Способ определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы в сыворотке крови, плазме, эритроцитах и в моче


 


Владельцы патента RU 2525437:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пензенский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ПГУ") (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии, и предназначено для определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы в биологической среде при любых патологических состояниях путем биохимического исследования. Производят забор биологической среды, выбранной из плазмы крови, эритроцитов или мочи, осаждают белки путем добавления 10% раствора трихлоруксусной кислоты, и в случае образования осадка проводят центрифугирование при 1000 об/мин в течение 15 минут, затем добавляют 0,05 М раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М соляной кислоте, после чего пробу центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 минут, и в случае выпадения осадка осадок промывают 2 раза раствором этанол-этилацетат (1:1), затем подсушивают на водяной бане 10 минут и затем растворяют в 8 М растворе мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут до полного растворения, с последующим анализом раствора спектрофотометрическим методом. Способ обеспечивает увеличение информативности биохимических тестов, снижение расходов биологического материала. Способ пригоден как для однократного исследования, так и для мониторинга состояния окислительной модификации белков и уровня средних молекул в раннем послеоперационном периоде. 9 табл., 2 прим.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии и предназначено для определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы (средних молекул) сыворотки или плазмы крови, эритроцитах, моче при любых патологических состояниях путем биохимического исследования.

В настоящее время достаточно широко изучены механизмы перекисного окисления липидов, его роли в нормальном функционировании клеток и патогенезе различных заболеваний. Однако активные формы кислорода могут вызывать свободно-радикальное окисление не только липидов, но и белков, что вносит значительный вклад в формирование окислительного стресса любого генеза. Изучение окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы, которые могут проявлять и оксидантные, и прооксидантные свойства, позволит глубже изучить механизмы развития критическх состояний и углубит клинико-лабораторную диагностику тяжести эндотоксикоза [1].

Известен способ определения эндогенной интоксикации [2], заключающийся в определении уровня молекул средней массы в сыворотке крови. Однако этот способ не позволяет оценить степень окислительной модификации белков сыворотки крови, существенный вклад в которую вносят вещества средней молекулярной массы.

Наиболее близким к заявленному изобретению является биохимический способ определения окислительной модификации белков сыворотки крови человека [3], заключающийся в реакции взаимодействия окисленных аминокислотных остатков белков с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДФГ) с образованием производных 2,4-динитрофенилгидразона.

Данный способ предполагает забор крови натощак, затем к 0,1 мл сыворотки крови приливается 20% раствор трихлоруксусной кислоты. К денатурированным белкам добавляется равный объем (1 мл) 0,1 М 2,4-ДФГ, растворенного в 2 М HCl. В контрольную пробу добавляется вместо 2,4-ДФГ равный объем 2 М HCl. Инкубацию осуществляют при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем пробы центрифугируют при 3000 об/мин 20 минут. Осадок промывают 3 раза раствором этанол-этилацетат (1:1) для экстракции липидов и 2,4-ДФГ, который не реагировал с карбонильными группами окисленных белков. Полученный осадок подсушивают с целью устранения оставшегося растворителя этанол-этилацетат и затем растворяют в 8 М растворе мочевины. Мочевину приливают к осадку в объеме 2,5 мл и выдерживают в кипящей водяной бане в течение 5 минут до полного растворения. Оптическую плотность образовавшихся динитрофенилгидразонов регистрируют на спектрофотометре при следующих длинах волн: 356, 370, 430, 530 нм.

Однако этот метод ориентирован только на одну биологическую среду - сыворотку крови, только на один параметр - окислительную модификацию белков.

Имеется также трудность технического характера: такой реактив, как «0,1 М 2,4-ДФГ, растворенный в 2 М HCl», приготовить сложно в связи с практической нерастворимостью 2,4-ДФГ - он постоянно выпадает в осадок. Можно провести нагревание, но, через определенное время, осадок снова выпадает.

