Способ сохранения доступности иммуногенной композиции для введения животному

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биофармацевтике, и может быть использована для сохранения иммуногенной композиции в пригодном состоянии для введения животному. Для этого указанная композиция содержит антиген ящура (FMD) и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, и указанная эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела. Способ включает: предоставление композиции, замораживание композиции и хранение замороженной композиции до ее востребования для введения животному. Группа изобретений также относится к способу тестирования иммуногенной композиции. Данная группа изобретений позволяет достигнуть увеличение срока хранения вакцины против FMD, которая основана на эмульсии в качестве адъюванта, при этом можно применять процесс небыстрого замораживания, не оказывая воздействие на адъювантные свойства эмульсии. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Данное изобретение относится к способу сохранения доступности иммуногенной композиции для введения животному. Изобретение также относится к способу тестирования иммуногенной композиции и к иммуногенной композиции, необязательно в комбинации с конкретными инструкциями по хранению композиции.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В медицине часто применяют иммуногенные композиции для введения животным (включая людей). Такие композиции могут, например, представлять собой вакцину или диагностическую композицию. Часто такая композиция содержит адъювант для улучшения иммунного ответа у животного. Важным классом адъювантов, особенно в ветеринарии, являются эмульсии, содержащие масляные вещества, например эмульсии типа из так называемых масло-в-воде (O/W), вода-в-масле (W/O) или вода-в-масле-в-воде (W/O/W), где масляное вещество в целом служит в качестве соединения для стимуляции иммунного ответа.

В ежедневной практике является преимущественным, чтобы иммуногенные композиции имели длительные сроки хранения. Это означает, что они могут храниться в течение долгого времени при поддержании адекватной эффективности действия до востребования для введения животному. Общеизвестно, что антигены, как таковые, наилучшим образом сохраняются при низких температурах. Однако, в частности, эмульсии не могут быть заморожены без неблагоприятного эффекта на их адъювантные свойства. Именно замораживание может быть неблагоприятным для качества эмульсии и, следовательно, для качества адъювантных свойств. Следовательно, доступные для приобретения иммуногенные композиции, содержащие адъювантные эмульсии, всегда сопровождаются инструкциями по хранению композиции выше температуры замораживания эмульсии. На практике, поскольку большинство адъювантных эмульсий основано на воде, это означает, что композиции обычно хранят между 2 и 8°C. Несмотря на то что она является идеально пригодной для поддержания адекватного качества эмульсии, температура между 2°C и 8°C означает, то многие антигены (которые часто содержат сложный белок или другие биополимерные структуры) подвержены заметной порче. Конкретно, для антигенов, которые не являются очень стабильными по природе, такие как антигены ящура, это означает, что иммуногенные свойства могут легко опуститься ниже адекватного уровня в пределах 12 месяцев от начального производства.

В предшествующем уровне техники эта проблема была отмечена и было найдено несколько решений. Одним из них является хранение антигенов отдельно от адъювантной эмульсии. Таким образом, антигены могут храниться, например, при температуре, равной -196°C, а эмульсия - при 4°C. При этом оба компонента могут поддерживать их желательные свойства в течение многих лет. Недостатком этого способа является то, что требуется некоторое время, чтобы составить иммуногенную композицию и распределить ее при необходимости для введения животному. Обычно это занимает от 72 до 120 часов. В случае экстренной ситуации это может быть слишком долгим. Также, когда существует такая экстренная ситуация и композиция должна доставляться немедленно после того, как она была составлена, безопасность и иммуногенность композиции не может быть тестирована.

Еще одно решение известно из EP 1 201 251. В данном патенте описан способ получения стратифицированных криогенно хранимых вакцин (так называемых SACS). Этот способ основан на подходе, связанном с послойной укладкой индивидуальных компонентов вакцины в один и тот же первичный контейнер и затем хранением продукта при ультранизких температурах (приблизительно -150°C). Несмотря на то что с использованием этого способа избегают неблагоприятного эффекта на иммуногенность, способ является очень сложным, и тот факт, что вакцина должна храниться при ультранизких температурах, делает способ очень дорогостоящим для применения.

