Способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики

Авторы патента:

Бызова Надежда Алексеевна (RU)

Дзантиев Борис Борисович (RU)

Сотников Дмитрий Васильевич (RU)

Жердев Анатолий Виталиевич (RU)

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

Владельцы патента RU 2532352:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии имени А.Н. Баха РАН Российской академии наук (ИНБИ РАН) (RU)

Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики. Предложенное изобретение предназначено для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител к возбудителям инфекционных заболеваний или другим антигенам, например, таким как аллергены. Отличительной особенностью предлагаемого способа определения антител является то, что раствор для разбавления пробы содержит специфические антитела против иммобилизованной в аналитической зоне тест-полоски антигена (или антигенов). Используемая концентрация антител в разбавляющем растворе меньше нижнего предела определения антител данным методом при использовании разбавляющего раствора, не содержащего специфических антител, вследствие чего в отсутствие специфических антител в пробе окрашивания аналитической зоны тест-полоски не наблюдается. Если же проба содержит специфические антитела, то наличие в разбавляющем растворе дополнительного количества специфических антител приводит к усилению интенсивности окраски аналитической зоны тест-полоски. Применение изобретения позволяет регистрировать суммарную концентрацию специфических антител в пробе и в разбавляющем растворе, что приводит к снижению предела обнаружения анализа вследствие смещения рабочего диапазона определяемых тестом концентраций в область более низких значений. 3 ил., 1 пр.

Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики. Наличие в сыворотке крови антител, специфичных к возбудителю определенного заболевания, или иному антигену, например, такому как аллерген, является эффективным критерием, позволяющим с высокой достоверностью диагностировать соответствующее инфекционное заболевание или аллергию (Резникова Л.С., Эпштейн-Литвак Р.В., Леви М.И. / Серологические методы исследования при диагностике инфекционных болезней - М., Медгиз, 1962; Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник для студентов медицинских ВУЗов / Под ред. А.А Воробьева. - М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2006). В случае диагностики инфекционных заболеваний преимуществами данного подхода по сравнению с непосредственным выявлением и идентификацией возбудителя является определенность при выборе тестируемой пробы (сыворотка крови, тогда как возбудитель может на данной стадии инфекции преимущественно локализоваться в самых разных органах и тканях), а также возможность быстрой детекции достаточно высокого уровня антител, индуцированного контактом с антигеном, в то время как для выявления антигена могут потребоваться довольно продолжительные стадии доращивания до достижения им регистрируемой концентрации. Хотя в настоящее время активно используются как микробиологические, так и иммунологические способы диагностики инфекционных заболеваний, для проведения массового первичного скрининга оптимально иммунологическое определение наличия в сыворотке крови специфических антител (серодиагностика), которое может быть реализовано с высокой экспрессностью и производительностью. Особенный интерес вызывают серодиагностические подходы в тех случаях, когда в силу особенностей роста микроорганизмов получение результатов микробиологического тестирования может потребовать значительного времени. В случае диагностики аллергии антитела против определенного аллергена являются главным маркером данного функционального расстройства (IgE антитела в случае аллергии немедленного типа и IgG антитела в случае аллергии замедленного типа), поэтому методы лабораторной диагностики аллергии зачастую сводятся к определению антител, или выявлению реакции организма, связанной с наличием данных антител (как в случае провокационной пробы) (Паттерсон Р., Грэммер Л.К., Гринбергер П.А. Аллерические болезни: диагностика и лечение / Перевод с англ., под ред. акад. РАМН А.Г. Чучалина (гл. ред.), чл.-корр. РАМН И.С. Гущина (отв. ред.). - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2000). Эти причины определяют значительный интерес к серодиагностическим методам.

Благодаря экспрессности, достаточно высокой чувствительности и специфичности серологические тесты незаменимы при массовых обследованиях. Кроме того, гуморальный иммунный ответ отражает активный инфекционный процесс, и поэтому результаты иммунохимического тестирования достоверно отражают именно случаи заболевания, дискриминируя их от бактерионосительства.

