Способ повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии. Предложен способ повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, включающий культивирование мезенхимальных стромальных клеток человека в среде DMEM/F12, содержащей 100 ед/мл пенициллина и 100 ед/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10% фетальной бычьей сыворотки, в присутствии провоспалительных факторов TNF-α в концентрации 20 нг/мл и IFN-γ в концентрации 30 нг/мл, характеризующийся тем, что культивирование проводят в атмосфере, состоящей из 5% CO2 и 95% воздуха, при температуре 37°С в течение 48 часов. Изобретение позволяет повысить иммуносупрессорную активность клеток МСК и может быть использовано в трансплантологии и фармакологии. 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к биофармакологии и медицине и заключается в новом способе повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток.

В последнее время обнаружено, что мезенхимальные стромальные (стволовые) клетки (МСК) обладают антивоспалительными и иммуносупрессивными свойствами, выражающимися в подавлении пролиферации активированных Т-лимфоцитов, в подавлении созревания дендритных клеток, снижении способности В-клеток секретировать иммуноглобулины.

Иммуносупрессивные свойства МСК в нормальных условиях не выражены, а проявляются вследствие воздействия провоспалительного микроокружения, а именно в присутствии активированных лимфоцитов и секретируемых ими провоспалительных белковых факторов - цитокинов, например IL-1, TNF-alpha, IFN-gamma. В научной литературе достаточно подробно исследовано влияние активированных Т-клеток и продуцируемых ими цитокинов на МСК (Ren G., Zhang L., Zhao X., Xu G., Zhang Y., Roberts A.L, Zhao R.C., Shi Y.. Cell Stem Cell. 2008; 2: 141-150). При этом воздействие различных факторов определяет фенотипические изменения в МСК, уровень их неспецифической иммуносупрессорной активности, способность ингибировать деление и функции отдельных субпопуляций клеток иммунной системы, а также уровень в МСК эффекторных молекул, непосредственно отвечающих за иммуносупрессорное действие на активированные Т-клетки и другие типы иммунных клеток (Kang J.W., Kang K.S., Koo Н.С., Park J.R., Choi E.W., Park Y.H.. Stem Cells Dev. 2008; 17:681-693; Hemeda H., Jakob M., Ludwig A.K., Giebel В., Lang S., Brandau S.. Stem Cells Dev. 2010; 19: 693-706). При этом воздействие только одного из факторов, например рекомбинантного цитокина интерферона гамма, либо фактора некроза опухоли альфа, на МСК приводит только к незначительному проявлению иммуносупрессорной активности, которая задействует отдельные ветви иммуносупрессорной программы. Так, в частности, воздействие IFN-g на МСК приводит к селективному повышению уровня фермента IDO, метаболизирующего триптофан и неспецифически ингибирующего деление активированных Т-клеток. В то же время обработка МСК TNF-a запускает механизм, базирующийся на повышении уровня другого фермента, индуцируемой NO-синтазы, которая синтезирует оксид азота (II), оказывающий токсическое действие на лимфоциты и другие клетки иммунной системы (Chen W.. Nat. Immunol. 2011; 12: 809-811).

Близким аналогом данного изобретения является способ ингибирования Т-клеточного ответа на антиген, включающий культивирование мезенхимальных стволовых клеток в присутствии низких концентраций IFN-g (US6797269). Низкие концентрации этого цитокина значительно увеличивают способность МСК презентировать на своей поверхности антигенные пептиды, но не содержат на своей поверхности достаточного уровня ко-стимулирующих молекул, необходимых для эффективной активации Т-клеток. Инкубация таких антиген-презентирующих МСК с Т-клетками в процессе активации с помощью антигена индуцирует в последних анергическое состояние, то есть неспособность к эффективной активации. Кроме того, модифицированные МСК предлагается использовать в качестве вектора для направленного действия на активированные Т-клетки молекул, негативно влияющих на антиген-специфическую активацию, в частности, белка CTLA-4.