ЗАДАЧА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является преодолеть или, по меньшей мере, минимизировать проблемы предшествующего уровня техники, относящиеся к хранению иммуногенных композиций до их востребования для введения животному, и предоставить удобный путь сохранения такой композиции, доступной для применения. Еще одной задачей изобретения является предоставить новый способ тестирования иммуногенной композиции, новую комбинацию иммуногенной композиции и инструкцию для хранения композиции, а также новую жидкую иммуногенную композицию.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Первая задача изобретения решена посредством предоставления способа в соответствии с вводной частью данного описания, где указанная композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела (включающей температуру рядом с телом), указанный способ включает предоставление композиции (т.е. обеспечение доступности композиции, например, посредством ее составления или простого приобретения ее на рынке), замораживание композиции и хранение замороженной композиции до ее востребования для введения животному. Вторая задача решена посредством предоставления способа тестирования иммуногенной композиции для введения животному, указанная композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, указанный способ включает составление иммуногенной композиции, замораживание композиции, хранение замороженной композиции в течение предварительно определенного времени, оттаивание композиции и определение иммуногенности оттаявшей композиции.

Третья задача решается посредством предоставления комбинации иммуногенной композиции для введения животному, указанная композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, и инструкцию о том, что композиция может храниться при температуре ниже температуры замораживания этой композиции до ее востребования для введения животному.

Четвертая задача изобретения решается посредством предоставления жидкой иммуногенной композиции для введения животному, композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, эту композицию замораживают приблизительно при -20°C и затем оттаивают до жидкого состояния.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Быстрое замораживание: процесс, посредством которого температура образца очень быстро понижается до температур ниже -140°C посредством погружения образца в жидкость, имеющую температуру ниже -140°C (конкретно жидкий азот при -196°C), или газообразную фазу такой жидкости.

Замораживание приблизительно до -20°C: для замораживания при условиях, сходных с замораживанием в стандартной бытовой морозильной камере компрессорного типа, имеющей внутреннюю температуру (в отделении замораживания) обычно между -12 и -28°C.

Иммуногенная композиция: композиция, которая обладает способностью инициировать иммунную систему хозяина, когда композицию вводят этому хозяину.

Иммуногенность: мера способности инициировать иммунную систему хозяина.

Вакцина: состав, подходящий для применения на животных (включая людей), содержащий один или более антигенов (таких, как ослабленные или убитые микроорганизмы и/или их субъединицы, или любое другое вещество, такое как метаболит организма) в иммунологически эффективном количестве (т.е. способном к стимуляции иммунной системы целевого животного), обычно объединенных с фармацевтически приемлемым носителем (таким, как, например, жидкость, содержащая воду), необязательно содержащим иммуностимуляторы (адъюванты), который при введении животному индуцирует иммунный ответ, который является достаточным для лечения заболевания или нарушения у животного, т.е. чтобы, по меньшей мере, способствовать предотвращению, облегчению или излечению заболевания или нарушения.

Адъювант: вещество или композиция, которая способна оказать благоприятное воздействие или ослабить конкретный процесс в каскаде иммунологических событий, в конечном счете приводящий к лучшему иммунному ответу против антигена.

Поставить: обеспечить доставку по назначению, например, с использованием обычной почты или экспресс-перевозки с использованием дорожной транспортировки, воздушного транспорта, водного транспорта или каких-либо средств, подходящих для упаковки, или другого осязаемого предмета.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Неожиданно заявитель обнаружил, что вопреки общепринятым знаниям и инструкциям поставщиков адъювантных эмульсий можно замораживать иммуногенную композицию, когда она основана на эмульсии, которая является единичной эмульсией (по существу эмульсией типа O/W или W/O) при первой температуре ниже температуры тела животного, и указанная эмульсия обращается при второй температуре (т.е., по меньшей мере, начинает обращаться при этой второй температуре) между первой температурой и температурой тела. Обращение в этом смысле означает, что фаза, которая эмульгируется при первой температуре, побуждается становиться непрерывной фазой при второй температуре, и в то же время эта фаза, которая является непрерывной при первой температуре, побуждается к эмульгированию в другой фазе при второй температуре. Такие эмульсии в настоящее время применяют промышленно. Например, Intervet/Schering-Plough Animal Health продает вакцину против ящура (FMD), именуемую DECIVAC® FMD-DOE, которая содержит эмульсию, которая является (единичной) эмульсией масло-в-воде ниже 25°C, но которая обращается при более высокой температуре, например при 37°C. Поскольку это обращение происходит в организме животного, никакое перемешивание не является возможным и часть воды будет оставаться присутствующей в виде непрерывной фазы даже после обращения. Следовательно, конечная обращенная эмульсия вода-в-масле будет содержать некоторое количество воды, присутствующее в виде непрерывной фазы даже после обращения. Результатом является таким образом эмульсия типа вода-в-масле в присутствии некоторой воды в виде явной непрерывной фазы. Следовательно, такая эмульсия часто именуется двойной эмульсией (несмотря на то, что технически это не так). Несмотря на то что поставщик определенно инструктирует не замораживать композицию, авторы обнаружили, что замораживание лишь едва (или даже не) оказывает воздействие на адъювантные свойства эмульсии. Причина этого не вполне понятна, но может быть обусловлена тем фактом, что эмульсия должна обращаться в любом случае при введении животному. Это может означать, что качество эмульсии перед обращением не является важным или менее существенно для качества эмульсии после обращения. Таким образом, несмотря на то что качество эмульсии может значительно снизиться при замораживании, это, по-видимому, оказывает небольшое или даже не оказывает никакого воздействия на адъювантные свойства эмульсии после обращения. Преимущество обнаруженного в настоящее время эффекта состоит в том, что иммуногенная композиция может храниться при значительно более низких температурах и что, таким образом, скорость природного ухудшения свойств антигенов в композиции может характерным образом быть понижена (обычно в 2 раза на 10 градусов более низкой температуры хранения для нормальных химических реакций или даже до полной блокировки для катализируемых реакций и ферментативных процессов) вне зависимости от того, какие антигены используются. Отмечают, что эмульсия может содержать одно или более из поверхностно-активных средств для получения обращающих свойств. Однако также может быть, что сам антиген служит для предоставления этих свойств, так как антигены могут иметь свойства, подобные поверхностно-активным средствам. В любом случае в данной области является общеизвестным, как получить единичную эмульсию, которая обращается при определенной температуре (т.е. при этой температуре или выше).

