Набор последовательностей олигонуклеотидов для диагностики герминальных мутаций в гене ret, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к раку щитовидной железы


 

C12N15/113 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2524433:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" РАМН) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к молекулярной биологии и онкологии, и может быть использовано для диагностики терминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к раку щитовидной железы (РЩЖ). Набор последовательностей олигонуклеотидов имеет следующий нуклеотидный состав: 5'-CATGGCCACTCCCAGTGC-3', 5'-CACAGGGACTCCTCAGCAC-3', 5'-CACCCCCACCCACAG-3',5'-GAGATGGGTGGCTTGTG-3', 5'-GGCTAGTGCTGTCAGGCC-3', 5'-CTAAGCACCCTAGACGCG-3', 5'-CAGGGATAGGGCCTGG-3', 5'-CCCCAAGAGAGCAACACC-3', TACGAGCCGTGCCT, GATGGGCTGCGCAG, CACGTGCTGGGCCT, TAGAAGCTGTACAT, CACGAGAAGTGGAG, TACGAGCTGAGCTG, GGAAATGGATGGGATTTG, CCATATGGACGGCAATTC. Изобретение позволяет провести эффективную диагностику герминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к РЩЖ, исходя из частот мутаций среди пациентов в российской популяции. 4 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно молекулярной биологии и онкологии.

Известна нуклеотидная последовательность для детекции мутаций 11 экзона гена RET (Патент США №6171791 В1).

Недостатки: небольшая протяженность исследуемой ДНК (только 11 экзон с 1810 по 1845 позиции), отсутствие точного определения рисков развития рака щитовидной железы (РЩЖ), трудоемкость проведения и высокая стоимость исследований (секвенирование).

Известно изобретение, посвященное выявлению онкогенов RET/PTC при папиллярном РЩЖ (Патент Украины №29847 U).

Недостатки: трудоемкость процесса (выделение РНК применением метода обратной транскрипции и амплификации), изучение соматических мутаций, а не герминальных, что не позволяет оценивать риск развития заболевания, изучение только папиллярного рака.

Задачей заявляемого изобретения является создание оптимального набора последовательностей олигонуклеотидов для анализа герминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к РЩЖ, исходя из частот мутаций среди пациентов в российской популяции.

Задача решается путем создания оптимального набора последовательностей олигонуклеотидов для детекции точковых герминальных мутаций С634 в 11 экзоне и М918Т в 19 экзоне гена RET с использованием мультиплексной «гнездовой» полимеразной цепной реакции (ПЦР) и аллель-специфичной гибиридизации с набором иммобилизованных дифференцирующих олигонуклеотидов.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание оптимального набора последовательностей олигонуклеотидов для диагностики герминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к РЩЖ, исходя из частот мутаций среди пациентов в российской популяции.

Технический результат достигается подбором оптимального набора последовательностей олигонуклеотидов для мультиплексной «гнездовой» ПЦР и гибридизации, которые используются для диагностики герминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к РЩЖ, у пациентов в российской популяции, имеющий следующий нуклеотидный состав:

5'-CATGGCCACTCCCAGTGC-3'

5'-CACAGGGACTCCTCAGCAC-3'

5'-CACCCCCACCCACAG-3'

5'-GAGATGGGTGGCTTGTG-3'

5'-GGCTAGTGCTGTCAGGCC-3'

5'-CTAAGCACCCTAGACGCG-3'

5'-CAGGGATAGGGCCTGG-3'

5'-CCCCAAGAGAGCAACACC-3'

