Способ получения низкогидролизованной пептидной композиции из белков молочной сыворотки


 


Владельцы патента RU 2531164:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии имени А.Н. Баха Российской академии наук (ИНБИ РАН) (RU)
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии) (RU)

Группа изобретений относится к молочной промышленности. Белковый раствор с содержанием жира не более 0,05% получают из сухого концентрата сывороточного белка, сухой молочной сыворотки или нативной подсырной сыворотки. Белковый раствор пастеризуют, ультрафильтруют при 8-12°C на ультрафильтрационных мембранах с молекулярной массой отсекаемых компонентов от 1 до 5 кДа до массовой доли сухих веществ в ретентате 8-18%. Температуру ретентата молочной сыворотки доводят до 50-55°C, а его начальное значение pH - до 7,0-7,2 добавлением 20%-ного водного раствора гидроксида натрия. Осуществляют ферментативный гидролиз препаратом «Protamex» 2,5-4,0% от массы белка в ретентате при 50-55°C 1,5 ч без pH-статирования и пастеризуют полученный гидролизат при 80-85°C 5-10 мин. Пептидная композиция имеет степень гидролиза не более 6%, суммарное содержание свободных аминокислот в эквивалентах глютаминовой кислоты не более 4 мг/мл, пониженное содержание аллергенов молочной сыворотки α-лактальбумина, β-лактоглобулина и бычьего сывороточного альбумина и обладает антиоксидантной и гипотензивной активностью. Группа изобретений направлена на получение продукта с привлекательными органолептическими характеристиками (нейтральный вкус без горечи), с антиоксидантной и гипотензивной активностью и пониженным содержанием белков аллергенов молочной сыворотки. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к молочной промышленности, в частности к получению низкогидролизованных пептидных композиций из белков молочной сыворотки с антиоксидантными и гипотензивными свойствами и привлекательными органолептическими характеристиками, используемых при производстве функциональных пищевых продуктов массового потребления и специализированных продуктов для лиц с пищевой непереносимостью белков молока.

В последнее десятилетие большое внимание уделяется разработке функциональных пищевых продуктов массового потребления и специализированных продуктов для питания ключевых категорий лиц с пищевой непереносимостью или аллергией на определенные пищевые компоненты, или алиментарно-зависимыми заболеваниями. При этом основой данных категорий пищевых продуктов, придающих им соответствующие свойства, являются функциональные пищевые ингредиенты. Многочисленные исследования показали, что ферментативные гидролизаты пищевых белков, в том числе гидролизаты казеина и белков молочной сыворотки, обладают не только питательной ценностью за счет содержания незаменимых и заменимых аминокислот в легкоусвояемой форме, но и являются источником биологически активных пептидов, участвующих в регуляции различных функций организма, включая поддержание баланса микрофлоры желудочно-кишечного статуса, антиоксидантного и иммунного статуса, регуляцию артериального давления и др. Таким образом, очевидно, что для профилактики развития клинических признаков пищевой непереносимости молочных белков, повышения антиоксидантного статуса, профилактики функциональных нарушений со стороны деятельности сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта и восстановления баланса его микрофлоры необходимо разрабатывать способы получения пептидных композиций, обладающих антиоксидантным, гипотензивным и пребиотическим действием.

В частности, известен способ получения гидролизата белка молочной сыворотки, предусматривающий смешивание сывороточного белкового продукта, содержащего по меньшей мере 65% белка из расчета по сухому веществу, и воды с получением суспензии с содержанием белка до 20%, протеолитический гидролиз суспензии до степени гидролиза 15 и 35%, выделение из смеси на ультра- или микрофильтрационном устройстве со значением отсекания выше 10000 белкового гидролизата в виде пермеата, отличающийся тем, что перед протеолитическим гидролизом суспензию подвергают тепловой обработке при температуре выше 60°C, нагретую таким образом смесь подвергают регулированию pH щелочным веществом, гидролиз ведут протеазой, продуцируемой В. licheniformis, предпочтительно Alcalase, и/или протеазой, продуцируемой В. subtilis, предпочтительно Neutrase, посредством метода нестатичного pH, после выделения белкового гидролизата проводят инактивацию ферментов (см. Патент РФ №2084172, 27.05.1992 г.).

Недостатком данного способа является получение средне (степень гидролиза 5-20%) и глубоко (степень гидролиза более 20%) гидролизованных пептидных композиций со средней длиной пептидной цепи не более 5 аминокислотных остатков, обладающих низкой степенью горечи, что снижает как потребительские свойства гидролизатов, так и пищевых продуктов на их основе. Кроме того, в примерах, раскрывающих данное изобретение, приводятся данные по использованию для гидролиза сывороточных белков молока композиции из двух ферментных препаратов (Neutrase и Alcalase 2.4L), что приводит к увеличению себестоимости получения гидролизатов.

Известен способ получения частичного гидролизата молочных белков (при соотношении сывороточные белки/казеин от 40/60 до 80/20), включающий гидролиз, концентрирование и сушку. Гидролиз осуществляют в одну стадию под действием смеси ферментов трипсина и химотрипсина, при этом белок предварительно термически денатурируют при (70-80)°C. Гидролиз проводят в 4-6% растворе субстрата при фермент-субстратном соотношении 0,6-0,8% при температуре (30-50)°C в течение 2-6 часов. Устанавливают исходный pH 7,5-8,0 ед. и далее в ходе процесса не pH-статируют, позволяя pH опуститься до величины 6,5-6,8 ед. Далее проводят термическую инактивацию фермента при температуре (80-90)°C, концентрирование и сушку. Гидролизат используют в продуктах непосредственно, без дальнейшей очистки. По данным иммуноферментного анализа (проводимого в варианте метода торможения непрямого иммуноферментного теста) антигенность гидролизата снижается на 75-95% в сравнении с исходным белком (см. Патент US №5405637, НКИ 426/580, 11.04.1995 г.).