Задачей заявляемого изобретения является увеличение информативности биохимических тестов определения молекул средней массы (МСМ) и окислительной модификации белков (ОМБ) в сыворотке крови, эритроцитах путем исследования их в комплексе - в одной и той же пробе и снижение расхода биологического материала. Предлагаемый способ позволяет работать и в других биологических средах - плазме крови, моче. Таким образом, применение данного изобретения позволит расширить представления о механизмах окислительной модификации белков у больных в критических состояниях за счет комплексного изучения основных маркерных биологических сред, используемых в клинико-диагностических лабораториях, - сыворотка крови, эритроциты, моча. Сыворотка крови может быть заменена на плазму.

Техническим результатом заявляемого изобретения является определение окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы сыворотки крови, эритроцитах, отличающееся тем, что одновременно в пробах производят определение уровня средних молекул, и окислительной модификации белков, причем растворение денатурированных белков производят в 0,05 М растворе 2,4-ДФГ (динитрофенилгидразина) в 2 М HCl (соляной кислоте), после чего пробу центрифугируют при 1000 об/мин, в течении 20 минут, далее осадок промывают 2 раза раствором этанол-этилацетат (1:1), после подсушивания и растворения которого выдерживают пробы в кипящей воде в течении 10 минут. В способе определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы вместо сыворотки крови в качестве биологического материала может быть использована плазма крови.

Также поставленная задача решается способом определения окислительной модификации белков мочи в пуле веществ средней молекулярной массы, включающий забор биологических сред, осаждение белков, центрифугирование, добавление раствора мочевины, отличающийся тем, что в пробе мочи для определения окислительной модификации белков берут 0,5 мл жидкости из верхней части пробирки, далее обрабатывают 0,05 М раствором 2,4-ДФГ в 2 М HCl пробу центрифугируют при 1000 об/мин, в течение 20 минут.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Производят забор крови путем венепункции натощак. Кровь центрифугируют для отделения сыворотки от форменных элементов.

Проводят разведение сыворотки крови в 10 раз (в стеклянных пробирках, в том числе все этапы далее также в стеклянных пробирках) путем прибавления к 0,1 мл сыворотки крови 0,9 мл физиологического раствора. Затем для осаждения белков к пробе приливается 0,5 мл 10% раствор трихлоруксусной кислоты и производится перемешивание. Проводят центрифугирование 15 минут при 1000 оборотов в минуту.

Надосадочную жидкость отбирают в количестве 0,5 мл, прибавляют 4,5 мл дистиллированной воды и определяют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 254 нм. Величина экстинкции пробы соответствует уровню молекул средней массы, содержание которых выражается в единицах оптической плотности (ед.опт.пл.).

К осадку денатурированных белков добавляют 1 мл 0,05 М 2,4-ДФГ, растворенного в 2 М HCl. Инкубацию осуществляют при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем пробы центрифугируют при 1000 об/мин. 20 минут.

Осадок промывают последовательно 2 раза раствором этанол-этилацетата (1:1) для экстракции липидов и 2,4-ДФГ, который не реагировал с карбонильными группами окисленных белков. После каждого промывания раствором этанол-этилацетата (1:1) осадок подсушивают на водяной бане 10 минут с целью устранения оставшегося растворителя этанол-этилацетата и затем растворяют в 2,5 мл 8 М раствора мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут до полного растворения.

Аналогично проводят ход метода с мочой и эритроцитами. Однако при работе с мочой есть специфика.

Особенность проведения метода в моче. Для анализа берут не осадок денатурированных белков, т.к. он, как правило, образуется слабо, а 0,5 мл жидкости из пробирки. Стадия промывания раствором этанол-этилацетатом (1:1) отсутствует. Далее делают все в соответствии с методом: добавляют 2,5 мл 8 М раствора мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут.