TACGAGCCGTGCCT

GATGGGCTGCGCAG

CACGTGCTGGGCCT

TAGAAGCTGTACAT

CACGAGAAGTGGAG

TACGAGCTGAGCTG

GGAAATGGATGGGATTTG

CCATATGGACGGCAATTC

Подбор последовательностей олигонуклеотидов включает: синтез олигонуклеотидов SEQ ID NO:9-16, строго комплементарных целевой последовательности ДНК и соответствующих температурным условиям гибридизации; амплификацию фрагментов гена RET с использованием на I этапе мультиплексной «гнездовой» ПЦР, в которой матрицей служит образец ДНК, набор олигонуклеотидов с последовательностями, представленными в SEQ ID NO:1-8, с образованием на II этапе ПЦР биотип-меченого ПЦР-продукта; наличие набора иммобилизованных олигонуклеотидов с последовательностями, представленными в SEQ ID NO:9-16; гибридизацию меченого ПЦР-продукта с набором иммобилизованных олигонуклеотидов.

Для проведения молекулярно-генетического исследования биологическим материалом служила геномная ДНК, выделенная из лимфоцитов периферической крови.

Олигонуклеотиды для амплификации и олигонуклеотидные зонды синтезировали с использованием фосфодиэфирного и гидрофосфорильного методов. Синтез олигонуклеотидов осуществляли используя автоматический ДНК/РНК синтезатор.

Олигонуклеотиды для гибридизации аллелей гена RET, ассоциированного с наследственной предрасположенностью к РЩЖ, подбирали таким образом, чтобы идентифицировать все выбранные для анализа точковые мутации

Для определения точковых мутаций гена RET были подобраны и синтезированы 8 высокоспецифичных дифференцирующих олигонуклеотидных зондов, структура которых обеспечивала связывание только с полностью комплементарными ДНК-мишенями.

ПЦР проводили с использованием термостабильной Taq-полимеразы в соответствующем буфере на приборе Dyad. Смесь ПЦР I этапа объемом 25 мкл включала в себя: 1×ПЦР-буфер (Трис-HCl 67 мМ, рН 8,6, (NH4)2SO4 166 мМ, Тритон Х-100 0,01%), MgCl2 1,5 мМ, 0,2 мМ каждого из дНТФ, Taq-полимеразы 2,5 U, по 0,2 мкМ олигонуклеотидов.

Амплификация включала: денатурацию двухцепочечной ДНК при t=94°C в течение 3 мин 30 сек, далее - 35 циклов полимеразной цепной реакции: при t=94°C в течение 30 сек, при t=60°C в течение 20 сек, при t=72°C в течение 10 сек, затем элонгация при t=72°C в течение 3 мин. Смесь II этапа ПЦР содержала 0.2 мкМ прямого праймера, 2 мкМ обратного биотип-меченого праймера. В качестве матрицы в смесь добавляли 2 мкл продукта I этапа ПЦР и проводили амплификацию, включающую: денатурацию при t=94°C в течение 3 мин 30 сек, далее 35 циклов ПЦР: при t=94°C в течение 30 сек, при t=61°C в течение 20 сек, при t=72°C в течение 10 сек, элонгацию при t=72°C в течение 3 мин. Получали одноцепочечный ампликон, способный к гибридизации с аллель-специфичными ДНК-зондами. Амплификацию каждого образца ДНК проводили в отдельной пробирке. Олигонуклеотиды, используемые для иммобилизации, несут по 5'- или 3'-концу активную группу, обеспечивающую иммобилизацию.

Набор дифференцирующих олигонуклеотидов наносили на поверхность мембраны, содержащей активные группы.

В мультиплексной «гнездовой» реакции I этапа ПЦР использовали олигонуклеотиды SEQ ID NO:1, 2, 5, 6.

В мультиплексной «гнездовой» реакции II этапа ПЦР использовали олигонуклеотиды SEQ ID NO:3, 4, 7, 8.

В таблице 1 представлены последовательности олигонуклеотидов для мультиплексной «гнездовой» реакции I и II этапов ПЦР.

