Способ диагностики системного амилоидоза у экспериментальных лабораторных животных


 


Владельцы патента RU 2524627:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Амурская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Способ диагностики AL-амилоидоза заключается в том, что каплю биологической жидкости с кристаллоиндуктором подвергают клиновидной дегидратации и затем полученную фацию анализируют под микроскопом с использованием количественных критериев. Способ доступен, прост в исполнении, позволяет выявить системный амилоидоз в короткие сроки.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике амилоидоза.

В настоящее время существует ряд способов диагностики амилодоза. Это гистологическое исследование биоптата пораженного органа в сочетании с гистохимическими окрасками и микрокопированием под поляризационным микроскопом [1]. Данный метод точен, но имеет ряд недостатков. Во-первых, это сложность получения образца исследуемой ткани. Во-вторых, это осложнения, присущие методу биопсии. Третий, и ключевой недостаток, это время исследования, которое занимает несколько суток.

Другой способ диагностики амилоидоза - функциональная проба с конго красным или метиленовым синим. Сущность пробы заключается в том, что введенный внутривенно краситель должен фиксироваться с патологическим белком (амилоидом) и не выводиться с мочой [1, 2]. Но красители обладают тропностью ко многим белкам, и именно это может быть причиной частых ложных результатов. Также возможно развитие токсических и аллергических реакций у больного, так как данные красители не совсем инертны к живым тканям. Большое отрицательное значение имеет психологический фактор, так как данная процедура воспринимается не всегда положительно пациентом.

Еще одним из способов диагностики является определение аминокислотной последовательности амилоидного белка иммуноферментным анализом [3]. Недостатком данного способа является вариабельность состава аминокислот у различных подвидов амилоидных белков, и при этом постоянно появляются разные по химическому составу разновидности патологических белков, что мешает диагностическому поиску. К существенным недостаткам относится необходимость сбора большого количества сывороток для заполнения стрипов при проведении анализа, что делает экономически нецелесообразным проведение единичных анализов. К относительным недостаткам относится дороговизна наборов антител, промывочных жидкостей и большие временные затраты на проведение реакций.

В результате проведенного патентно-информационного поиска ближайший аналог выявлен не был.

Задачей изобретения является создание способа диагностики амилоидоза, простого в осуществлении, не требующего больших материальных затрат и который проводиться в короткие сроки.

Сущность изобретения заключается в заборе сыворотки крови у животных, смешивании ее в объеме 100 мкл с 50 мкл изотонического раствора NaCl и нанесении на предварительно обезжиренное предметное стекло в объеме 20 мкл, далее помещении предметного стекла в чашку Петри на 1 час при температуре 22°C и влажности воздуха 55-75%, после чего проводят анализ фации под микроскопом при увеличении в 100 раз с использованием количественных параметров в качестве критериев, таких как количество центров кристаллизации в квадранте, количество вторичных лучей и исчерченность периферического белкового валика.

Способ был отработан на 30 беспородных белых крысах - самцах. Данные крысы были разделены на 2 группы: экспериментальную с первичным системным амилоидозом AL и интактную. Условия содержания, пищевой рацион идентичен. Для получения модели системного амилоидоза нами использовалась модель с введением неполного адъюванта Фрейнда. Адъювант в сочетании с нативным яичным альбумином вводился внутрибрюшино в течении 7 дней через день по 1 мл на 300 г массы тела После этого на 14 день все крысы были выведены с эксперимента с забором сыворотки крови и органов (печень, почки, селезенка, легкие, сердце).

Для метода клиновидной дегидратации бралось 100 мкл сыворотки крови и 50 мкл 0,9% раствора NaCl, далее два раствора смешивались, и полученный субстрат в объеме 20 мкл наносился на предварительно обезжиренное предметное стекло. Стекло помещалось в чашку Петри на один час при температуре, равной 22°C и влажности воздуха, равной 55-75%. После этого полученная путем клиновидной дегидратации фация анализировалась под микроскопом с увеличением в 100 раз.