Отмечают, что на основании данных, полученных с замороженной FMD вакциной, в EP 1 201 251 предполагают, что быстрое замораживание вакцины на основе эмульсии и хранение вакцины в замороженном состоянии может быть вариантом для вакцин, содержащих эмульсии, составленные с маслом Montanide ISA 206 (доступно от SEPPIC, France), но очевидно, что этот вариант действия в целом не считается имеющим разумный шанс на успех, принимая во внимание конкретные инструкции от производителя (SEPPIC) - не хранить эмульсию на основе Montanide ISA 206 в замороженном состоянии. Несомненно, сам заявитель EP 1 201 251 выбрал путь SACS вместо замораживания и ни один другой квалифицированный специалист не исследовал путь замораживания со времени публикации, указанной EP патентной заявки в 2002 г., несмотря на огромную потребность в адекватном хранении нестабильных иммуногенных композиций. Заявитель, однако, несмотря на ясные рекомендации не следовать варианту замораживания, но следовать путем SACS, обнаружил, что хранение иммуногенной композиции в замороженном состоянии, по меньшей мере, при использовании эмульсии, как указано здесь выше, является очень простым и эффективным путем сохранения композиции в пригодном состоянии для введения животному. В случае экстренной ситуации композиция может просто оттаиваться и вводиться немедленно, что является существенным преимуществом, особенно в случае экстренной ситуации, когда могут потребоваться доступные большие количества иммуногенной композиции (в пределах часов).

В варианте осуществления иммуногенность иммуногенной композиции устанавливают перед ее хранением. Является очень преимущественным, когда иммуногенность иммуногенной композиции известна перед введением. В предшествующем уровне техники, когда иммуногенные композиции составляют в случае экстренной ситуации, не остается времени для оценки иммуногенности композиции. С настоящим изобретением может быть проведено применение композиции с утвержденным качеством.

В варианте осуществления композицию поставляют третьей стороне (также охватывающей почтовый адрес, отличающийся от места пребывания третьей стороны) по ее запросу перед тем, как ее замораживают. В этом варианте осуществления производителю не требуется замораживать композицию перед ее поставкой третьей стороне. Указанная третья сторона сама может хранить композицию в замороженном состоянии. Этот вариант осуществления является особенно преимущественным, когда третья сторона предусматривает, что большие количества композиции могут потребоваться в доступном состоянии немедленно, когда возникает экстренная ситуация и не должно быть потеряно время. Альтернативно, композицию поставляют третьей стороне по ее запросу после того, как она была заморожена. В этом варианте осуществления может быть так, что производитель иммуногенной композиции является стороной, которая хранит композицию в замороженном состоянии. Это имеет такое преимущество, что производитель может иметь постоянный контроль над обстоятельствами, при которых композицию хранят до ее поставки третьей стороне.

