Сополимеры на основе n-винилпирролидона в форме фармацевтически приемлемых солей кислот
Изобретение относится к химии биологически активных сополимеров, которые могут найти применение в медицине и ветеринарии. Сополимер на основе N-винилпирролидона в форме фармацевтически приемлемых аддитивных солей кислот представлен общей формулой (I):
где R обозначает водород или метил; содержание мономерных звеньев n составляет 25-90 мол.%; X обозначает анион фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты; k равно 1 или 2; m принимает значения от 0,1 до 1,0; и средневязкостная молекулярная масса сополимера Мµ равна 15-150 кДа. Изобретение позволяет расширить арсенал биологически активных сополимеров, обладающих улучшенными характеристиками растворимости, и проявляющих большую активность в качестве иммуностимулятора, пролонгатора действия антибиотиков, активатора продуцирования IL-1 и фагоцитоза, чем известные аналогичные соединения. 6 табл., 11 пр.
Область техники
Изобретение относится к химии биологически активных полимеров. Более конкретно, изобретение обеспечивает сополимер на основе N-винилпирролидона в форме фармацевтически приемлемых аддитивных солей кислот, представленный общей формулой (I):
где R обозначает водород или метил;
содержание мономерных звеньев n составляет 25-90 мольн.%;
X обозначает анион фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты;
k равно 1 или 2;
m принимает значения от 0,1 до 1,0;
и средневязкостная молекулярная масса сополимера Mµ равна 15-150 кДа.
Уровень техники
В патенте RU 2000004 (опубл. 15.02.1993) раскрыты сополимеры N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина со средневязкостной молекулярной массой в диапазоне 29-45 кДа, содержащие 25-40 мольн.% 2-метил-5-винилпиридиновых звеньев, обладающие иммуностимулирующим действием, а также пролонгирующим действием при введении антибиотиков.
В патенте RU 2015993 (опубл. 15.07.1994) раскрыто получение группы сополимеров со средневязкостной молекулярной массой 40 кДа, аналогичных описанным в публикации RU 2000004, в которых среднестатистическое число 2-метил-5-винилпиридиновых звеньев n равно 35, а также показано их противоопухолевое действие.
В патенте RU 2415876 (опубл. 10.04.2011) раскрыты сополимеры на основе N-винилпирролидона, представленные общей формулой:
где мономерное звено M представляет фрагмент 2-метил-5-винилтетразола (МВТ) или 2-метил-5-винилпиридина (МВП), содержание мономерных звеньев n составляет 25-90 мольн.%, а средневязкостная молекулярная масса сополимера Mµ=46-150 кДа, если М представляет МВП, пригодные для применения в качестве адъювантов при изготовлении вакцин.
В патенте RU 2430932 (опубл. 10.10.2011) раскрыты сополимеры на основе N-винилпирролидона, представленные общей формулой:
где мономерное звено M представляет фрагмент 2-метил-5-винилтетразола (МВТ) или 2-метил-5-винилпиридина (МВП), содержание мономерных звеньев n составляет 25-50 мольн.%, а средневязкостная молекулярная масса сополимера Mµ=15-28 кДа, если M представляет МВП, которые являются активаторами продуцирования интерлейкинов-1, вследствие чего могут быть полезны в качестве противораковых агентов.
В патенте RU 2430933 (опубл. 10.10.2011) раскрыто применение сополимеров на основе М-винилпирролидона, структура которых описывается приведенной выше общей формулой, в качестве активаторов фагоцитоза.
Все перечисленные сополимеры на основе N-винилпирролидона, содержащие фрагменты 2-метил-5-винилпиридина, рассматриваются авторами данного изобретения как его ближайшие аналоги. Их главным недостатком является малая растворимость в слабокислых и нейтральных водных средах (pH 6-7), что затрудняет их эффективное применение при изготовлении инъекционных лекарственных форм. При этом растворимость сополимеров в таких средах при постоянстве их средневязкостной молекулярной массы довольно резко уменьшается с увеличением доли 2-метил-5-винилпиридиновых фрагментов. В результате в слабокислых и нейтральных водных растворах сополимеров, содержащих свыше 55 мольн.% фрагментов МВП, не достигаются эффективные концентрации.
