Способ предотвращения развития кишечной инфекции бактериальной природы

Группа изобретений относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использована для лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте. Для этого у экспериментальных животных формируют одну из указанных патологий с последующим пероральным введением лечебных препаратов в терапевтически эффективных дозах под контролем содержания патогенной микрофлоры в течение срока, обеспечивающего устранение заболевания. При этом в качестве лечебного средства перорально в первые 2 часа после инфицирования каждому животному 1 раз в сутки вводят или Стимбифид или культуральную жидкость лактобактерий как средство монотерапии, обеспечивающее колонизационную резистентность слизистой кишечника по отношению к возбудителю. Каждому животному Стимбифид вводят в дозе 13 мг на протяжении 5 дней с момента заражения животного, а культуральную жидкость - в объеме 0,2 мл на протяжении 7 дней с момента заражения животного. Также предложен способ получения средства для лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте. Группа изобретений обеспечивает высокий процент устранения патологии за счет применения пребиотического препарата и жидкого пробиотического комплекса без сопутствующих негативных последствий. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, инфектологии и медицинской микробиологии и может быть использовано для моделирования условий при отборе средств предотвращения развития в чувствительном организме кишечной инфекции, вызванной патогенными бактериями.

Человек и животные рождаются стерильными, по уже в первые часы и дни после рождения их кожа и слизистые заселяются микроорганизмами, количество и видовой состав которых определяются условиями прохождения родов, состоянием окружающей среды и типом вскармливания [Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1998. - №1. - С.61-65; Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание: в 3 т. Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции. - М.: Изд-во ГРАНТЪ, 1998. - 288 с]. Организм взрослого человека обильно заселен микроорганизмами, из которых более 60% колонизируют кишечник [Salminen S., Isolauri Е., Onela Т. Gut flora in normal and disordered states // Chemotherapy. - 1995. - Vol.41 (Suppl.l). - P. 5-15; Ардатская М.Д. Дисбактериоз кишечника: понятие, диагностика, принципы лечебной коррекции // Consilium medicum. - 2008. - Т.10, №8. - С.86-92].

На современном этапе изучения микроэкологических нарушений в кишечнике и в целом инфекционного процесса накоплено достаточно данных, свидетельствующих о способности отдельных представителей собственной кишечной микрофлоры, обладающих определенными механизмами приживления, вызывать заболевание при снижении иммунитета. В этой связи некоторых представителей кишечной микрофлоры, вызывающих на фоне снижения иммунитета гнойно-воспалительные заболевания, бактериемию новорожденных, локальные или генерализованные уроинфекции, артриты и другие заболевания, являющиеся аутоиммунными, относят к условно-патогенным микроорганизмам.

Предотвратить транслокацию условно-патогенных микроорганизмов через кишечную стенку и их дальнейшую диссеминацию по чувствительному организму можно, повлияв на колонизационную резистентность слизистой оболочки кишечника [Глушанова Н.А., Шендеров Б.А. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лактобацилл хозяина в условиях совместного культивирования in vitro. Журн. микробиол. - 2005. - №2. - 56-61]. Нормальная кишечная микрофлора наряду с другими функциями поддерживает колонизационную резистентность слизистой оболочки кишечника, а вместе с этим ингибирование адгезии патогенных микроорганизмов к эпителию и их размножение. Основным механизмом колонизационной резистентности является активация иммунной системы. В то же время состояние колонизационной резистентности связано с биологическими свойствами микроорганизмов кишечной микрофлоры, патогенных, условно-патогенных, а также пробиотических микроорганизмов в случае назначения последних с профилактической или лечебной целью. Взаимоотношения между указанными группами микроорганизмов могут носить антагонистический, синергидный или индиферентный характер, что придает им конкурентоспособность либо совместимость. Таким образом, сохранив или повысив колонизационную резистентность, обеспечив индигенной кишечной микрофлоре с помощью современных препаратов микроэкологическое преимущество, можно повлиять на инфекционный процесс, вызванный не только условно-патогенными, но и высоковирулентными микроорганизмами, способными инициировать тяжелые заболевания желудочно-кишечного тракта с выраженными нарушениями видового и количественного состава кишечной микрофлоры.