В варианте осуществления композицию замораживают посредством использования процесса небыстрого замораживания. Процесс быстрого замораживания имеет важный недостаток в том, что необходимо специальное часто дорогое устройство. Такое устройство может быть недоступным в каждом месте, в котором сторона хочет хранить иммуногенную композицию. Кроме того, процесс быстрого замораживания требует обученных операторов с учетом включенных рисков при работе с жидкостями при ультранизких температурах (удушье, ожоговые раны и т.д.). Заявитель неожиданно обнаружил, что в настоящем изобретении можно применять процесс небыстрого замораживания для замораживания композиции. Было обнаружено даже, что общепринятая морозильная камера компрессорного типа, такая как обычная бытовая морозильная камера, будет достаточной. Несмотря на то что время замораживания является значительно более длительным в такой морозильной камере и, таким образом, отрицательное воздействие на качество эмульсии может быть огромным, заявитель неожиданно обнаружил, что в настоящем способе отсутствует или едва имеется какое-либо негативное влияние на иммуногенность иммуногенной композиции. Даже, по-видимому, является адекватным, когда замораживание происходит приблизительно при -20°C, т.е. при температуре замораживания, которая имеется в обычной бытовой морозильной камере.

В варианте осуществления композицию хранят в течение более чем 4 месяцев, конкретно более чем 12 месяцев. Было обнаружено, что хранение в течение таких периодов времени не оказывает или едва оказывает воздействие на адъювантные свойства эмульсии. В варианте осуществления единичная эмульсия является эмульсией масло-в-воде, предпочтительно эмульсией, где масло содержит смесь маннидолеата и минерального масла. Такая эмульсия оказалась идеально подходящей в данном изобретении. Конкретно, данное изобретение является пригодным для иммуногенной композиции, содержащей антиген ящура (FMD). Общеизвестно, что антигены FMD являются характерным образом неустойчивыми и наилучшим образом консервируются при очень низких температурах. Настоящее изобретение предоставляет вариант, когда тестируемая вакцина против FMD является доступной при сохранении ее иммуногенности в течение продолжительного времени при сравнении с настоящей ситуацией, где тестируемую FMD вакцину хранят при 4°C.

Данное изобретение также относится к способу тестирования иммуногенной композиции для введения животному, где указанная композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, где указанный способ включает составление иммуногенной композиции, замораживание композиции, хранение замороженной композиции в течение предварительно определенного времени, оттаивание композиции и определение иммуногенности оттаявшей композиции.

Данное изобретение также относится к комбинации иммуногенной композиции для введения животному, где указанная композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, и инструкцию о том, что композиция может храниться при температуре ниже температуры замораживания этой композиции до востребования для введения животному. В варианте осуществления комбинация является упаковкой (например, коробкой, пузырьком, колбой или любым другим контейнером), содержащей композицию и инструкцию в осязаемом виде (например, в виде листка, напечатанных инструкций на упаковке или в виде стикера, приклеенного к упаковке). В альтернативном варианте осуществления комбинация является рекомендацией, сделанной общедоступной в устной форме или в виде письменного описания, например рекомендации, что иммуногенная композиция "X" может замораживаться и храниться в этом состоянии до востребования для введения. Рекомендация может, например, быть показана на веб-сайте дистрибьютора или производителя конкретной иммуногенной композиции или сделана общедоступной в журнале, презентации на конгрессе или другом эквивалентном событии, или представлена либо только в устном виде, или в письменной форме, или в комбинации устной и письменной формы, в коммерческой презентации, такой как телевизионно-коммерческая, или презентации на стенде медицинского или научного собрания.

Изобретение также относится к жидкой иммуногенной композиции для введения животному, композиция содержит антиген и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, причем эта эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, эту композицию замораживают приблизительно при -20°C и затем оттаивают до жидкого состояния.

ПРИМЕРЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Пример 1 в сочетании с фигурами 1, 2 и 3 показывает эффект замораживания на качестве эмульсии разнообразных эмульсий.

Пример 2 описывает эффект различных типов замораживания на макроскопическую консистенцию эмульсии.

Пример 3 показывает эффект хранения на иммуногенность иммуногенной композиции с адъювантом в виде эмульсии масло-в-воде.

