Способ прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения


 


Владельцы патента RU 2527338:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт онкологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ онкологии" СО РАМН) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения. Сущность способа состоит в том, что в ткани опухоли определяют тотальную активность протеасом, активность 20S протеасом и экспрессию NF-κB p50, HIF-1α и рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2, по уравнениям. При Y1>Y2 прогнозируют отсутствие, а при Y1<Y2 прогнозируют развитие лимфогенных метастазов. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, онкологии и может быть использовано для прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения.

К числу социально значимых онкологических заболеваний относят и плоскоклеточные карциномы головы и шеи (ПКГШ). Несмотря на то, что ПКГШ являются опухолями наружной локализации, они характеризуются высокой запущенностью, связанной анатомо-топографическими особенностями с бессимптомным течением и высокой агрессивностью заболевания [Ridge J.A., 2011]. Статус лимфатических узлов, их вовлеченность в патологический процесс является важным прогностическим признаком опухолей области головы и шеи, что, в первую очередь, ассоциировано с выживаемостью больных [Layland MK, 2005]. Известно, что точность радиографических методов исследования в диагностике лимфогенных метастазов составляет от 75 до 83%, а КТ - равно 60% [Yoon Y.C. et al., 2003].

Наиболее близким к заявляемому является способ прогнозирования исходов плоскоклеточных карцином головы и шеи (ПКГШ), учитывающий появление лимфогенных метастазов у больных ПКГШ (патент РФ№2426991, опубл. 27.11.2010). В способе проводят иммуноферментное определение уровня матриксных металлопротеиназ (ММП) - 2 и 9, тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ (ТИМП) - 1 и 2 в сыворотке крови до лечения, и при уровне ММП-9 более 550 нг/мл и уровне ТИМП-1 более 230 нг/мл, прогнозируют снижение общей и безрецидивной 2-летней выживаемости, при ТИМП-2 более 120 нг/мл, ММП-2 более 250 нг/мл, дополнительно к упомянутым показателям прогнозируют высокую вероятность появления метастазов.

Недостатками известного способа являются:

- низкая чувствительность и специфичность, что не позволяет оценить практическую значимость и эффективность применения;

- не учитывается биологическое поведение самой опухоли, в то время как она может оказывать выраженное влияние на прогноз заболевания, что снижает точность и информативность способа.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности прогнозирования заболевания в отношении риска развития лимфогенных метастазов.

Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения, заключающемся в исследовании биологически активных молекул опухоли, в ткани опухоли определяют тотальную активность протеасом, активность 20S протеасом и экспрессию NF-κB p50, HIF-1α и рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2 по уравнениям:

Y1=-39,5+28,6·Х1-0,05·Х2+0,09·Х3+1,4·Х4-0,87·Х5 (отсутствие лимфогенных метастазов);

Y2=-23,6+20,1·Х1-0,0003·Х2+0,04·Х3+0,84·Х4-0,38·Х5 (наличие лимфогенных метастазов),

где X1 - степень дифференцировки (1 - низкодифференцированная опухоль, 2 - умеренно дифференцированная, 3 - высокодифференцированная);

Х2 - тотальная активность протеасом ·10-3 Ед/мг белка;

Х3 - активность 20S протеасом ·10-3 Ед/мг белка;

Х4 - Экспрессия HIF-1, УЕ/мг белка в лунке;

Х5 - Экспрессия NF-κВ p50, УЕ/мг белка в лунке;

и при Y1>Y2 прогнозируют отсутствие; а при Y1<Y2 прогнозируют развитие лимфогенных метастазов.

Данные существенные признаки не выявлены из научно-медицинской литературы. Они явным образом не следуют из уровня техники для специалистов. Способ апробирован на базе клиник НИИ онкологии СО РАМН. Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям «новизна», «изобретательский уровень», «промышленно применимо».

Способ осуществляют следующим образом.