Температура кристаллизации была выбрана из-за двух явлений: первое - именно при этой температуре мы получили наиболее точные и детализированные изображения кристаллизации; изменение температуры на 4 градуса Цельсия выше или ниже 22 градусов демонстрировало намного худшие результаты; второе - данная температура равна комнатной температуре, и для своего воссоздания не требует никаких специальных приборов.

В роли кристаллизатора использовался 0,9% раствор NaCl, так как он является изотоническим к биологическим средам организма и не вызывает в них структурных и количественных сдвигов, другие же кристаллизаторы, которые часто фигурируют в других работах (CuSO4, глицин), индуцируют изменения кристаллогеных свойств жидкости и искажают истинную кристаллограмму. Кроме того, преимущество изотонического раствора NaCl - это его дешевизна и доступность.

На основании проведенного ряда опытов нами установлено оптимальное время кристаллизации, которое равно одному часу. Если объект будет кристаллизироваться меньше данного времени, то кристаллогенез не успевает завершиться и на исследуемой фации имеются акристаллические зоны. Увеличение времени свыше одного часа не меняет кристаллограму, так как именно этого времени достаточно для полного прекращения кристаллогенеза.

Главное значение имеют качественные показатели, такие как форма кристаллов, их разветвленность и пространственное соотношение. В экспериментальной группе мы получили большие крестообразные кристаллы, которые уменьшали свой размер и сгущались ближе к центру дегидратированной капли, при этом количество разветвлений было минимально. В интактной же группе кристаллы имеют характерные «нежные линии», которые значительно отличаются от получившихся кристаллов в первой группе. Также был разработан ряд количественных параметров, использующихся в качестве критериев диагностики:

1. Количество центров кристаллизации в квадрате исследования. Размеры последнего были получены экспериментально - мы получили площадь всей капли, а далее разбили ее на 16 квадрантов с площадью, равной 500 условных единиц. В экспериментальной группе количество центров кристаллизации равно 2±1 (р=0,05). В интактной же группе данный показатель равняется 5±1 (р=0,05).

2. Количество вторичных лучей. В группе животных с вызванным AL-амилоидозом данный введенный параметр равен 7±2 (р=0,05). У потенциально здоровых лабораторных животных из интактной группы количество вторичных лучей равняется 13±2 (р=0,05).

3. Исчерченность периферического белкового валика. В группе экспериментальных животных данный параметр равен 9±2 (р=0,05). При этом стоит отметить, что данные трещины имеют неправильный вид и направление. В группе интактных животных количество линий на белковом валике равно 12±2 (р=0,05), и данные линии имеют строго упорядоченный параллельный ход, что также служит диагностическим критерием в отличии от фаций с AL-амилоидозом.

Все полученные и интерпретированные результаты анализа полученных фаций были сравнены с гистологическим исследованием аутоптатов органов (печень, почки, селезенка, легкие, сердце) для подтверждения корреляции параметров и наличия патологии. На основании данного исследования нами получено 100% подтверждение амилоидоза с помощью разработанного способа.

Технический результат использования способа:

1. Минимальные затраты времени.

2. Достоверность, нативность и физиологичность проводимого исследования.

3. Отсутствие аллергических и токсических явлений со стороны пациента.

4. Снижение затрат на проведение диагностики AL-амилоидоза.

5. Доступность аппаратуры для исследования.

Литература

1. Варшавский, В.А., Проскурнева, Е.П. Значение и методы морфологической диагностики амилоидоза в современной медицине. Практическая нефрология. - 1998. - №2, - с.16-23.

2. Houdner, P., Rausing, A., Steen, К., Torp A. Diagnosis of cardiac amyloidosis by Myocardial Biopsy. // Acta med. Scand - 1975 - №6, p.525-528.

3. Skinner M. Amyloidosis Current Therapy in Allergy, Immunology, and Rheumatology. // Mosby-Year Book. - 1996, - p.235-240.