Иммунохимический анализ может быть реализован в различных форматах. Однако, поскольку для массовых обследований первоочередное значение имеют скорость и производительность тестирования, в данной ситуации несомненными преимуществами обладает иммунохроматографический анализ, для которого все необходимые реагенты предварительно нанесены на мембранные компоненты тест-полоски и ее контакт с тестируемой пробой непосредственно инициирует движение фронта жидкости по мембранам, протекание специфических реакций и формирование иммунных комплексов, которые благодаря включению в их состав окрашенного маркера могут детектироваться визуально или с помощью оптического детектора (Рис.1).

Применительно к серодиагностике (определению антител, специфичных к определенному антигену или группе антигенов) общая схема иммунохроматографии заключается в следующем.

Проба, потенциально содержащая специфические антитела, при контакте с тест-полоской под действием капиллярных сил перемещается вдоль тест-полоски. При этом она вначале взаимодействует с окрашенными частицами, на поверхности которых адсорбирован (конъюгирован) компонент, предназначенный для связывания с антителами. Часто в качестве такового компонента выбирают антивидовые антитела (иммуноглобулины, выделенные из сыворотки животного, иммунизированного препаратом иммуноглобулинов человека или другого организма, для которого проводится серодиагностика), белок A из Staphylococcus aureus, белок G из Streptococcus spp. или другие реагенты для связывания антител. В качестве метки наиболее часто используется коллоидное золото, а в качестве метода конъюгации - простая физическая адсорбция белка на поверхности с последующим отделением неадсорбированных молекул с помощью осаждения частиц коллоидного золота центрифугированием. Затем фронт жидкости преодолевает аналитическую (тестовую) зону, которая представляет собой участок мембраны с иммобилизованным антигеном (нативным или специально модифицированным для эффективной сорбции), в результате взаимодействия с которым формируются комплексы из молекул антигена/антигенов, специфических к ним антител и конъюгата с коллоидным золотом. Степень связывания маркера с иммобилизованным антигеном и, соответственно, интенсивность окрашивания мембраны определяются концентрацией специфических антител в пробе. Для проверки качества реагентов и сохранения функциональности тест-системы используется расположенная далее контрольная зона, в которой компонент, сорбированный на окрашенной частице, связывается с соответствующим иммобилизованным на мембране реагентом.

Ниже представлена информация о методике, реализуемой в тест-системе «TB-Check-1» фирмы «Vedalab» (Франция) - см. http://http://www.sanitamedikal.com/Assets/MD_220002_m3_TB_l408_c.pdf. Данная методика определения антител к возбудителю туберкулеза рассматривается в настоящей заявке в качестве прототипной.

Метод основан на комбинации антител к иммуноглобулинам человека, конъюгированных с хромогеном, и высокоочищенного БЦЖ-белка. При прохождении исследуемого образца через адсорбционную зону тестового устройства конъюгат, содержащий меченые антитела, связывается с IgG, образуя комплекс «антиген-антитело». Этот комплекс взаимодействует с высокоочищенным БЦЖ-белком в тестовой зоне устройства и, если концентрация специфического IgG к возбудителю туберкулеза превышает 350 Е/мл, образует окрашенную полосу. При низкой концентрации антител окрашенная полоса в тестовой зоне не образуется. Несвязавшийся конъюгат взаимодействует с реагентом в контрольной зоне тестового устройства, образуя окрашенную полосу, что указывает на правильное проведение теста. Процедура исследования: заполнить одноразовую пипетку сывороткой или плазмой и внести 1 каплю в окно для пробы тестового устройства. Добавить в окно для пробы 5-6 полных капель разбавляющего раствора (дилюента). Через 10-15 мин произвести учет результатов.