Для прогнозирования развития лимфогенных метастазов ПКГШ проводят флуорометрическое определение тотальной активности протеасом, активности 20S протеасом, а также иммуноферментное определение экспрессии NF-κB p50 и HIF-1α:

NF-κB - nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells - ядерный транскрипционный фактор κB p50. HIF-1α - hypoxia inducible transcription factor в опухолевой ткани. Для этого из операционного материала берут образцы опухолевой ткани в течение 2-3 часов после операции, очищают от участков некроза, кровоизлияний и помещают в жидкий азот. Образцы тканей до определения активности ферментов хранят при температуре -70°С и размораживают не более 1 раза для исследования активности и содержания маркеров. Перед определением активности исследуемых ферментов замороженную опухолевую ткань гомогенизируют до порошкообразного состояния в жидком азоте. 20S протеасомы выделяют методом высаливания с помощью сульфата аммония до 70% насыщения [Абрамова Е.Б., 2006]. Химотрипсинподобную активность 26S протеасом, осуществляющуюся химотрипсинподобными центрами протеасом, оценивают по гидролизу флуорогенного олигопептида Suc-LLVY-AMC (Sigma, США) [Ben-Shahar S., 1999]. Образовавшийся продукт регистрируют на флуориметре «Hitachi-850» (Япония) при длине волны возбуждения 380 нм и эмиссии 440 нм. Для оценки активности примесных протеаз в образцах применяют специфический ингибитор протеасом - MG132. За единицу активности протеасом принимают количество фермента, при котором гидролизуется 1 нмоль Suc-LLVY-AMC в течение 1 мин. Удельную активность протеасом выражают в единицах активности на 1 мг белка. Содержание белка определяют по методу Лоури.

Приготовление ядерных экстрактов для определения NF-κB p50, HIF-1α проводят в соответствии с рекомендациями фирмы производителя Caymanchem (США). Замороженную ткань (100 мг) гомогенизируют в жидком азоте, затем ресуспендируют. Гомогенат центрифугируют при 2400 g и 4°С для получения осадка, который ресуспендируют в 50 мкл 50 mM Трис-HCl буфера (рН 7,5) и затем центрифугируют при 14000 g и 4 С. Полученный супернатант используют для определения экспрессии транскрипционных факторов. Экспрессию NF-κB p50 и HIF-1α определяют в ядерных экстрактах иммуноферментным методом. Результаты определения содержания транскрипционных факторов выражают в условных единицах на мг белка в лунке Рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2 по уравнениям:

Y1=-39,5+28,6·Х1-0,05·Х2+0,09·Х3+1,4·Х4-0,87·Х5 (отсутствие лимфогенных метастазов);

Y2=-23,6+20,1·X1-0,0003·X2+0,04·X3+0,84·X4-0,38·Х5 (наличие лимфогенных метастазов);

где X1 - степень дифференцировки (1 - низкодифференцированная опухоль, 2 - умеренно дифференцированная, 3 - высокодифференцированная);

Х2 - тотальная активность протеасом ·10-3 Ед/мг белка;

Х3 - активность 20S протеасом ·10-3 Ед/мг белка;

Х4 - Экспрессия HIF-1, УЕ/мг белка в лунке;

Х5 - Экспрессия NF-κВ p50, УЕ/мг белка в лунке;

и при Y1>Y2 прогнозируют отсутствие; а при Y1<Y2 прогнозируют развитие лимфогенных метастазов.

Классификацию проводят следующим образом для групп: 1 - нет лимфогенных метастазов, 2 - имеются лимфогенные метастазы. Относят больного к одному из классов на основании следующих неравенств: если Y1>Y2, то объект относится к первому классу, к группе с отсутствием лимфогенных метастазов; если Y1<Y2, то объект относится ко второму классу. Чувствительность и специфичность полученной дискриминантной модели составляет, соответственно, 96% и 90%, диагностическая точность - 93%.

Такой подход к прогнозированию риска возникновения лимфогенных метастазов ПКГШ обусловлен рядом предпосылок:

- одним из патогенетических механизмов, лежащих в основе развития и прогрессирования плоскоклеточного рака области головы и шеи, является изменение активности протеасомной системы и экспрессии регулируемых ими субстратов, в том числе NF-κB. Необходимо отметить, что регуляторным этапом многих физиологических и патологических процессов является внутриклеточная деградация белков в протеасомах. Протеасомы способны активировать NF-κB за счет быстрой деградации его собственного ингибитора 1 кВ, что способствует выработке р105 - предшественника р50 субъединицы NF-κB [Goldberg A.L. 2007; Shah S.A., 2001]. Известно, что посттрансляционная модификация р105 - предшественника NF-κB р50 осуществляется с помощью 20S протеасом без процесса убиквитинирования [Moorthy A.K., 2006].