Целью данного изобретения является расширение арсенала биологически активных сополимеров на основе N-винилпирролидона, обладающих улучшенными характеристиками растворимости и активности, которые могут найти применение в медицине и ветеринарии.
Описание изобретения
В результате проведенных исследований авторы изобретения установили, что недостатки известного уровня техники могут быть преодолены путем перевода сополимеров на основе N-винилпирролидона в форму их фармацевтически приемлемых аддитивных солей кислот, представленных общей формулой (I):
где R обозначает водород или метил;
содержание мономерных звеньев n составляет 25-90 мольн.%;
X обозначает анион фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты;
k равно 1 или 23;
m принимает значения от 0,1 до 1,0;
и средневязкостная молекулярная масса сополимера Mµ равна 15-150 кДа.
Неожиданно было обнаружено, что, по сравнению с соответствующими основными формами, предлагаемые солевые формы сополимеров общей формулы (I) обладают большей физиологической активностью, например в качестве иммуностимуляторов, активаторов продуцирования цитокинов, таких как интерлейкины-1, пролонгаторов действия антибиотиков при лечении тяжелых бактериальных инфекций и активаторов фагоцитоза. Это позволяет рассматривать их как потенциальные активные компоненты лекарственных средств, в частности, эффективных при лучевых, онкологических и бактериальных поражениях организма.
Предлагаемые солевые формы сополимеров формулы (I) получают радикальной сополимеризацией N-винилпирролидона (N-ВП) и любого из незамещенных (НВП) или замещенных (ЗВП) коммерчески доступных винилпиридинов: 2-винилипиридина (CAS 100-69-6), 4-винилпиридина (CAS 100-43-6), 2-метил-5-винилпиридина (CAS 140-76-1), 3-метил-5-винилпиридина (CAS 51961-51-4), 4-метил-2-винилпиридина (CAS 13959-34-7), 6-метил-2-винилпиридина (CAS 1122-70-9), а также 4-метил-3-винилпиридина в присутствии инициатора, например, динитрила азобис-изомасляной кислоты (ДАК) и агентов обрыва цепи, таких как пероксид водорода и циклогексан, с последующим взаимодействием с кислотой, взятой в виде раствора или в свободном виде.
Ввиду большого различия в константах сополимеризации N-ВП и НВП или N-ВП и ЗВП, последние сомономеры быстро расходуются в процессе сополимеризации, поэтому синтез сополимера заданного состава обеспечивается поддержанием их постоянного соотношения путем компенсации расхода более реакционно-способных мономеров добавлением смеси, содержащей такие мономеры и агенты обрыва цепи. Объем указанной смеси вычисляют каждые 20 минут по результатам определения соотношения концентраций N-ВП и НВП (N-ВП и ЗВП) в реакционной смеси.
Реакцию сополимеризации проводят при температуре 60-70°C. По достижении степени конверсии по мономерам 15-30% реакционную массу охлаждают до 20°C и передают на стадию получения аддитивной соли фармацевтически приемлемой кислоты.
Было установлено, что атомы азота пиридиновых фрагментов сополимеров на основе N-винилпирролидона обладают достаточной основностью для образования солей заданного стехиометрического состава при взаимодействии в водных растворах с сильными неорганическими кислотами, а также с органическими кислотами, имеющими pKa порядка 5. Это позволяет получать сополимеры на основе N-винилпирролидона общей формулы (I) с требуемой растворимостью в водных системах, таких как, например, физиологический солевой раствор.