Одной из наиболее важных задач в иммунохроматографии является повышение чувствительности анализа. Применительно к серодиагностике это означает минимизацию ложноотрицательных результатов теста в случае, если антитела в пробе содержатся в диагностически значимых концентрациях, но ниже предела детекции метода. Заявителями предлагается подход для решения этой задачи, основанный на добавлении в пробу дополнительного количества специфических антител в концентрациях ниже, чем предел детекции метода при использовании разбавляющего раствора, не содержащего специфических антител. В этом случае суммарная концентрация антител в пробе и добавленных антител может превысить предел детекции и проба будет диагностирована как положительная. Таким образом, повышается чувствительность метода за счет смещения диапазона определяемых концентраций в область более низких значений.

Предложенный подход был реализован заявителями для серодиагностики туберкулеза с использованием антигена 38 кДа (Ag78, antigen 5, PhoS, Rv0934) M. tuberculosis. Ниже представлено описание способа получения тест-полосок и проведения иммунохроматографического анализа, а также полученные результаты.

Пример:

Для формирования тест-системы использовали набор мембран «mdi Easypack» фирмы «Advanced Microdevices» (Индия), включающий рабочую мембрану CNPC-SN12 L2-P25 (размер пор 15 мкм), подложку под конъюгат PT-R5, мембрану для нанесения образца GFB-R4, адсорбирующую мембрану AP 045 и ламинирующую защитную пленку МТ-1.

На мембраны были нанесены следующие реагенты:

1. Рекомбинантный антиген 38 кДа М. tuberculosis (Rv0934), фирма «Arista Biologicals Inc.» (США), кат. № AGMTB-0220.

2. Конъюгат коллоидного золота со средним диаметром частиц 30 нм и рекомбинантного антигена 38 кДа М. tuberculosis.

3. Моноклональные антитела НТМ81 против рекомбинантного антигена 38 кДа М. tuberculosis, Центр молекулярной диагностики и терапии, Москва (Россия).

Для формирования аналитической зоны использовали антиген 38 кДа, контрольной зоны - антитела против антигена 38 кДа. На 1 см полосы наносили 2 мкл раствора антигена (1,0 мг/мл в 50 мМ фосфатном буфере, pH 7,4) и 2 мкл раствора антител (0,5 мг/мл в том же буфере). Конъюгат коллоидного золота с антигеном 38 кДа наносили в разведении, соответствующем D₅₂₀=2,0, в объеме 8 мкл на 1 см полосы. Для нанесения реагентов использовали диспенсер «IsoFlow» фирмы «Imagene Technology)) (США). Листы мембран с нанесенными иммунореагентами нарезали на индивидуальные тест-полоски шириной 4 мм.

Иммунохроматографический анализ проводили при комнатной температуре. Тест-полоску погружали в пробу на 1 мин в вертикальном положении, а затем извлекали и помещали на горизонтальную поверхность. Детекцию связывания коллоидного золота осуществляли через 10 мин визуально или получая цифровое изображение тест-полоски с помощью сканера и количественно оценивая интенсивность окраски аналитической зоны с помощью программы «Nonlinear Dynamics TotalLab TL120 v2009».

Путем тестирования растворов, содержащих фиксированные концентрации специфических антител (моноклональных антител НТМ81) построена калибровочная кривая и определен предел визуальной детекции метода (Рис.2). Затем были протестированы сыворотки крови от пациента, зараженного туберкулезом и от здорового донора (Рис.3, A), в этом случае положительных результатов тестирования не наблюдалось. После добавления в пробы дополнительного количества специфических антител в концентрации, соответствующей пределу визуальной детекции (5 мкг/мл), в сыворотке больного пациента наблюдается отчетливое окрашивание аналитической зоны (Рис.3, Б). Таким образом, предложенный подход позволил избежать ложноотрицательного результата теста.

Рис.1. Принцип иммунохроматографического анализа.

Рис.2. Калибровочная кривая определения специфических антител против антигена 38 кДа М. tuberculosis методом иммунохроматографии.

Рис.3. Тестирование сывороток крови больного туберкулезом и здорового донора без добавления дополнительного количества специфических антител (А) и после добавления специфических антител в концентрации 5 мкг/мл (Б).

Способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики, в котором на мембранной тест-полоске наносят антиген или антигены и частицы коллоидного золота, конъюгированные с реагентом для связывания антител, отличающийся тем, что раствор для разбавления пробы содержит специфические антитела против используемого антигена или антигенов.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающий приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, отличающийся тем, что после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 минуты и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам.

Способ прогнозирования гнойных послеоперационных осложнений у больных колоректальным раком // 2530571

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования гнойных послеоперационных осложнений у больных раком толстой кишки (колоректальный рак) путем динамического исследования крови.

Способ прогнозирования рецидива рака яичников // 2530556

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения заболевания у больных раком яичников. Сущность способа: в опухолевой ткани яичников определяют долю клеток в S фазе клеточного цикла, при значении этого показателя менее 15,9% прогнозируют благоприятный исход, а при значении этого показателя более 15,9% прогнозируют неблагоприятный исход.

Способ диагностики тромбоэмболии легочных артерий // 2527346

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, кардиологии и сердечно-сосудистой хирургии, и может быть использовано для диагностики тромбоэмболии легочных артерий (ТЭЛА).

Способ оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений // 2526817

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации.

Способ спекрофотометрического определения ионов металлов // 2526176

Изобретение относится к мониторингу окружающей среды и биологических объектов на предмет определения содержания ионов металлов в жидких средах с использованием фотохромных соединений.

Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком легкого // 2526120

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности комплексного лечения больных раком легкого в раннем послеоперационном периоде.

Способ комплексной оценки содержания продуктов окислительной модификации белков в тканях и биологических жидкостях // 2524667

Изобретение относится к медицине, в частности к биологической химии, и предназначено для более полной оценки окислительной модификации белков (ОМБ) и анализа соотношения альдегид-динитрофенилгидразонов (АДНФГ) и кетон-динитрофенилгидразонов (КДНФГ) основного и нейтрального характера в плазме и клетках крови, а также в тканях животных с целью определения степени выраженности и стадии окислительного стресса.

Способ прогнозирования наступления беременности // 2524650

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения высокого тромбогенного риска у беременных при проведении экстракорпорального оплодотворения в плазме крови.

Способ определения маркера развития ревматоидного артрита на основе выявления укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах в т-лимфоцитах периферической крови // 2522961

Изобретение относится к области медицины, включающей исследования биологического материала, и касается определения относительной длины теломер на хромосомах. Способ заключается в выявлении укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови с помощью метода количественной флуоресцентной гибридизации in situ (Q-FISH).

Мелкозернистые наполнители для фотометрических реактивных пленок // 2532359

Изобретение относится к способу обнаружения аналита в пробе жидкости тела путем использования диагностического тестового элемента. Диагностический тестовый элемент (110) для обнаружения аналита в пробе (126) жидкости тела, в частности цельной крови объемом менее 2 микролитров, содержит по меньшей мере одно тестовое поле (116) с по меньшей мере одним реагентом-индикатором, где реагент-индикатор способен при наличии аналита испытывать по меньшей мере одно обнаруживаемое изменение, в частности оптическое изменение. Тестовое поле (116) включает по меньшей мере один детекторный слой (118), содержащий реагент-индикатор, где детекторный слой содержит частицы (137). При этом по меньшей мере 90% всех частиц (137) индикаторного слоя (118) имеют фактический размер менее 10 микрон. Диагностический тестовый элемент (110)содержит по меньшей мере один несущий элемент (112), имеющий по меньшей мере одну прозрачную область (114), где тестовое поле (116) своей стороной детектирования (120) по меньшей мере частично нанесено на прозрачную область (114). Обнаруживаемое изменение является оптически детектируемым изменением, где для детектирования обнаруживаемого изменения применяют оптический детектор с пространственным разрешением. 8 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл., 2 пр.