На культуре плоскоклеточных опухолей выявлен цитостатический эффект применения ингибитора протеасом, что коррелировало с экспрессией транскрипционного фактора NF-κB, уровнем проапоптотических белков Bik и Bim [Chen Z, 2008; Li C., 2008J. Рост экспрессии HIF-1 и связанная с ним продукция в опухоли ангиогенных белков и пептидов, находящаяся под контролем протеолитических систем, играет роль в развитии ПКГШ [Winter, S.C. 2006; Fillies, Т. 2005].

Информативность отобранных критериев обоснована наличием связи активности протеасом, экспрессии NF-кВ р50 и HIF-lα с возникновением лимфогенных метастазов опухолей головы и шеи, что было подтверждено при исследовании 66 пациентов (средний возраст 57,1±1,7 лет) с морфологически верифицированным диагнозом плоскоклеточного рака области головы и шеи Т2-3N0-2.

В исследование были включены 25 больных раком гортани и гортаноглотки, 23 пациентов с опухолями ротовой полости и 18 больных - с раком языка, которые в виду одинакового гистологического строения опухоли составили общую группу больных плоскоклеточными карциномами области головы и шеи. Объемы диагностики (TNM, 2009) и лечения больных соответствовали рекомендуемым алгоритмам объемов диагностики и лечения злокачественных новообразований, утвержденным министерством здравоохранения и социального развития РФ. Всем пациентам было проведено хирургическое иссечение опухоли. При наличии регионарных метастазов выполняли фасциально-футлярное иссечение шейной клетчатки, операцию Кайла. Проведение данной работы одобрено этическим комитетом ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН, получены информированные согласия от всех пациентов.

Опухолевая ткань забиралась из операционного материала не позднее чем через 2-3 часа после операции, замораживалась в жидком азоте. Затем в опухолевой ткани определялась активность 26S протеасом, экспрессия NF-κВ р50 и HIF-1α. Оценку качества полученных функций проводили на 10 пациентах, не включенных в основную выборку. Рассчитывали дискриминантные функции Y1, Y2 по уравнениям:

Y1=-39,5+28,6·Х1-0,05·Х2+0,09·Х3+1,4·Х4-0,87·Х5 (отсутствие лимфогенных метастазов);

Y2=-23,6+20,1·X1-0,0003·X2+0,04·X3+0,84·X4-0,38·Х5 (наличие лимфогенных метастазов);

где X1 - степень дифференцировки (1 - низкодифференцированная опухоль, 2 - умеренно дифференцированная, 3 - высокодифференцированная);

Х2 - тотальная активность протеасом ·10-3 Ед/мг белка;

Х3 - активность 20S протеасом ·10-3 Ед/мг белка;

Х4 - Экспрессия HIF-1, УЕ/мг белка в лунке;

Х5 - Экспрессия NF-κВ р50, УЕ/мг белка в лунке;

и при Y1>Y2 прогнозировали отсутствие; а при Y1<Y2 прогнозировали развитие лимфогенных метастазов.

Чувствительность и специфичность полученной дискриминантной модели составила, соответственно, 96% и 90%, диагностическая точность - 93%.

Показатели специфичности и прогностической значимости положительного результата (риска развития метастазов) свидетельствуют о высокой информативности заявляемого способа, который предполагает большее число возможных случаев лимфогенного метастазирования, чем реально выявлено на момент клинического обследования. Выделение группы больных ПКГШ, характеризующихся высоким риском лимфогенного метастазирования, позволяет определить адекватные сроки динамического наблюдения (более частое посещение врача-онколога) и в случае прогрессирования заболевания принять своевременные лечебные меры.

Клинические примеры.