Приведены исследования молекулярно-массового распределения методом эксклюзионной жидкостной хроматографии высокого давления на колонке TSK, которые, однако, были получены в водно-органических средах и поэтому недостаточно адекватно отражают состав гидролизата.

Аналогичный метод получения "частичных" гидролизатов молочного белка приводится в патенте (см. Патент US №5589357, НКИ 435/68.1, 31.12.1996 г.). В отличие от описанного выше способа инактивацию смеси ферментов трипсин+химитрипсин в гидролизате проводят острым паром.

Недостатки представленных выше аналогов следующие:

- дополнительно необходима стадия термической инактивации фермента, которая может приводить к ухудшению качества продукта (снижению биологической ценности из-за потери части незаменимых аминокислот);

- непосредственно после проведения гидролиза и инактивации ферментов гидролизат сушат без дополнительной очистки. Это приводит к тому, что в состав продукта попадают остаточные количества нерасщепленного белкового субстрата и компоненты ферментных препаратов, которые могут сами по себе обладать аллергенным действием, что ухудшает качество продукта и снижает возможность его использования в гипоаллергенных смесях;

- степень снижения антигенности получаемого продукта составляет 75-95%, что соответствует снижению в 4-20 раз. Этого крайне недостаточно для использования данного гидролизата в гипоаллергенных продуктах питания. В составе гипоаллергенных смесей профилактического назначения степень снижения антигенных свойств должна составлять 104 (10.000) раз или более;

- в ходе проведения процесса производится мониторинг молекулярно-массового распределения пептидов методом эксклюзионной хроматографии на колонке TSK G-2000 SWXL. Однако при этом применяется растворитель, содержащий ацетонитрил, что может исказить результаты анализа, а именно привести к занижению содержания пептидов с молекулярными массами более 10 кДа (килодальтон) вследствие выпадения их в осадок при растворении в подвижной фазе, содержащей ацетонитрил. При этом следует отметить - степень потери белково-пептидного материала зависит от концентрации ацетонитрила в подвижной фазе, что делает результаты анализа неопределенными.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ получения ферментативного гидролизата сывороточных белков со средней степенью гидролиза. Способ включает получение белкового раствора, его пастеризацию, ферментативный гидролиз панкреатином, ультра- и диафильтрацию полученного гидролизата с разделением на фильтрат и концентрат, сушку. Белковый раствор получают из сухого концентрата сывороточного белка, а гидролиз ведут при фермент-субстратном соотношении 1,5-2,5%, при температуре 48-54°C в течение 3-3,5 часов, с начальным pH 7,9-8,3 (см. Патент РФ №2375910).

Недостатками предложенного способа являются:

- использование панкреатина для получения гидролизата, что приводит к увеличению его себестоимости по сравнению с гидролизатами, полученными при использовании бактериальных пищевых ферментных препаратов.

- диафильтрация полученного раствора, приводящая к дополнительным потерям белка.

Технический результат заявляемого изобретения заключается в получении низкогидролизованных пептидных композиций из белков молочной сыворотки с привлекательными органолептическими характеристиками (без горечи), с антиоксидантной и гипотензивной активностью и пониженным содержанием белков-аллергенов молочной сыворотки, что дает возможность их использования при производстве функциональных пищевых продуктов массового потребления и специализированных пищевых продуктов для людей с пищевой непереносимостью белков молока.

«Protamex» является протеазным комплексом, продуцируемым микроорганизмами рода Bacillus. Активность ферментативного препарата составляет не менее 400 Протеолитических единиц на 1 г. Использование фермента «Protamex», разрешенного для применения в пищевых производствах и пищевых системах, обеспечивает приятный вкус готовому продукту без наличия горечи в отличие от известных аналогичных продуктов и серо-бежевый или кремовый цвет.

Технический результат достигается тем, что способ получения низкогидролизованных пептидных композиций белков молочной сыворотки включает приготовление белкового раствора (очистку молочной сыворотки, сепарирование), его пастеризацию, ультрафильтрацию, ферментативный гидролиз препаратом «Protamex» и пастеризацию полученного гидролизата для термической инактивации ферментного препарата «Protamex». Белковый раствор получают из сухого концентрата сывороточного белка, сухой молочной сыворотки или используют нативную подсырную сыворотку. При содержании жира в белковом растворе более 0,05% его обезжиривают пропусканием через сепаратор. Пастеризацию белкового раствора проводят при температуре от 75 до 85°C с выдержкой 20-30 с. Ультрафильтрацию белкового раствора проводят при температуре 8-12°C на ультрафильтрационных мембранах с молекулярной массой отсекаемых компонентов от 1 до 5 кДа до содержания сухих веществ в ретентате 8-18%. Перед внесением ферментного препарата «Protamex» ретентат подогревают до температуры 50-55°C и его начальное значение pH доводят добавлением 20% водного раствора гидроксида натрия до 7,0-7,2, а гидролиз ведут при температуре 50-55°C, дозе (E/S) ферментного препарата «Protamex» 2.5-4,0% от содержания белка в ретентате в течение 1,5 часов без pH-статирования, после чего полученный гидролизат пастеризуют при температуре 80-85°C в течение 5-10 минут.