Кроме того, известно, что необработанные МСК могут быть использованы для подавления реакции «трансплантат против хозяина» и других аутоиммунных состояний человека (US 6368636). Следует отметить, что представленный выше аналог использует принципиально другой способ получения иммуносупрессорных МСК, заключающийся в направленном угнетении антиген-зависимой активации именно Т-клеток. Этот способ не позволяет получить клетки, обладающие иммуносупрессорной активностью в отношении широкого спектра иммунных клеток, в том числе и лимфоцитов.

Настоящее изобретение представляет собой новый способ повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, состоящий в активации МСК путем инкубации в присутствии комбинации сразу двух провоспалительных белков-цитокинов TNF-α и IFN-γ. Преимущество данного способа заключается в значительном увеличении неспецифической иммуносупрессорной активности МСК в отношении различных типов иммунных клеток человека, по сравнению с необработанными МСК и МСК, обработанных только IFN-γ, либо только TNF-α.

Задачей изобретения является разработка нового способа получения МСК из жировой ткани человека, которые обладают повышенными по сравнению с нормальными МСК, иммуносупрессорными свойствами.

Техническим результатом изобретения является получение с помощью разработанного нового способа культур МСК жировой ткани человека, которые обладают повышенной иммуносупрессорной активностью, то есть способностью подавлять функции и деление активированных клеток иммунной системы человека.

Кроме того, обработка не одним, а комбинацией из сразу двух белков-цитокинов IFN-g и TNF-a, позволяет существенно увеличить иммуносупрессорную активность МСК за счет синергетического эффекта и включения сразу нескольких эффекторных механизмов. Такая усиленная неспецифическая ингибирующая активность полученных новым способом иммуносупрессорных МСК может существенно расширить круг их возможного использования по сравнению с аналогами и добиться лучших результатов, используя меньшее число клеток.

Поставленная техническая задача решается тем, что способ повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, включает культивирование мезенхимальных стромальных клеток человека в присутствии провоспалительных факторов TNF-α и IFN-γ.

Поставленная задача решается также тем, что при осуществлении упомянутого выше способа, культивирование МСК проводят в среде DMEM/F12, содержащей дополнительно антибиотик, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10% фетальной бычьей сыворотки.

Частным вариантом настоящего изобретения является упомянутый выше способ, характеризующийся тем, что в качестве антибиотика среда содержит 100 ед/мл пенициллина или стрептомицина, или их комбинацию в концентрациях 100 ед/мл каждого.

Другим частным вариантом настоящего изобретения является упомянутый выше способ, характеризующийся тем, что культивирование проводят в атмосфере, состоящей из 4,5-5,5% CO2 и 94,5-95,5% воздуха, при температуре 35-38°С в течение 40-50 часов.

Другим частным вариантом настоящего изобретения является упомянутый выше способ, характеризующийся тем, что провоспалительные факторы TNF-α используют в концентрации 10-40 нг/мл и IFN-γ используют в концентрации 10-40 нг/мл.

Другим частным вариантом настоящего изобретения является упомянутый выше способ, характеризующийся тем, провоспалительные факторы TNF-α используют в концентрации 15-25 нг/мл и IFN-γ в концентрации 25-35 нг/мл.

Изобретение в общем виде может быть реализовано следующим образом: мезенхимальные стромальные клетки жировой ткани человека следует культивировать in vitro; культивированные клетки можно проинкубировать в CO2 - инкубаторе (5% CO2; 95% воздуха), в частности, при 37°С в течение 48 часов в присутствии TNF-alpha IFN-gamma; иммуносупрессорные свойства полученных МСК можно оценить путем их сокультивирования с предварительно активированными лейкоцитами крови человека.