Не существует принципиальных ограничений, налагаемых на применяемую кислоту, кроме ее силы (pKa порядка 5), физиологической переносимости ее солей и достаточной растворимости получаемой соли общей формулы (I) в заданной водной среде. Поэтому примерами кислот, пригодных для целей изобретения, являются хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, уксусная кислота [в формуле (I) k равно 1], серная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, яблочная кислота [в формуле (I) k равно 2]. Наиболее предпочтительны хлористоводородная кислота, уксусная кислота, лимонная кислота и янтарная кислота.
Перед взаимодействием с кислотой продукт сополимеризации предпочтительно выделяют осаждением диэтиловым эфиром (ДЭ), отфильтровывают и растворяют в ином растворителе, например, в воде или водно-органическом растворителе, содержащем ацетон или этанол. Такой вариант осуществления изобретения предпочтителен при получении солей прибавлением рассчитанного количества раствора кислоты с последующим выпариванием растворителя.
Альтернативно, гидрохлориды указанных сополимеров могут быть получены барботированием осушенного хлористого водорода через раствор основания сополимера в безводном полярном органическом растворителе, таком как ацетон, хлороформ, хлористый метилен или их смеси.
Строение любого полученного сополимера на основе N-винилпирролидона характеризуется, в частности, числом мономерных звеньев НВП или ЗВП (n) и числом присоединенных молекул кислоты (m). Число n может быть вычислено по данным элементного анализа с учетом стехиометрии сополимера. Число m определяют по результатам титрования. Например, содержание хлорид-, сукцинат- и сульфат-анионов может быть установлено по результатам аргентометрического и бариметрического титрований. Получение необходимых расчетных формул доступно среднему специалисту в данной области.
Альтернативно строение полученного продукта определяют по данным ЯМР-спектрометрии, например 1H-, 13C- или 15N-ЯМР, по соотношениям интегральных интенсивностей сигналов определенных ядер. Решение данной задачи также доступно среднему специалисту в данной области.
Полученные продукты в форме оснований также характеризуют средневязкостной молекулярной массой, которую вычисляют по характеристической вязкости сополимеров. Это необходимо для расчета количества кислот, которое следует прибавить для переведения сополимеров в форму аддитивных солей. Выбор методики и подбор условий измерения вязкости являются рутинной процедурой, доступной среднему специалисту в данной области. В одном варианте изобретения характеристическую вязкость определяют в растворителе, состоящем из 85 об.% ДМФА и 15 об.% 0,1 М водного раствора LiBr.
Сополимер в форме аддитивной соли фармацевтически приемлемой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления настоящего изобретения является нетоксичным, что может быть подтверждено исследованиями in vivo. В качестве признаков токсического воздействия сополимера на подопытных животных могут рассматриваться, например, гибель, снижение массы тела, изменения походки и поведения, цвета мочи, консистенции экскрементов, состояния глаз и ушей, выпадение зубов и шерсти, а также раздражение кожи в месте введения препарата.
Предлагаемые сополимеры в форме аддитивной соли фармацевтически приемлемой кислоты обладают иммуностимулирующим действием, а также продлевают период эффективного действия антибиотиками. Последнее позволяет снизить терапевтически эффективную дозу антибиотика или повысить эффективность лечения как в отношении срока выздоровления, так и в отношении процента случаев успешного излечения.
Предлагаемые сополимеры в форме аддитивной соли фармацевтически приемлемой кислоты стимулируют производство интерлейкинов-1 в организме, а также активируют фагоцитоз в организме. При этом в любом из перечисленных проявлений своей биологической активности предлагаемые сополимеры в форме аддитивной соли фармацевтически приемлемой кислоты значимо превосходят действие соответствующих основных форм, что будет показано далее на адекватных моделях in vivo. Выбор подопытных животных, в качестве которых могут быть использованы млекопитающие и птицы, не представляет затруднений для специалиста в данной области. Например, млекопитающими предпочтительно являются беспородные белые мыши, кролики или морские свинки.