Экспериментально было установлено, что оптимальная температура проведения гидролиза составляет 50-55°C. Отклонение в меньшую сторону ниже 50°C нежелательно, т.к. приводит к увеличенному содержанию остающихся в реакционной смеси негидролизованных высокомолекулярных белковых структур, что снижает выход получаемого продукта и приводит к снижению качества, повышению остаточной аллергенности гидролизата. Отклонение в большую сторону (свыше 55°C) также нежелательно, т.к. приводит к ускорению процесса термической инактивации ферментного препарата, что влечет за собой уменьшение выхода готового продукта. Кроме того, это приводит к перерасходу энергии на поддержание температуры в ходе процесса и последующее охлаждение готового продукта, что вызывает увеличение себестоимости продукта.

Экспериментально было установлено, что ультрафильтрация белкового раствора на мембранах с молекулярной массой отсекаемых компонентов от 1 до 5 кДа позволяет получить концентрат белков молочной сыворотки (ретентант) с максимальным выходом. Использование мембран с меньшей пористостью снижают выход как ретентата, так и конечного продукта (гидролизата).

Проведение гидролиза ретентата ферментным препаратом «Protamex» при установлении начального pH 7,0-7,2 ед., которое в течение гидролиза постепенно снижается, позволяет не проводить в дальнейшем pH-статирование, что уменьшает количество солей, поступающих в продукт, и, следовательно, улучшает его качество. Регулирование начального pH реакционной смеси осуществляют 20%-ным раствором щелочи (гидроксида натрия).

Пастеризация гидролизата необходима для улучшения его микробиологических показателей, а также термической инактивации ферментного препарата «Protamex». Уменьшение температуры пастеризации ниже заявленного диапазона значений приводит к возрастанию риска микробной контаминации гидролизата и продуктов на его основе при их последующем хранении.

Заявляемая совокупность признаков позволяет получить низкогидролизованные пептидные композиции белков молочной сыворотки с привлекательными органолептическими характеристиками, пониженной антигенностью, антиоксидантной и гипотензивной активностью. В заявляемом изобретении остаточная антигенность контролируется методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа и рассчитывается как отношение содержания аллергенов молочной сыворотки в гидролизате и ретентате.

Результаты определения содержания белков-аллергенов в ретентатах и гидролизатах молочной сыворотки представлены в таблице 1. Как видно из представленных данных остаточная антигенность гидролизатов по содержанию бычьего сывороточного альбумина не превышает 1,5%, α-лактальбумина - 11%, молочных белков, главным образом β-лактоглобулина - 85%.

Антиоксидантную емкость ретентата и гидролизатов белков молочной сыворотки определяли спектрофотометрическим методом TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity) по отношению к катион-радикалу АБТС (диаммонийная соль 2-азинобис-(3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой кислоты)) и спектрофлуориметрическим методом ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity) по отношению к пероксильному радикалу. Антиоксидантную емкость выражали концентрацией эквивалентов водорастворимого аналога витамина E - тролокса. Результаты определения антиоксидантной емкости в ретентатах и гидролизатах молочной сыворотки представлены в таблице 2. Показано, что в процессе ферментативного гидролиза антиоксидантная емкость гидролизатов увеличивалась в 1,8-2,0 раза по отношению к катион-радикалу АБТС и в 1,08-1,57 раза по отношению к пероксильному радикалу, что обусловлено образованием антиоксидантных пептидов и снятием стерических барьеров для взаимодействия остатков редокс-активных аминокислот с радикалами за счет разрушения третичной структуры белков молочной сыворотки. При этом увеличение дозы ферментного препарата «Protamex» с 2,5 до 4,0% от белка в ретентате приводит к увеличению антиоксидантной емкости получаемого гидролизата на 15-39% в зависимости от типа радикала (таблица 2).

Гипотензивную активность ретентата и гидролизатов белков молочной сыворотки определяли спектрофлуориметрическим методом по их способности ингибировать ангиотензин-1-превращающий фермент (АПФ), являющийся ключевым звеном реннин-ангиотензин-альдостероновой системы регуляции артериального давления. Для определения АПФ-ингибирующей активности гидролизатов и ретентата использовали субстрат с внутренним тушением флуоресценции трифторацетат o-аминобензоил-фенилаланил-аргинил-лизил(динитрофенил)-пролина. За величину гипотензивной активности принимали концентрацию гидролизатов и ретентата (мл/л), при которой наблюдалось 50% ингибирование активности АПФ. Результаты определения гипотензивной активности в ретентатах и гидролизатах молочной сыворотки представлены в таблице 2. Показано, что в процессе ферментативного гидролиза гипотензивная активность гидролизатов увеличивалась в 3,7-5,3 раза, что обусловлено образованием АПФ-ингибирующих пептидов. При этом увеличение дозы ферментного препарата «Protamex» с 2,5 до 4,0% от белка в ретентате приводит к увеличению гипотензивной активности получаемого гидролизата на 16% (таблица 2).