Пример 1

В этом примере показан эффект замораживания на качество эмульсии разнообразных доступных для приобретения эмульсий. Для этого авторы применяли эмульсии следующих FMD вакцин: CEDIVAC®-FMD (доступно от Central Institute for Animal Diseases Control, Lelystad, Нидерланды), AFTOVACIN® OLEOSA (доступно от Intervet/Schering-Plough Animal Health, Moinho Velho, Бразилия) и DECIVAC® FMD DOE (доступно от Intervet/Schering-Plough Animal Health, Boxmeer, Нидерланды). Качество эмульсии оценивают микроскопически. Каждую эмульсию представляют в виде, таком, когда ее хранили при 4°C и после того, как эмульсию замораживали в стандартной бытовой морозильной камере компрессорного типа при -20°C, хранили в течение 5 последовательных дней в этой морозильной камере, оттаивали и нагревали до 4°C.

Результаты показаны на фигурах 1, 2 и 3. Фигура 1A показывает эмульсию CEDIVAC®-FMD после стандартного хранения (в соответствии с инструкциями поставщика) при 4°C. Можно видеть, что эмульсия является двойной эмульсией (в этом случае типа вода-в-масле-в-воде). Фигура 1B показывает соответствующую картину этой эмульсии при хранении в замороженном состоянии, как указано здесь выше. Очевидно, что качество эмульсии значительно подвержено влиянию. Явным образом происходит множественная коагуляция.

Фигура 2A показывает эмульсию AFTOVACIN® OLEOSA после стандартного хранения (в соответствии с инструкциями поставщика) при 4°C. Можно видеть, что эмульсия является единичной эмульсией (в данном случае типа вода-в-масле). Фигура 2B показывает соответствующую картину данной эмульсии при хранении в замороженном состоянии, как указано здесь выше. Очевидно, что качество эмульсии едва подвержено влиянию.

Фигура 3A показывает эмульсию DECIVAC® FMD DOE после стандартного хранения (в соответствии с инструкциями поставщика) при 4°C. Эмульсия является единичной эмульсией типа масло-в-воде (где масло содержит смесь маннидолеата и минерального масла, доступную для приобретения как MONTANIDE® ISA 206, от SEPPIC, Париж, Франция), но обращается в тип вода-в-масле при нагреве до 37°C. Фигура 3B показывает соответствующую картину данной эмульсии при хранении в замороженном состоянии, как указано здесь выше. Очевидно, что качество эмульсии значительно подвержено влиянию. Явным образом происходит множественная коагуляция.

Данные результаты указывают на то, что эмульсия типа, как присутствует в доступной для приобретения вакцине DECIVAC® FMD DOE, подвержена серьезной потере качества эмульсии, когда эмульсию замораживают, конкретно, в процессе небыстрого замораживания, как используют в данном примере. Обычно полагают, что это соответствует существенной потере адъювантных свойств.

Пример 2

В данном примере описан эффект разнообразных типов замораживания на макроскопическую консистенцию единичной эмульсии. В данном случае эксперимент осуществляли с эмульсией, доступной для приобретения вакцины DECIVAC® FMD DOE. Один образец эмульсии был быстро заморожен при помещении стеклянного пузырька, содержащего эмульсию, в жидкий азот и содержания его там в течение 24 часов. Второй образец эмульсии был подвергнут процессу небыстрого замораживания при помещении пузырька, содержащего эмульсию, в стандартную бытовую морозильную камеру, имеющую внутреннюю температуру -20°С, и содержании пузырька в морозильной камере в течение 24 часов. После этого оба образца оттаивали посредством подвергания пузырьков условиям окружающей среды (нормальный воздух, 21°С, атмосферное давление). Затем качество эмульсии макроскопически оценивали, подвергая пузырьки визуальному обследованию. Выявлено, что эмульсия, подвергнутая небыстрому замораживанию, показала существенно большую коагуляцию масляной фазы. Из этого можно сделать вывод, что небыстрое замораживание имеет большее влияние на качество эмульсии для этого типа эмульсии, чем быстрое замораживание.

Пример 3

В данном примере показан эффект хранения на иммуногенность иммуногенной композиции с адъювантом в виде эмульсии масло-в-воде. В данном примере выбран случай с более худшим сценарием, а именно иммуногенная композиция, содержащая в себе три антигена FMD, которые являются общеизвестно неустойчивыми. Следовательно, эффект, который хранение оказывает на иммуногенность композиции, может быть распознан во временном формате месяцев. Для устойчивых антигенов это может требовать нескольких лет. Принципы, однако, остаются такими же: показать наличие (отсутствие) эффекта замораживания на адъювантные свойства эмульсий, используемых в настоящем изобретении.