Для определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы в эритроцитах, сначала эритроциты получают из крови следующим образом: кровь центрифугируют при 3000 оборотов в минуту в течение 15 минут, плазму отсасывают, и эритроциты промывают 3 раза физиологическим раствором объемом 9 мл. Эритроцитарную массу используют в соответствии с ходом метода. Кровь должна быть взята с антикоагулянтом, например с гепарином или трилоном Б.

Ход проведения метода может быть реализован в виде клинического набора реактивов. В этом случае при описании хода метода используют следующие обозначения: реактив А - 10% раствор трихлоруксусной кислоты; реактив Б - 0,05 М 2,4-ДФГ, растворенный в 2 М HCl; реактив В - раствор этанол-этилацетат (1:1); реактив Г - 8 М раствор мочевины.

Оптическую плотность образовавшихся динитрофенилгидразонов регистрируют на спектрофотометре при следующих длинах волн: 356, 370, 430, 530 нм (против воды). У практически здоровых людей без клинических проявлений каких-либо заболеваний (контрольная группа - 13 человек в возрасте 32,69±2,99 лет) показатели этого параметра и уровни МСМ представлены в таблице 1. Величины более этих уровней (верхняя граница диапазона нормы) позволяют говорить об увеличенных уровнях этих параметров, что свидетельствует об увеличении эндогенной интоксикации организма, проявляющейся, в том числе, повышенной окислительной модификацией белков в анализируемых биологических средах.

Анализ определений ОМБ при различных длинах волн показывает, что наибольшие различия в их уровнях в различных биологических средах имеют место при 530 нм. Это позволяет рекомендовать эту длину волны как необходимую, базовую. Однако, в зависимости от имеющегося в данной клинико-диагностической лаборатории оборудования, можно выбрать любую из указанных длин волн или использовать их все (356, 370, 430, 530 нм) в комплексе.

Таблица 1.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в контрольной группе - норма.
Биохимические тесты Биологические среды
Сыворотка Эритроциты Моча
МСМ, единиц оптической плотности 0,13±0,004 0,15±0,004 0,31±0,03
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,325±0,03 0,38±0,03 0,57±0,09
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,435±0,02 0,41±0,02 0,66±0,07
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,64±0,05 0,49±0,02 0,65±0,035
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,175±0,02 0,45±0,03 0,26±0,01

Далее представлены клинические примеры использования предлагаемого способа.

Пример 1. Больная Ш., 62 года, поступила в Городскую клиническую больницу скорой медицинской помощи им. Г.А.Захарьина г.Пензы (ГКБ СМП им. Г.А.Захарьина) с диагнозом - хронический холецистит.

У больной была произведена венепункция и сбор утренней мочи, натощак. Состояние пациентки и подготовка к лапороскопической холецистэктомии (ЛХЭ) требовали всестороннего лабораторного обследования. Для оценки выраженности эндогенной интоксикации определяли уровни МСМ и окислительной модификации белков (ОМБ) в сыворотке крови, эритроцитах на этапах до ЛХЭ, сразу после ЛХЭ, на 1 и 5 сутки наблюдений, в моче - до ЛХЭ, на 1 и 5 сутки после операции. Для получения сыворотки крови и эритроцитов взятую кровь делили на две порции: в ту пробирку, в которой планировалось получение эритроцитов, добавляли ЭДТА.

Окислительную модификацию белков сыворотки крови человека в пуле веществ средней молекулярной массы определяли следующим образом.

1. В сыворотке крови.

Взятую кровь центрифугировали для отделения сыворотки от форменных элементов. Проводили разведение сыворотки крови в 10 раз (в стеклянных пробирках, в том числе все этапы далее) путем прибавления к 0,1 мл сыворотки крови 0,9 мл физиологического раствора. Затем для осаждения белков к пробе приливали 0,5 мл 10% раствор трихлоруксусной кислоты и производится перемешивание. Проводили центрифугирование 20 минут при 1000 оборотов в минуту.