Идентификацию пептидов, присутствующих в гидролизатах молочной сыворотки, проводили путем их фракционирования методом препаративной гель-проникающей хроматографии с последующим хроматографическим анализом полученных фракций методом обращено-фазовой хроматографии с детекцией методом масс-спектрометрии ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье (FT-ICR-MS) и автоматическим поиском по базе данных белковых последовательностей UniProt KB_SwisProt sprot_v.57.9. В гидролизатах из белков молочной сыворотки идентифицировано 199 пептидов размером от 5 до 25 аминокислотных остатков (таблица 3), для которых основными белками предшественниками являлись бычий сывороточный альбумин, β-лактоглобулин, казеины. Среди идентифицированных пептидов 86 содержат остатки редокс-активных аминокислот (тирозина, триптофана, метионина, цистеина и гистидина), ответственных за антиоксидантные свойства соответствующих пептидов. Анализ последовательностей идентифицированных пептидов с помощью базы данных BioPep позволил установить наличие в составе пептидных композиций 2 пептидов VKEAMAPK и ЕАМАРК из β-казеина, обладающих антиоксидантной активностью, и 3 пептидов ALKAWSVAR (бычий сывороточный альбумин), AMKPWIQPK (αs2-казеин) SAPLR (белок, взаимодействующий с белком, подобным фактору 6 АДФ-рибозилирования), обладающих АПФ-ингибирующей активностью.

Качественные преимущества получаемых гидролизатов заключаются в следующем:

- в пониженной антигенности за счет сниженного содержания аллергенов молочной сыворотки - α-лактальбумина, β-лактоглобулина, бычьего сывороточного альбумина;

- в наличии антиоксидантных и гипотензивных свойств;

- в привлекательных органолептических характеристиках, нейтральном вкусе без привкуса горечи;

- возможности использования при производстве функциональных пищевых продуктов массового спроса.

Благодаря этому гидролизаты в качестве белковых компонентов могут быть использованы для получения функциональных продуктов для профилактического питания детей и взрослых, предрасположенных к пищевой аллергии и непереносимости белков коровьего молока;

Способ получения пептидных композиций из белков молочной сыворотки осуществляется следующим образом.

Сухой концентрат сывороточных белков (КСБ) растворяют при постоянном перемешивании в питьевой воде с температурой (40-45)°C, охлаждают и оставляют набухать в течение 3,0-6,0 часов при перемешивании каждые 30 минут. Полученный раствор сывороточных белков пастеризуют при температуре 85°C с выдержкой 20 с, охлаждают и подают на ферментативный гидролиз.

Сухую молочную сыворотку растворяют при постоянном перемешивании в питьевой воде с температурой (40-45)°C, охлаждают и оставляют набухать в течение 3,0-6,0 часов при перемешивании каждые 30 минут. Полученный раствор сывороточных белков пастеризуют при температуре 85°C с выдержкой 20 с, охлаждают и подают на ультрафильтрацию.

Сыворотку подсырную нативную очищают, сепарируют на сепараторах-сливкоотделителях для обезжиривания, пастеризуют при температуре от 75 до 85°C с выдержкой 20-30 с, охлаждают и подают на ультрафильтрацию.

Раствор сывороточных белков разделяют на ультрафильтрационной установке с пропускной способностью мембран от 1 до 5 кДа, трансмембранном давлении 0,2-0,4 атм на ретентат (массовая доля сухих веществ 8-11% и фильтрат.

Ретентат или раствор КСБ подогревают до температуры 50-55°C, pH раствора доводят до 7,0-7,2 добавлением необходимого количества 20% водного раствора гидроксида натрия, псосле чего в реакционную смесь вносят ферментный препарат «Protamex» в дозировке 2,5-4,0% от количества белка в реакционной смеси.

Ферментативный гидролиз раствора сывороточных белков ведут с использованием ферментного препарата «Protamex» при температуре 50-55°C в течение 1,5 часов.

По окончании ферментации гидролизаты пастеризуют при температуре 80-85°C в течение 5-10 минут с последующим охлаждением до температуры 30±2°C. Полученные жидкие гидролизаты фасуют и направляют на хранение.

Следующие примеры иллюстрируют способ получения пептидных композиций из белков молочной сыворотки.

Пример 1

65 кг сухой сыворотки растворяют при перемешивании в питьевой воде (935 кг) с температурой 40°C до образования раствора с массовой долей сухих веществ (белок, жир, лактоза, соли) от 7%, охлаждают до 4°C и оставляют набухать в течение 3,0-6,0 часов при перемешивании каждые 30 мин. Полученный раствор сывороточных белков пастеризуют при температуре 85°C с выдержкой 20 с, затем охлаждают до температуры 40°C и подают на концентрирование на мембранах с пропускной способностью от 1 до 5 кДа. Используют полисульфоновые мембраны UF DHT 20-6338/30FF.

По окончании ультрафильтрации полученный ретентат с массовой долей сухих веществ 9% направляют на ферментативный гидролиз.

Ретентат подогревают до температуры 52-54°C, доводят его pH до 7,1 добавлением 3,2 л 20% раствора гидроксида натрия, после чего в реакционную смесь вносят 687.5 г ферментного препарата «Protamex» (2,5% от количества белка в реакционной смеси).

Ферментативный гидролиз ретентата ведут при температуре 52-54°C в течение 1,5 часов.

Гидролизаты пастеризуют при температуре 82-84°C в течение 10 минут с последующим охлаждением до температуры 30°C.

Получают 167 л пептидной композиции из белков молочной сыворотки с массовой долей сухих веществ 10,6%, массовой долей общего азота 0,43%, общим содержанием свободных аминокислот в эквивалентах глютаминовой кислоты 3,44±0,23 мг/мл, степенью гидролиза 4,91±0,26%, остаточной антигенностью по содержанию α-лактальбумина 4,6%, бычьего сывороточного альбумина 0,6%, β-лактоглобулина 72,1%, обладающей антиоксидантной и гипотензивной активностью (таблица 2).

