Cпособ индуцированных повреждений днк в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках


 


Владельцы патента RU 2527345:

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "НИЖЕГОРОДСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ (ГБОУ ВПО "НижГМА" МИНЗДРАВА РОССИИ) (RU)

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики злокачественных новообразований. Из образца клеток крови готовят слайды из нескольких слоев агарозы, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки. Осуществляют повреждения ДНК клеток фосфатно-солевым буфером с pH 7,4-7,5, через который предварительно пропускают озон -кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500-1000 мкг/л в течение 5 мин. Проводят разрушение клеток при pH=10, денатурацию ДНК, помещая слайды в щелочной раствор при pH>13, электрофорез поврежденных ДНК разрушенных клеток в растворе pH>13 при напряжении 27 В, силе тока 260-270 мА, напряженности поля 2,0 В/см. Окрашенные флуоресцентным красителем поврежденные ДНК регистрируют путем фотографирования, обрабатывают с помощью программного обеспечения, вычисляют величину отношения количества поврежденных ДНК к их общему количеству в процентах и при величине отношения более 10% делают заключение об индуцированных повреждениях ДНК. Способ позволяет диагностировать злокачественные новообразования, в т.ч. скрининг, осуществлять подбор лекарственных препаратов и геронтопротекторов при радио-, химио- и озонотерапии. 2 пр.

 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к молекулярной биологии и экспериментальной медицине, и может быть использовано для диагностики злокачественных новообразований, индивидуального подбора лекарственных препаратов и геронтопротекторов, при тактике радио-, химио- и озонотерапии, также для выявления групп риска различных заболеваний у населения (скрининг).

Преамбула: повреждение ДНК необходимо для индивидуальной оценки репарационной системы клетки.

В настоящее время известен способ для создания индуцированных повреждений дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Данный способ является наиболее близким по совокупности существенных признаков и достигаемому техническому результату к предлагаемому способу и выбран авторами в качестве прототипа (1).

Данный способ включает: приготовление слайдов, состоящих из 3-х слоев агарозы, средний из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, повреждение ДНК иммобилизованных в агарозу клеток рентгеновским излучением в дозе 3 Гр со средней мощностью 1 Гр/мин, разрушение (лизис) клеток при pH=10 с целью удаления мембран клеток и большинства белков, денатурацию (расплетение=раскручивание=выпрямление) ДНК путем помещения слайдов в щелочной раствор (pH>13) для формирования однонитевых участков в молекулах ДНК, соединенных с ядерным матриксом, которые участвуют в образовании хвоста «кометы», проведение электрофореза поврежденных ДНК в щелочном растворе (pH>13) при напряжении 27 В, силе тока 260-270 мА, напряженности поля 2,0 В/см, за счет подвижности в постоянном электрическом поле поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток, заключенных в агарозу, при этом поврежденные ДНК мигрируют к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий хвост кометы, параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК, затем осуществляют окрашивание ДНК флуоресцентным красителем для их визуализации, далее изображения ДНК («комет») фотографируют с помощью фотоаппарата, соединенного с флуоресцентным микроскопом, главным образом, в центральной части слайдов, где «кометы» располагаются примерно в одной плоскости, после чего полученные изображения обрабатывают с помощью специализированного программного обеспечения, разработанного для регистрации и специализированного программного обеспечения, разработанного для регистрации и анализа отображений, реализующего алгоритмы расчета 13-ти стандартных параметров «комет» (2), при этом программное обеспечение позволяет определить общее количество ДНК и количество поврежденных ДНК и вычислить отношение количества поврежденных ДНК к общему количеству ДНК в процентах и на основании полученных данных делают заключение об индуцированных повреждениях ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Данный способ эффективен и информативен при малом количестве требуемого экспериментального материала.

Однако данный способ является затратным за счет использования дорогостоящей рентгеновской установки для создания индуцированных повреждений ДНК в клетке и работы на ней специально обученного персонала, а также специальной защиты для обслуживающего персонала и требования к помещению из-за рентгеновского излучения. Задачей предлагаемого изобретения является разработка эффективного способа создания индуцированных повреждений ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках, безопасного при реализации и не требующего дорогостоящего стационарного оборудования, специально обученного персонала и специально оборудованного помещения.