Таблица 1
ДНК-локус Специфический номер последовательности Название Последовательность 5'-3' Длина, пары нуклеотидов Температура отжига олигонуклеотидов
С634 1 634_F1 5'-CATGGCCACTCCCAGTGC-3' 18 63
2 634_R1 5'-CACAGGGACTCCTCAGCAC-3' 18 63
3 634_F2 5'-CACCCCCACCCACAG-3' 18 62
4 634_R2 5'-GAGATGGGTGGCTTGTG-3' 18 63
М918Т 5 918_F1 5'-GGCTAGTGCTGTCAGGCC-3' 18 62
6 918_R1 5'-CTAAGCACCCTAGACGCG-3' 18 62
7 918_F2 5'-CAGGGATAGGGCCTGG-3' 16 60
8 918_R2 5'-CCCCAAGAGAGCAACACC-3' 18 60

В таблице 2 представлены последовательности олигонуклеотидных зондов, используемых для гибридизации.

Таблица 2
Специфический номер последовательности Мутация Название зонда Последовательность5'-3'
9 C634WT c634_wt TACGAGCCGTGCCT
10 C634R c634_r GATGGGCTGCGCAG
11 C634G c634_g CACGTGCTGGGCCT
12 C634Y c634_y TAGAAGCTGTACAT
13 C634W c634_w CACGAGAAGTGGAG
14 C634S c634_s TACGAGCTGAGCTG
15 M918WT m918_wt GGAAATGGATGGGATTTG
16 М918Т m918_t CCATATGGACGGCAATTC

В таблице 3 представлены олигонуклеотиды SEQ ID NO для «гнездовой» ПЦР: 1-4 для ДНК-локуса С634 и 4-8 для ДНК-локуса М918Т.

Таблица 3
С634 1 634F1 5'-CATGGCCACTCCCAGTGC-3'
2 634R1 5'-CACAGGGACTCCTCAGCAC-3'
3 634F2 5'-CACCCCCACCCACAG-3'
4 634R2 5'-GAGATGGGTGGCTTGTG-3'
М918Т 5 918F1 5'-GGCTAGTGCTGTCAGGCC-3'
6 918R1 5'-CTAAGCACCCTAGACGCG-3'
7 918F2 5'-CAGGGATAGGGCCTGG-3'
8 918R2 5'-CCCCAAGAGAGCAACACC-3'

В таблице 4 представлены последовательности иммобилизованных олигонуклеотидов: 9-16 для гибридизации.

Таблица 4
9 TACGAGCCGTGCCT
10 GATGGGCTGCGCAG
11 CACGTGCTGGGCCT
12 TAGAAGCTGTACAT
13 CACGAGAAGTGGAG
14 TACGAGCTGAGCTG
15 GGAAATGGATGGGATTTG
16 CCATATGGACGGCAATTC

Гибридизационная смесь общим объемом 500 мкл включала формамида 100 мкл, 20×SSPE (sodium chloride, sodium phosphate, EDTA) 100 мкл и амплификата 20 мкл. Готовую гибридизационную смесь денатурировали при t=95°C в течение 5. мин, охлаждали во льду 2 мин, далее мембрану с иммобилизованными олигонуклеотидами инкубировали в гибридизационной смеси в течение 10-12 ч. После завершения инкубации проводили отмывку от непрореагировавшей гибридизационной смеси в 1×SSPE буфере при комнатной температуре в течение 15 мин.

Затем проводили блокирование мест неспецифического связывания, для этого мембрану инкубировали в блокирующем буфере, в состав которого входил БСА (бычий сывороточный альбумин). Промывали мембрану SSC (saline-sodium citrate) буфером (NaCl 0,15М) два раза. После этого проводили инкубацию с разведенным в буфере конъюгатом (стрептавидин-щелочная фосфатаза). Не связавшийся коньюгат удаляли с мембраны SSC буфером. Мембрану инкубировали с буфером (Трис-HCl 0,1М рН 7.6, MgCl2 10 мМ, ZnCl2 10 мМ, Тритон Х-100 0.1%) в течение 2 мин. После этого инкубировали мембрану в красящем буфере, содержащим субстраты НСТ и БХИФ (5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат и нитросиний тетразолий). Для прекращения реакции промывали мембрану дистиллированной водой.

