Способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза


 


Владельцы патента RU 2530574:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Амурская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающий приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, отличающийся тем, что после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 минуты и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам. 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к патологической анатомии и фтизиатрии, и касается способа ускоренной методики окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза.

Известно большое количество способов окраски для выявления микобактерий туберкулеза. Ближайший аналог: это метод, описанный Г.Г.Автандиловым (Основы патологоанатомической практики. - Москва - 1994 г. - С.383). Методика окраски: срезы депарафинируют и доводят до спирта. На срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров. Потом подогревание ведут в течение 1-2 минут, затем краску оставляют на срезе после прекращения подогревания еще на 20-25 минут. Краску сливают, снимают фильтровальную бумагу. Дифференцируют в 1% солянокислом спирте (70°) до появления бледно-розового тона. Промывают в водопроводной воде 1-2 минуты. Докрашивают срезы метиленовым синим Лефлера в течение 0,5-0,6 минуты. Окрашивают несильно, затем дифференцируют в 0,5-1% солянокислом спирте и хорошо промывают в воде. Быстро проводят через спирты, ксилол и заключают в бальзам.

Однако предложенный способ неудобен тем, что окраска препаратов занимает большое количество времени. Поэтому необходимо усовершенствовать данный метод для достоверности и объективизации посмертного патологоанатомического исследования туберкулеза с целью более быстрой диагностики.

Задачей настоящего изобретения является разработка ускоренного метода окраски, позволяющего за более короткий промежуток времени достоверно проводить посмертную диагностику туберкулеза легких.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающем приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 мин и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор митиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам, причем просветление в карбол-ксилоле не допустимо, так как это может привести к вымыванию красителя.

Задача достигается следующим образом.

По общепринятой методике ткань легких, лимфатических узлов, бронхов извлекаются при аутопсии. Помещаются в емкость, заполненную 10% раствором нейтрального формалина. Через 12-24 часа из материала вырезаются продольные кусочки исследуемых тканей толщиной до 05, -1,0 см и вновь погружают в емкость с 10% раствором нейтрального формалина. Затем через 12 часов после тщательной промывки в течение 5 часов в проточной воде материал обезвоживают в спиртах восходящей крепости (50% (3 часа), 60% (3 часа), 70% (12 часов), 80% (12 часов), 96% (12 часов), 100% (12 часов)) с последующим погружением в касторовое масло на 12-24 часа.

Для удаления спиртов кусочки погружают в хлороформ (3 порции со сменой через 1,5 часа), далее для удаления хлороформа помещают поочередно в три порции расплавленного парафина по 1,5 часа в каждой. После всего этого кусочки заливаются расплавленным парафином в специальные бумажные коробочки с этикетировкой материала. Полученные блоки наклеиваются на пластиковую кассету и с помощью микротома изготавливаются гистологические срезы толщиной 5 мкм. И наклеиваются на предметное стекло с последующим окрашиванием по Циль-Нильсону. Сначала срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением в воду. Затем срезы помещают в 1% раствор йодной кислоты на 2 мин. Промывают в проточной воде в течение 10 секунд. На срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, затем оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут. Далее убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты. Далее на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в водопроводной воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой. Обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам. Просветление в карбол-ксилоле не допустимо, так как это может привести к вымыванию красителя. Общее время окраски данным методом 20-25 минут, а предложенными методами других авторов более одного часа.

Пример использования предложенного способа.

Предложенным способом были окрашены ткань легких, лимфатических узлов и бронхов у 105 умерших больных лекарственно-устойчивым туберкулезом в возрасте от 21 до 60 лет. Исследуемый материал извлекался, фиксировался, промывался, обезвоживался и заливался в парафин. Далее проводилась окраска по Цилю-Нильсону. Сначала срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол (5 минут в термостате при температуре 54°C) и спирты нисходящей концентрации (5 минут в термостате при температуре 54°C) с последующим помещением в воду. Затем срезы помещают в 1% раствор йодной кислоты на 2 мин. Промывают в проточной воде в течение 10 секунд. На срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, затем оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут. Убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты. Далее на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают водой, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой. Обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам. Просветление в карбол-ксилоле не допустимо, так как это может привести к вымыванию красителя. Общее время окраски данным методом 20-25 минут, а предложенными методами других авторов более одного часа.

Технический результат использования изобретения:

1. Достоверность и объективизация посмертной патологоанатомической диагностики туберкулеза.

2. За счет нагревания растворов в термостате и над пламенем спиртовки улучшается качество окраски гистологических срезов.

3. Сокращается время исследования, что позволяет сделать заключение в более ранние сроки, снизить токсическое влияние реагентов на медицинский персонал.

4. Данный способ может применяться для дифференцированной диагностики различных гранулематозных образований.

5. Способ может быть использован для срочной интраоперационной диагностики (путем изготовления гистологических срезов на замораживающем микротоме).

Литература

1. Автандилов Г.Г. Основы патологоанатомической практики. - Москва, 1994, - с.383.

2. Волкова О.В. Елецкий Ю.К. Основы гистологии и гистологической техники. Москва. «Медицина». 1982.

3. Гринберг Л.М. Баранова Е.Ю, Кондратов Д.Л. Гистобактериоскопия в морфологической диагностике туберкулеза легких: Пособие для врачей.- Уральский НИИ фтизиопульмонологии. - Екатеренбург, 2004.