Известен комплексный способ лечения острых кишечных инфекций с применением диеты, этиотропной и патогенетической терапии с учетом тяжести и формы болезни. Госпитализации подлежат все больные с абдоминальной и генерализованной формами кишечных заболеваний. Целью назначения антибактериальных препаратов является купирование острых проявлений болезни и предупреждение генерализации инфекции, обострений, рецидивов, затяжного и хронического течения. Антибиотики и химиотерапевтические препараты являются основными средствами борьбы с инфекционными заболеваниями бактериальной природы [Бондарева Т.А., Калининский В.Б., Борисевич И.В., Бондарев В.П., Фоменков О.О. Современное состояние и перспективы решения проблемы повышения эффективности экстренной профилактики и лечения системных бактериальных инфекций // Молекулярная медицина. - 2009. - №5. - С.21-25). Однако обилие указанных препаратов часто сопровождается их бессистемным использованием, что не только снижает эффективность применения антимикробных препаратов различных классов, но и приводит к ряду побочных эффектов [Бельмер С.В. Дисбактериоз кишечника как осложнение антибактериальной терапии // Детские инфекции. - 2007. - Т.6, №2. - С.44-48]. К последним относят токсические реакции, поражения паренхимы печени, поражения почек, поражения периферической нервной системы и органов кроветворения, дисбактериозы (дисбиозы), аллергизирующее действие и иммунодепрессивные состояния.

Даже самые безопасные антибактериальные препараты оказывают негативное влияние на организм пациента и могут вызывать гибель не только патогенных микроорганизмов в естественных биотопах, но и микроорганизмов, входящих в состав нормальной микрофлоры человека [Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии. // Антибиотики и мед. биотехнол. - 1987. - Т.32, №2. - С.18-241.

Следовательно, нужны новые средства и способы лечения кишечных инфекций. При разработке таких средств и способов важное место уделяется моделированию их в эксперименте [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Р.Ю. Хабриева. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.].

Наиболее близким к заявленному изобретению как в части «Способ лечения...», так и в части «Способ получения средства…» является техническое решение, известное из статьи [Дармов И.В., Маракулин И.В., Погорельский И.П., Новикова О.Д., Портнягина О.Ю., Соловьева Т.Ф. Профилактика экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции с помощью иммунизации порином из Yersinia pseudotuberculosis. // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. - 1999. - Т.127, №2. - С.221-223].

Однако известный способ не может быть использован при наличии в организме животных инфекционного агента, а требует предварительной иммунизации здоровых особей.

Техническим результатом изобретения как в части «Способ лечения…», так и в части «Способ получения средства…» является разработка такого способа лечения и способа получения средства для его осуществления, которые бы позволяли применять их у животных, уже зараженных инфекционным агентом, обеспечивая при этом высокий процент устранения патологии без сопутствующих негативных последствий.

Этот технический результат в части «Способ лечения…» достигается тем, что в заявляемом способе лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте путем формирования у животных экспериментальной соответствующей этиологическому агенту патологии с последующим пероральным введением лечебных препаратов в терапевтически эффективных дозах под контролем содержания патогенной микрофлоры в течение срока, обеспечивающего устранение заболевания, в качестве лечебного средства перорально в первые 2 часа после инфицирования каждому животному 1 раз в сутки вводят или Стимбифид, или культуральную жидкость лактобактерий как средство монотерапии, обеспечивающее колонизационную резистентность слизистой кишечника по отношению к возбудителю, при этом каждому животному Стимбифид вводят в дозе 13 мг не менее 5 дней, а культуральную жидкость - в объеме 0,2 мл не менее 7 дней.

О колонизационной резистентности слизистой кишечника судят по отсутствию дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры, определяемых путем подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г^-1) с учетом выросших колоний на селективных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 часов.

Формирование у животных экспериментальной кишечной патологии осуществляют путем перорального введения им возбудителей или кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в количестве 10 LD₅₀.