Пример 1. Больной Л. 68 лет обратился в НИИ онкологии СО РАМН г.Томска, где по результатам комплексного обследования у него был диагностирован рак гортани высокой степени дифференцировки, стадия T3N0M0. Было проведено исследование с целью определения вероятности лимфогенного метастазирования согласно предлагаемому способу. Опухолевая ткань забиралась из операционного материала не позднее чем через 2-3 часа после операции, замораживалась в жидком азоте. Затем в опухолевой ткани определялась активность 26S протеасом, экспрессия NF-κВ р50 и HIF-1. Тотальная активность протеасом составила 45,6·1000 Ед/мг белка, активность 20S протеасом - 25,6·1000 Ед/мг белка; экспрессия HIF-1α была равна 4,1 УЕ/мг белка в лунке, экспрессия NF-κВ р50 - 2,2 УЕ/мг белка в лунке. Вычисление дискриминантных функций с использованием биохимических и клинико-морфологических показателей классифицировало данный клинический случай с минимальным риском развития лимфогенного метастазирования (Y1=73,4; что больше чем Y2=64,8), что было подтверждено дальнейшими наблюдениями. При динамическом наблюдении в течение 20 месяцев с момента диагностирования опухоли не были выявлены лимфогенные метастазы.

Пример 2. Больной П. 70 лет обратился в НИИ онкологии СО РАМН г.Томска, где по результатам комплексного обследования у него был диагностирован рак гортани умеренной степени дифференцировки, стадия T3N0M0. Было проведено исследование с целью определения вероятности лимфогенного метастазирования согласно предлагаемому способу. Опухолевая ткань забиралась из операционного материала не позднее чем через 2-3 часа после операции, замораживалась в жидком азоте. Затем в опухолевой ткани определялась активность 26S протеасом, экспрессия NF-κВ р50 и HIF-1. Тотальная активность протеасом составила 43,5-1000 Ед/мг белка, активность 20S протеасом - 33,9·1000 Ед/мг белка; экспрессия HIF-1α была равна 5,1 УЕ/мг белка в лунке, экспрессия NF-κВ р50 - 7,4 УЕ/мг белка в лунке. Вычисление дискриминантных функций с использованием биохимических и клинико-морфологических показателей классифицировало данный клинический случай как сопряженный с риском развития лимфогенного метастазирования (Y1=50,0; что меньше чем Y2=59,6), что было подтверждено дальнейшими наблюдениями. При динамическом наблюдении через 10 месяцев с момента диагностирования опухоли были выявлены лимфогенные метастазы.

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность с достаточной точностью и информативностью прогнозировать развитие лимфогенных метастазов при ОГШ и на основании этого выбирать наиболее адекватную тактику лечения данной категории пациентов.

Список источников информации

1. Абрамова Е.Б., Астахова Т.М., Ерохов П.А., Шарова Н.П. Множественность форм протеасомы и некоторые подходы к их разделению // Изв. РАН Сер.биол. - 2006. - №2. - С.150-156.

2. 26 S proteasome-mediated production of an authentic major histocompatibility class I-restricted epitope from an intact protein substrate / Ben-Shahar S., Komlosh A., Nadav E. et al. // The J of Biol. Chem. - 1999. - Vol.274. - No.31. - P.21963 -21972.

3. Bortezomib induces apoptosis via Bim and Bik up-regulation and synergizes with cisplatin in the killing of head and neck squamous cell carcinoma cells / Li C., Li R., Grandis J. R. et al. // Mol Cancer Ther. 2008. 7(6). 1647-1655.

4. Differential bortezomib sensitivity in head and neck cancer lines corresponds to proteasome, nuclear factor-kappaB and activator protein-1 related mechanisms / Chen Z., Ricker J.L., Malhotra P.S. et al. // Mol Cancer Ther. 2008. 7(7). 1949-1960.

5. Goldberg A.L. Functions of the proteasome: from protein degradation and immune surveillance to cancer therapy // Biochemical Society Transactions - 2007 - Vol.35. - P.12-17.

6. HIF1-alpha overexpression indicates a good prognosis in early stage squamous cell carcinomas of the oral floor / T. Fillies, R. Werkmeister, P.J. Diest et al. // BMC Cancer. - 2005. - Vol.5. P.84.

7. Layland M.K. The influence of lymph node metastasis in the treatment of squamous cell carcinoma of the oral cavity, oropharynx, larynx, and hypopharynx: NO versus N+/M.K. Layland, D.G. Sessions, J. Lenox // Laryngoscope. - 2005. - Vol.115. - P.629-639.

8. Metastasis to regional lymph nodes in patients with esophageal squamous cell carcinoma: CT versus FDG PET for presurgical detection - prospective study / Y.C. Yoon, K.S.L. Lee, B.-T. Shim et al. // Nuclear medicine. - 2003. - Vol.227. - P.764-770.