Достижение технического результата при осуществлении изобретения будет далее проиллюстрировано примерами, способствующими точному и полному пониманию его сути. Специалисту в каждой конкретной области очевидны возможные модификации и замены, например, относящиеся к протоколам исследований, которые не выходят за рамки объема изобретения, определяемые его формулой.
Пример 1. Получение сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина (2-М-5-ВП) в форме гидрохлорида
А. Синтез основания
В реактор загружают исходную реакционную смесь, содержащую 1,00 кг (960 мл) N-ВП, 16,8 г (17,6 мл) 2-М-5-ВП, 1,6 г (1,7 мл) 30% водного раствора пероксида водорода, 109,2 г (140 мл) циклогексана и 35 г динитрила азо-бис-изомасляной кислоты (ДАК). Реакционную массу нагревают до 65-70°C и в течение 5 часов ведут синтез при данной температуре, периодически отбирая пробы для хроматографического анализа (ВЭЖХ, Сферисорб С-18, 5 мкм, 4,6×250 мм, EtOR/H2O 6:94, 2,5 мл/мин (50°C), 254 нм). Подают смесь, содержащую 150 г (144 мл) N-ВП, 57,3 г (55 мл) 2-М-5-ВП, 0,51 г (0,5 мл) 30% водного раствора пероксида водорода и 7,5 г ДАК. По достижении степени конверсии по мономерам 20% реакционную массу охлаждают до 20°C и выливают при перемешивании в 30 л диэтилового эфира, оставляют при перемешивании на ночь, образовавшийся осадок выделяют фильтрацией и сушат: сначала при атмосферном давлении при 40-60°C, а затем - в вакуумном сушильном шкафу при 80-90°C. Получают 167,4 г продукта со средневязкостной молекулярной массой 15-21 кДа и n, равным 25 мольн.%.
Б. Получение гидрохлорида в водном растворе
В 2,0 л дистиллированной воды при перемешивании растворяют 100,0 г полученного сомономера, добавляют 0,5 мл 35% соляной кислоты и перемешивают в течение 1 часа. Целевой гидрохлорид выделяют выпариванием воды при пониженном давлении, после чего высушивают до постоянной массы в вакуумном сушильном шкафу при 80-90°C. Получают гидрохлорид сополимера общей формулы (I), в которой, по данным аргентометрического титрования, m имеет значение 0,97±0,02 (Mµ принята равной 18 кДа).
В. Получение гидрохлорида в неводном растворителе
В 1,0 л безводного хлороформа растворяют 50,0 г полученного сомономера и при перемешивании в течение 15 минут барботируют осушенный хлористый водород с расходом 10 мл/мин. Полученный раствор выпаривают при пониженном давлении, твердое вещество высушивают как описано выше. Получают гидрохлорид сополимера общей формулы (I), в которой, по данным аргентометрического титрования, m имеет значение 0,98±0,02 (Mµ принята равной 18 кДа).
Примеры 2-6. Получение сополимеров N-винилпирролидона и других НВП или ЗВП в форме фармацевтически приемлемых солей
Аналогично методике, раскрытой в примере 1, и используя указанные в таблице 1 количества веществ, получают следующие сополимеры на основе N-винилпирролидона (загрузка 1,00 кг) в форме фармацевтически приемлемых солей.
