Штамм rhodotorula sp. для очистки почв, вод, сточных вод, шламов от нефти и нефтепродуктов

Авторы патента:

C12N1/26 - способы, использующие, или питательные среды, содержащие углеводороды (очистка углеводородных масел с помощью микроорганизмов C10G 32/00)

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

C02F3/34 - отличающаяся используемыми микроорганизмами

Владельцы патента RU 2526496:

Федеральное государственною бюджетное учреждение науки Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для очистки почв, вод, сточных вод, шламов от нефти и нефтепродуктов. Штамм Rhodotorula sp. 51-18-2Р депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ Y-2993D. Штамм способен разрушать нефть и нефтепродукты в загрязненной воде или почве. Изобретение позволяет повысить эффективность очистки почв, вод, сточных вод и шламов от нефти и нефтепродуктов. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения нового штамма бактерий, эффективного для очистки нефтезагрязненных почв, водоемов, сточных вод загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

Известны штаммы Micobacterium flavescens ВКПМ - В-6000, Micobacterium sp. ИЖ-4, Rhodococcus sp. 56д, Acinetobacter sp. HB-1 (Патент РФ №2191752, опубликовано 27.10.2002 г., приоритет 27.09.1999 г.; Патент РФ №2191753, опубликовано 27.10.2002 г., приоритет 27.09.1999 г.). Недостатком этих культур является узкий диапазон pH среды 6,8-8,0).

Известны штаммы Mycobacterium phlei и Pseudomonas aeruginosa (Патент РФ №2053206, опубликовано 27.01.1996 г., приоритет 29.09.1994 г.), применяемые для биодеструкции углеводородов нефтепродуктов в окружающей среде в теплое время года. Однако эти штаммы неэффективны в воде ниже 12°C. Кроме того, вид Pseudomonas aeruginosa относится к условно-патогенным микроорганизмам и использование в открытых системах недопустимо.

Задачей изобретения является получение нового штамма бактерии, обеспечивающего разрушение растворенных в воде нефтепродуктов загрязненных водоемов и сточных вод, а также нефти и нефтепродуктов в загрязненной почве.

Штамм Rhodotorula sp. 51-18-2 (номер, присвоенный штамму авторами) выделен в 2001 году из пробы почвы Усинского района Республики Коми, изъятой в подфакельной зоне после завершения эксплуатации объекта. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов, номер VKM Y-2993D.

В классификации микроорганизмов по группам патогенности Санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 от 1 мая 2008 г. «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» данный вид (род) не значится.

Описание условий, необходимых для культивирования штамма: среда для культивирования следующего состава: на 1000 мл воды - сахароза 20 г, NaNO₃ - 3,0 г; KH₂PO₄ - 1,0 г; KCl - 0,5 г; MgSO₄×5H₂O - 0,5 г; Алканы - 10 г, 15-25°C, 3-5 суток в условиях жидкофазной ферментации.

Штамм характеризуется следующими признаками: Колонии ярко-розовые, выпуклые, гладкие, блестящие слизистые, край ровный. Клетки овальные, крупные, 3-7 X 4-15 мкм, почкование полярное.

Режим хранения штамма - длительное хранение в лиофилизированной форме в плотно запаянных стеклянных ампулах. Кратковременное хранение (для подготовки биомассы с целевым использованием) - периодические пересевы - 1 раз в 2 месяца с хранением выросшей чистой культуры на скошенном агаре среды следующего состава: на 1000 мл воды - сахароза 30 г, NaNO₃ - 3,0 г; KH₂PO₄ - 1,0 г; KCl - 0,5 г; MgSO₄×5H₂O - 0,5 г; агар микробиологический - 20,0; в закрытых пробирках в холодильнике при температуре не выше +6 и не ниже +1°C.

Способность штамма к биодеструкции нефти и нефтепродуктов изучали в лабораторных опытах со сточной водой и почвенными пробами загрязненных нефтью, результаты приведены в примерах ниже.