9. Moorthy A.K., Savinova O.V., Ho J.Q., Wang V.Y., Vu D., Ghosh G. The 20S proteasome processes NF-kappaBI pl05 into p50 in a translation-independent manner. // EMBO J. - 2006. - Vol.25(9). - P.1945-56.

10. Head and Neck Tumors cancer management: 14th edition. / J.A. Ridge, B.S. Glisson, M.N. Lango, S. Feigenberg http://cancernetwork.com/cancer-management/head-and-neck/article/10165/1802498 Accessed 2 November 2011.

11. 26S proteasome inhibition induces apoptosis and limits growth of human pancreatic cancer / S.A. Shah, M.W. Potter, T.P. McDade et al // J. Cell Biochem. - 2001. - Vol.82(1). - P.110-122.

12. The relation between hypoxia-inducible factor (HIF)-1 alpha and HIF-2alpha expression with anemia and outcome in surgically treated head and neck cancer / S.C. Winter, K.A. Shah, C. Han et al. // Cancer. - 2006. - Vol.107. - P.757-766.

Способ прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах области головы и шеи после проведения комбинированного лечения путем исследовании биологически активных молекул, отличающийся тем, что в ткани опухоли определяют тотальную активность протеасом, активность 20S протеасом и экспрессию NF-kB p50, HIF-1α и рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2 по уравнениям:
Y1=-39,5+28,6·Х1-0,05·Х2+0,09·Х3+1,4·Х4-0,87·Х5
Y2=-23,6+20,1·Х1-0,0003·Х2+0,04·Х3+0,84·Х4-0,38·Х5,
где
X1 - степень дифференцировки (1 - низкодифференцированная опухоль, 2 - умереннодифференцированная, 3 - высокодифференцированная);
Х2 - тотальная активность протеасом ·10-3 Ед/мг белка;
Х3 - активность 20S протеасом ·10-3 Ед/мг белка;
Х4 - экспрессия HIF-1, УЕ/мг белка в лунке;
Х5 - экспрессия NF-κВ p50, УЕ/мг белка в лунке;
и при Y1>Y2 прогнозируют отсутствие; а при Y1<Y2 прогнозируют развитие лимфогенных метастазов



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea. Способ включает проведение серологических исследований и определение положительно реагирующих животных.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз.

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается диагностики функционального класса хронической сердечной недостаточности (ХСН). Диагностику осуществляют по разработанной формуле, учитывающей оценку значений изменения конечного диастолического объема левого желудочка сердца и толщины межжелудочковой перегородки в диастолу, определяемых при проведении эхокардиографии, а также изменения значений NT-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения больных неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для автоматического анализа образцов кала. Автоматический анализатор образцов кала содержит автоматический контроллер, контейнер для образцов, разжижающее устройство, перемешивающее и смешивающее устройство, анализирующее устройство, устройство всасывания и очистки, соединенное трубопроводами с анализирующим устройством.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в молочный период. Пробу помещают в стакан, заливают флотационной жидкостью, размешивают, процеживают, дают взвеси отстояться в течение 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или в течение 40 минут для обнаружения яиц гельминтов.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи.