Надосадочную жидкость отбирали в количестве 0,5 мл, прибавляли 4,5 мл дистиллированной воды и определяли оптическую плотность полученного раствора при длине волны 254 нм. Величина экстинкции пробы соответствовала уровню молекул средней массы, содержание которых выражали в единицах оптической плотности (ед.опт.пл.).

К осадку денатурированных белков добавляли 1 мл 0,05 М 2,4-ДФГ, растворенного в 2 М HCl. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем пробы центрифугировали при 1000 об/мин 20 минут.

Осадок промывали последовательно 2 раза раствором этанол-этилацетата (1:1) для экстракции липидов и 2,4-ДФГ, который не реагировал с карбонильными группами окисленных белков. После каждого промывания раствором этанол-этилацетатом (1:1) осадок подсушивали на водяной бане 10 минут с целью устранения оставшегося растворителя этанол-этилацетат и затем растворяли в 2,5 мл 8 М раствора мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут до полного растворения.

2. В эритроцитах.

Для проведения анализа в эритроцитах кровь (брали с ЭДТА) центрифугировали при 3000 оборотов в минуту в течении 15 минут, плазму отсасывали, и эритроциты промывали 3 раза физиологическим раствором (9 мл). Далее аналогично проводили ход метода, как и в сыворотке крови.

3. В моче.

Ход метода в целом аналогичен его осуществлению в сыворотке крови. Однако для определения ОМБ брали не осадок денатурированных белков, т.к. он образовывался слабо, а 0,5 мл жидкости из пробирки. Стадия промывания раствором этанол-этилацетат (1:1) отсутствовала. Далее делали все в соответствии с методом: добавляли 2,5 мл 8 М раствора мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут.

Оптическую плотность образовавшихся динитрофенилгидразонов (в сыворотке крови, эритроцитах, моче) регистрировали на спектрофотометре при следующих длинах волн: 356, 370, 430, 530 нм (против воды). Полученные результаты представлены в таблицах 2-4.

Динамику молекул средней массы (МСМ) и окислительной модификации белков (ОМБ) анализировали на фоне общепринятых критериев эндогенной интоксикации - лейкоцитарных индексов интоксикации (ЛИИ) и индекса ядерного сдвига (таблица 5).

Таблица 2.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в сыворотке крови у обследованной больной хроническим холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
ДоЛХЭ Сразу после ЛХЭ 1 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
МСМ, единиц оптической плотности 0,13±0,004 0,17178 0,13619 0,15761 0,17495
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,325±0,03 0,158 0,218 0,226 0,121
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,435±0,02 0,304 0,247 0,226 0,299
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,64±0,05 0,251 0,156 0,181 0,241
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,175±0,02 0,228 0,092 0,071 0,143
Таблица 3.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в эритроцитах у обследованной больной хроническим холециститом
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
До ЛХЭ Сразу после ЛХЭ 1 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
МСМ, единиц оптической плотности 0,15±0,004 0,238 0,245 0,21 0,233
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,38±0,03 0,291 0,261 0,304 0,27
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,41±0,02 0,261 0,283 0,315 0,258
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,49±0,02 0,684 0,588 0,61 0,494
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,45±0,03 0,93 0,88 1,05 0,66
Таблица 4.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в моче у обследованной больной хроническим холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
До ЛХЭ 1 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
МСМ, единиц оптической плотности 0,31±0,03 0,23853 0,55787 0,18253
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,57±0,09 0,308 0,534 0,313
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,66±0,07 0,718 0,458 0,3
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,65±0,035 0,423 1,084 0,509
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,26±0,01 0,28 0,312 0,414
Таблица 5.
Лейкоцитарные индексы интоксикации и индекс ядерного сдвига у обследованной больной хроническим холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
До ЛХЭ Сразу после ЛХЭ 1 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
ЛИИ по Кальф-Калифу 1,59±0,09 4,13 3,385 1,857 1,703
ЛИИ по Островскому 1,79±0,06 3,348 2,846 1,857 1,703
ЛИИ по Химич 1,09±0,06 2,879 2,334 1,374 0,749
Индекс ядерного сдвига 0,02±0,004 0,1324 0,1045 0 0

Полученные данные обследования свидетельствовали о наличии эндогенной интоксикации у пациентки, что проявлялось повышенными уровнями ЛИИ до 1 суток наблюдений, на 5 сутки после операции их величины приближались к норме (за исключением ЛИИ по Химич, который был ниже нормы в 1,5 раза).