Способ диагностики системного амилоидоза у экспериментальных лабораторных крыс, заключающийся в заборе сыворотки крови, смешивании ее в объеме 100 мкл с 50 мкл изотонического раствора NaCl и нанесении на предварительно обезжиренное предметное стекло в объеме 20 мкл, далее помещении предметного стекла в чашку Петри на 1 час при температуре 22°С и влажности воздуха 55-75%, проведении после этого анализа фации под микроскопом при увеличении в 100 раз с использованием количественных параметров в качестве критериев, таких как количество центров кристаллизации в квадранте, представляющем собой площадь всей капли, разбитой на 16 квадрантов, количество вторичных лучей и исчерченность периферического белкового валика, при этом диагноз «системный амилоидоз» считается установленным, если количество центров кристаллизации в квадранте исследования равно 2±1 (р=0,05), количество вторичных лучей равно 7±2 (р=0,05) и исчерченность периферического белкового валика равна 9±2 (р=0,05), при этом трещины имеют неправильный вид и направление.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, травматологии, трансплантологии, кумбостиологии, и представляет собой способ изготовления дермального матрикса (ДМ).
(57) Способ относится к области медицины и предназначено для ранней диагностики некротизирующего энтероколита у новорожденных. Способ включает определение трансферрина и свободного гемоглобина в кале.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии, и может быть использовано для выбора тактики лечения местно-распространённого рака предстательной железы.
Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и описывает способ прогнозирования динамики течения муковисцидоза, выявленного путем неонатального скрининга, основанный на учете пола, возраста, уровня гемоглобина, лейкоцитов, АлАТ, АсАТ, С-реактивного белка, вида бактериальной флоры в мазках из носа и в мазках из зева, уровня хлоридов пота, в котором определяют коэффициент прогноза динамики течения муковисцидоза (Кдм) с использованием регрессионного управления: Кдм=3,21946+0,526873*пол - 0,0488185*возраст - 0,0125638*гемоглобин+0,0302588*лейкоциты - 0,0418016*АлАТ+0,00832224*АсАТ+0,0736644*СРБ+; 0,238719* флора из носа+0,442044* флора из зева - 0,00669528*хлориды пота, где: пол - для мальчиков обозначают цифрой 1, для девочек цифрой 0; возраст - количество полных месяцев на момент обследования; гемоглобин - уровень гемоглобина в периферической крови в граммах на литр, лейкоциты - количество лейкоцитов в кубическом миллиметре периферической крови; АлАТ - уровень аланин-аминотрансферазы в венозной крови в единицах на литр; АсАТ - уровень аспартат-аминотрансферазы в венозной крови в единицах на литр; СРБ - уровень с-реактивного белка в миллиграммах на литр; флора из носа и флора из зева - вид бактериальной флоры в мазках из носа или из зева: 1 стрептококк, 2 синегнойная палочка; 3 стафилококк; 4 грибы; 5 рост флоры отсутствует (мазок стерилен); 6 энтерококк; 7 коринобактерии; 8 нейсерия; 9 ацинетобактер; 10 кишечная палочка; 11 цитробактер; 12 клебсиелла; 13 стернотофомонас; 14 гемофилийная палочка; 15 моракселла; 16 прочие виды флоры; хлориды пота - уровень хлоридов пота в ммоль/л; если величина коэффициента менее 2,3, прогнозируют течение заболевания без отрицательной динамики; если коэффициент 2,3 и более, прогнозируют течение муковисцидоза с ухудшением состояния.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к медицинской диагностике, и касается калибратора для синхронного анализа белков, способных к комплексообразованию друг с другом.
Изобретение относится к медицине, педиатрии, перинатологии, детской неврологии и может быть использован для ранней диагностики нарушения движений у детей с перинатальным поражением нервной системы.

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития стрессовых переломов костей нижних конечностей.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для электрохимического определения антиоксидантной активности биологических жидкостей, например плазмы или сыворотки крови.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования восстановления фертильности в послеоперационном периоде у женщин с наружным генитальным эндометриозом.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Изобретение раскрывает способ оценки риска развития внутриутробной инфекции у новорожденного при наличии у матери антител класса G к Chlamydia trachomatis в крови.