Пример 2

Процесс проводят аналогично примеру 1. Отличается тем, что в реакционную смесь вносят 1100 г ферментного препарата «Protamex» (4,0% от количества белка в реакционной смеси).

Получают 160 л пептидной композиции из белков молочной сыворотки с массовой долей сухих веществ 9,9%, массовой долей общего азота 0,44%, общим содержанием свободных аминокислот в эквивалентах глютаминовой кислоты 3,78±0,25 мг/мл, степенью гидролиза 5,37±0,30%, остаточной антигенностью по содержанию α-лактальбумина 10,8%, бычьего сывороточного альбумина 1,3%, β-лактоглобулина 84,8%, обладающей антиоксидантной и гипотензивной активностью (таблица 2).

Таблица 1
Содержание белков-алергенов и остаточная аллергенность ретентатов и гидролизатов белков молочной сыворотки
Образец C(молочного белка - αs1-, αs2-, β-, к-казеины и β-лактоглобулин), мг/мл, при иммуноанализе набором Ridascreen Fast Milk (R-Biopharm, Германия) Остаточная антигенность, % C(α-лактальбумина), мг/мл, при иммуноанализе набором E91018Bo (Life Science Inc., США) Остаточная антигенность, % C(бычьего сывороточного альбумина), мг/мл при иммуноанализе набором Bovine serum albumin (BSA) assay (Cygnus technologies Inc., США) Остаточная нтигенность,
%
Получение пептидной композиции при E/S=2,5%
УФ-ретентат молочной сыворотки 53,07±8,87 100,00 1,21±0,18 100,00 0,96±0,10 100,00
Гидролизат молочной сыворотки 38,24±7,60 72,06 0,055±0,001 4,55 0,006±0,002 0,63
Получение пептидной композиции при E/S=4,0%
УФ-ретентат молочной сыворотки 53,42±7,78 100,00 0,87±0,13 100,00 0,98±0,07 100,00
Гидролизат молочной сыворотки 45,32±1,72 84,84 0,094±0,006 10,80 0,013±0,003 1,33
Таблица 2
Антиоксидантная емкость (мМ эквивалентов тролокса) и гипотензивная активность (IC50 мл/л) ретентатов и гидролизатов белков молочной сыворотки
Образец Антиоксидантная емкость Гипотензивная активность (IC50)
TEAC ORAC
Получение пептидной композиции при E/S=2,5%
УФ-ретентат молочной сыворотки 4,31±0,18 2,83±0,18 321,8
Гидролизат молочной сыворотки 7,77±0,19 3,07±0,19 86,8
Получение пептидной композиции при E/S=4,0%
УФ-ретентат молочной сыворотки 4,47±0,15 2,72±0,14 395,0
Гидролизат молочной сыворотки E/S=4,0% 8,95±0,23 4,27±0,14 74,4
Таблица 3
Пептидный профиль гидролизатов белков молочной сыворотки
Белок-предшественник Bos taurus Последовательность пептида Молекулярная масса, Да
Acetyl-CoA carboxylase 1 LIAEK 572,3533
Sodium- and chloride-dependent glycine transporter ILEAK 572,3533
WDR12 LLEAK 572,3533
CE290 D1LQK 615,3592
Ras GTPase-activating protein 3 VFQSVK 706,4014
Beta-catenin-like protein 1 LLNKFTENDSEK 1436,715
Serum albumin DTHKSEIAHR 1192,595
K2CA LQDLK 615,3592
Structural maintenance of chromosomes protein 1A QESSR 605,2769
MKI67 FHA domain-interacting nucleolar phosphoprotein LLKCHFIPPEK 1323,737
Nuclear migration protein nudC INPENSK 800,4028
Adenylate cyclase type 1 LLNELFGK 932,5331
UPF0490 protein Clorf201 homolog AGFVSK 607,333
Complement C3 ADALVGK 672,3806
Protein KRI1 homolog KEILAK 700,4483
Thyroglobulin GQEIPGTR 856,4403
Mitochondrial import inner membrane translocase subunit TIM50 QMIIEPTSPCLLPDPLR 1922,001
Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3 (Fragments) XKNLLLNHMDVLK 1564,876
Endoplasmic reticulum protein ERp29 LIEKNK 743,4541
Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase SRAAVGNK 801,4457
Alpha-S2-casein ISQRYQK 921,5032
Cytochrome с oxidase subunit 8B, mitochondrial GWAVPK 656,3646
DnaJ homolog subfamily С member 14 EPKSAR 686,3711
Rho guanine nucleotide exchange factor 10-like protein LMRVK 661,3945
Pyruvate carboxylase, mitochondrial DTQAMK 692,3163
Selenium-binding protein 1 VIQVPPK 779,4905
Palmitoyl-protein thioesterase 1 KMVEKK 777,4418
Rab GTPase-binding effector protein 2 ASLPR 542,3176
Rho GDP-dissociation inhibitor 3 EIVSGLK 744,4381
ERP27 LVDNK 587,3279
Beta-2-microglobulin IVKWDRDL 1043,576
Serum albumin ALKAWSVAR 1000,582
Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1 LGREAASR 858,4671
Mitochondrial Rho GTPase 1 IDLQK 615,3592