Группа изобретений относится к системе и методу для мониторинга соответствующего по меньшей мере одного параметра крови различных пациентов посредством устройств для обеспечения доступа, обеспечивающих соответствующий по меньшей мере один доступ к крови каждого пациента через кожу, отборных устройств для отбора образов для отбора соответствующего некоторого количества крови у каждого пациента с получением соответствующего по меньшей мере одного образца крови, аналитического устройства для анализа крови, выполненного с возможностью совместного анализа образцов крови, для анализа предварительно определенных параметров крови образца крови, общего вычислительного устройства для вычисления параметров медикаментов, которые необходимо ввести соответствующим пациентам, на основании записей данных, соответствующих определенным параметрам проанализированной крови, и подающих устройств для подачи соответствующих медикаментов с вычисленными параметрами медикаментов.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики злокачественных новообразований. Из образца клеток крови готовят слайды из нескольких слоев агарозы, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки. Осуществляют повреждения ДНК клеток фосфатно-солевым буфером с pH 7,4-7,5, через который предварительно пропускают озон -кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500-1000 мкг/л в течение 5 мин. Проводят разрушение клеток при pH=10, денатурацию ДНК, помещая слайды в щелочной раствор при pH>13, электрофорез поврежденных ДНК разрушенных клеток в растворе pH>13 при напряжении 27 В, силе тока 260-270 мА, напряженности поля 2,0 В/см. Окрашенные флуоресцентным красителем поврежденные ДНК регистрируют путем фотографирования, обрабатывают с помощью программного обеспечения, вычисляют величину отношения количества поврежденных ДНК к их общему количеству в процентах и при величине отношения более 10% делают заключение об индуцированных повреждениях ДНК. Способ позволяет диагностировать злокачественные новообразования, в т.ч. скрининг, осуществлять подбор лекарственных препаратов и геронтопротекторов при радио-, химио- и озонотерапии. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа состоит в том, что в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты берется кровь из расчета 1 мл на пробу; затем из общего объема отбирают по 1,0 мл в пробирки эппендорф, контрольную и содержащие навески ксенобиотиков; после 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовят мазки крови путем нанесения на сухое предметное стекло капли крови с получением мазка и окрашивания его по методу Лейшмана; затем проводят исследование форменных элементов крови с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500. Появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле, является показателем мембранотоксичности ксенобиотика. Изобретение позволяет провести экспресс-оценку мембранотоксичности вещества.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Проводят биохимическое исследование сыворотки крови натощак с определением уровня глюкозы и аланинаминотрансферазы и ультразвуковых исследований: печени с определением эхогенной структуры, поджелудочной железы натощак с определением размеров ее головки и щитовидной железы с определением ее объема. Определяют по полученным данным величины диагностического коэффициента по формуле . При получении значения P≥0,5 диагностируют метаболический синдром, а при P<0,5 - отсутствие метаболического синдрома. Способ позволяет повысить точность определения метаболического синдрома за счет определения биохимических и ультразвуковых показателей. 5 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и биофармации, и описывает способ количественного определения углеродных наноструктур, в частности наноалмазов и нанотрубок, в биологических образцах и их распределение в организме ex vivo, основанное на использовании метода масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой. Способ характеризуется тем, что поверхность углеродных наноструктур модифицируют (2,4,5-трийодфенил)-метанолом, определяют количество йода в модифицированных углеродных наноструктурах, полученные модифицированные углеродные наноструктуры вводят в организм экспериментального животного с последующим изъятием органов и тканей, их гомогенизацией в 0,5-2 М растворе NaOH, отбором пробы гомогената, разбавлением ее водой, обработкой разбавленной пробы ультразвуком до температуры 40-70°C, определением в полученной пробе количества йода методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой и расчетом содержания углеродных наноструктур в пробе по разности содержания йода в пробе до введения модифицированных углеродных наноструктур и после их введения в организм и пересчетом этого количества йода в содержание углеродных наноструктур в образце, используя исходное содержание йода в модифицированной углеродной наноструктуре. Способ обеспечивает мониторинг распределения углеродных наноносителей в организме in vivo. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области гигиены, санитарии и медицины, в частности, к способам лабораторной диагностики содержания нанодисперсных частиц диоксида кремния в организме работающих, к факторам риска в воздухе рабочей зоны которых относится диоксид кремния, и может быть использован для обоснования санитарно-гигиенических мероприятий по предупреждению и устранению воздействия нанодисперсных соединений. У работника, к факторам риска в воздухе рабочей зоны которого относится диоксид кремния, отбирают венозную цельную кровь и делят ее на две исследуемые пробы. Первую пробу подвергают исследованию рентгеновским энергодисперсионным микроанализом, устанавливая при этом наличие в пробе кремния на уровне порога обнаружения. Вторую пробу крови, смешанную в объемном соотношении 1:1 с раствором гепарина в концентрации 5000 МЕ/мл, подвергают исследованию методом динамического светорассеяния с фотонной