| Таблица 1 | ||||||||
| Пр. | Исходная смесь | Подаваемая смесь | ||||||
| НВП/ЗВП (масса, г) | 30% H2O2 (мл) | ЦГ (мл) | ДАК (Г) | N-ВП (г) | НВП/ЗВП (масса, г) | 30% H2O2 (мл) | ДАК (г) | |
| 2 | 3-М-5-ВП (17,5) | 6,2 | 105 | 4,1 | 187,5 | 3-М-5-ВП (71,7) | 2,1 | 1,0 |
| 3 | 3-М-5-ВП (21,3) | 5,9 | 110 | 3,8 | 154,7 | 3-М-5-ВП (175,0) | 1,8 | 0,8 |
| 4 | 4-М-3-ВП (18,1) | 5,7 | 75 | 2,5 | 164,3 | 4-М-3-ВП (149,3) | 1,5 | 0,6 |
| 5 | 4-ВП (16,0) | 5,0 | 66,2 | 2,2 | 145,0 | 4-ВП (131,7) | 1,3 | 0,5 |
| 6 | 4-ВП (18,8) | 5,2 | 97,1 | 3,4 | 136,5 | 4-ВП (154,4) | 1,6 | 0,7 |
Выход и характеристики сополимеров, полученных в соответствии с примерами, представлены в таблице 2. Уксусную кислоту прибавляют в виде 70% раствора (в таблице 2 отмечено *), другие кислоты прибавляют в виде водных растворов, близких к насыщенным.
| Таблица 2 | ||||||
| Пр. | Выход, г | Mµ, кДа | n | Кислота | m | |
| название | масса, г (объем, мл*) | |||||
| 2 | 233,4 | 46 | 37 | уксусная | (0,80) | 0,5 |
| 3 | 228,7 | 77 | 85 | янтарная | 0,25 | 0,85 |
| 4 | 241,4 | 89 | 74 | лимонная (дигидрат) | 0,35 | 0,75 |
| 5 | 209,3 | 86 | 69 | лимонная (дигидрат) | 0,19 | 0,5 |
| 6 | 202,1 | 64 | 81 | уксусная | (0,16) | 0,75 |
Пример 7. Исследование острой токсичности сополимеров N-винилпирролидона и НВП или ЗВП в форме фармацевтически приемлемых солей in vivo
Испытание проводят на 5 здоровых мышах гибридах F1 (СВА×С57В1) весом 18-20 г. Испытуемые соединения растворяют в стерильном изотоническом растворе NaCl из расчета 10 масс.% и вводят каждому животному 0,4 мл этого раствора. Время наблюдения за животными составляет 7 суток. Препарат считают выдержавшим испытание, если в течение предусмотренного срока наблюдения не погибнет ни одна подопытная мышь.
Гибели животных в опыте не наблюдали, что указывает на величину LD50 для мышей, превышающую 5000 мг/кг. Таким образом, сополимеры, полученные в соответствии с примерами 1-6, можно отнести к нетоксичным веществам.
Кроме того, установлено, что соединения примеров 1-6 в дозе 500 мг/кг в месте подкожного введения не вызывают раздражающего действия на белых мышей, а также выпадения волосяного покрова.
Пример 8. Исследование иммуностимулирующего действия соединений методом миграционной активности колониеобразующих клеток селезенки (эндогенное колониеобразование)
Методика выполнения исследования описана в монографии Переверзев А.Е. Кроветворные колониеобразующие клетки и физические стресс-факторы. - Л.: Наука, 1986. - 172 с. стр.43-44. Мышей линии BALB в кассетах по 30 мышей облучают γ-излучением 137Cs с экспозиционной дозой 600 рентген (поглощенная доза 1,5 Гр, что вызывает гибель 50% животных в течение 1-2 месяцев). За 24 часа до облучения мышам подкожно (в область холки) вводят 0,5 мл растворов соединений с концентрацией 2500 мг/кг (доза соединений составляет 1250 мг/мышь) или равный объем стерильного изотонического раствора NaCl (контрольная группа). На 10 сутки мышей умерщвляют разрывом шейного отдела позвоночника, извлекают селезенки, которые помещают в фиксатор Боэна. Колонии подсчитывают визуально под лупой.