Пример 1. Разрушение углеводородов в воде

Для изучения углеводородокисляющих свойств штамма был проведен опыт в присутствии сырой нефти. На 1 л воды добавляли NaNO₃ - 2,0 г; KH₂PO₄ - 1,0 г; KCl - 0,5 г; MgSO₄×5H₂O - 0,5 г, раствор разливали в 250 мл колбы по 100 мл стерилизовали их в течение часа в автоклаве, охлаждали до комнатной температуры, затем до температуры экспозиции в холодильнике, после чего проводили заражение содержимого колбы предварительно приготовленной суспензией живой культуры Rhodotorula sp. 51-18-2 Р-Y-2993D с титром живых клеток 10 млрд. клеток/1 мл в количестве 1 мл на колбу. Контрольную колбу микроорганизмами не заражали. Во все колбы добавляли по 0,5 г сырой нефти. Условия опыта - температура 0+2°C, +25°C(таблица 1). Длительность 10 суток.

Таблица 1
Обозначение вариантов опыта
Варианты опыта	1. t +2°C	2. t +25°C
1. Контроль	1-1	1-2
2. Rhodotorula sp. 51-18-2 P-Y-2993D	2-1	2-2

Содержание нефти в почве анализировали методом флуориметрии на анализаторе жидкости «Флюорат-02» в соответствии с ПНД Ф 16.1.21-98 [Методика выполнения измерений массовой доли нефтепродуктов в пробах почв на анализаторе жидкости «Флюорат-02». ПНД Ф 16.1.21-98. -M., 1998. - 15 с.]. Результаты анализа концентрации углеводородов приведены в таблице 2. Как видно из данных анализа, в присутствие штамма Rhodotorula sp. 51-18-2 Р-Y-2993D происходит снижение концентрации растворенных в воде углеводородов, усиливающееся при повышении температуры от +2 до +25°C от 56 до 91%.

Таблица 2
Изменение концентрации растворенных в воде углеводородов в опыте
Вариант	Температура, °C	Концентрация растворенных углеводородов, мг/дм³	Общая степень деструкции, %
1-1	2	13,0	0
1-2	25	24	0
2-1	2	5,7	56
2-2	25	2,2	91

Пример 2. Разрушение углеводородов в почве.

Для опыта брали почву (песок), загрязняли ее нефтью в количестве 150 мг/г. В почвенные пробы вносили суспензию штамма Rhodotorula sp. 51-18-2 Р-Y-2993D с титром клеток 1010 в количестве мл на 1 кг пробы. Условия опыта - температура 25°C и 5°C в течение 15 суток. Содержание нефти в почве анализировали методом флуориметрии на анализаторе жидкости «Флюорат-02» в соответствии с ПНД Ф 16.1.21-98 [Методика выполнения измерений массовой доли нефтепродуктов в пробах почв на анализаторе жидкости «Флюорат-02». ПНД Ф 16.1.21 - 98. - М., 1998. - 15 с.]. Результаты приведены в таблице 3.

Как видно из представленных в таблице результатов - в сравнении с контролем, в почвенных пробах произошло снижение концентрации нефти в течение опыта как при комнатной температуре, так и в более холодных условиях. Таким образом, штамм Rhodotorula sp. 51-18-2 Р-Y-2993D можно использовать для очистки нефтезагрязненных почв и водоемов как в нормальных условиях, так и в условиях холодного климата.

Таблица 3
Изменение уровня нефтяного загрязнения в опыте
Варианты опыта	Длительность экспозиции, суток	Концентрация нефтепродуктов в пробах почвы, мг/дм³
Контроль	15, температура 25°C	55,0
Контроль	15, температура +5°C	78,0
Rhodotorula sp. 51-18-2 Р-Y-2993D	15, температура 25°C	14,9
Rhodotorula sp. 51-18-2 P-Y-2993D	15, температура 5°C	30,7

Штамм Rhodotorula sp. ВКМ Y-2993D, используемый для очистки почв, вод, сточных вод, шламов от нефти и нефтепродуктов.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен штамм бактерий Exiguobacterium mexicanum ВКПМ B-11011, обладающий способностью быстро утилизировать нефть, дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат.

Штамм бактерий bacillus vallismortis - деструктор нефти и нефтепродуктов // 2513702

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен штамм бактерий Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 - деструктор нефти и нефтепродуктов.

Препарат для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов // 2501852

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для очистки загрязненных нефтью почв. Препарат, содержащий биодеструктор нефтяного загрязнения, представляет собой фугат культуральной жидкости микробной массы консорциума нефтеокисляющих микроорганизмов, иммобилизованных на торфоносителе.