Поставленная задача решается предлагаемым способом создания индуцированных повреждений ДНК индивидуальных неделимых ядросодержащих клеток, включающий подготовку слайдов, состоящих из нескольких слоев агарозы, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, повреждение ДНК клеток, разрушение (лизис) клеток при pH=10, денатурацию поврежденных ДНК в разрушенных клетках щелочным раствором при pH>13, проведение электрофореза ДНК клеток в щелочных растворах при pH>13, последующее окрашивание флуоресцентным красителем поврежденных ДНК, регистрацию интенсивности флуоресценции изображения ДНК «комет» и обработку полученного изображения ДНК с помощью программного обеспечения, позволяющую определить величину отношения интенсивности флуоресценции поврежденных ДНК к интенсивности флуоресценции общего количества ДНК в клетке в процентах, и по полученной величине отношения делают заключение, согласно изобретения, повреждение ДНК клеток осуществляют обработкой слайда фосфатно-солевым буфером с pH 7,4-7,5, через который предварительно пропускают озон - кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500-1000 мкг/л в течение 5 мин, и при величине отношения более 10% делают заключение о создании индуцированных повреждений ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Техническим результатом предлагаемого способа является безопасность и снижение материальных затрат на его реализацию, так как осуществление предлагаемого способа не требует стационарного дорогостоящего оборудования, специально обученного персонала и специально оборудованного помещения.

Данный технический результат обусловлен тем, что для создания индуцированных повреждений ДНК индивидуальных неделимых ядросодержащих клеток в качестве предлагаемого средства берут озон - кислородную смесь, для этого обрабатывают слайд, один из слоев которого содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, фосфатно-солевым буфером с pH 7,4-7,5, через который предварительно пропускают озон - кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500-1000 мкг/л в течение 5 мин, и при величине отношения более 10% делают заключение о создании индуцированных повреждений ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом

Предварительно готовят слайды, состоящие из нескольких слоев агарозы, в частности из 2-х слоев, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, затем создают повреждения ДНК клеток, находящихся в одном из слоев слайда, фосфатно-солевым буфером с pH 7,4-7,5, через который предварительно пропускают озон - кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500-1000 мкг/л в течение 5 мин, в качестве образца индивидуальных неделимых ядросодержащих клеток может быть взят образец крови, после чего проводят разрушение (лизис) клеток при pH=10 с целью удаления мембран клеток и большинства белков, денатурацию (расплетение=раскручивание=выпрямление) ДНК, помещая слайды в щелочной раствор при pH>13, для формирования однонитевых участков в молекулах ДНК, соединенных с ядерным матриксом, которые участвуют в образовании хвоста «кометы», и проведение электрофореза поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток в щелочном растворе pH>13 при напряжении 27 В, силе тока 260-270 мА, напряженности поля 2,0 В/см, за счет подвижности в постоянном электрическом поле поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток, заключенных в агарозу, при этом поврежденные ДНК мигрируют к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий хвост «кометы», параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК, для визуализации поврежденных ДНК осуществляют их окрашивание флуоресцентным красителем, изображения окрашенных флуоресцентным красителем поврежденных ДНК («комет») регистрируют путем фотографирования с помощью фотоаппарата, соединенного с флуоресцентным микроскопом, главным образом, в центральной части слайдов, где «кометы» располагаются примерно в одной плоскости, и полученные изображения обрабатывают с помощью специализированного программного обеспечения, разработанного для регистрации и анализа отображений, реализующего алгоритмы расчета 4-х стандартных параметра «комет», при этом программное обеспечение позволяет определить как общее количество ДНК, так и количество поврежденных ДНК, и вычисляют величину отношения количества поврежденных ДНК и общему количеству ДНК в процентах и на основании полученной величины отношения более 10% делают заключение об индуцированных повреждениях ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Примеры конкретного использования предлагаемого способа

Пример 1.