Согласно настоящему изобретению провосполительные факторы TNF-α и IFN-γ могут присутствовать в среде для культивирования в различных концентрациях, предпочтительно в концентрации 10-40 нг/мл, наиболее предпочтительно 15-35 и 25-35 нг/мл соответственно.

Согласно настоящему изобретению могут быть использованы любые культуры мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека. Выделение мезенхимальных стромальных клеток может быть осуществлено стандартными способами, хорошо известными специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение (например, как описано Priya N, Sarcar S, Majumdar AS, Sundarraj S.J Tissue Eng Regen Med. 2012 Vol.27, pp.1-9), и не ограничивается описанными ниже примерами.

Состав среды для культивирования согласно настоящему изобретению не ограничен каким-либо специальным образом, для культивирования может быть использована любая среда, содержащая компоненты, необходимые для роста мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, в частности, может быть использована коммерчески доступная среда DMEM/F12.

Пример конкретного выполнения настоящего изобретения.

1. Выделение и культивирование мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани in vitro

Подкожный жир человека (от 0,5 до 10 мл) собран в ходе хирургической операции в операционных помещениях с соблюдением правил асептики и антисептики. Выделение клеток из полученного в результате операции материала проведено в стерильных условиях ламинарного бокса.

Основные этапы включают:

Измельчение ткани в тканевом дезинтеграторе gentleMACSdissiciator (Myltenyi Biotec) до консистенции суспензии мелких (размером не более 2 кубических миллиметров)кусочков.

Смешивание измельченной жировой ткани с раствором коллагеназы I типа (200 ед/мл, Worthington Biochemical, США) и диспазы (40 ед/мл, Sigma, Германия) при соотношении объема ткани (в мл) к объему ферментативного раствора (в мл) 1:2.

Инкубирование образца в CO2-инкубаторе (5% СО2; 95% воздуха) при 37°С в течение 30-45 мин при постоянном встряхивании.

Добавление по окончании инкубации равного объема среды DMEM/F12, содержащей 100 ед./мл пенициллина, 100 ед/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия (HyClone), 10% фетальной бычьей сыворотки (HyClone).

Центрифугирование полученного образца при 200 g в течение 5 мин.

Удаление с помощью вакуумного насоса белесого поверхностного слоя, состоящего из зрелых адипоцитов и кусочков ферментативно необработанной ткани.

Суспендирование осадка, состоящего из клеток стромы жировой ткани и клеток сосудистой стенки и крови, в стерильной деионизованной воде для лизирования эритроцитов.

Добавление для восстановления осмотического давления в образце 10-кратного объема среды DMEM/F12.

Фильтрование полученной суспензии клеток через нейлоновые фильтры с размером пор 100 мкм (BD Falcon Cell Strainer, США).

Центрифугирование фильтрата при 200 g 5 мин.

Удаление супернатанта.

Определение концентрации выделенных из подкожной жировой ткани первичных клеток с помощью камеры Гаряева под микроскопом или с помощью автоматического счетчика клеток (Countess, Invitrogen) при температуре воздуха +20 - +25°С и относительной влажности 40-70%.

Ресуспендирование осадка в среде роста DMEM/F12, содержащей 100 ед/мл пенициллина, 100 ед/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия (HyClone), 10% фетальной бычьей сыворотки (HyClone) до концентрации 5×104 фрагментов/см3.

Высаживание полученной суспензии на чашки Петри (Coming Costar) и инкубирование при 37°С, 5% СО2 в CO2-инкубаторе в течение 2 суток.

Смена среды в чашках Петри для удаления неприкрепившихся клеток. Выход клеток должен составлять 4-7×104 прикрепившихся клеток на 1 мл ткани. Смена ростовой среды проводится каждые 2-3 дня до достижения 70-80% плотности монослоя.

Удаление ростовой среды из чашек Петри.

Двукратная промывка монослоя раствором DPBS (HyClone).

Обработка монослоя смесью 0,25% раствора трипсина и 0,02% ЭДТА (1:1) (HyClone).