корреляционной спектроскопией, определяя при этом размер выявленных частиц диоксида кремния и выполняя графическое построение первой гистограммы распределения их размеров. Затем также методом динамического светорассеяния с фотонной корреляционной спектроскопией исследуют первый контрольный образец, представляющий собой водную суспензию нанодисперсного диоксида кремния, с построением второй гистограммы распределения размеров частиц и второй контрольный образец, представляющий собой смешанную в объемном соотношении 1:1 с раствором гепарина в концентрации 5000 МЕ/мл венозную цельную кровь индивида, не подвергавшегося воздействию диоксида кремния, с построением третьей гистограммы распределения размеров частиц. Производят графическое наложение первой, второй и третьей гистограмм и при совпадении хотя бы части пиков по показателю распределения частиц первой гистограммы с пиками на второй и третьей указанных гистограммах при одновременном установлении наличия в пробе крови кремния на уровне порога обнаружения рентгеновским энергодисперсионным микроанализом считают наличие нанодисперсных частиц диоксида кремния в цельной крови доказанным. Способ обеспечивает возможность определения пространственного распределения наночастиц в объеме, а также динамики поведения наночастиц при исследовании процессов диффузии или агрегации и оседания. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 ил.
Изобретение относится к медицине. Сущность способа ранней диагностики хронической болезни почек состоит в том, что используют диапазон доз Допамина от 1 до 3 мкг/кг массы тела и стандартную водную нагрузку в количестве 200 мл. По отсутствию нарастания скорости клубочковой фильтрации судят о наличии ранних признаков хронической болезни почек. Использование заявленного способа позволяет максимально стандартизировать исследование за счет точного дозирования препарата. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для обоснования выбора тактики наблюдения и ведения пациентов, направленной профилактики неблагоприятного течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания. Способ включает в себя сбор анамнеза заболевания с выявлением факторов риска ухудшения клинического течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания, проведение клинических, иммунологических исследований сыворотки крови больного. Рассчитывают интегрированную оценку патогенетической значимости наличия или отсутствия воздействия на пациента экзогенных и эндогенных факторов, способствующих ухудшению заболевания, клинических, иммунологических показателей. Затем на основании совокупности полученных данных прогнозируют вероятность ухудшения клинического течения идиопатической саркомы Капоши и делают прогноз относительно дальнейшего развития заболевания. Заявленный способ позволяет получить индивидуальные критерии прогнозирования вероятности ухудшения клинического течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания, позволяет обосновать выбор тактики наблюдения и ведения пациентов, направленной профилактики неблагоприятного течения заболевания путем устранения выявленных факторов риска, назначения своевременной адекватной рациональной терапии. 3 табл., 4 пр., 12 ил.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и иммунологии и может быть использовано для оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ) в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. Для этого в группе животных воздействуют на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) при длине волны 5,6 мм в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня. Разовая экспозиция физического фактора при этом составляет 1-2 минуты в течение 2 недель с перерывами 1-2 дня. Затем осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины. На седьмой день после операции осуществляют трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв через день. Затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. На 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов. При этом определяют клеточность тимуса (КТ) в 106кл./100 мг его массы, функциональную активность лимфоцитов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в ед., содержание антителообразующих клеток (АОК) по N.K.Erne в кл./чП в селезенке, апоптоз в аннексиновом тесте (АП) в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) в ед. После этого расчитывают индекс эффекта физического фактора (ИФ) по формуле: И Ф = А П × Н С Т × К Т × 100 Ц И К × А О К . При величине ИФ меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта КВЧ-воздействия. Способ обеспечивает возможность объективной оценки эффекта воздействия электромагнитных миллиметровых волн КВЧ в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения анеуплоидии методом секвенирования. Получают внеклеточную ДНК из образца крови беременной женщины. Из полученной внеклеточной ДНК создают геномные библиотеки. Геномные библиотеки секвенируют с целью получения множества чтений ДНК и определяют представленность каждой хромосомы в геноме. Определяют количество чтений, выровненных на разные хромосомы. Вывод о наличии анеуплоидии по какой-либо хромосоме делают при обнаружении отличий в представленности отдельных хромосом от среднего значения по геному, при этом отличие в представленности отдельных хромосом от среднего значения по геному идентифицируют при p-value < 0.0001 в результате применения одностороннего двухвыборочного t-критерия Стьюдента для независимых выборок к покрытиям окон. Изобретение обеспечивает эффективную пренатальную неинвазивную диагностику анеуплоидии плода начиная с периода первого триместра беременности. 8 з.п. ф-лы,1 пр.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающий приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, отличающийся тем, что после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 минуты и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам. 1 пр.
Наверх