Предварительно подготовили 2-слойный слайд путем нанесения на стекло первого слоя из раствора агарозы, после высушивания первого слоя на него нанесли из раствора агарозы второй слой, который содержал индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, для этого в 1% раствор легкоплавкой агарозы ввели кровь самца белых беспородных интактных крыс весом 180 г, возрастом 5-ти месяцев, разведенную в фосфатном буфере, далее осуществили создание повреждений ДНК клеток, находящихся во втором слое слайда, фосфатно-солевым буфером с pH 7,4, через который предварительно пропустили озон - кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500 мкг/л в течение 5 мин, затем провели разрушение (лизис) клеток при pH=10 с целью удаления мембран клеток и большинства белков и денатурацию (расплетение=раскручивание=выпрямление) ДНК, помещая слайды в щелочной раствор при pH=13,2 для формирования однонитевых участков в молекулах ДНК, соединенных с ядерным матриксом, которые участвуют в образовании хвоста «кометы», после чего провели электрофорез поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток в щелочном растворе pH=13,2 при напряжении 27 В, силе тока 260 мА, напряженности поля 2,0 В/см, за счет подвижности в постоянном электрическом поле поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток, заключенных в агарозу, при этом поврежденные ДНК мигрируют к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий хвост «кометы», параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК, для визуализации поврежденных ДНК осуществили их окрашивание флуоресцентным красителем, полученные изображения окрашенных флуоресцентным красителем поврежденных ДНК («комет») зарегистрировали путем фотографирования с помощью фотоаппарата, соединенного с флуоресцентным микроскопом, главным образом, в центральной части слайдов, где «кометы» располагаются примерно в одной плоскости, и зарегистрированные изображения обработали с помощью специализированного программного обеспечения, разработанного для регистрации и анализа отображений (4), реализующего алгоритмы расчета 4-х стандартных параметров «комет», при этом программное обеспечение позволило определить как общее количество ДНК, так и количество поврежденных ДНК, и вычислить величину отношения количества поврежденных ДНК и общему количеству ДНК в процентах, которая составила 10,87%, и на основании полученной величины отношения сделали заключение о создании индуцированных повреждениях ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Пример 2.

Предварительно подготовили 2-слойный слайд путем нанесения на стекло первого слоя из раствора агарозы, после высушивания первого слоя на него наносили из раствора агарозы второй слой, который содержал индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, для этого в 1% раствор легкоплавкой агарозы ввели кровь самца белых беспородных интактных крыс весом 198 г, возрастом 5-ти месяцев, разведенную в фосфатном буфере, осуществили повреждение ДНК клеток, находящихся во втором слое слайда, фосфатно-солевым буфером с pH 7,5, через который предварительно пропустили озон - кислородную смесь при концентрации озона в смеси 1000 мкг/л в течение 5 мин, затем провели разрушение (лизис) клеток при pH=10 с целью удаления мембран клеток и большинства белков и денатурацию (расплетение=раскручивание=выпрямление) ДНК, помещая слайды в щелочной раствор при pH=13,5 для формирования однонитевых участков в молекулах ДНК, соединенных с ядерным матриксом, которые участвуют в образовании хвоста «кометы», после чего провели электрофорез поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток в щелочном растворе pH=13,5 при напряжении 27 В, силе тока 270 мА, напряженности поля 2,0 В/см, за счет подвижности в постоянном электрическом поле поврежденных ДНК разрушенных (лизированных) клеток, заключенных в агарозу, при этом поврежденные ДНК мигрируют к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий хвост «кометы», параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК, для визуализации поврежденных ДНК осуществили их окрашивание флуоресцентным красителем, полученные изображения окрашенных флуоресцентным красителем поврежденных ДНК («комет») зарегистрировали путем фотографирования с помощью фотоаппарата, соединенного с флуоресцентным микроскопом, главным образом, в центральной части слайдов, где «кометы» располагаются примерно в одной плоскости, и зарегистрированные изображения обработали с помощью специализированного программного обеспечения, разработанного для регистрации и анализа отображений (3), реализующего алгоритмы расчета 4-х стандартных параметров «комет», при этом программное обеспечение позволило определить как общее количество ДНК, так и количество поврежденных ДНК, и вычислить величину отношения количества поврежденных ДНК и общему количеству ДНК в процентах, которая составила 11,00%, и на основании полученной величины отношения сделали заключение об индуцированных повреждениях ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ является эффективным и безопасным, не требующим значительных материальных затрат на оборудование, подготовку специалистов для работы на нем и подготовку специально оборудованного помещения.