Этот технический результат в части «Способ получения средства…» для осуществления способа лечения достигается тем, что в заявляемом способе лечения кишечного иерсиниоза или псевдотуберкулеза или сальмонеллеза в эксперименте, содержащего продукты культивирования лактобактерий, из препарата Лактобактерин выделяют лактобактерии, проводят их культивирование в жидкой питательной среде при температуре 37°C в течение 72 часов до концентрации (2,8-3,0)·10⁹ КОЕ·мл^-1, после чего культуральную жидкость центрифугируют в закрытых пробирках до удаления из нее клеток или их обломков и получают целевой продукт в виде супернатанта.

Способ лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте осуществляют следующим образом.

1. В инфицированный возбудителем кишечной инфекции живой организм через рот (per os) вводят в определенной дозе биологически активный комплекс, создающий приоритетные условия для размножения микроорганизмов собственной кишечной микрофлоры, стабилизирующих барьерные свойства слизистой оболочки кишечника, стимулирующих иммунную систему и выработку секреторных иммуноглобулинов, ингибирующих рост патогенной микрофлоры и вытеснение ее из организма, поддержание ионного гомеостаза приэпителиальной зоны кишечника, в первую очередь бифидобактерий, а также лактобактерий, эшерихий.

2. Диагностируют заболевание с использованием бактериологического метода и определением клинически значимых симптомов болезни.

3. Вводят пребиотик или микробный экзометаболит до достижения лечебного эффекта - нормализации кишечных функций и стабилизации кишечной микрофлоры, определяемой бактериологическим методом, для чего определяют биологически активный комплекс (действие позитивного экзогенного фактора), пероральное введение которого в инфицированный живой организм должно купировать генерализацию кишечной инфекции.

4. Определяют общее количество жизнеспособных микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей у подопытных животных до начала инфицирования возбудителем кишечной инфекции и в конце наблюдения (на 21 сутки) или на момент гибели животного от генерализации кишечной инфекции.

5. Вычисляют разницу показателей численности кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей в двух временных точках (до начала инфицирования возбудителем кишечной инфекции и на 21 сутки наблюдения или на момент гибели животного от генерализации кишечной инфекции) для оценки микроэкологического состояния кишечной микрофлоры.

6. Определяют наличие и количество бактерий кишечной инфекции в содержимом кишечника у погибших подопытных животных в результате генерализации кишечной инфекции, а также у выживших животных на 21 сутки наблюдения.

7. По количеству выживших особей в опытной группе инфицированных животных, получавших перорально выбранный биологически активный комплекс, а также по общему количеству микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей перед инфицированием и в конце наблюдения на 21 сутки выносили суждение о протективной эффективности биологически активного комплекса.

8. Вынесение суждения об эффективности перорального введения биологически активного комплекса в инфицированный организм производят на основании улучшения самочувствия и выздоровления, а также определения общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей в 1 г фекалий, свидетельствующего об отсутствии дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры.

9. В качестве биологически активного комплекса можно использовать: пребиотический препарат Стимбифид, произведенный ООО «В-МИН»/ООО «МедСтар», Россия. Препарат создан на основе фруктоолиго- и фруктополисахаридов, содержит премикс витаминно-минеральный «Immunity» и вспомогательные вещества (натрия бикарбонат, лактоза, кальция стеарат).

Описание Способа получения средства для осуществления способа лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте.

1. Из препарата Лактобактерин выделяют лактобактерии, для чего в асептических условиях вскрывают флакон, содержащий лиофилизованную культуру лактобактерий, вносят во флакон 5,0 мл стерильного раствора хлорида натрия для регидратации культуры лактобактерий и получения гомогенной взвеси.

2. Отбирают 2,0 мл регидратированной культуры лактобактерий и переносят в 100 мл жидкой питательной среды во флакон с ватно-марлевой пробкой.