Фермент щелочная фосфатаза превращала бесцветный субстрат в конечный продукт реакции сине-сиреневого цвета. Реакцию окрашивания наблюдали в местах связывания зонда и комплементарной последовательности.

Наличие одного из мутантных аллелей (C634WT, C634R, C634G, C634Y, C634W, C634S, M918WT, М918Т) в исследуемом образце определяли с учетом расположения олигонуклеотидных зондов на мембране. Наличие мутаций в генотипе пациента подтверждает генетический диагноз наследственной предрасположенности к РЩЖ или определяет высокий риск его развития в течение жизни.

Изобретение иллюстрируется примерами 1,2:

Пример 1.

Пациент Р., 9 лет

Предварительный диагноз: подозрение на синдром множественных эндокринных неоплазий 2Б типа (МЭН 2Б).

Семейный анамнез: онкологическими заболеваниями не отягощен.

Исследование: определение мутаций в прото-онкогене RET, ассоциированного с развитием синдрома множественных эндокринных неоплазий 2Б (МЭН 2Б).

Материал исследования: ДНК, выделенная из лимфоцитов периферической крови.

Результат: выявлена герминальная миссенс-мутация р.М918Т (с.2753Т>С) в гетерозиготном состоянии в 918 ко доне 16 экзоне протоонкогена RET, ассоциированная с синдромом МЭН2Б. Диагностированная мутация зарегистрирована в международной базе данных MEN2 Database ARUP [arup.utah.edu].

Заключительный диагноз: синдром множественных эндокринных неоплазий тип 2Б (с-м МЭН 2Б). Высокий риск билатеральной феохромоцитомы, множественных неврином желудочно-кишечного тракта.

Учитывая результаты молекулярно-генетического исследования, пациент относится к наивысшей группе риска (уровень D) развития прогностически неблагоприятных (агрессивных) форм медуллярного РЩЖ, с 50%-ным риском развития феохромоцитомы надпочечников.

Тип наследования - аутосомно-доминантный.

Рекомендовано:

1. учитывая полную пенетрантность прото-онкогена RET, пациенту целесообразно проведение хирургического лечения в объеме тотальной тиреоидэктомии с лимфодисекцией;

2. динамическое наблюдение:

- наблюдение онкологом, эндокринологом, генетиком;

- контроль уровня кальцитонина базального и стимулированного в динамике+УЗИ области шеи;

- контроль общего и ионизированного кальция в динамике;

- контроль метанефрина плазмы крови и суточной мочи+УЗИ забрюшинного пространства для своевременной диагностики феохромоцитомы в динамике;

3. ДНК-диагностика на наличие мутации в гене RET родственников 1-11 степени родства.

Пример 2.

Пациентка П., 13 лет

Диагноз: подозрение на синдром множественных эндокринных неоплазий 2А типа (МЭН 2А).

Семейный анамнез: отягощен медуллярным РЩЖ.

Исследование: определение мутаций в прото-онкогене RET.

Материал исследования: ДНК, выделенная из лимфоцитов периферической крови.

Результат: выявлена герминальная миссенс-мутация p.C634Y в гетерозиготном состоянии в 634 кодоне протоонкогена RET. Диагностированная мутация зарегистрирована в международной базе данных MEN2 Database ARUP [amp.utah.edu] как клинически значимый вариант.

Заключение: наследственный RET-ассоциированный медуллярный РЩЖ в составе синдрома МЭН2А.

Учитывая результаты молекулярно-генетического исследования, пациент относится к группе высокого риска (уровень D) развития прогностически неблагоприятных (агрессивных) форм медуллярного РЩЖ с 50%-ным риском развития феохромоцитомы надпочечников.