Источники информации

1. Прототип. Сирота Н.П., Кузнецова Е.А. Применение метода «комета-тест» в радиобиологических исследованиях. Радиационная биология. Радиоэкология, 2010, т.50, №3, с.329.

2. Chemeris N.К., Gapeyev А.В., Sirota N.P. et al. DNA damage in frog erythrocytes after in vitro exposure to a high peak-power pulsed electromagnetic field. Mutat Res. 2004, V.558, №1, 2, p.27.

3. Степанов B.H. Методы и программные средства автоматизации анализа изображений медико-биологических микрообъектов. Автореферат диссертации кандидата технических наук. М., 2005, с.23.

Способ создания индуцированных повреждений ДНК индивидуальных неделимых ядросодержащих клеток, включающий подготовку слайдов, состоящих из нескольких слоев агарозы, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки, повреждение ДНК клеток, разрушение (лизис) клеток при pH=10, денатурацию поврежденных ДНК в разрушенных клетках щелочным раствором при pH>13, проведение электрофореза ДНК клеток в щелочных растворах при pH>13, последующее окрашивание флуоресцентным красителем поврежденных ДНК, регистрацию интенсивности флуоресценции изображения ДНК «комет» и обработку полученного изображения ДНК с помощью программного обеспечения, позволяющую определить величину отношения интенсивности флуоресценции поврежденных ДНК к интенсивности флуоресценции общего количества ДНК в клетке в процентах, и по полученной величине отношения делают заключение, характеризующийся тем, что повреждение ДНК клеток осуществляют обработкой слайда фосфатно-солевым буфером с pH 7,4-7,5, через который предварительно пропускают озон - кислородную смесь при концентрации озона в смеси 500-1000 мкг/л в течение 5 мин, и при величине отношения более 10% делают заключение об индуцированных повреждениях ДНК в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea. Способ включает проведение серологических исследований и определение положительно реагирующих животных.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз.