Serum albumin YTRKVPQVSTPTLVEVSR 2059,143
STMN1 EVLQK 615,3592
Interleukin-12 subunit alpha LLMDPK 715,3938
Beta-casein VKEAMAPK 872,4789
Aconitate hydratase, mitochondrial NINIVRKR 1011,63
Seizure protein 6 homolog LISSPK 643,3905
GLNA KDPNK 600,3231
UPF0407 protein C2orf39 homolog FDEITVKWEEGK 1479,725
Hexokinase-1 GESAIS 562,2598
JSPR1 EPVSK 558,3013
Peroxisome assembly protein 12 OS=Bos taurus GN=PEX12 PE=2 SV=1 LAGVR 514,3227
ACTN4 EAMLK 590,3098
Protein THEMIS ILASEIR 800,4756
Myosin-2 VKQKLEK 871,5491
PAF VVASR 530,3176
ADP-ribosylation factor-like protein 6-interacting protein 6 SAPLR 542,3176
Fibrinogen gamma-B chain KTTMK 607,3363
Probable carboxypeptidase PM20D1 DGFIYGRGTLDNK 1454,715
Twinfilin-1 QLNYVQLEIDIK 1474,803
60S ribosomal protein L9 GTVQQADE 846,3719
Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP1B QEVIK 615,3592
Vacuolar protein-sorting-associated protein 36 LLLAEK 685,4374
N-terminal kinase-like protein GPMKLGTR 858,4745
TM223 ALQSLSARR 1000,578
Serum albumin SLGKVGTR 816,4818
Serum albumin AEFVEVTK 921,4807
Serum albumin AEFVEVTKLVTDLTK 1691,935
Serum albumin LSQKFPKAEFVEVTK 1749,967
ZNHI1 RVLDR 657,3922
Transmembrane protein 131-like QILSITK 801,496
Abnormal spindle-like microcephaly-associated protein homolog (Fragment) AGKHQR 695,3827
Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats protein DLLQK 615,3592
UPF0453 protein C12orf44 homolog VGEKLCEK 904,4688
Glucosamine-fructoses-phosphate aminotransferase [isomerizing] 2 NIENVK 715,3864
Tax 1-binding protein 1 homolog EIADKTEK 932,4814
Allergen Bos d 2 DKIVEGGPLR 1082,608
DCE1 ANFFR 653,3285
Beta-lactoglobulin LSFNPTQLEEQCHI 1657,777
Alpha-S2-casein LTEEEKNR 1017,509
Uncharacterized protein KIAA1539 homolog KGYSVPK 777,4385
WDR12 MPLFK 650,3462
Uncharacterized potential VYEDSGIPLPADSPK 1586,783
DNA-binding protein C17orf49 homolog
MYB TPAIK 528,3271
WD repeat-containing protein 92 DISMNK 706,332
DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunitRPABCl QSLVDMAPK 1003,501
LIGA QLDIK 615,3592
Protein ariadne-1 homolog VQDKYR 807,4239
Lethal(3)malignant brain tumor-like 2 protein GYLMK 626,3098
Complement C4 (Fragments) VLREDSR 873,4668
Protein FAM92A1 MKRDDLK 904,48
RNA-binding protein 5 EGSGLGRK 802,4297
Complement factor B VGSQYR 708,3555
MARCKS-related protein MGSQSSKAPR 1047,513
Acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32 family member A KLENLK 743,4541
Semaphorin-3C ICPNDTGGLR 1101,524
cGMP-dependent 3',5'-cyclic phosphodiesterase MLDLMR 809,3775
Alpha-1-syntrophin MPILISK 816,4779
LysM and putative peptidoglycan-binding domain-containing protein 2 LDLQIK 728,4432
Chromodomain-helicase-DNA-binding protein 1-like 1 VDGSVRGEER 1102,537
Leucine-rich repeat-containing protein 41 KSEAK 561.3122
RAB6-interacting golgin TQAETMKLK 1048,559
COX assembly mitochondrial protein homolog TGIPTK 615,3592
Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1 AVNQDK 673,3395
XPO2 LLAVSK 633,4197
Sodium-driven chloride bicarbonate exchanger EYGLSYLSLR 1201,623
Serum albumin DAFLGSFLYEYSR 1566,735
TT23L ASPIR 542,3176
Coiled-coil domain-containing protein 104 KDMKIK 761,4469
GTPIR 542,3176
E3 SUMO-protein ligase RanBP2 (Fragment) OS=Bos taurus GN=RANBP2 PE=2 SV=2 LVDTGR 659.3602
SDF2 EQVLK 615,3592
Flotillin-2 LKAEAYQK 949,5232
Myosin-Ic SELSDK 677,3232
Glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1 LPLSILKEK 1039,664
Cathelicidin-1 AVDQLNEQSSEPNIYR 1861,881
Alpha-1B-glycoprotein VLSPAGPEAQFELR 1512,794
Alpha-1B-glycoprotein SLLSELSDPVELRVAGS 1770,936
Ubiquitin-like domain-containing CTD phosphatase 1 DKELLK 744,4381
ERP27 QLDLK 615,3592
Leucine zipper putative tumor suppressor 2 LIPVSGKLEK 1082,67
RNA-binding protein 5 AAERREK 858,4671
Folate receptor alpha FYAENPTSGSTPQGI 1567,715
Zinc-alpha-2-glycoprotein RKWEAEAVYVQR 1533,805
Zinc-alpha-2-glycoprotein SLTRPLTVPWDPRQQAE 1993,038
Zinc-alpha-2-glycoprotein AEPLAPWSQVEGMEDWEKESALQR 2785,302
Zinc-alpha-2-glycoprotein RAEPLAPWSQVEGMEDWEKESALQR 2941,403