При этом уровни МСМ и ОМБ сыворотки крови, эритроцитов и мочи проявили себя как более чувствительные тесты эндотоксикоза: к 5 суткам наблюдений ряд их показателей отличались от нормы. МСМ были повышены: в сыворотке крови - в 1,4 раза, в эритроцитах - в 1,6 раза, в моче - в 1,7 раза. Уровень ОМБ при 530 нм, предлагаемой нами в качестве базовой длины волны для исследования, в сыворотке крови был меньше нормы в 1,2 раза, в эритроцитах и моче - выше в 1,5 раза и 1,6 раза соответственно. Это может свидетельствовать о некотором дисбалансе ОМБ в исследуемых биологических средах организма при хроническом холецистите.

Пример 2. Больная К., 51 год, поступила в Городскую клиническую больницу скорой медицинской помощи им. Г.А.Захарьина г.Пензы (ГКБ СМП им. Г.А.Захарьина) с диагнозом - острый холецистит.

У больной была произведена венепункция и сбор утренней мочи, натощак. Тяжелое состояние пациентки и подготовка к лапороскопической холецистэктомии (ЛХЭ) требовали всестороннего лабораторного обследования. Для оценки выраженности эндогенной интоксикации определяли уровни МСМ и окислительной модификации белков (ОМБ) в сыворотке крови, эритроцитах на этапах сразу после ЛХЭ, на 3 и 5 сутки наблюдений, в моче - на 5 сутки после операции. Для получения сыворотки крови и эритроцитов взятую кровь делили на две порции: в ту пробирку, в которой планировалось получение эритроцитов, добавляли ЭДТА.

Окислительную модификацию белков сыворотки крови человека в пуле веществ средней молекулярной массы определяли следующим образом.

1. В сыворотке крови.

Взятую кровь центрифугировали для отделения сыворотки от форменных элементов. Проводили разведение сыворотки крови в 10 раз (в стеклянных пробирках, в том числе все этапы далее) путем прибавления к 0,1 мл сыворотки крови 0,9 мл физиологического раствора. Затем для осаждения белков к пробе приливали 0,5 мл 10% раствор трихлоруксусной кислоты и производится перемешивание. Проводили центрифугирование 15 минут при 1000 оборотов в минуту.

Надосадочную жидкость отбирали в количестве 0,5 мл, прибавляли 4,5 мл дистиллированной воды и определяли оптическую плотность полученного раствора при длине волны 254 нм. Величина экстинкции пробы соответствовала уровню молекул средней массы, содержание которых выражали в единицах оптической плотности (ед.опт.пл.).

К осадку денатурированных белков добавляли 1 мл 0,05 М 2,4-ДФГ, растворенного в 2 М HCl. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем пробы центрифугировали при 1000 об/мин. 20 минут.

Осадок промывали последовательно 2 раза раствором этанол-этилацетата (1:1) для экстракции липидов и 2,4-ДФГ, который не реагировал с карбонильными группами окисленных белков. После каждого промывания раствора этанол-этилацетат (1:1) осадок подсушивали на водяной бане 10 минут с целью устранения оставшегося растворителя этанол-этилацетат и затем растворяли в 2,5 мл 8 М раствора мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут до полного растворения.

2. В эритроцитах.

Для проведения анализа в эритроцитах кровь (брали с ЭДТА) центрифугировали при 3000 оборотов в минуту в течении 15 минут, плазму отсасывали, и эритроциты промывали 3 раза физиологическим раствором (9 мл). Далее аналогично проводили ход метода, как и в сыворотке крови.