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается диагностики функционального класса хронической сердечной недостаточности (ХСН). Диагностику осуществляют по разработанной формуле, учитывающей оценку значений изменения конечного диастолического объема левого желудочка сердца и толщины межжелудочковой перегородки в диастолу, определяемых при проведении эхокардиографии, а также изменения значений NT-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения больных неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для автоматического анализа образцов кала. Автоматический анализатор образцов кала содержит автоматический контроллер, контейнер для образцов, разжижающее устройство, перемешивающее и смешивающее устройство, анализирующее устройство, устройство всасывания и очистки, соединенное трубопроводами с анализирующим устройством.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в молочный период. Пробу помещают в стакан, заливают флотационной жидкостью, размешивают, процеживают, дают взвеси отстояться в течение 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или в течение 40 минут для обнаружения яиц гельминтов.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи.
Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа состоит в том, что в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты берется кровь из расчета 1 мл на пробу; затем из общего объема отбирают по 1,0 мл в пробирки эппендорф, контрольную и содержащие навески ксенобиотиков; после 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовят мазки крови путем нанесения на сухое предметное стекло капли крови с получением мазка и окрашивания его по методу Лейшмана; затем проводят исследование форменных элементов крови с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500. Появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле, является показателем мембранотоксичности ксенобиотика. Изобретение позволяет провести экспресс-оценку мембранотоксичности вещества.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Проводят биохимическое исследование сыворотки крови натощак с определением уровня глюкозы и аланинаминотрансферазы и ультразвуковых исследований: печени с определением эхогенной структуры, поджелудочной железы натощак с определением размеров ее головки и щитовидной железы с определением ее объема. Определяют по полученным данным величины диагностического коэффициента по формуле . При получении значения P≥0,5 диагностируют метаболический синдром, а при P<0,5 - отсутствие метаболического синдрома. Способ позволяет повысить точность определения метаболического синдрома за счет определения биохимических и ультразвуковых показателей. 5 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и биофармации, и описывает способ количественного определения углеродных наноструктур, в частности наноалмазов и нанотрубок, в биологических образцах и их распределение в организме ex vivo, основанное на использовании метода масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой. Способ характеризуется тем, что поверхность углеродных наноструктур модифицируют (2,4,5-трийодфенил)-метанолом, определяют количество йода в модифицированных углеродных наноструктурах, полученные модифицированные углеродные наноструктуры вводят в организм экспериментального животного с последующим изъятием органов и тканей, их гомогенизацией в 0,5-2 М растворе NaOH, отбором пробы гомогената, разбавлением ее водой, обработкой разбавленной пробы ультразвуком до температуры 40-70°C, определением в полученной пробе количества йода методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой и расчетом содержания углеродных наноструктур в пробе по разности содержания йода в пробе до введения модифицированных углеродных наноструктур и после их введения в организм и пересчетом этого количества йода в содержание углеродных наноструктур в образце, используя исходное содержание йода в модифицированной углеродной наноструктуре. Способ обеспечивает мониторинг распределения углеродных наноносителей в организме in vivo. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области гигиены, санитарии и медицины, в частности, к способам лабораторной диагностики содержания нанодисперсных частиц диоксида кремния в организме работающих, к факторам риска в воздухе рабочей зоны которых относится диоксид кремния, и может быть использован для обоснования санитарно-гигиенических мероприятий по предупреждению и устранению воздействия нанодисперсных соединений. У работника, к факторам риска в воздухе рабочей зоны которого относится диоксид кремния, отбирают венозную цельную кровь и делят ее на две исследуемые пробы. Первую пробу подвергают исследованию рентгеновским энергодисперсионным микроанализом, устанавливая при этом наличие в пробе кремния на уровне порога обнаружения. Вторую пробу крови, смешанную в объемном соотношении 1:1 с раствором гепарина в концентрации 5000 МЕ/мл, подвергают исследованию методом динамического светорассеяния с фотонной корреляционной спектроскопией, определяя при этом размер выявленных частиц диоксида кремния и выполняя графическое построение первой гистограммы распределения их размеров. Затем также методом динамического светорассеяния с фотонной корреляционной спектроскопией исследуют первый контрольный образец, представляющий собой водную суспензию нанодисперсного диоксида кремния, с построением второй гистограммы распределения размеров частиц и второй контрольный образец, представляющий собой смешанную в объемном соотношении 1:1 с раствором гепарина в концентрации 5000 МЕ/мл венозную цельную кровь индивида, не подвергавшегося воздействию диоксида кремния, с построением третьей гистограммы распределения размеров частиц. Производят графическое наложение первой, второй и третьей гистограмм и при совпадении хотя бы части пиков по показателю распределения частиц первой гистограммы с пиками на второй и третьей указанных гистограммах при одновременном установлении наличия в пробе крови кремния на уровне порога обнаружения рентгеновским энергодисперсионным микроанализом считают наличие нанодисперсных частиц диоксида кремния в цельной крови доказанным. Способ обеспечивает возможность определения пространственного распределения наночастиц в объеме, а также динамики поведения наночастиц при исследовании процессов диффузии или агрегации и оседания. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 ил.
