Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее


 


Владельцы патента RU 2524430:

Мельник Николай Васильевич (RU)

Изобретение касается вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способа ее получения. Представленная вакцина содержит инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, 1-10% инактивированной бактериальной массы из указанного штамма с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, глицерин и смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант. Способ получения вакцины включает культивирование штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирование его формалином, отделение бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделение из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистку и концентрирование ультрафильтрацией на полых волокнах, добавление суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ и сапонина, а также добавление 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, глицерина и смеси минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора. Представленные изобретения позволяют получить вакцину, обеспечивающую устойчивый иммунитет. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 7 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.

Известна вакцина для профилактики некробактериоза рогатого скота, содержащая в равных объемных соотношениях инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из местных эпизоотических культур возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 1816348, А61К 39/00, 1995).

Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.

Известна вакцина против сибирской язвы животных, содержащая суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы (ТУ 9388-004-00008064-99). Известна также инактивированная вакцина против некробактериоза животных, содержащая инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из производственного штамма "0-1" ВИЭВ возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 2109519, А61К 39/02, 1998).

Существующие моновакцины применяют независимо друг от друга и не создают иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и некробактериоза. Использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает более сильное стрессовое состояние животных.

Известна ассоциированная вакцина против сибирской язвы, анаэробной дизентерии и инфекционной энтеротоксемии овец, содержащая суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в исходной концентрации (3-4)×108 спор в 1 см3, анатоксины Cl. perfringens типов С с исходной активностью 100-150 ЕС в 1 см3 и Д с исходной активностью 60-80 ЕС в 1 см3 и физиологический раствор (Патент RU №2191599, МПК7 А61К 39/116, 2002).

Однако известная ассоциированная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.

Известны также вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант, причем инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин адсорбирован 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятом в конечной концентрации 1,8-2,0%, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (5-5,2)×107 в 1 см3 физиологического раствора, а в качестве адъюванта содержит сапонин при определенном соотношении компонентов (Патент РФ №2480237, МПК А61К 39/116, опубл. БИ№10, 2013), и способ ее получения.

Задачей изобретения является повышение эффективности вакцины против сибирской язвы и некробактериоза за счет увеличения сроков иммунитета животных.

Технический результат изобретения достигается в вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, содержащей инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант, отличающейся тем, что суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, дополнительно содержит 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см, глицерин и смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)х107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 10,0-15,0
Глицерин 20,0-30,0
Смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0-20,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-7,0 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0% остальное

Технический результат изобретения достигается также в вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, отличающейся тем, что в качестве эмульгатора содержит эмульгатор-139 или оксиэтилированный С710 алкилфенол.

Технический результат изобретения достигается также в способе получения вакцины против сибирской язвы и некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделения из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистки, концентрирования ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбции на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, добавления суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ и сапонина, отличающемся тем, что перед адсорбцией на гидроокиси алюминия к экзотоксину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, а глицерин и смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно, добавляют после добавления сапонина.

Известно использование в качестве адъюванта смеси Маркола-52 с эмульгатором-139 в соотношении 9:1 (Патент RU №2337706, МПК А61К 39/00, бюл. №31, опубл. 10.11.2008).

Известно также использование в качестве эмульгатора ОП-7 и ОП-10 (ГОСТ 8433-81, Патент RU №2134964, МПК А01N 25/00, опубл. 27.08.1999) - оксиэтилированные С710 алкилфенолы, используются для приготовления концентрированных эмульсий нерастворимых в воде ингредиентов.

Ассоциированную вакцину вводят однократно крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям и северным оленям внутрикожно при помощи безыгольного инъектора в объеме 0,2-0,4 см3.

Предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза создает длительный иммунитет у привитых животных, при этом по иммуногенности она превосходит известную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза. Вакцина безвредна и авирулентна для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Вакцину против сибирской язвы и некробактериоза готовят следующим образом.

Пример 1. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 54,0 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированного 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 10,0 г сапонина, 20,0 г глицерина и 15,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и эмульгатора-139, взятых в весовых соотношениях 1:0,9, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0
Сапонин 10,0
Глицерин 20,0
Смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 2. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,1 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 33,8 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 7,0 мг%, адсорбированного 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 15 г сапонина, 30,0 г глицерина и 20,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и эмульгатора-139, взятых в весовых соотношениях 1:1,1, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 10,0-15,0
Глицерин 20,0-30,0
Смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0-20,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 3. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 54,0 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированного 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 10,0 г сапонина, 20,0 г глицерина и 15,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-7, взятых в весовых соотношениях 1:0,9, получая состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0
Сапонин 10,0
Глицерин 20,0
Смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 4. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 33,8 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 7,0 мг%, адсорбированного 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 15 г сапонина, 30,0 г глицерина и 20,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-7, взятых в весовых соотношениях 1:1,1, получая состав 4 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 10,0-15,0
Глицерин 20,0-30,0
Смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0-20,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 5. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 54,0 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированного 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 10,0 г сапонина, 20,0 г глицерина и 15,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-10, взятых в весовых соотношениях 1:0,9, получая состав 5 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0
Сапонин 10,0
Глицерин 20,0
Смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 6. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 33,8 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 7,0 мг%, адсорбированного 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 15 г сапонина, 30,0 г глицерина и 20,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-10, взятых в весовых соотношениях 1:1,1, получая состав 6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 10,0-15,0
Глицерин 20,0-30,0
Смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0-20,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 7. Полученные по примерам 1-6 составы 1-6 применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела крупному рогатому скоту и свиньям по 0,4 см3 (2 раза по 0,2 см3), овцам, козам и северным оленям по 0,2 см.