1 -phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase beta-4 (Fragment) IVAQYDK 835,444
Phosphatidylcholine transfer protein SGVIRVK 757,481
Glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1 SLFSHAFEVVKT 1363,714
LETM1 domain-containing protein 1 ALQMKALCR 1048,552
Polymeric immunoglobulin receptor AQDFQGR 820,3828
Polymeric immunoglobulin receptor KAQDFQGR 948,4777
Serum albumin IETMREK 905,464
Serum albumin FKDLGEEHFK 1248,614
Serum albumin LSQKFPKAEFVEVTKLVTDLTK 2520,42
Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(O) subunit gamma-11 GSCIIS 578,2734
Dynamin-l-like protein KEAADMLK 920,4637
UPF0609 protein C4orf27 homolog MVGGGAKR 790,412
Alpha-1-acid glycoprotein HAEDKLITR 1081,588
Monoacylglycerol lipase ABHD6 ELQESAAVEK 1102,551
KTEL motif-containing protein 1 MMAEVVRR 990,5103
Calcium-transporting ATPase type 2C member 1 YLSMLR 797,4105
Drebrin-like protein SV=1 LKSPFLQK 959,5804
Uncharacterized protein C14orf38 homolog KVKQELK 871,5491
Zinc-alpha-2-glycoprotein KWEAEAVYVQR 1377,704
Beta-casein INKKIEK 871,5491
GA-binding protein subunit beta-2 DMLKMTALHWATEHHHRDVVELLIK 3022,563
Aldehyde dehydrogenase family 3 member B1 IVMTAAAK 819,4524
Ropporin-1 ERSERVALSNWAELTPELLK 2340,244
Alpha-Si-casein EKVNELSK 945,5131
RL10A KLNKNKK 871,5603
Glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1 SSRQPQSQNPK 1255,627
Nicotinate phosphoribosyltransferase LIAGPDK 712,4119
CDKN2AIP N-terminal-like protein MVGGEAAAAVEELISGVR 1757,898
28S ribosomal protein S34, mitochondrial LIAELARRVR 1195,751
Dynein intermediate chain 1, axonemal LLNLVREVK 1082,681
Protein kintoun QMLDATALEAVEK 1417,712
39S ribosomal protein L47, mitochondrial MAAASLAVFCR 1138,563
Brain acid soluble protein 1 DAQDTTKPEDK 1246,568
Histone-binding protein RBBP7 EGKIVDAK 858,4811
Nuclear factor 1B-type GIPLESTDGER 1172,567
Beta-casein EAMAPK 645,3156
3-oxoacyl-[acy1-carrier-protein] synthase, mitochondrial VSPFFVPK 919,5168
Transforming growth factor-beta receptor-associated protein 1 RNIPK 626,3864
NADH dehydrogenase [ubiquinone] flavoprotein 3, mitochondrial QSPPK 555,3017
UPF0534 protein C4orf43 homolog LNLIGEK 785,4647
F-actin-capping protein subunit beta DIVNGLR 785,4395
Melanocyte-stimulating hormone receptor MPALGSQRR 1014,539
Protein argonaute-2 VKFTK 621,385
S-adenosylmethionine synthetase isoform type-1 RSGQLPWLQPDSK 1510,789
Zinc finger CCHC domain-containing protein 12 TSIIARMSNSR 1250,64
COQ5 LLSQEK 716,4068
Uroplakin-3-like protein FLVMSDR 866,432
Folliculin FTKVDSRPKEDTQK 1677,869
Trichohyalin-like protein 1 QLPTKK 713,4436
Protein FAM92B LKDIQK 743,4541
UDP-glucose 6-dehydrogenase IAILGFAFK 978,5902
Transmembrane and coiled-coil domain-containing protein C6orf 129 homolog RSLEKEKSSLMNK 1564,824
General transcription factor II-I ALQSPKRPR 1051,625
Kinetochore protein Spc25 KENLLK 743,4541
Coiled-coil domain-containing protein 105 HSWVNISR 997,5094
Sodium/potassium-transporting ATPase subunit alpha-2 AQDILAR 785,4395
GNAT2 EAKTVK 674,3963
Alpha-S2-casein AMKPWIQPK 1097,606
Electron transfer flavoprotein subunit beta LAEKEK 716,4068
ASAP1 KPFDK 633,3486
Fibroblast growth factor 5 LHASAK 625,3547
Sterol-4-alpha-carboxylate 3-dehydrogenase, decarboxylating MKFMIGNGK 1040,515
CO038 KFDPK 633,3486
SELT YPDIR 662,3388
Galactose-3-O-sulfotransferase 3 LQQATK 687,3915
Factor Xlla inhibitor VYDPKG 677,3384
Zinc finger protein 350 SPQSSVVLQEK 1200,635
SUCB1 LQGTR 573,3235
GMFB VFEIR 662,3752
Cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 2 QVLLR 627,4068
Nucleotide exchange factor SIL1 LQQYR 706,3762
DNA nucleotidylexotransferase KMGTTR 708,3589
Heat shock factor-binding protein 1 IDDMSSR 822,3542
Dynamin-1 DEMLR 678,3007
LisH domain-containing protein ARMC9 SMTYLK 741,3731
Uncharacterized protein KIAA1462 homolog LDGAVPAPDPR 1106,572
DnaJ homolog subfamily C NEFYK 699,3228
member 27
Calcyclin-binding protein MQQKSQRK 1048,545
Leucine-rich repeat-containing protein 28 HKNLFLNYR 1203,651