Инкубирование в течение 15 мин при 37°С, 5% CO2 в CO2-инкубаторе.

Суспендирование прикрепившихся клеток с помощью пипетирования.

Определение концентрации суспензии культивируемых мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека с помощью камеры Гаряева под микроскопом или с помощью автоматического счетчика клеток (Countess, Invitrogen) при температуре воздуха +20 - +25°С и относительной влажности 40-70%.

Добавление в полученную суспензию клеток 3-кратного от первоначального объема ростовой среды.

Высаживание суспензии на чашки Петри в соотношении 1:3.

2. Выделение, культивирование и активация иммунных клеток in vitro

С согласия здоровых доноров в стерильные флаконы (Corning Costar), содержащие стерильный раствор ЭДТА в количестве 1,2-2 мг/мл крови, рН 7,2 забирали 10-25 мл периферической крови из локтевой вены.

Основные этапы:

Разведение нативной венозной крови 0,01М стерильным раствором PBS (рН 7,2) в соотношении 1:1.

Внесение в 50-мл конические пробирки (Coming Costar) 20 мл Ficoll Paque® (Pharmacia Biotech) плотностью 1,077.

Наслоение разведенной суспензии клеток крови на Ficoll Paque® в соотношении 1,5:1.

Центрифугирование суспензии клеток крови в градиенте плотности Ficoll Paque® при 400 g 30 мин.

Перенесение клеток, располагающихся в интерфазе, в новую 50-мл пробирку, добавление 50 мл раствора HBSS (HyClone).

Осаждение клеток центрифугированием при 200 g в течение 5 мин.

Удаление супернатанта.

Ресуспендирование осадка в 50 мл раствора HBSS и центрифугирование при 200 g в течение 5 мин.

Ресуспендирование осадка в DPBS (HyClone).

Определение концентрации суспензии культивируемых мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека с помощью камеры Гаряева под микроскопом или с помощью автоматического счетчика клеток (Countess, Invitrogen) при температуре воздуха +20 - +25°С и относительной влажности 40-70%.

Разведение суспензии клеток крови до концентрации 1×107 клеток средой DMEM/F12, содержащей 100 ед/мл пенициллина, 100 ед/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия (HyClone), 10% фетальной бычьей сыворотки (HyClone).

Добавление для активации полученной суспензии клеток фитогемагглютинина (РНА, Sigma) до конечной концентрации 10 мкг/мл.

Инкубирование образца в CO2-инкубаторе (5% СО2; 95% воздуха) при 37°С в течение 2 ч.

Осаждение суспензии активированных клеток крови центрифугированием при 200 g в течение 5 мин.

Ресуспендирование осадка в 50 мл раствора HBSS, центрифугирование при 200 g в течение 5 мин.

Ресуспендирование осадка в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 100 ед/мл пенициллина, 100 ед/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия (HyClone), 10% фетальной бычьей сыворотки (HyClone) до концентрации 1×107 клеток и высаживание на чашки Петри с прекокультивированными МСК.

Инкубирование в CO2 - инкубаторе (5% СО2; 95% воздуха) при 37°С в течение 48 часов

3. Активация МСК in vitro с помощью провоспалительных цитокинов TNF-alpha, IFN-gamma

Добавление к монослою выделенных и ко-культивированных МСК TNF-alpha в концентрации 20 нг/мл и IFN-gamma в концентрации 30 нг/мл.

Инкубирование в CO2 - инкубаторе (5% СО2; 95% воздуха) при 37°С в течение 48 часов.

После инкубации клетки обрабатывают раствором трипсина в растворе Версена (раствор ЭДТА в PBS), что приводит к их откреплению от клеточной поверхности, промывают культуральной средой, содержащей 5-10% сыворотки. Полученные таким образом клетки можно использовать для оценки их иммуносупрессорной активности, в частности способности подавлять деление активированных Т-клеток, и продукции этими клетками цитокинов.