Группа изобретений относится к измерению объема или концентрации биологических веществ. Представлено измерительное устройство с кожухом и по меньшей мере одним дисплеем, интегрированным в кожух, при этом кожух содержит отсек, предназначенный для вставки картриджа в кожух с целью доставки в устройство предназначенного для измерения образца, и при этом отсек имеет отверстие на передней части кожуха, и первая часть кожуха для вставки картриджа выступает под углом ко второй части кожуха. Также описан способ измерения с указанным устройством при анализе биологических жидкостей. Достигается повышение надежности и широты применения при проведении анализа 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для определения наличия у пациента повышенного риска обладания сердечно-сосудистым заболеванием или нарушением по полиморфным вариантам генов. Предложен способ идентификации пациента, который нуждается в ранней и/или агрессивной или профилактической терапии сердечно-сосудистого заболевания и способ лечения такого пациента. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные способы и наборы для определения риска обладания сердечно-сосудистым заболеванием, что позволяет идентифицировать пациента, который нуждается в терапии сердечно-сосудистого заболевания. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 4 ил., 18 табл., 1 пр.

Изобретение касается способа образования 3-фенилимино-3H-фенотиазинового медиатора или 3-фенилимино-3H-феноксазинового медиатора, включающего предоставление первого реагента, содержащего фенотиазин или феноксазин; предоставление первого растворителя; предоставление второго реагента и предоставление второго растворителя. Первый реагент, первый растворитель, второй реагент и второй растворитель объединяют для образования раствора реагентов. К раствору реагентов добавляют персульфат натрия для соединения первого и второго реагентов, приводящего к образованию реакционного раствора, содержащего 3-фенилимино-3H-фенотиазиновый медиатор или 3-фенилимино-3H-феноксазиновый медиатор. Дополнительно проводят обработку реакционного раствора для удаления первого растворителя и второго растворителя для выделения медиаторов. Изобретение также касается продуктов, полученных указанным способом, и их применения в электрохимическом тест-сенсоре. Медиаторы по изобретению имеют низкий фоновый ток и обладают необходимыми характеристиками, включая стабильность. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл., 25 пр., 5 ил.

Заявленное изобретение относится к области диагностики и может быть использовано для раннего обнаружения беременности. Тестер на беременность содержит впитывающий наконечник (1), частично напрессованный на тестовую полоску (3) в корпусе оболочки, имеющем верхнюю оболочку (2.1) и нижнюю оболочку (2.2), и тестовую полоску (3) на стабилизирующей подложке (12), доходящую до окна проверки результата (4) с отметками контрольной и тестовой линий. Тестер дополнительно имеет защитную внешнюю оболочку, состоящую из верхней оболочки (5.1) и нижней оболочки (5.2). В передней части тестера на внутренней поверхности оболочек (5.1) и (5.2) расположены противоположные полуоси (6.1) и (6.2), которые входят в отверстия (7.1) и (7.2) в оболочках (2.1) и (2.2). В задней части тестера на внутренней стороне верхней оболочки (5.1) есть штифт (8), входящий в отверстие (9) на внутренней стороне нижней оболочки (5.2), в передней части которой, на ее внутренней стороне, есть фиксирующий выступ (10). Над выступом (10), на нижней поверхности корпуса оболочки (2), есть паз (11), в котором фиксирующий выступ (10) перемещается. На нижней поверхности нижней оболочки (2.2), которая видима в закрытом положении, есть выемка (13), в которую фиксирующий выступ (10) заходит в открытом положении. Заявленное изобретение обеспечивает повышение гигиеничности при использовании тестера на беременность. 12 ил.