Рекомендуется:

1. учитывая полную пенетрантность прото-онкогена RET, пациенту целесообразно проведение хирургического лечения в объеме тотальной тиреоидэктомии с лимфодисекцией;

2. динамическое наблюдение:

- определение уровня базального и пентагастрин-стимулированного кальцитонина;

- контроль метанефрина плазмы крови и суточной мочи+УЗИ забрюшинного пространства для своевременной диагностики феохромоцитомы в динамике;

3. ДНК-диагностика на наличие мутации в гене RET родственников I-II степени родства.

Набор последовательностей олигонуклеотидов для диагностики герминальных мутаций в гене RET, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к раку щитовидной железы, имеющий следующий нуклеотидный состав:
5'-CATGGCCACTCCCAGTGC-3'
5'-CACAGGGACTCCTCAGCAC-3'
5'-CACCCCCACCCACAG-3'
5'-GAGATGGGTGGCTTGTG-3'
5'-GGCTAGTGCTGTCAGGCC-3'
5'-CTAAGCACCCTAGACGCG-3'
5'-CAGGGATAGGGCCTGG-3'
5'-CCCCAAGAGAGCAACACC-3'
TACGAGCCGTGCCT
GATGGGCTGCGCAG
CACGTGCTGGGCCT
TAGAAGCTGTACAT
CACGAGAAGTGGAG
TACGAGCTGAGCTG
GGAAATGGATGGGATTTG
CCATATGGACGGCAATTC.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к микробиологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pMind-vapB, представляющую собой плазмиду pMind, в которую клонирована последовательность, представленная на рис.2.

Изобретение относится к микробиологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pMind-vapC, представляющую собой плазмиду pMind, в которую клонирована последовательность, представленная на фиг.2.

Изобретение относится к биотехнологии. Заявлены экспрессионные векторы, предназначенные для экспрессии человеческого дарбэпоэтина.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения наноструктурированного материала на основе рекомбинантных жгутиков архей H.

Изобретение относится к области генетической инженерии, молекулярной биологии и медицины. Предложен носитель для направленной доставки нуклеиновых кислот в клетки, экспрессирующие рецептор CXCR4, состоящий из последовательности-лиганда к рецептору CXCR4 с последовательностью аминокислот KPVSLSYRSPSRFFESH, линкерного участка из двух молекул ε-аминогексановой кислоты, соединяющей последовательность-лиганд с последовательностью для компактизации нуклеиновых кислот, последовательности, обеспечивающей компактизацию нуклеиновых кислот и выход комплекса из эндосом CHRRRRRRHC.

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pESAT6-DBD, состоящую из искусственного бактериального оперона химерного белка, включающего промоторную область раннего промотора бактериофага Т5, гена химерного белка, состоящего из последовательности белкового антигена ESAT6 из Mycobacterium tuberculosis, слитого с последовательностью декстрансвязывающего домена (DBD) декстрансукразы Leuconostoc citreum KM20 и терминатора транскрипции; бактериального оперона бета-лактамазы и бактериального участка инициации репликации типа ColEl.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ модульного конструирования ДНК аптамеров, способных специфически и высокоаффинно связывать тромбин, имеющих стабилизированную основную субструктуру, предусматривает сборку их структуры моделированием из комбинации трех структурных модулей, содержащих квадруплексный модуль нуклеиновой кислоты, дуплексный модуль нуклеиновой кислоты и соединяющий их модуль нуклеиновой кислоты, имеющий неканоническую структуру, путем определения третичной структуры его спектральным методом кругового дихроизма с подтверждением факта образования более стабильного G-квадруплекса, отличного от квадруплексной структуры исходного структурного квадруплексного модуля.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, предусматривает однократное введение эффективного количества антигена PCV2 животным, нуждающимся в таком лечении или профилактическом лечении.