3. Проводят культивирование лактобактерий в жидкой питательной среде в микроаэрофильных условиях при температуре 37°C в течение 72 часов до концентрации (2,8-3,0)·10⁹ КОЕ·мл^-1, после чего нативную культуру центрифугируют (3000g, 15 мин) в закрытых пробирках до удаления из нее клеток или их обломков и получают целевой продукт в виде супернатанта.

4. Надосадочную жидкость (жидкий пробиотический комплекс), полученную из нативной культуры пробиотических лактобактерий, освобожденную центрифугированием от клеточных элементов лактобактерий и содержащую низкомолекулярные экзометаболиты, накапливающиеся в культуральной среде в процессе роста и размножения лактобактерий при оптимальных микроаэрофильных условиях, используют для перорального введения конвенциональным белым мышам.

Общим, что объединяет пребиотический препарат Стимбифид и жидкий пробиотический комплекс в составе надосадочной жидкости нативной культуры лактобактерий, выделенных из пробиотического препарата Лактобактерин, является многонаправленность пребиотического действия, эксклюзивно стимулирующего размножение бифидобактерий и других представителей нормальной кишечной микрофлоры, угнетающего рост патогенной микрофлоры и вытеснение ее из кишечника, повышающего скорость восстановления нормальной микрофлоры кишечника, стабилизирующего барьерные свойства слизистой оболочки кишечника, стимулирующего выработку секреторных иммуноглобулинов в просвете кишечника и повышающего фагоцитарную активность клеток печени.

Моделирование заболевания осуществляют следующим образом.

1. Выбирают конкретный возбудитель кишечного заболевания, проводят оценку патогенности (в качестве такового могут быть выбраны:

возбудитель псевдотуберкулеза, вызывающий тяжелое инфекционное заболевание, при септической форме которого летальность может достигать 25-50%;

возбудитель кишечного иерсиниоза - зоонозной бактериальной инфекции с выраженным полиморфизмом клинических проявлений и поражением желудочно-кишечного тракта;

возбудитель сальмонеллеза - острой зоонозно-антропонозной бактериальной инфекции, для которой характерны интоксикация и преимущественное поражение желудочно-кишечного тракта).

2. Оценку патогенности возбудителя кишечного заболевания проводят при энтеральном (пероральном) пути поступления возбудителя в организм лабораторного животного, естественном для кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза. С учетом результатов перорального заражения лабораторных животных рассчитывают степень патогенности возбудителя кишечной инфекции (вирулентность) в виде показателя среднесмертельной дозы LD₅₀ [Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 280 с.]. Определенные для конвенциональных белых мышей показатели среднесмертельных доз (LD₅₀) составили: для возбудителя кишечного иерсиниоза - 7,4·10⁷ КОЕ; для возбудителя псевдотуберкулеза - 8,5·10⁴ КОЕ; для возбудителя сальмонеллеза - 3,1·10⁸ КОЕ.

Пример 1

Выращивают культуру псевдотуберкулезного микроба при температуре 5±3°C в течение 3 суток, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия исходя из расчета концентрации микробных клеток 10 LD₅₀ в вводимом объеме суспензии для перорального заражения животных. Указанная концентрация бактерий в суспензии, равная 10 среднелетальным дозам псевдотуберкулезного микроба, обеспечивает гарантированное развитие инфекционного процесса при пероральном введении бактериальной суспензии.

Берут 10 прошедших акклиматизацию конвенциональных белых мышей массой 18-20 г и рассаживают в кювет с крышкой. От каждого животного в начале исследования отбирают фекальные массы для подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г^-1) с учетом выросших колоний на селективных плотных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 часов.

Вводят перорально конвенциональным белым мышам суспензию бактерий псевдотуберкулезного микроба в объеме 0,2 мл, содержащем 10 LD₅₀ возбудителя, наблюдают за животными, отмечая исход инфицирования. В таблице 1 приведен результат инфицирования конвенциональных белых мышей возбудителем псевдотуберкулеза $$(\overline{X}\pm I_{95},n=10)$$ .