Способ повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, включающий культивирование мезенхимальных стромальных клеток человека в среде DMEM/F12, содержащей 100 ед/мл пенициллина и 100 ед/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10% фетальной бычьей сыворотки, в присутствии провоспалительных факторов TNF-α в концентрации 20 нг/мл и IFN-γ в концентрации 30 нг/мл, характеризующийся тем, что культивирование проводят в атмосфере, состоящей из 5% CO2 и 95% воздуха, при температуре 37°С в течение 48 часов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения моноклональных антител (МКА) к лизостафину. Предложен новый штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus 2F9 - продуцент моноклональных антител, специфичных к лизостафину, ингибирующих его литическую активность и пригодных для его количественного определения.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Предложен способ экспансии мононуклеарных клеток пуповинной крови (пкМНК) ex vivo в присутствии мультипатентных мезенхимальных клеток (ММСК), включающий культивирование ММСК из стромально-васкулярной фракции жировой ткани до достижения монослоя при концентрации O2 в среде 5%, добавление суспензии пкМНК к монослою ММСК, культивирование в течение 72 часов при концентрации O2 в среде 5%, отбор неприкрепленных пкМНК и замену среды, продолжение культивирования ММСК с прикрепившимися к ним пкМНК в течение 7 дней при концентрации O2 в среде 5%.

Группа изобретений относится к области лекарственных средств и контроля их воздействия. Устройство для определения кардиотоксичности химического соединения содержит подложку (10), несущую деформируемый блок (34), причем блок (34) частично отделен от подложки полостью (32), обеспечивающей внеплоскостную деформацию блока.

Группа изобретений относится к области медицины и касается способов создания зуба, обладающего требуемым размером, и восстановления утраченной части зубов ротовой полости путем трансплантации созданного зуба в область утраты зубов.
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложена композиция, содержащая стволовые клетки из амниотической жидкости человека с фенотипом CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, питательную среду, эритропоэтин, эпидермальный фактор роста и коллаген, взятые в эффективном количестве.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к средству для лечения ишемических поражений тканей, представляющему собой смесь с соотношением 1÷0,5-3 из двух культур мезенхимальных стволовых клеток, одна из которых модифицирована генетической конструкцией на основе вирусного вектора, обеспечивающего гиперпродукцию фактора роста эндотелия сосудов, а другая модифицирована генетической конструкцией на основе вирусного вектора, обеспечивающего гиперпродукцию ангиопоэтина, а также способу лечения ишемических поражений тканей посредством обкалывания ишемезированной ткани, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ увеличения экспрессии MAFA в клетках, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам генерации антиген-специфических клеток с цитотоксической активностью против клеток рака молочной железы, и может быть использовано в медицине.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использована для изготовления восстановительного материала, используемого для восстановления области утраченного зуба в полости рта.
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ предусматривает эвтаназию крольчат путем обезглавливания, удаление лапок, хвостов, снятие шкурок, вскрытие брюшной полости на уровне поясничных позвонков, извлечение почек, снятие капсулы органа, измельчение на кусочки величиной 1-3 мм.
Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для восстановления кожного покрова с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей. Комбинированный трансплантат (КТ) представляет собой дермальный матрикс (ДМ), полученный из донорского слоя с колонизированными на его поверхности аутологичными ММСК в количестве не менее 750-1500 тыс на 1 см2. Группа изобретений относится также к способу получения комбинированного трансплантата, включающему забор костного мозга у пациента, получение культуры ММСК, нанесение суспензии ММСК с концентрацией не менее 1 млн/мл на поверхность ДМ из расчета 1 млн ММСК на 5 см2 ДМ. Использование данного комбинированного трансплантата обеспечивает заживление ран кожи и мягких тканей за счет ускорения процессов регенерации. 3 н. и 8 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и медицины. Предложена композиция для индукции миграции стволовых клеток жировой ткани взрослых, которая содержит в качестве активного ингредиента человеческие мезенхимальные стволовые клетки из жировой ткани взрослых в количестве от 1х107 до 1х1010, которые экспрессируют на клеточной поверхности рецептор хемокина или фактора роста, или секреторный продукт из этих стволовых клеток включает рецептор хемокина или фактора роста; где секретируемый продукт стволовых клеток жировой ткани взрослых представляет собой адипонектин; и где человеческие стволовые клетки жировой ткани взрослых подвергаются первичному воздействию смесью, содержащей хемокин или фактор роста. Изобретение может быть использовано в медицине в качестве клеточного терапевтического средства благодаря более эффективной миграции стволовых клеток к пораженному участку. 2 н. и 6 з. п. ф-лы, 9 ил., 8 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к стимуляции выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) клетками костного мозга, и может быть использовано в медицине. Прилипающую фракцию миелокариоцитов культивируют в питательной среде с добавлением стимулятора - ингибитора протеинкиназы p38. Изобретение позволяет повысить выработку Г-КСФ клетками прилипающей фракции миелокариоцитов. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области генетической инженерии, тканевых технологий и медицины. Способ получения мезенхимальных стволовых клеток из плюрипотентных линий стволовых клеток человека включает получение эмбриоидных телец из плюрипотентных стволовых клеток человека, прикрепление эмбриоидных телец к чашке Петри для индукции спонтанной дифференцировки эмбриоидных телец в мезенхимальные стволовые клетки, культивирование с пролиферацией мезенхимальных стволовых клеток при сохранении идентичности мезенхимальных стволовых клеток, и где индукция спонтанной дифференцировки стадии происходит путем формирования петель аутологичного цитокина без добавления внешнего цитокина, также соответствующие клетки, их применение, набор и способ культивирования. Изобретение может быть использовано для получения мезенхимальных стволовых клеток в регенеративной медицине и клеточной терапии. 7 н. и 8 з.п. ф-лы, 11 ил., 3 пр.