3. В моче.

Ход метода в целом аналогичен его осуществлению в сыворотке крови. Однако для определения ОМБ брали не осадок денатурированных белков, т.к. он образовывался слабо, а 0,5 мл жидкости из пробирки. Стадия промывания раствором этанол-этилацетата (1:1) отсутствовала. Далее делали все в соответствии с методом: добавляли 2,5 мл 8 М раствора мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут.

Оптическую плотность образовавшихся динитрофенилгидразонов (в сыворотке крови, эритроцитах, моче) регистрировали на спектрофотометре при следующих длинах волн: 356, 370, 430, 530 нм (против воды). Полученные результаты представлены в таблицах 6-8.

Динамику МСМ и ОМБ анализировали на фоне общепринятых критериев эндогенной интоксикации - лейкоцитарных индексов интоксикации (ЛИИ) и индекса ядерного сдвига (таблица 9).

Полученные данные обследования свидетельствовали о наличии эндогенной интоксикации у пациентки, что проявлялось повышенными уровнями ЛИИ до 3 суток наблюдений, на 5 сутки после операции их величины приближались к норме (за исключением - ЛИИ по Кальф-Калифу, снизившегося в 2,2 раза, и индекса ядерного сдвига, повышенного в 4,2 раза).

При этом уровни МСМ и ОМБ сыворотки крови, эритроцитов и мочи проявили себя как более чувствительные тесты эндотоксикоза: к 5 суткам наблюдений ряд их показателей отличались от нормы. МСМ были повышены: в эритроцитах - в 1,3 раза, в моче - в 1,9 раза. Уровень ОМБ при 530 нм, предлагаемой нами в качестве базовой длины волны для исследования, был выше нормы в эритроцитах и моче - в 1,4 раза и 1,9 раза соответственно. Это может свидетельствовать о дисбалансе ОМБ в исследуемых биологических средах организма при остром холецистите.

Таблица 6.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в сыворотке крови у обследованной больной острым холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
Сразу после ЛХЭ 3 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
МСМ, единиц оптической плотности 0,13±0,004 0,267 0,248 0,1297
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,325±0,03 0,442 0,554 0,521
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,435±0,02 0,337 0,319 0,655
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,64±0,05 0,583 0,708 0,63
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,175±0,02 0,205 0,28 0,16
Таблица 7.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в эритроцитах у обследованной больной острым холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
Сразу после ЛХЭ 3 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
МСМ, единиц оптической плотности 0,15±0,004 0,205 0,2158 0,1905
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,38±0,03 0,342 0,331 0,299
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,41±0,02 0,419 0,356 0,302
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,49±0,02 0,435 0,5 0,485
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,45±0,03 0,422 0,456 0,615
Таблица 8.
Величины молекул средней массы (МСМ) и уровни окислительной модификации белков (ОМБ) в моче у обследованной больной острым холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
5 сутки после ЛХЭ
МСМ, единиц оптической плотности 0,31±0,03 0,5808
ОМБ, единиц оптической плотности (356 нм) 0,57±0,09 1,231
ОМБ, единиц оптической плотности (370 нм) 0,66±0,07 1,226
ОМБ, единиц оптической плотности (430 нм) 0,65±0,035 1,2
ОМБ, единиц оптической плотности (530 нм) 0,26±0,01 0,486
Таблица 9.
Лейкоцитарные индексы интоксикации и индекс ядерного сдвига у обследованной больной острым холециститом.
Биохимические тесты Норма Уровень значений параметров
Сразу после ЛХЭ 3 сутки после ЛХЭ 5 сутки после ЛХЭ
ЛИИ по Кальф-Калифу 1,59±0,09 2,786 2,625 0,725
ЛИИ по Островскому 1,79±0,06 2,571 2,125 1,778
ЛИИ по Химич 1,09±0,06 1,157 1,318 0,924
Индекс ядерного сдвига 0,02±0,004 0,0435 0.133 0,0847

С помощью предлагаемого способа обследовано 12 больных холециститом, в том числе 5 больных острым и 7 больных хроническим холециститом. Это больные, которым были проведены лапароскопические холецистэктомии (ЛХЭ). Наблюдения в исследуемых группах проводились до и сразу после ЛХЭ, на 1, 3, 5 сутки послеоперационного периода.