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии и представляет собой штамм Escherichia coli M15 [pREP4, pAg85A-DBD] - продуцент химерного белка Ag85A-DBD, а также способ иммобилизации, концентрирования и очистки полученного белка на декстране.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу селекции аптамеров к клеточным рецепторам и поверхностным белкам, который включает проведение раундов селекции, каждый из которых включает стадии: позитивной селекции с дальнейшим удалением несвязавшаяся ДНК; негативной селекции с последующим отделением связавшихся с негативной мишенью последовательностей; амплификацию полученных в ходе селекции аптамеров с получением ПЦР-продукта.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Настоящее изобретение обеспечивает синтетические 5'UTR области, содержащие первый полинуклеотидный фрагмент в виде второго интрона гена кальциевой АТФазы саркоплазматического/эндоплазматического ретикулума и второй полинуклеотидный фрагмент, представленный частью 5' нетранслируемой области (5'UTR) гена казеина.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения одноцепочечной кольцевой РНК. Способ включает синтез смысловой цепи и антисмысловой цепи, содержащих нуклеотидную последовательность с неспаренными нуклеотидами на 5'-конце и 3'-конце, и одновременно лигирование нуклеотида на 5'-конце нуклеотидной последовательности с неспаренными нуклеотидами в смысловой цепи с нуклеотидом на 3'-конце нуклеотидной последовательности с неспаренными нуклеотидами в антисмысловой цепи и, наоборот, с использованием лигазы.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и касается способа амплификации и детекции нуклеотидных последовательностей в реакционной смеси и набору, используемому в этом способе.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ модульного конструирования ДНК аптамеров, способных специфически и высокоаффинно связывать тромбин, имеющих стабилизированную основную субструктуру, предусматривает сборку их структуры моделированием из комбинации трех структурных модулей, содержащих квадруплексный модуль нуклеиновой кислоты, дуплексный модуль нуклеиновой кислоты и соединяющий их модуль нуклеиновой кислоты, имеющий неканоническую структуру, путем определения третичной структуры его спектральным методом кругового дихроизма с подтверждением факта образования более стабильного G-квадруплекса, отличного от квадруплексной структуры исходного структурного квадруплексного модуля.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу селекции аптамеров к клеточным рецепторам и поверхностным белкам, который включает проведение раундов селекции, каждый из которых включает стадии: позитивной селекции с дальнейшим удалением несвязавшаяся ДНК; негативной селекции с последующим отделением связавшихся с негативной мишенью последовательностей; амплификацию полученных в ходе селекции аптамеров с получением ПЦР-продукта.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и медицины. Предложена L-нуклеиновая кислота - антагонист MCP-1 и способ её детектирования.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается тест-системы и способа для обнаружения РНК вируса болезни Шмалленберг. Предложенная тест-система включает праймер Schm U, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-САА ССА GAA GAA GGC САА GA-3', праймер Schm L, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-TCT GGC АСА GGA TTT GAG AC-3' и зонд Schm Z, имеющий последовательность 5'-[Hex] CCC CAC САА AAG TAA GAT CGA CAC [BHQ2]-3'.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается набора праймеров для выявления генетического материала (РНК) и дифференциации вируса парагриппа человека 1, 2, 3 и 4 типов в клинических образцах.

Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства. В способе растения обрабатывают раствором биологически активного вещества, в качестве которого используют 24-эпибрассинолид.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой полипептид, обладающий антимикробной активностью, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, соответствующей положениям 1-21 SEQ ID NO:2.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается набора для выявления Ку-лихорадки методом ПЦР-РВ. Охарактеризованный набор содержит синтетические олигонуклеотиды, ограничивающие фрагмент гена groEL: GroEL F 5′ CTTCTACTGTTATGACGCCTTCTTTGC 3′ GroEL R 5′ CGCAAGTAGGCACCATTTCTGC 3′, и флуоресцентный зонд: GroEL Probe 5′ FAM-CACTTTCTCCATCGCTTCCGCAATAATA-TAMRA 3′. Изобретение может быть использовано в медицине, ветеринарии, клинической лабораторной диагностике для выявления ДНК бактерии Coxiella burnetii в пробах, а также для решения научно-исследовательских задач по изучению данного микроорганизма. 2 табл., 2 пр.
Наверх