Устойчивость к заражению сибирской язвой и некробактериозом сохраняется до 1,5 лет, что в 1,5 раза длительней, чем известная вакцина (полученная по прототипу) - что подтверждают данные таблицы.

Таблица. Сравнительная характеристика показателей иммуногенности известной и предлагаемой вакцины против сибирской язвы и некробактериоза через 1.5 года после вакцинации оленей в республике Саха (Якутия).

Испытуемые составы Вид животного Количество голов Проявление симптомов заболевания % защиты
некробактериоза сибирской язвы
Состав 1 олени 900 0 0 100
Состав 2 олени 900 0 0 100
Состав 3 олени 900 0 0 100
Состав 4 олени 900 0 0 100
Состав 5 олени 900 0 0 100
Состав 6 олени 900 0 0 100
Прототип олени 900 60 30 90

Таким образом, ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным более длительно защитить животных одновременно от сибирской язвы и некробактериоза.

1. Вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант, отличается тем, что суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, дополнительно содержит 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, глицерин и смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 10,0-15,0
Глицерин 20,0-30,0
Смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора 394, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно 15,0-20,0
Инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин

с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-7,0 мг%, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0% остальное

2. Вакцина против сибирской язвы и некробактериоза по п.1, отличающаяся тем, что в качестве эмульгатора содержит эмульгатор-139 или оксиэтилированный С710 алкилфенол.

3. Способ получения вакцины против сибирской язвы и некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделения из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистки, концентрирования ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбции на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, добавления суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ и сапонина, отличающийся тем, что перед адсорбцией на гидроокиси алюминия к экзотоксину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, а глицерин и смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно, добавляют после добавления сапонина.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области иммунологии, молекулярной биологии и генетической инженерии. Предложена иммуногенная композиция, содержащая смесь стафилококковых белков, и включающая стафилококковый белок, связывающий внеклеточный компонент, и стафилококковый транспортный белок, или стафилококковый белок, связывающий внеклеточный компонент, и стафилококковый регулятор вирулентности или токсин, или стафилококковый транспортный белок и стафилококковый регулятор вирулентности или токсин.
Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

Изобретение раскрывает иммуногенную композицию, имеющую иммуногенную активность в отношении Neisseria meningitidis из серогрупп В и С, содержащую (а) олигосахарид N. meningitidis серогруппы С (Nmc), (в) протеолипосомные везикулы наружной мембраны N.meningitidis серогруппы В (NmB) и (с) белок NmB, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в описании, или иммуногенный фрагмент указанной последовательности, или последовательность по меньшей мере на 80% идентичной указанной последовательности.
Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается способа изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.
Способ относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использован для лечения больных хроническим неспецифическим эндометритом. Способ осуществляют следующим образом: больной на 5-7 день менструального цикла после опорожнения мочевого пузыря внутриматочно вводят 4-7 мл лечебного препарата - поливалентного комплексного пиобактериофага.
Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения ассоциированной вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.

Изобретение относится к различным наборам. .

Изобретение относится к области медицины и касается комбинированных вакцин с низкой дозой конъюгата HIB. .
Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения ассоциированной вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.
Изобретение относится к технологии производства диагностического препарата, необходимого для здравоохранения и ветеринарии при оценке напряженности противосибиреязвенного иммунитета и диагностики инфекции у лиц, привлекаемых к работам с возбудителем сибирской язвы.
Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии и иммунологии, и может быть использовано при разработке вакцины против мелиоидоза. .
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии и иммунологии, и может быть использовано для иммунопрофилактики мелиоидоза. .
Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к биотехнологии и касается варианта белка субтилизина Bacillus amyloliguefaciens с заменой Y217L, содержащий Т-клеточный эпитоп, при этом указанный Т-клеточный эпитоп указанного варианта включает одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из остатков, соответствующих положениям 76, 79 и 122, где указанный вариант субтилизина необязательно имеет замену в одном или нескольких из положений 3, 31, 40, 41, 46, 47, 48, 50, 76, 101, 104, 107, 111, 128, 147, 154, 181, 182, 183, 185, 206, 215, 216, 218, 238, 247, 248, 250, 254, 258, 262.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности производству вакцин. .
Изобретение относится к области биотехнологии. .
Изобретение относится к области биохимии, в частности к бескапсульному природно-ослабленному штамму Bacillus anthracis. Штамм В. anthracis 363/11 депонирован в коллекции штаммов микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №363. Штамм предназначен для разработки средств специфической профилактики сибирской язвы. Изобретение позволяет расширить спектр защитного действия, увеличить иммуногенность, уменьшить иммунизирующую дозу и реактогенность вакцинного штамма против сибирской язвы. 5 табл., 5 пр.
Наверх