Исследования проведены на клинической базе кафедры анестезиологии-реаниматологии и скорой медицинской помощи (АРиСМП) Государственного бюджетного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Пензенский институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ДПО ПИУВ Минздравсоцразвития России) - в Городской клинической больнице скорой медицинской помощи им. Г.А.Захарьина г.Пензы (ГКБ СМП им. Г.А.Захарьина) в хирургическом отделении. Подготовка биологического материала к анализу проводилась в экспресс-лаборатории отделения реанимации и интенсивной терапии ГКБ СМП им. Г.А.Захарьина, также являющейся одной из клинических баз кафедры АРиСМП ГБОУ ДПО ПИУВ Минздравсоцразвития России.

Величины МСМ определялись на спектрофотометре СФ-2000, уровень ОМБ оценивали с помощью КФК-3 в лаборатории кафедры биохимии ПГПУ им. В.Г.Белинского.

Предлагаемый способ позволяет увеличить информативность биохимического теста - определение уровня молекул средней массы в сыворотке крови, плазме, эритроцитах и в моче, являющегося одним из наиболее часто используемых маркеров эндогенной интоксикации. Данное предложение позволит расширить представления о механизмах окислительной модификации белков у больных в критических состояниях, в частности использовать его в экспресс-лабораториях отделений реанимации и интенсивной терапии, при малом объеме полученной биологической среды (крови, мочи) и времени проведения анализа.

Источники информации:

1. Рябов Г.А., Азизов Ю.М., Дорохов С.И., Кулабухов В.В., Титова И.А., Пасечник И.Н., Бражник Т.Б., Рыбинцев В.Ю. Окислительная модификация белков плазмы крови у больных в критических состояниях // Анестезиология и реаниматология. - 2000. - №2. - с.72-75.

2. Изобретение «СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ» патент №2193780, приоритет от 26.04.2001 г., опубликовано 27.11.2002.

3. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.Г. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод ее определения // Вопросы медицинской химии. - 1995. - №1. - с.24-26.

Способ определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы в биологической среде, характеризующийся тем, что производят забор биологической среды, выбранной из плазмы крови, эритроцитов или мочи, осаждают белки путем добавления 10% раствора трихлоруксусной кислоты, и в случае образования осадка проводят центрифугирование при 1000 об/мин в течение 15 минут, затем добавляют 0,05 М раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М соляной кислоте, после чего пробу центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 минут, и в случае выпадения осадка осадок промывают 2 раза раствором этанол-этилацетат (1:1), затем подсушивают на водяной бане 10 минут и затем растворяют в 8 М растворе мочевины, выдерживая пробы в кипящей водяной бане в течение 10 минут до полного растворения, с последующим анализом раствора спектрофотометрическим методом.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к анализаторам для автоматического определения показателей гемостаза (коагуляторам). .
Изобретение относится к медицине, а именно к внутренним болезням, и может быть использовано для оперативной оценки нарушений микроциркуляции. .
Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическому способу определения концентрации компонентов свертывания крови и продуктов их превращения в биологических жидкостях.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения функционального состояния системы гемостаза. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования. .

Изобретение относится к способу in vitro измерения активности тромбина в образце крови. .
Изобретение относится к медицине, клинико-лабораторной диагностике и экспериментальной медицине. .

Группа изобретений относится к горному делу, в частности к геофизическим исследованиям скважин, и может быть использовано для осмотра скважин при проведении ремонтных работ.