Для эксперимента авторы изобретения использовали вакцину DECIVAC® FMD DOE, в данном случае содержащую антигены 01 Manisa, A22 Iraq и Asia 1 Shamir. Образцы вакцин хранили либо при 4°C ("Жидкий") или замораживали в стандартной морозильной камере приблизительно при -20°С ("Замороженный") и хранили в этой морозильной камере. Иммуногенность хранимых вакцин определяют (через 4 и 12 месяцев хранения) посредством вакцинации 5 животных (рогатый скот) единственной дозой (2 мл) и отбора крови у скота через 28 дней. Сыворотку получают из крови. Титр нейтрализующих антител против вируса FMD гомологичного серотипа определяют в образце сыворотки на животное. Средний титр соответствует иммуногенности вакцины. Результаты показаны здесь ниже на Фигурах 4, 5 и 6.

Из Фигуры 4 очевидно, что антиген 01 Manisa является относительно устойчивым в наблюдаемом периоде времени. Все еще можно видеть, что иммуногенность замороженной вакцины через 12 месяцев хранения является в некоторой степени лучше, чем иммуногенность вакцины, хранимой при 4°C. Следовательно, адъювантные свойства замороженной эмульсии еще являются адекватными.

Для антигена A22 Iraq становится ясным, что хранение при 4°C является неблагоприятным для иммуногенности. Очевидно, сам антиген теряет свои иммуногенные свойства, а не адъювантная эмульсия, так как сама эмульсия остается устойчивой в течение, по меньшей мере, приблизительно 5 лет, когда ее хранят при 4°C. Когда ее хранят при -20°C, иммуногенность едва снижается. Очевидно, антиген является довольно устойчивым при -20°С. Также эмульсия явным образом сохраняет свои иммуногенные свойства, когда ее хранят в замороженном состоянии.

Для третьего антигена, Asia 1 Shamir, можно видеть ситуацию, соответствующую ситуации с антигеном A22 Iraq. С учетом того факта, что для вакцины, сохраняемой в замороженном состоянии, иммуногенность остается неизменной во время хранения, должен быть сделан вывод, что адъювантные свойства эмульсии совсем не претерпели влияния негативного воздействия посредством процесса замораживания и хранения.

Вкратце, из этих экспериментов может быть сделан вывод, что адъювантные свойства эмульсии остаются полностью незатронутыми, когда эмульсию, как определено в прилагаемой формуле изобретения, или вакцину на основе этой эмульсии замораживают. Конкретно, процесс небыстрого замораживания, несмотря на то что является неблагоприятным для качества эмульсии, по-видимому, является достаточным даже при использовании температуры замораживания, такой высокой, как приблизительно -20°C. Преимущества данного изобретения могут применяться для увеличения срока хранения любой иммуногенной композиции, которая основана на эмульсии в качестве адъюванта.

1. Способ сохранения иммуногенной композиции в пригодном состоянии для введения животному, где указанная композиция содержит антиген ящура (FMD) и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, и указанная эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, где способ включает:
- предоставление композиции,
- замораживание композиции и
- хранение замороженной композиции до ее востребования для введения животному.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед хранением иммуногенной композиции устанавливают ее иммуногенность.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что перед замораживанием композицию поставляют третьей стороне по ее запросу.

4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что после замораживания композицию поставляют третьей стороне по ее запросу.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что композицию замораживают посредством использования процесса небыстрого замораживания.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что композицию замораживают в морозильной камере компрессорного типа.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что замораживание происходит приблизительно при -20°C.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что композицию хранят в течение более чем 4 месяцев, конкретно более чем 12 месяцев.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что единичная эмульсия является эмульсией масло-в-воде.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что масло содержит смесь маннидолеата и минерального масла.

11. Способ тестирования иммуногенной композиции для введения животному, где композиция содержит антиген ящура (FMD) и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного и указанная эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, где способ включает:
- составление иммуногенной композиции,
- замораживание композиции,
- хранение замороженной композиции в течение предварительно определенного времени,
- оттаивание композиции и
- определение иммуногенности оттаявшей композиции.

12. Комбинация иммуногенной композиции для введения животному, где композиция содержит антиген ящура (FMD) и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, и указанная эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, и инструкцию о том, что композиция может храниться при температуре ниже температуры замораживания этой композиции до востребования для введения животному.

13. Жидкая иммуногенная композиция для введения животному, где композиция содержит антиген ящура (FMD) и эмульсию, которая является единичной эмульсией при первой температуре ниже температуры тела животного, и указанная эмульсия обращается при второй температуре между первой температурой и температурой тела, указанную композицию замораживают приблизительно при -20°C и затем оттаивают до жидкого состояния.