Иммуностимулирующее действие полимеров оценивают по разности числа колоний в опытных группах по сравнению с контрольной группой. Результаты представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | |||||
| Пр. | Свойства сополимеров | Среднее число колоний на 1 селезенку | |||
| Mµ, кДа | n | форма | m | ||
| 1 | 18 | 25 | гидрохлорид | 0,97 | >35,0 (сливной рост) |
| 2 | 46 | 37 | ацетат | 0,5 | 31,3±2,6 |
| 3 | 77 | 85 | сукцинат | 0,85 | >35,0 (сливной рост) |
| 4 | 89 | 74 | цитрат | 0,75 | >35,0 (сливной рост) |
| 5 | 86 | 69 | цитрат | 0,5 | 27,9±3,2 |
| 6 | 64 | 81 | ацетат | 0,75 | 29,6±3,8 |
| 1c | 40 | 35 | основание | 0 | 25,1±2,8 |
| 2c | 45 | 25 | основание | 0 | 28,0±3,7 |
| 3c | 38 | 31 | основание | 0 | >35,0 (сливной рост) |
| Контрольная группа | 11,3±2,6 |
Приведенные данные показывают, что фармацевтически приемлемые соли сополимеров, полученные в соответствии с изобретением, на 10-30% активнее соединений, раскрытых в публикации RU 2000004 (примеры 1c, 2c и 3c в таблице выше).
Пример 9. Исследование сочетанного действия антибиотиков и сополимеров на основе N-винилпирролидона при сибирской язве
Исследования проводят на беспородных белых мышах массой 18-20 г, разделенных на группы по 10 особей. За 24 часа до введения препаратов мышей заражают подкожной инъекцией (102 спор/1 мл) вирулентного штамма №76 возбудителя сибирской язвы. Антибиотики (тетрациклин, 500 Ед; стрептомицин, 1500 Ед) вводят подкожно в объеме 0,2 мл 2%-ного раствора сополимера в физиологическом растворе однократно (I) или в течение 7 суток (VII). Оценкой эффективности является процент выживания мышей в опытных группах по сравнению с контрольной группой и сроки гибели мышей за период наблюдения 14 суток. Результаты представлены в таблице 4.
| Таблица 4 | |||||||
| Пр. | Свойства сополимеров | Кратность введения | % выживания | Сроки гибели, сутки | |||
| Mµ, кДа | n | форма | m | ||||
| 1 | 18 | 25 | гидрохлорид | 0,97 | (I) | 10 | 3, 4, 5 |
| (VII) | 90 | 10 | |||||
| 2 | 46 | 37 | ацетат | 0,5 | (I) | 20 | 4, 6 |
| (VII) | 100 | - | |||||
| 3 | 77 | 85 | сукцинат | 0,85 | (I) | 30 | 5, 6 |
| (VII) | 100 | - | |||||
| 4 | 89 | 74 | цитрат | 0,75 | (I) | 20 | 3, 5 |
| (VII) | 90 | 12 | |||||
| 5 | 86 | 69 | цитрат | 0,5 | (I) | 20 | 6, 7 |
| (VII) | 80 | 9, 10 | |||||
| 6 | 64 | 81 | ацетат | 0,75 | (I) | 20 | 3, 5 |
| (VII) | 100 | - | |||||
| 1c | 40 | 35 | основание | 0 | (I) | 0 | 3, 4, 6 |
| (VII) | 20 | 9, 11 | |||||
| 2c | 45 | 25 | основание | 0 | (I) | 0 | 3, 4, 5 |
| (VII) | 80 | 9 | |||||
| 3c | 38 | 31 | основание | 0 | (I) | 0 | 3, 4 |
| (VII) | 80 | 6 | |||||
| 4c | 30 | 40 | основание | 0 | (I) | 0 | 3, 4 |
| (VII) | 100 | - |
Приведенные данные показывают, что фармацевтически приемлемые соли сополимеров, полученные в соответствии с изобретением, эффективнее соединений, раскрытых в публикации RU 2000004 (примеры 1c, 2c, 3c и 4c в таблице выше).