Способ определения степени выраженности воспалительного процесса при остеоартрозе коленного сустава // 2533216

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения выраженности воспалительного процесса при остеоартрозе. Сущность способа состоит в том, что проводят люминолзависимую железоиндуцированную хемилюминесценцию модельной системы, которая имеет следующий состав: 2,72 г KH2PO4, 7,82 г KCl, 1,5 г цитрата натрия C6H8O7Na3*5,5H2O на 1 литр дистиллированной воды, pH 7,45 с 0,2 мл 10-5 М раствора люминола, затем в присутствии синовиальной жидкости определяют интенсивность свечения модельной системы до и после добавления синовиальной жидкости. Рассчитывают степень подавления интенсивности хемилюминесценции модельной системы по формуле. При ее значении от 1,71 до 6,48% определяют высокую активность воспалительного процесса, от 6,49 до 21,55% - среднюю активность, от 21,56 до 55,46% - малую активность. Использование способа позволяет уменьшить время определения и повышает точность оценки степени воспалительного процесса при остеоартрозе. 1 табл., 1 ил., 3 пр.

Способ и устройство для определения анализируемого вещества // 2533234

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к аспектам, относящимся к способам неферментативного определения присутствия или количества углеводов в образце, и описывает способ, устройство и набор для анализа образца для определения присутствия или количества анализируемого вещества, в частности углеводорода, более конкретно сахара, в образце при использовании ткани. Способ включает нанесение образца на синтетическую ткань; химическую модификацию указанного углевода, присутствующего в образце, окисляющим средством с достаточным окисляющим потенциалом, чтобы расщепить углевод между двумя гидроксильными группами; инактивацию указанного окисляющего средства, которое препятствовал бы определению химически модифицированного углевода; определение присутствия или количества указанного химически модифицированного углевода при помощи медьсодержащего соединения для получения видимого изменения цвета. Изобретение может использоваться для определения присутствия углевода на поверхности для индикации загрязнения поверхности, в частности загрязнения веществом, способствующим микробному росту. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 ил., 7 табл.,4 пр.

Способ прогнозирования эффекта терапии инфликсимабом у детей с болезнью крона // 2533435

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования эффекта терапии инфликсимабом у детей с болезнью Крона. Проводят определение сывороточной концентрации фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), оценку относительного содержания Th17-лимфоцитов (%CD3+CD4+CD161+ от CD3+CD4+) и активности сукцинатдегидрогеназы в популяции регуляторных Т-клеток (CD3+CD4+CD127low) (SDH-Treg) до и на следующие сутки после введения инфликсимаба. Вычисляют прогностический коэффициент эффективности препарата К по формуле. При значении коэффициента К<0,5 прогнозируют минимальный терапевтический эффект инфликсимаба. При К=0,5-1,5 прогнозируют умеренный терапевтический эффект, требующий коррекции схемы введения препарата. При К от более 1,5 до 2,5 прогнозируют стойкий положительный эффект от введения инфликсимаба. Изобретение обеспечивает возможность прогнозирования долгосрочного, не менее 1 года, эффекта терапии инфликсимабом на любом этапе терапии. 4 ил., 2 табл., 3 пр.

Способ оценки формирования гипоксии в третьем триместре гестации при снижении уровня рн и оксигемоглобина, вызванных обострением цитомегаловирусной инфекции // 2535047

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации. Способ включает: определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, уровня рН крови и содержания оксигемоглобина на биохимическом анализаторе, и при нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, уменьшении рН крови до 7,25±0,03, а оксигемоглобина до 90,15±0,35% при контроле 95,20% оценивают угрозу формирования гемической гипоксии.

Способ проведения иммунохроматографического анализа с диссоциирующей флуоресцентной меткой // 2535061

Изобретение относится к медицине и касается способа проведения иммунохроматографического анализа с диссоциирующей флуоресцентной меткой, в котором на мембранной тест-полоске формируют комплексы, в состав которых входят молекулы антигена или антигенов, специфичные к ним антитела и молекулы метки. При этом после проведения анализа метка экстрагируется из рабочей мембраны тест-полоски и флуоресцентный сигнал измеряется в объеме жидкости. Способ по изобретению обеспечивает оптимальные условия для флуоресценции метки, а так же устранение мешающего влияния мембраны, которая, будучи непрозрачной, уменьшает интенсивность как возбуждающего, так и испускаемого света. 1 ил., 1 пр.