Настоящее изобретение касается способа размножения и дифференцирования плюрипотентных клеток. Описанный способ включает стадии: культивирование плюрипотентных клеток и обработку плюрипотентных клеток ингибитором активности фермента GSK-3B, где указанный ингибитор представляет собой 3-[1-(2-гидроксиэтил)-1H-индол-3-ил]-4-(1-пиридин-3-ил-1H-индол-3-ил)-пиррол-2,5-дион. Представленное изобретение позволяет получить достаточное количество клеточного материала с сохранением способности к дифференцированию для последующего использования в клинических целях. 9 з.п. ф-лы, 15 ил., 11 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к лейколектинам, и может быть использовано в медицине. Получен полипептид лейколектин, характеризующийся SEQ ID NO:1-8. Для рекомбинантного получения лейколектина используют кодирующую его нуклеиновую кислоту, встроенную в вектор экспрессии, которым трансформируют клетку-хозяина. Для определения присутствия или определения количества полипептида лейколектина в образце используют антитело или антиген-связывающий фрагмент вариабельной области указанного антитела, которое специфически связывается с полипептидом лейколектином. Полипептид лейколектин или кодирующую его нуклеиновую кислоту используют в составе фармацевтической композиции в терапии патологических нарушений кожи и слизистых. Изобретение позволяет эффективно лечить или проводить профилактику аутоиммунных нарушений кожи, воспалительных заболеваний кожи или слизистой оболочки, или поврежденной кожи у животного. 11 н. и 5 з.п. ф-лы, 19 ил., 3 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. В настоящем изобретении предлагаются способы стимуляции дифференцирования плюрипотентных стволовых клеток. В частности, в настоящем изобретении предлагается способ увеличения экспрессии маркеров, ассоциированных с линией панкреатических эндокринных клеток, с применением агониста рецептора TGF-бета, такого как активин A, активин B, активин C, GDF-8, GDF-11 или GDF-15. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.