Представленные в таблице 1 данные свидетельствуют, что в результате инфицирования возбудителем псевдотуберкулеза все подопытные животные контрольной группы погибли в срок от 5 до 13 суток от начала инфицирования. От всех погибших животных выделена чистая культура псевдотуберкулезного микроба: в 1 г фекалий количество бактерий составляет 8,6·10⁷-1,2·10⁸ КОЕ·г^-1. Снижение общего количества нормальной кишечной микрофлоры составляет 3,7·10⁵ раз, бифидобактерий - 5,9·10⁴ раз, лактобактерий -2,2·10⁶ раз, эшерихий - 1,4·10³ раз.

Полученные результаты свидетельствуют о генерализации инфекции, гибели животных от псевдотуберкулеза и развитии глубоких дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры.

Пример 2

Выращивают культуру псевдотуберкулезного микроба согласно методу, описанному в примере 1. Для последующего заражения подопытных животных используют суспензию бактерий в изотоническом растворе хлорида натрия, в 0,2 мл которой содержится количество бактерий, равное 10 LD₅₀, при пероральном введении животным.

Берут 10 прошедших акклиматизацию конвенциональных белых мышей массой 18-20 г и рассаживают в кювет с крышкой. От каждого животного в начале исследования и по окончании периода наблюдения отбирают фекальные массы для подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г^-1) с учетом выросших колоний на селективных плотных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 часов.

Вводят перорально конвенциональным белым мышам суспензию бактерий псевдотуберкулезного микроба в объеме 0,2 мл, содержащем 10 LD₅₀ возбудителя.

Готовят суспензию пребиотика Стимбифид на дистиллированной воде, в 0,2 мл которой содержится 13 мг препарата. Указанная доза в объеме 0,2 мл суспензии соответствует с учетом переводного коэффициента суточной дозе пребиотика Стимбифид для человека. Суточную дозу пребиотика Стимбифид вводят перорально конвенциональным белым мышам через 2 часа после перорального инфицирования подопытных животных и продолжают вводить суспензию пребиотика Стимбифид инфицированным животным на протяжении 5 дней после их инфицирования. За животными наблюдают в течение 21 суток, отмечают исход инфицирования (таблица 2).

В таблице 2 приведена протективная эффективность пребиотика Стимбифид при пероральном заражении конвенциональных белых мышей возбудителем псевдотуберкулеза $$(\overline{X}\pm I_{95},n=10)$$ .

Пребиотик Стимбифид, как это следует из представленных в таблице 2 результатов, полностью предотвращает размножение возбудителя псевдотуберкулеза на поверхности слизистой оболочки кишечника, его транслокацию через кишечную стенку, попадание в кровяное русло и диссеминацию по организму. Ни одно животное, инфицированное возбудителем псевдотуберкулеза, на фоне перорального введения пребиотика Стимбифид не заболело и не погибло. При этом бактериологическое исследование фекалий животных не выявило дисбиотических изменений микрофлоры кишечника, а количество бифидобактерий в кишечном содержимом даже возросло.

Полученные результаты свидетельствуют, что пребиотик Стимбифид обеспечивает формирование у конвенциональных белых мышей высокого уровня колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника, не допускающей адгезии колонизации, транслокации возбудителя псевдотуберкулеза и генерации инфекционного процесса.

Пример 3

Выращивают лактобактерии штамм L. plantarum 8Р-А3, выделенные из пробиотического препарата Лактобактерий, в жидкой питательной среде при температуре 37°C в микроаэрофильных условиях в течение 72 часов до концентрации (2,8-3,0)·10⁹ КОЕ·мл^-1. Полученную нативную культуру освобождают от микробных клеток центрифугированием в закрывающихся центрифужных пробирках. Надосадочную жидкость нативной культуры лактобактерий используют для перорального введения конвенциональным белым мышам.

Выращивают культуру псевдотуберкулезного микроба согласно методу, описанному в примере 1. Для последующего заражения подопытных животных используют суспензию бактерий в изотоническом растворе хлорида натрия, в 0,2 мл которой содержится количество бактерий, равное 10 LD₅₀ при пероральном введении животным.