Изобретение относится к контролю формы, которая имеет пористый слой оксида алюминия на своей поверхности с множеством мельчайших углублений. Способ включает этап обеспечения на основании зависимости между первым параметром, который является показателем толщины пористого слоя оксида алюминия, и цветовым параметром, который является показателем цвета света, отраженного от пористого слоя оксида алюминия, первой цветовой информации, которая представляет допуск на первый параметр пористого слоя оксида алюминия, который имеет неровную структуру, которая находится в пределах допуска, этап обеспечения формы, которая является объектом контроля, при этом форма имеет пористый слой оксида алюминия на своей поверхности; этап получения цветового параметра, который является показателем цвета света, отраженного от пористого слоя оксида алюминия формы-объекта контроля, и этап определения пригодности первого параметра формы-объекта контроля на основании полученного цветового параметра и первой цветовой информации.
Изобретение относится к аналитической химии, а именно к фотометрическим способам определения редкоземельных элементов в природных объектах и технических материалах.

Настоящее изобретение относится к сенсорике катионов металлов с использованием фотохромных соединений в жидких средах для мониторинга окружающей среды и биологических объектов.

Изобретение относится к области оптического приборостроения и касается спектрометра на основе поверхностного плазмонного резонанса. Спектрометр содержит последовательно расположенные на одной оптической оси источник излучения света с непрерывным спектром, коллиматор, поляризатор, цилиндрическую линзу или цилиндрическое зеркало, устройство нарушенного полного внутреннего отражения с отражающим элементом, диспергирующее устройство, фокусирующий объектив и светочувствительную фотоматрицу, установленную в фокусе объектива.

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к способам определения концентрации примесей в питьевой воде. Способ включает обработку проб воды раствором йодида калия, поочередное измерение оптической плотности проб диоксида хлора при pH 7 и хлорит-иона и диоксида хлора при pH 2,5, определение из градуировочных графиков концентрации диоксида хлора при pH 7 и суммарной концентрации хлорит-иона и диоксида хлора при pH 2,5, расчет концентрации хлорит-иона по формуле: ( C 2 16,86 − C 1 67,46 ) × 16,86 , где C1 - концентрация диоксида хлора при pH 7, мг/дм3; C2 - суммарная концентрация диоксида хлора и хлорит-иона при pH 2,5, мг/дм3; 67,46 - окислительный эквивалент диоксида хлора, соответствующий pH 7; 16,86 - окислительный эквивалент хлорит-иона, соответствующий pH 2,5.

Изобретение относится к области пищевой промышленности, в частности к способу и устройству определения зрелости икры. Икру (W) погружают на загрузочный лоток (6), направляют свет от светового излучателя (11) на икру (W) и изображение, по меньшей мере, части икры (W) в состоянии облучения светом от светового излучателя (11) икры (W) снимают с помощью устройства для съемки изображений (12).

Изобретение относится к обнаружению вещества в атмосфере и основано на использовании, по меньшей мере, одного датчика, реагирующего на наличие определяемого вещества и который облучается, по меньшей мере, одним источником света, и, по меньшей мере, одного фотоприемника.

Изобретение относится к измерительной технике, а именно к калибровке измерительной системы. .

Изобретение относится к измерительной технике, а именно к калибровке измерительной системы. .

Изобретение относится к способам определения содержания лигнина Класона. Способ определения лигнина заключается в том, что к лигноцеллюлозному материалу добавляют водно-диоксановый раствор, полученный смешением концентрированной азотной кислоты и 1,4-диоксана в соотношении 1:4 (по объему), реакционную смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 минут, затем добавляют 2 М раствор гидроксида натрия, объем реакционной смеси доводят дистиллированной водой и фильтруют, измеряют оптическую плотность фильтрата при 440 нм, и по величине оптической плотности судят о содержании лигнина в целлюлозном полуфабрикате. Изобретение заключается в упрощении и ускорении выполнения анализа. 2 табл., 24 пр.
Наверх