Изобретение относится к медицине и описывает способ прогнозирования эффективности защиты лимфоцитов от переокисления путем определения концентрации гидроксирадикалов, в котором при комплексном внесении в среду инкубации лимфоцитов 1,4-дитиоэритритола и аскорбиновой кислоты в конечной концентрации 2,5 мМ и 0,07 мМ соответственно защиту лимфоцитов от гидроксирадикалов оценивают как эффективную при росте в среде гидроксирадикалов до 7% и менее, а неэффективную при росте в среде гидроксирадикалов до 8% и более. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования, при этом способ прост в осуществлении и интерпретации полученных результатов. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для приготовления гистологических препаратов. Способ включает взятие материала и его фиксацию в жидкости, обезвоживание и заливку в парафин, приготовление срезов. Перед фиксацией энуклированного глаза его склеру прошивают нитками на глубину порядка 1 мм как минимум в двух местах, например сверху или снизу, а также с боков, например с назальной или височной стороны. При этом используют нить из материала, инертного к материалам, используемым при подготовке среза, например льняную или синтетическую, кроме того, цвет ниток варьируют по участкам прошивания. После фиксации маркированного глаза в жидкости и его заливки в парафин глаз перед его делением на срезы располагают с учетом его исходной ориентации в пространстве, для чего ориентируются на вышеописанные нитяные метки. Техническим результатом изобретения является обеспечение сохранения исходного положения образца от момента энуклеации глаза до приготовления срезов, что позволяет сохранить его структуру, форму и целостность, а также значительно повысить информативность полученных срезов гистологических препаратов и повысить точность диагноза.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, неонатологии и пульмонологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения пневмонии у новорожденных детей с очень низкой (ОНМТ) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) при рождении. Для этого в динамике лечения проводят исследование биологического материала, то есть определение содержания альвеолоцитов в состоянии некробиоза/некроза в фарингеальном аспирате. При отсутствии изменения их количества или снижении содержания данных клеток относительно исходного уровня лечение оценивают как эффективное, а при повышении - как не эффективное. Способ позволяет провести своевременную коррекцию лечебных мероприятий, улучшить исход заболевания, а также избежать болезненных и травматичных процедур забора крови у новорожденных. 4 пр., 1 табл.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для управления биохимическими реакциями in vitro и in vivo. Управление осуществляется посредством воздействия на магнитную наносуспензию, содержащую биоактивную макромолекулу, прикрепленную непосредственно или через лиганд к однодоменным магнитным наночастицам, внешним низкоинтенсивным низкочастотным переменным магнитным полем, обеспечивающим деформацию и/или изменение конформации участвующих в реакции биоактивных макромолекул. Изобретение позволяет дозированно воздействовать на конкретное звено метаболизма, отвечающее за патологическое состояние. 12 з.п. ф-лы, 11 ил.

Группа изобретений относится к системе и методу для мониторинга соответствующего по меньшей мере одного параметра крови различных пациентов посредством устройств для обеспечения доступа, обеспечивающих соответствующий по меньшей мере один доступ к крови каждого пациента через кожу, отборных устройств для отбора образов для отбора соответствующего некоторого количества крови у каждого пациента с получением соответствующего по меньшей мере одного образца крови, аналитического устройства для анализа крови, выполненного с возможностью совместного анализа образцов крови, для анализа предварительно определенных параметров крови образца крови, общего вычислительного устройства для вычисления параметров медикаментов, которые необходимо ввести соответствующим пациентам, на основании записей данных, соответствующих определенным параметрам проанализированной крови, и подающих устройств для подачи соответствующих медикаментов с вычисленными параметрами медикаментов. Достигается упрощение и повышение надежности монитори-нга. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата, дополнительные морфометрические исследования базальных кератиноцитов в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи. При этом при схожей гистологической картине, описываемой при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи как акантоз, гиперкератоз, паракератоз, отек и расширение сосудов дермы, лимфогистиоцитарные инфильтраты, расположенные в верхней трети дермы, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи, представленном CD2+, CD3+, CD4+, CD5+, CD43+, CD45RO+ лимфоцитами, проводят дополнительно морфометрические исследования всех клеток эпидермиса. Далее рассчитывают относительный объем эпидермиса и митотический индекс эпидермальных клеток. При увеличении относительного объема эпидермиса в 2,2 и более раза по сравнению с нормальной кожей и увеличении митотического индекса эпидермальных клеток в 2,7 и более раза по сравнению с нормальной кожей диагностируют эритродермическую форму грибовидного микоза, а при неизмененных по сравнению с нормальной кожей относительном объеме эпидермиса и митотическом индексе эпидермальных клеток диагностируют синдром псевдолимфомы кожи. Изобретение обеспечивает ускорение и точность дифференциальной диагностики указанных видов лимфом кожи, что позволяет выбрать тактику раннего адекватного рационального лечения пациента. 2 табл., 2 пр.
Наверх