Берут 10 прошедших акклиматизацию конвенциональных белых мышей массой 18-20 г и рассаживают в кювет с крышкой. От каждого животного в начале исследования и по окончании периода наблюдения отбирают фекальные массы для подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г^-1) с учетом выросших колоний на селективных плотных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 часов.

Вводят перорально конвенциональным белым мышам суспензию бактерий псевдотуберкулезного микроба в объеме 0,2 мл, содержащем 10 LD₅₀ возбудителя.

Вводят перорально инфицированным конвенциональным белым мышам надосадочную жидкость нативной культуры лактобактерий в объеме 0,2 мл через 2 часа после перорального введения животным суспензии псевдотуберкулезного микроба. Введение надосадочной жидкости нативной культуры лактобактерий подопытным животным осуществляют на протяжении 7 дней после их инфицирования. За животными наблюдают в течение 21 суток, отмечают исход инфицирования. В таблице 3 приведена протективная эффективность надосадочной жидкости нативной культуры лактобактерий, содержащей низкомолекулярные микробные экзометаболиты, при пероральном заражении конвенциональных белых мышей возбудителем псевдотуберкулеза (Х±I₉₅, n=10).

Приведенные в таблице 3 результаты свидетельствуют о том, что надосадочная жидкость нативной культуры лактобактерий штамма L. plantarum 8Р-А3, содержащая низкомолекулярные микробные экзометаболиты, которые образуются в процессе роста и размножения лактобактерий, эффективно защищает при пероральном введении инфицированных конвенциональных белых мышей от псевдотуберкулеза. Предотвращение колонизации слизистой оболочки кишечника бактериями псевдотуберкулезного микроба и их элиминация из кишечника животных происходит вследствие поддержания естественного микробного сообщества нормальной микрофлоры кишечника, чему содействуют низкомолекулярные микробные экзометаболиты, вводимые подопытным животным с надосадочной жидкостью нативной культуры лактобактерий. О сохранении микробного сообщества в кишечном содержимом свидетельствуют цифры общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей - бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий.

Сохранение численных значений общего количества нормальной кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей следует связать с пребиотическим эффектом низкомолекулярных микробных экзометаболитов, обеспечивающих сохранение высокого уровня колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника.

Представленные результаты подтверждают, что важной характеристикой микробиоценоза кишечника является количественное соотношение видов микрофлоры. В составе микробного сообщества доминируют анаэробные и микроаэрофильные группы микроорганизмов. Именно они составляют «видовое ядро» микробиоценоза, создавая среду обитания для всего сообщества. Однако редкие и малочисленные виды также важны для жизни микробного сообщества: они создают его видовое разнообразие, увеличивают количество биоценотических связей, служат резервом для наполнения и замещения доминирующих видов, т.е. придают микробиоценозу устойчивость в разных условиях [Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбактериозы - актуальная проблема медицины. // Вестник РАМН. - 1997. - №3. - С.4-7; Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса. // Вестник РАМН. - 1997. - №3. - С.7-10; Покровский В.И. Человек и микроорганизмы. Здоровье и болезнь. // Вестник РАМН. - 2000. - №11. - С.3-6]. Видовой состав микробного сообщества и численность отдельных видов кишечного микробиоценоза определяются условиями замкнутого пространства кишечника, в котором у взрослого человека создаются весьма специфические условия. И чем условия специфичнее, тем беднее видовой состав микроорганизмов и выше численность отдельных видов. При различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, таких как снижение желудочной секреции, нарушение функции или резекция илеоцекального клапана, нарушение кишечного пищеварения и всасывания, непроходимость кишечника, структурные нарушения стенки кишки (дивертикулез), последствия оперативного вмешательства и др., наблюдается избыточное поступление бактерий в тонкую кишку, создаются благоприятные условия для пролиферации бактерий и стазу в кишечнике [Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Зверков И.В., Чичерин И.Ю. Дисбактериоз (понятие, диагностика, принципы лечебной коррекции). Современные возможности пребиотической терапии: учебно-методическое пособие для врачей и курсантов циклов усовершенствования врачей. М.: ФГУ «Учебно-научный медицинский центр» Управления делами Президента Российской Федерации. 2010. - 50 с].