Изобретение относится к медицине. Сущность способа ранней диагностики хронической болезни почек состоит в том, что используют диапазон доз Допамина от 1 до 3 мкг/кг массы тела и стандартную водную нагрузку в количестве 200 мл. По отсутствию нарастания скорости клубочковой фильтрации судят о наличии ранних признаков хронической болезни почек. Использование заявленного способа позволяет максимально стандартизировать исследование за счет точного дозирования препарата. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для обоснования выбора тактики наблюдения и ведения пациентов, направленной профилактики неблагоприятного течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания. Способ включает в себя сбор анамнеза заболевания с выявлением факторов риска ухудшения клинического течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания, проведение клинических, иммунологических исследований сыворотки крови больного. Рассчитывают интегрированную оценку патогенетической значимости наличия или отсутствия воздействия на пациента экзогенных и эндогенных факторов, способствующих ухудшению заболевания, клинических, иммунологических показателей. Затем на основании совокупности полученных данных прогнозируют вероятность ухудшения клинического течения идиопатической саркомы Капоши и делают прогноз относительно дальнейшего развития заболевания. Заявленный способ позволяет получить индивидуальные критерии прогнозирования вероятности ухудшения клинического течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания, позволяет обосновать выбор тактики наблюдения и ведения пациентов, направленной профилактики неблагоприятного течения заболевания путем устранения выявленных факторов риска, назначения своевременной адекватной рациональной терапии. 3 табл., 4 пр., 12 ил.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и иммунологии и может быть использовано для оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ) в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. Для этого в группе животных воздействуют на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) при длине волны 5,6 мм в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня. Разовая экспозиция физического фактора при этом составляет 1-2 минуты в течение 2 недель с перерывами 1-2 дня. Затем осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины. На седьмой день после операции осуществляют трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв через день. Затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. На 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов. При этом определяют клеточность тимуса (КТ) в 106кл./100 мг его массы, функциональную активность лимфоцитов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в ед., содержание антителообразующих клеток (АОК) по N.K.Erne в кл./чП в селезенке, апоптоз в аннексиновом тесте (АП) в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) в ед. После этого расчитывают индекс эффекта физического фактора (ИФ) по формуле: И Ф = А П × Н С Т × К Т × 100 Ц И К × А О К . При величине ИФ меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта КВЧ-воздействия. Способ обеспечивает возможность объективной оценки эффекта воздействия электромагнитных миллиметровых волн КВЧ в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения анеуплоидии методом секвенирования. Получают внеклеточную ДНК из образца крови беременной женщины. Из полученной внеклеточной ДНК создают геномные библиотеки. Геномные библиотеки секвенируют с целью получения множества чтений ДНК и определяют представленность каждой хромосомы в геноме. Определяют количество чтений, выровненных на разные хромосомы. Вывод о наличии анеуплоидии по какой-либо хромосоме делают при обнаружении отличий в представленности отдельных хромосом от среднего значения по геному, при этом отличие в представленности отдельных хромосом от среднего значения по геному идентифицируют при p-value < 0.0001 в результате применения одностороннего двухвыборочного t-критерия Стьюдента для независимых выборок к покрытиям окон. Изобретение обеспечивает эффективную пренатальную неинвазивную диагностику анеуплоидии плода начиная с периода первого триместра беременности. 8 з.п. ф-лы,1 пр.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающий приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, отличающийся тем, что после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 минуты и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам. 1 пр.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в хирургии и онкологии для прогнозирования общей выживаемости пациентов после резекции печени по поводу метастатического колоректального рака на основе особенностей микроокружения опухоли. Способ включает исследование опухолевых биоптатов печени с помощью иммуногистохимического метода и определение наличия и величины площади лимфоцитарной инфильтрации в строме метастаза печени в трех полях зрения микроскопа. Поля зрения выбирают по максимально выраженной иммуногистохимической реакции с каждого среза биоптата печени с опухолью и в зависимости от наличия и величины площади лимфоцитарной инфильтрации определяют прогноз общей выживаемости. При наличии и величины площади лимфоцитарной инфильтрации 50% и более от опухолевой стромы в каждом из трех полей зрения пациента определяют в группу благоприятного прогноза (дожитие после резекции печени три года и более); при отсутствии или величине площади лимфоцитарной инфильтрации, составляющей менее 10% от опухолевой стромы в каждом из трех полей зрения, пациента определяют в группу неблагоприятного прогноза (с продолжительностью жизни меньше двух лет). Практическое применение способа повышает точность прогноза общей выживаемости после резекции печени по поводу метастатического колоректального рака и делает возможным прогнозирование общей выживаемости пациента. 1 табл., 4 пр.
Наверх