1. Способ получения низкогидролизованной пептидной композиции из белков молочной сыворотки, включающий получение белкового раствора, его пастеризацию, ультрафильтрацию, ферментативный гидролиз и пастеризацию полученного гидролизата, отличающийся тем, что белковый раствор с содержанием жира не более 0,05% получают из сухого концентрата сывороточного белка, сухой молочной сыворотки или нативной подсырной сыворотки, ультрафильтрацию белкового раствора проводят при температуре 8-12°C на ультрафильтрационных мембранах с молекулярной массой отсекаемых компонентов от 1 до 5 кДа до массовой доли сухих веществ в ретентате 8-18%, перед внесением ферментного препарата температуру ретентата молочной сыворотки доводят до 50-55°C, а его начальное значение pH - до 7,0-7,2 добавлением 20%-ного водного раствора гидроксида натрия, ферментативный гидролиз ведут препаратом «Protamex» в дозировке 2,5-4,0% от массы белка в ретентате при температуре 50-55°C в течение 1,5 ч без pH-статирования, а полученный гидролизат пастеризуют при температуре 80-85°C в течение 5-10 мин.

2. Пептидная композиция, полученная указанным выше способом, со степенью гидролиза не более 6%, суммарным содержанием свободных аминокислот в эквивалентах глютаминовой кислоты не более 4 мг/мл, пониженным содержанием аллергенов молочной сыворотки α-лактальбумина, β-лактоглобулина и бычьего сывороточного альбумина, и обладающая антиоксидантной и гипотензивной активностью.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии. Получают белковый раствор из сухого концентрата сывороточного белка.

Группа изобретений относится к пищевой промышленности. Проводят нанофильтрацию жидкой сыворотки с показателем рН от 6 до 7 с получением сыворотки с низким содержанием хлора, где содержание хлора снижено до не более чем 30 ммоль на 100 г сухих веществ.
Группа изобретений относится к молочной промышленности. Способ получения смеси для детского питания включает смешивание источника гидролизованного белка 1-5 г/100 ккал смеси, источника углеводов 8-12 г/100 ккал смеси и источника жира 3-7 г/100 ккал смеси с получением раствора.
Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при производстве молочных продуктов, безалкогольных напитков, кондитерских изделий. Сырье экстрагируют водой в течение 10-16 ч при температуре 50-100°C.

Изобретение относится к молочной промышленности и касается способа обработки сывороточного белка, предназначенного для изготовления молочного продукта. .
Изобретение относится к пищевой промышленности. .

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения гидролизата сывороточных белков с высокой степенью гидролиза и низкой остаточной антигенностью.

Изобретение относится к утилизации молочной сыворотки, в частности к способу выделения и очистки 3'-сиалиллактозы, 6'-сиалиллактозы, анионных олигосахаридов и/или белков из сыворотки.

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно биологически активным добавкам (БАД), и в частности к пищевым продуктам на основе БАД. Пищевой продукт для питания лиц, подверженных интенсивным физическим нагрузкам содержит следующие компоненты, масс.%: пептиды гидролизата головного мозга КРС с молекулярной массой от 0,2 до 10 кДа - 0,5-10,0, белки сыворотки молока - 5,0-30,0, гидролизаты белков сыворотки молока - 5,0-20,0, гемоглобин - 0,5-5,0, сухой концентрат куриного бульона - 1,0-5,0, среднецепочечные триглицериды - 1,0-10,0, линолевую кислоту - 1,0-10,0, лецитин - 0,5-5,0, янтарную кислоту - 0,05-0,5, фумаровую кислоту - 0,025-0,25, инулин - 1,0-10,0, лактит - 1,0-10,0, стевиозид - 0,01-0,1, комплекс витаминов В - 0,01-0,1, топинамбур пищевой сушеный - 1,0-10,0, аскорбиновую кислоту -0,05-0,5, йодированные молочные белки - 0,002-0,015, обогатитель - минеральный кальциевый - 0,5-5,0.

Изобретение относится к пищевой промышленности. .

Изобретение относится к области жидких энтеральных питательных композиций. .
Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано для получения концентрата сывороточных белков для обогащения и изготовления различных продуктов питания.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при приготовлении белково-витаминных продуктов питания с использованием сои. .
Изобретение относится к молочной промышленности, переработке вторичного молочного сырья, и может быть использовано в других отраслях пищевой промышленности. .

Изобретение относится к биотехнологической, в частности к молочной, промышленности. Продукт получают путем сухого смешивания сухих компонентов в следующем составе: концентрат альбумина сыворотки крови убойных животных, сухое обезжиренное молоко, и/или сухая подсырная деминерализованная сыворотка, или ультрафильтрационный концентрат сывороточных белков молока, концентрат низкомолекулярных катионных сывороточных белков молока в сочетании с куриным лизоцимом или куриный лизоцим, источник йода в составе белковой добавки. Последующее измельчение смеси на планетарной шаровой мельнице при скорости 600 об/мин в течение 11±1 мин при температуре измельчаемой смеси от 30 до 40°C до получения наноразмерных частиц модуля в диапазоне от 20 нм до 80 нм. Внесение витаминно-минерального премикса и перемешивание на барабанном смесителе периодического действия. Изобретение обеспечивает получение продукта с функциональными свойствами, такими как повышенная биологическая ценность, антиоксидантные свойства, иммуномодулирующие и иммуностимулирующие свойства, с хорошей растворимостью, термостабильностью и повышенной усвояемостью. 3 ил., 3 пр.
Наверх