Заявленный способ учитывает эти теоретические сведения и позволяет сохранить и даже повысить уровень колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника, которая в совокупности с рядом защитных факторов кишечника обеспечивает невосприимчивость всего организма к возбудителю кишечной инфекции.

Таблица 1
Способ лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте и способ получения средства для его осуществления
Количество животных	Сроки гибели, сутки, $$\overline{X}$$ (Xmin-Xmax)	Содержание живых бактерий в 1 г фекалий на… сутки эксперимента, КОЕ·г-1
взятых в опыт		павших от псевдотуберкулеза
выделенные микроорганизмы	начало эксперимента	в день гибели
10	10	8,8(5-13)	Общее количество	(6,0±0,7)·109	(1,6±0,6)·104
			Бифидобактерии	(6,5±0,6)·106	(1,1±0,4)·104
		Лактобактерии	(2,8±0,6)·108	(1,3±0,5)·102
	Эшерихии	(1,6±0,5)·104	(1,1±0,3)·101

Таблица 2
Количество животных	Сроки гибели	Содержание живых бактерий в 1 г фекалий на… сутки эксперимента, КОЕ·г-1
взятых в опыт		павших от псевдотуберкулеза
выделенные микроорганизмы	начало эксперимента	в день гибели
10	0	-	Общее количество	(6,1±0,8)·109	(5,8±0,6)·109
			Бифидобактерии	(6,3±0,7)·106	(5,1±0,7)·107
			Лактобактерии	(2,5±0,7)·108	(4,0±0,5)·108
Эшерихии	(1,7±0,6)·104	(3,9±0,7)·104

Таблица 3
Количество животных	Сроки гибели, сутки	Содержание живых бактерий в 1 г фекалий на… сутки эксперимента, КОЕ·г-1
взятых в опыт		павших от псевдотуберкулеза
выделенные микроорганизмы	начало эксперимента	в день гибели
10	0	-	Общее количество	(6,5±0,8)·109	(8,1±0,6)·109
			Бифидобактерии	(6,4±0,6)·106	(6,8±0,7)·107
			Лактобактерии	(2,8±0,7)·108	(5,3±0,6)·108
Эшерихии	(2,0±0,5)·104	(1,5±0,5)·104

1. Способ лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте путем формирования у животных экспериментальной соответствующей этиологическому агенту патологии с последующим пероральным введением лечебных препаратов в терапевтически эффективных дозах под контролем содержания патогенной микрофлоры в течение срока, обеспечивающего устранение заболевания, отличающийся тем, что в качестве лечебного средства перорально в первые 2 часа после инфицирования каждому животному 1 раз в сутки вводят или Стимбифид, или культуральную жидкость лактобактерий как средство монотерапии, обеспечивающее колонизационную резистентность слизистой кишечника по отношению к возбудителю, при этом каждому животному Стимбифид вводят в дозе 13 мг на протяжении 5 дней с момента заражения животного, а культуральную жидкость - в объеме 0,2 мл на протяжении 7 дней с момента заражения животного.

2. Способ по п.1. отличающийся тем, что о колонизационной резистентности слизистой кишечника судят по отсутствию дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры путем подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г^-1) с учетом выросших колоний на селективных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 часов.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что формирование у животных экспериментальной кишечной патологии осуществляют путем перорального введения им возбудителей или кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонелллеза в количестве 10 LD₅₀.

4. Способ получения средства для лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или сальмонеллеза в эксперименте, содержащего продукты культивирования лактобактерий, отличающийся чем, что из препарата Лактобактерин выделяют лактобактерии, проводят их культивирование в жидкой питательной среде при температуре 37°C в течение 72 часов до концентрации (2,8-3,0)·109 КОЕ·мл^-1, после чего культуральную жидкость центрифугируют в закрытых пробирках до удаления из нее клеток или их обломков и получают целевой продукт в виде супернатанта.