заболеваний конструкции, включающей терапевтический ген GDNF, что достигается использованием hsp 70 Drosophilla melanogaster. Таким образом достигается температурорегулируемая временная активация GDNF для стимуляции нейральной дифференцировки нейральных предшественников, а также предотвращает негативные последствия от гиперэкспрессии трансгенного фактора. 26 ил., 7 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантные плазмидные ДНК, кодирующие гибридные полипептиды со свойствами красного флуоресцентного белка mCherry. Рекомбинантная плазмидная ДНК pChFN3 кодирует гибридный белок ChFN3, который имеет свойства красного флуоресцентного белка mCherry и 10 домена фибронектина человека III типа, и рекомбинантная плазмидная ДНК pChTNF кодирует гибридный белок ChTNF, который имеет свойства красного флуоресцентного белка mCherry и TNF. Настоящее изобретение обеспечивает эффективную продукцию гибридных белков pChFN3 и ChTNF со свойствами красного флуоресцентного белка mCherry в штамме E.coli BL21(DE3). Изобретение позволяет получить целевой белок с высоким выходом при добавлении меньшего количества индуктора. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к молекулярной медицине, и может быть использовано в медицинской практике для лечения патологий, связанных с избыточным ангиогенезом, включая рост злокачественных опухолей, ревматоидный артрит, псориаз и диабетическую ретинопатию. Способ включает введение в область избыточного ангиогенеза эффективного количества протеолитически неактивных рекомбинантных форм активатора плазминогена урокиназного типа (урокиназы) в сочетании с рекомбинантным крингл-доменом активатора плазминогена урокиназного типа, конкурентно подавляющих протеолитическое действие нативного активатора плазминогена урокиназного типа и пространственно разобщающих рецепторные белки, опосредующие регуляторные эффекты системы урокиназы. Способ позволяет локально подавлять рост кровеносных сосудов. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к выявлению рака легкого с помощью аптамеров, и может быть использовано в диагностике. Аптамеры получают в результате селекции, включающей чередование раундов позитивной селекции аптамеров к измельченным опухолевым тканям легкого человека, забиравшимся после операции у онкологических больных, и негативной селекции к здоровым тканям легкого и цельной крови здоровых людей, с выявлением пула аптамеров с наибольшей аффинностью, его клонирования, секвенирования, проверки на специфичность связывания с опухолевыми клетками легкого. Полученные аптамеры обладают высокой чувствительностью к продуктам распада опухоли и циркулирующим раковым клеткам в периферической крови больных раком легкого, что позволяет повысить эффективность диагностики рака легкого человека. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и генной инженерии. Предложены нуклеиновая кислота, характеризующаяся нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок, который состоит из аминокислотной последовательности с делецией, заменой или добавлением одной или более аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 7 и обладает активностью фосфатазы фосфатидной кислоты, соответствующий белок, рекомбинантный вектор, клетка для экспрессии белка и способ получения композиции жирной кислоты. Изобретение может быть использовано для получения полиненасыщенных жирных кислот в пищевой промышленности. 8 н. и 1 з.п. ф-лы, 6 табл., 7 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области биоинженерии, молекулярной биологии и биотехнологии. Предложена дрожжевая клетка, предназначенная для детекции взаимодействия между белками и их доменами, котрансформированная двумя плазмидами, модифицированными для экспрессии в клетках дрожжей двух белков, где нуклеотидная последовательность, кодирующая первый белок, клонирована в одну плазмиду, а нуклеотидная последовательность, кодирующая второй белок, - в другую плазмиду, где нуклеотидные последовательности, кодирующие белки, слиты с нуклеотидными последовательностями, кодирующими активационный и ДНК-связывающий домены белка GAL4, при этом нуклеотидные последовательности, кодирующие исследуемые белки, отделены от нуклеотидных последовательностей, кодирующих активационный или ДНК-связывающий домен белка GAL4, при помощи нуклеотидной последовательности, кодирующей пептид, представляющий собой последовательность GluLeuGluAlaAlaAlaLysGluAlaAlaAlaLysGluAlaAlaAlaLysGluAlaAlaAla, который экспрессируется в виде белкового мостика между исследуемым белком и доменами белка GAL4. Изобретение позволяет свести к минимуму взаимовлияние доменов тестируемых белков и ДНК-связывающего/активационного доменов вектора и может быть использовано для детекции взаимодействия между белковыми молекулами в медицинских и исследовательских целях. 4 ил., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N41 (pBpuN4/MR), который получен путем трансформации штамма Escherichia coli ER2267 плазмидой pBpuN4/MR N41, полученной на основе плазмиды pUC19 и содержащей ген, кодирующий ДНК-метилтрансферазу M.BpuN4I, метилирующую один из цитозинов в положении С5 в последовательности 5'-GGNNCC-3', и ген рестриктазы BpuN4I. Настоящий рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N41 (pBpuN4/MR) является продуцентом сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции BpuN4I, узнающей последовательность ДНК 5'-G^GNNCC-3'/3'-CCNNG^G-5' и расщепляющей обе её цепи после первого гуанина с образованием 5'-выступающих четырёхнуклеотидных липких концов. Настоящее изобретение позволяет получить рестриктазу заданной специфичности с высоким выходом. 3 ил., 4 пр.
Наверх