Пример 10. Исследование действия сополимеров на основе N-винилпирролидона на продуцирование интерлейкина-1
Эффективность сополимеров, полученных в соответствии с изобретением, в качестве активаторов продуцирования интерлейкина-1α (IL-1α) и интерлейкина-1β (IL-1β) оценивают в соответствии с требованиями Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Минздрав РФ, 2000, с.257-260). Полученные данные приведены в таблице 5.
| Таблица 5 | ||||||||||
| Пр. | Свойства сополимеров | IL | Норма | Уровень IL (y.e.) при концентрации сополимера в крови крыс (мкг/мл) | ||||||
| Mµ, кДа | n | (Ф) | m | 0,01 | 0,1 | 1 | 10 | |||
| 1 | 18 | 25 | ГХ | 0,97 | 1α | 2,1±1,1 | 2,8±1,2 | 6,8±2, | 7,0±2,1 | 4,7±1,7 |
| 1β | 2,7±1,3 | 4,0±1,4 | 4,2±2,1 | 4,9±2,4 | 3,5±1,9 | |||||
| 2 | 46 | 37 | Ац | 0,5 | 1α | 2,1±1,1 | 2,9±1/3 | 6,5±2,4 | 7,1±2,3 | 4,9±1,6 |
| 1β | 2,7±1,3 | 3,7±1,5 | 3,9±2,3 | 4,5±2,3 | 3,2±1,8 | |||||
| 3 | 77 | 85 | Сц | 0,85 | 1α | 2,1±1,1 | 2,7±0,9 | 6,4±2,5 | 6,5±2,5 | 4,6±1,7 |
| Iβ | 2,7±1,3 | 3,8±1,2 | 4,0±2,0 | 4,6±2,2 | 3,1±1,9 | |||||
| 4 | 89 | 74 | Цт | 0,75 | 1α | 2,1±1,1 | 3,0±1,1 | 6,9±2,2 | 7,2±2,7 | 5,0±1,5 |
| 1β | 2,7±1,3 | 3,9±1,3 | 4,3±2,1 | 4,8±2,2 | 3,5±1,6 | |||||
| 5 | 86 | 69 | Цт | 0,5 | 1α | 2,1±1,1 | 2,7±1,2 | 6,4±2,6 | 6,6±2,4 | 4,6±1,8 |
| 1β | 2,7±1,3 | 4,0±1,0 | 4,3±2,2 | 4,9±2,1 | 3,5±1,7 | |||||
| 6 | 64 | 81 | Ац | 0,75 | 1α | 2,1±1,1 | 2,9±1,2 | 6,6±2,4 | 6,9±2,5 | 4,8±1,5 |
| 1β | 2,7±1,3 | 3,8±1,5 | 4,1±2,3 | 4,7±2,0 | 3,3±1,6 | |||||
| 1с | 22 | 25 | Ос | 0 | 1α | 2,1±1,1 | 2,2±1,0 | 5,1±2,2 | 5,3±2,4 | 3,7±1,9 |
| 1α | 2,7±1,3 | 3,1±2,1 | 3,3±2,4 | 3,8±1,8 | 2,7±1,7 | |||||
| Форма (Ф): | ||||||||||
| ГХ - гидрохлорид; Ац - ацетат; Сц - сукцинат; Цт - цитрат; Ос - основание. |
Приведенные данные показывают, что фармацевтически приемлемые соли сополимеров, полученные в соответствии с изобретением, на 20-30% эффективнее соединений, раскрытых в публикации RU 2430932 (пример 1c).
Пример 11. Исследование действия сополимеров на основе N-винилпирролидона в качестве активаторов фагоцитоза (активация перитонеальных макрофагов)
Беспородных белых мышей массой 18-25 г разделяют на группы по 5 животных. Животным внутримышечно вводят раствор сополимера в объеме около 250 мкл из расчета получения дозы 5 мг/кг или 50 мг/кг. Животным контрольной группы внутримышечно вводят 250 мкл физиологического раствора.