Представленные решения относятся к области иммунологии. Предложены фармацевтическое средство, содержащее пептид, полученный из HIG2 или URLC10, способный индуцировать цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) посредством образования антигенпрезентирующего комплекса с антигеном HLA-A0206. Описаны изолированные антигенпрезентирующая клетка и ЦТЛ и способы и средства для их индукции. Антигенпрезентирующую клетку индуцируют путем контакта клетки, экспрессирующей антиген HLA-A0206, с пептидом, полученным из HIG2 или URLC10. Цитотоксический лимфоцит индуцируют путем контакта CD8-положительной Т-клетки с антигенпрезентирующей клеткой, презентирующей на своей поверхности комплекс из антигена HLA-A0206 и пептида, полученного из HIG2 или URLC10. Охарактеризованы способ и средство индукции иммунного противоопухолевого ответа путем введения пациенту средства, содержащего пептид, который имеет способность индуцировать ЦТЛ. Представленные изобретения могут быть использованы в лечении раковых заболеваний, характеризующихся повышенной экспрессией HIG2 или URLC10. 9 н. и 3 з.п. ф-лы, 8 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности противогерпетического действия фотодинамического воздействия на вирус простого герпеса (ВПГ) in vitro. Сущность способа состоит в том, что оказывают фотодинамическое воздействие на культуру клеток почки африканской зеленой мартышки Vero, инфицированную ВПГ-1 и ВПГ-2, на образцы, содержащие вирусы ВПГ-1 и ВПГ-2, и на вирусное потомство и при снижении титра вируса от исходного значения на 2 и более lg ТЦД50/0,1 мл в культуре клеток, образцах, содержащих вирусы, и вирусном потомстве оценивают противогерпетическое действие как эффективное. Использование заявленного способа позволяет более точно оценить эффект фотодинамической терапии (ФДТ) in vitro с возможностью изучения механизмов различных вариантов проведения ФДТ для дальнейшего прогнозирования эффективности ФДТ у герпесинфицированных больных. 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, клеточным технологиям и тканевой хирургии. Способ получения культуры гладкомышечных клеток заключается в том, что вырезают фрагмент кровеносного сосуда, измельчают его на кусочки до размеров не более 2 мм в любом измерении и инкубируют кусочки в культуральном флаконе с предварительно нанесенными на дно флакона царапинами, содержащем среду для культивирования, содержащую 10% эмбриональной фетальной сыворотки, в течение по меньшей мере 10 дней, но не более 24 дней, при температуре 37°С в условиях СО2-инкубатора, отличающийся тем, что упомянутым фрагментом кровеносного сосуда является фрагмент восходящего отдела грудной аорты, вырезаемый в ходе процедуры аортокоронарного шунтирования, а упомянутые кусочки фрагмента восходящего отдела грудной аорты перед инкубированием выдерживают в среде для культивирования, содержащей 0,1% коллагеназы, в течение по меньшей мере 30 минут, но не более 60 минут, при температуре 37°С, после чего промывают средой для культивирования клеток. Изобретение позволяет получить клетки из тканей аорты для целей трансплантологии непосредственно из прижизненных тканей пациента. 3 ил.

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии. Предложен способ повышения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, включающий культивирование мезенхимальных стромальных клеток человека в среде DMEMF12, содержащей 100 едмл пенициллина и 100 едмл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 фетальной бычьей сыворотки, в присутствии провоспалительных факторов TNF-α в концентрации 20 нгмл и IFN-γ в концентрации 30 нгмл, характеризующийся тем, что культивирование проводят в атмосфере, состоящей из 5 CO2 и 95 воздуха, при температуре 37°С в течение 48 часов. Изобретение позволяет повысить иммуносупрессорную активность клеток МСК и может быть использовано в трансплантологии и фармакологии. 3 пр.

Наверх