4. Цинзерлинг А.В. Обработка и окраска мазков и срезов для выявления микроорганизмов // Архив патологии 1992. №5, - с.35-40.

5. Хмельницкий O.K., Белянин В.Л. Выявление возбудителей инфекционных болезней при морфологическом исследовании: Пособие для врачей. - Санкт-Петербург: СПбМАПО, 1996, - с.62.

Способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающий приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, отличающийся тем, что после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 минуты и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор митиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам, причем просветление в карбол-ксилоле не допустимо, так как это может привести к вымыванию красителя.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования гнойных послеоперационных осложнений у больных раком толстой кишки (колоректальный рак) путем динамического исследования крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения заболевания у больных раком яичников. Сущность способа: в опухолевой ткани яичников определяют долю клеток в S фазе клеточного цикла, при значении этого показателя менее 15,9% прогнозируют благоприятный исход, а при значении этого показателя более 15,9% прогнозируют неблагоприятный исход.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, кардиологии и сердечно-сосудистой хирургии, и может быть использовано для диагностики тромбоэмболии легочных артерий (ТЭЛА).

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации.

Изобретение относится к мониторингу окружающей среды и биологических объектов на предмет определения содержания ионов металлов в жидких средах с использованием фотохромных соединений.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности комплексного лечения больных раком легкого в раннем послеоперационном периоде.

Изобретение относится к медицине, в частности к биологической химии, и предназначено для более полной оценки окислительной модификации белков (ОМБ) и анализа соотношения альдегид-динитрофенилгидразонов (АДНФГ) и кетон-динитрофенилгидразонов (КДНФГ) основного и нейтрального характера в плазме и клетках крови, а также в тканях животных с целью определения степени выраженности и стадии окислительного стресса.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения высокого тромбогенного риска у беременных при проведении экстракорпорального оплодотворения в плазме крови.

Изобретение относится к области медицины, включающей исследования биологического материала, и касается определения относительной длины теломер на хромосомах. Способ заключается в выявлении укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови с помощью метода количественной флуоресцентной гибридизации in situ (Q-FISH).

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для раннего выявления дисметаболической нефропатии у детей 3-7 лет. Способ заключается в исследовании пробы мочи после взаимодействия мочи с 10% водным раствором хлорида кальция фотометрически на микропланшетном ридере при длине волны 620 нм и количественном определении кристаллообразующей способности мочи по формуле: Соп-(Dn-Dn-1)·13,4/(D4-D3), где D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция, D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой, Dn - оптическая плотность опытной пробы пациента №Х с 10% раствором хлористого кальция, Dn-1 - оптическая плотность опытной пробы пациента с дистиллированной водой, 13,4 г/л - концентрация стандартного раствора оксалата натрия.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения анеуплоидии методом секвенирования. Получают внеклеточную ДНК из образца крови беременной женщины.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и иммунологии и может быть использовано для оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ) в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для обоснования выбора тактики наблюдения и ведения пациентов, направленной профилактики неблагоприятного течения идиопатической саркомы Капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания.
Изобретение относится к медицине. Сущность способа ранней диагностики хронической болезни почек состоит в том, что используют диапазон доз Допамина от 1 до 3 мкг/кг массы тела и стандартную водную нагрузку в количестве 200 мл.

Изобретение относится к области гигиены, санитарии и медицины, в частности, к способам лабораторной диагностики содержания нанодисперсных частиц диоксида кремния в организме работающих, к факторам риска в воздухе рабочей зоны которых относится диоксид кремния, и может быть использован для обоснования санитарно-гигиенических мероприятий по предупреждению и устранению воздействия нанодисперсных соединений.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и биофармации, и описывает способ количественного определения углеродных наноструктур, в частности наноалмазов и нанотрубок, в биологических образцах и их распределение в организме ex vivo, основанное на использовании метода масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Проводят биохимическое исследование сыворотки крови натощак с определением уровня глюкозы и аланинаминотрансферазы и ультразвуковых исследований: печени с определением эхогенной структуры, поджелудочной железы натощак с определением размеров ее головки и щитовидной железы с определением ее объема.
Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики злокачественных новообразований. Из образца клеток крови готовят слайды из нескольких слоев агарозы, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в хирургии и онкологии для прогнозирования общей выживаемости пациентов после резекции печени по поводу метастатического колоректального рака на основе особенностей микроокружения опухоли. Способ включает исследование опухолевых биоптатов печени с помощью иммуногистохимического метода и определение наличия и величины площади лимфоцитарной инфильтрации в строме метастаза печени в трех полях зрения микроскопа. Поля зрения выбирают по максимально выраженной иммуногистохимической реакции с каждого среза биоптата печени с опухолью и в зависимости от наличия и величины площади лимфоцитарной инфильтрации определяют прогноз общей выживаемости. При наличии и величины площади лимфоцитарной инфильтрации 50% и более от опухолевой стромы в каждом из трех полей зрения пациента определяют в группу благоприятного прогноза (дожитие после резекции печени три года и более); при отсутствии или величине площади лимфоцитарной инфильтрации, составляющей менее 10% от опухолевой стромы в каждом из трех полей зрения, пациента определяют в группу неблагоприятного прогноза (с продолжительностью жизни меньше двух лет). Практическое применение способа повышает точность прогноза общей выживаемости после резекции печени по поводу метастатического колоректального рака и делает возможным прогнозирование общей выживаемости пациента. 1 табл., 4 пр.
Наверх