Способ определения содержания производных гемоглобина в крови // 2536217

Изобретение относится к медицинской диагностике в области гематологии и может быть использовано для одновременного определения всех производных гемоглобина в крови. Сущность способа: фотометрирование цельной крови осуществляют в видимом и ближнем ИК-диапазоне длин волн, измеряют спектральные коэффициенты пропускания кюветы с цельной кровью, а количественные значения концентрации основных производных гемоглобина, которые определяют путем минимизации невязки Изобретение может быть использовано для контроля газового состава крови в реанимации, токсикологии, при интенсивной терапии, для определения влияния на гемоглобинный состав физиологических, патологических и экологических факторов, а также в родильных домах, акушерских и педиатрических стационарах для контроля гематологических показателей новорожденных и мониторинга гипербилирубинемии. Изобретение обеспечивает повышение информативности анализа крови. 5 ил., 2 табл.

Способ оценки антиоксидантной защиты организма человека // 2538081

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения антиоксидантной защиты организма человека при диагностике и лечении различных заболеваний, сопровождающихся нарушением антиоксидантной защиты. Измеряют содержание химических элементов в крови человека рентгенофлуоресцентным методом с использованием синхротронного излучения, определяют соотношение суммы значений содержания химических элементов с прооксидантными свойствами к сумме значений химических элементов с антиоксидантными свойствами по формуле: А О З = ∑ i = 1 n x i ∑ i = 1 n y i , где xi - значение химических элементов в крови человека с прооксидантными свойствами; yi - значение химических элементов в крови человека с антиоксидантными свойствами; n - количество измеренных химических элементов в крови человека, сравнивают с аналогичным соотношением химических элементов для «условно здорового человека», и при полученном значении АОЗ больше, чем значение АОЗ для «условно здорового человека», судят о снижении антиоксидантной защиты организма человека. Изобретение обеспечивает повышение объективности и достоверности оценки антиоксидантной защиты организма человека. 3 пр.

Способ прогнозирования исхода мышечно-инвазивного рака мочевого пузыря после комбинированного лечения // 2538632

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования исходов мышечно-инвазивного рака мочевого пузыря. Способ включает проведение исследования активности 26S протеасом и содержания NF-кВ р65 и р50 в опухолевой ткани. При активности 26S протеасом более 18-1000 Ед/мг белка и при коэффициенте NF-кВ р65/р50 более 1,0 прогнозируют низкую вероятность развития рецидива; при активности 26S протеасом менее 18-1000 Ед/мг белка и при коэффициенте NF-кВ р65/р50 менее 1,0 прогнозируют высокую вероятность развития рецидива опухоли. Изобретение может быть использовано для определения прогрессирования заболевания в виде появления рецидивов опухоли после проведения трансуретральной резекции опухоли и полихимиотерапии по схеме M-VAC. Применение изобретения обеспечивает повышение точности и информативности прогнозирования исхода рака мочевого пузыря. 2 пр., 2 ил.

Способ прогнозирования ранней стадии апоптоза // 2540500

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования ранней стадии апоптоза лимфоцитов. Для этого выделяют клетки, инкубируют их 48 часов при температуре 37°C и 5% содержании CO2 с добавлением индуктора апоптоза дексаметазона в концентрации 10-4 моль/мл. Жизнеспособность лимфоцитов определяют количественно по включению трипанового синего с последующим определением концентрации восстановленного и окисленного глутатионов в лизате лимфоцитов после предварительной инкубации в течение 30 минут с 10 мМ 2-винилпиридина. Раннюю стадию апоптоза лимфоцитов прогнозируют при одновременном комплексном снижении концентрации восстановленного глутатиона на 17% и более и увеличении концентрации окисленного глутатиона на 19% и более по сравнению с контролем. Использование предлагаемого способа в медицинской практике позволяет прогнозировать статус антиоксидантной системы организма при различных заболеваниях по оценке ранней стадии апоптоза лимфоцитов. 1 табл.