Устройство для финишной очистки морских прибрежных вод // 2496724

Изобретение относится к области инженерной экологии. Устройство для финишной очистки морских прибрежных вод, представляющее собой санитарную водорослевую плантацию, включающую силовые пропиленовые канаты диаметром 30-40 мм, удерживаемые в горизонтальном положении металлическими тросами, прикрепленными к гравитационным якорям через крепежные элементы плавучих буев, соединенных с силовыми канатами.

Штамм rhodococcus erythropolis, используемый для разложения нефти // 2489485

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается новой культуры микроорганизмов, разрушающих нефть. .

Штамм pseudomonas citronellolis, используемый для разложения нефти и дизельного топлива // 2489484

Изобретение относится к биотехнологии. .

Штамм rhodococcus fascians, используемый для разложения нефти // 2489483

Штамм pseudomonas aeruginosa rcam01139 для разложения нефти и дизельного топлива // 2489482

Изобретение относится к микробиологической промышленности. .

Штамм micrococcus luteus, обладающий каталазной активностью и осуществляющий трансформации органических остатков природного происхождения // 2488630

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается использования культуры рода Micrococcus вида Micrococcus luteus для получения нового штамма Micrococcus luteus, который обладает высокой каталазной активностью и способствует повышению продуктивности агроэкосистемы, участвуя в процессах трансформации органических остатков природного происхождения.

Штамм penicillium sp., обладающий полифункциональными свойствами и осуществляющий трансформации органических остатков природного происхождения // 2487933

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается использования культуры рода Penicillium вида Penicillium sp.для получения нового штамма Penicillium sp., который обладает полифункциональными свойствами и способствует повышению продуктивности агро-экосистемы, участвуя в процессах трансформации органических остатков природного происхождения.

Способ очистки мерзлотных почв и водной среды от нефти и нефтепродуктов спорообразующими бактериями bacillus vallismortis // 2525930

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для очистки мерзлотной почвы и водной среды от нефти и нефтепродуктов. Выращивают штамм бактерий Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 и готовят из него суспензию, в которую вносят в мерзлотную почву и водную среду.

Способ выявления внутрибольничных штаммов микроорганизмов // 2525695

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предназначен для выявления внутрибольничных штаммов микроорганизмов при проведении эпидемиологического мониторинга.

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus 2f9-продуцент моноклональных антител, специфичных к лизостафину и ингибирующих его литическую активность // 2525663

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения моноклональных антител (МКА) к лизостафину. Предложен новый штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus 2F9 - продуцент моноклональных антител, специфичных к лизостафину, ингибирующих его литическую активность и пригодных для его количественного определения.

Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза // 2525637

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению питательных сред для культивирования возбудителя листериоза. Питательная среда содержит ферментативный гидролизат бобов сои, ферментативный гидролизат из активированной эмбрионально-яичной массы перепелов, натрий хлористый, калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений // 2524434

Изобретение относится к биотехнологии. Иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений содержит клетки микроорганизма, обладающего 1,2-дегидрогеназной активностью, включенные в матрицу криогеля поливинилового спирта.

Способ получения замороженного бактериального концентрата на основе симбиоза пробиотических бактерий // 2524432

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для приготовления кисломолочных продуктов. Способ предусматривает приготовление питательной среды, ее стерилизацию и охлаждение.

Штамм бактерий lactobacillus acidophilus используемый для приготовления кисломолочного продукта // 2524117

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus acidophilus №9-ПС обладает биохимической активностью и высокой кислотностью.

Штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной целлюлозы // 2523606

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 является продуцентом бактериальной целлюлозы.

Штамм молочнокислых бактерий (варианты) для полного разложения глютена в муке и его использование // 2523597

Группа изобретений относится к области микробиологии и может быть использована в пищевой промышленности. Предложены штамм Lactobacillus sanfranciscensis DSM 22063 и штамм Lactobacillus plantarum DSM 22064, способные к полному разложению глютена в муке.

Способ подготовки симбиотических бактерий рода xenorhabdus, выделенных из нематод вида steinernema feltiae protense, к хранению // 2522811

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении симбиотических бактерий рода Xenorhabdus, выделенных из нематод вида Steinernema feltiae protense. Способ предусматривает выращивание на питательной среде симбиотических бактерий рода Xenorhabdus, выделенных из нематод вида Steinernema feltiae protense.

Способ очистки воды и мерзлотных почв от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий pseudomonas panipatensis вкпм в-10593 // 2525932

Изобретение относится к биохимии. Предложен способ очистки воды и мерзлотной почвы от нефти и нефтепродуктов.