Исследование проводят через 24 часа после введения сополимера мышам. Через 10 минут после внутрибрюшинного введения 2 мл 0,05% суспензии коллоидной туши брюшную полость мышей промывают 5 мл изотонического раствора NaCl. Собранные клетки перитонеального экссудата трижды отмывают и суспендируют в 1 мл изотонического раствора NaCl. Процент фагоцитирующих клеток (% ФК) определяют по результатам микроскопического подсчета.
После этого клетки осаждают центрифугированием, удаляют супернатант и осадок клеток лизируют водой для инъекций. Лизаты помещают в фотометрические планшеты и определяют светопоглощение при длине волны 620 нм, пропорциональное количеству туши, поглощенной перитонеальными фагоцитами. Фагоцитарный индекс (ФИ), вычисляемый как отношение светопоглощения к числу фагоцитирующих клеток, отражает степень активации фагоцитоза. Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ), т.е. отношение среднего числа частиц (ФК), поглощенное одной фагоцитирующей клеткой за 1 ч, к ФК за 2,5 ч, отражает переваривающую способность фагоцитов (таблица 6). Приведенные в ней данные показывают, что фармацевтически приемлемые соли сополимеров, полученные в соответствии с изобретением, на 25-35% эффективнее соединений, раскрытых в публикации RU 2430932 (пример 1c в таблице выше).
| Таблица 6 | ||||||||
| Свойства сополимеров | Доза, мг/кг | Характеристики | ||||||
| Пр. | Mµ, кДа | n | (Ф) | m | % ФК | ФИ | ИЗФ | |
| 1 | 18 | 25 | ГХ | 0,97 | 5 | 80,4±4,1 | 8,3±0,6 | 32,3±6,1 |
| 50 | 91,9±1,7 | 11,1±0,9 | 42,0±11,3 | |||||
| 2 | 46 | 37 | Ац | 0,5 | 5 | 81,6±4,2 | 8,4±0,8 | 32,8±5,8 |
| 50 | 90,0±1,3 | 10,9±1,0 | 41,1±10,9 | |||||
| 3 | 77 | 85 | Сц | 0,85 | 5 | 81,0±2,9 | 8,4±0,7 | 32,5±5,9 |
| 50 | 94,3±1,1 | 11,4±0,9 | 43,1±11,6 | |||||
| 4 | 89 | 74 | Цт | 0/75 | 5 | 81,0±2,3 | 8,4±0,5 | 32,5±5,3 |
| 50 | 91,8±1,0 | 11,1±1,0 | 42,0±11,8 | |||||
| 5 | 86 | 69 | Цт | 0,5 | 5 | 77,4±3,9 | 8,0±0,6 | 31,1±5,6 |
| 50 | 87,9±1,5 | 10,6±0,9 | 40,2±10,7 | |||||
| 6 | 64 | 81 | Ац | 0,75 | 5 | 83,7±2,8 | 8,6±0,7 | 33,6±5,7 |
| 50 | 90,9±1,3 | 11,0±0,9 | 41,5±10,6 | |||||
| 1с | 22 | 25 | Ос | 0 | 5 | 61,0±3,9 | 6,3±0,7 | 24,5±5,5 |
| 50 | 68,7±1,3 | 8,3±1,0 | 31,4±12,8 | |||||
| Контрольная группа | 0 | 56,0±5,7 | 7,0±1,0 | 13,5±5,1 | ||||
| Форма (Ф): | ||||||||
| ГХ - гидрохлорид; Дц - ацетат; Сц - сукцинат; Цт - цитрат; Ос - основание. |
Сополимер на основе N-винилпирролидона в форме фармацевтически приемлемых аддитивных солей кислот, представленный общей формулой (I):
отличающийся тем, что R обозначает водород или метил;
содержание мономерных звеньев n составляет 25-90 мол.%;
Х обозначает анион фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты;
k равно 1 или 2;
m принимает значения от 0,1 до 1,0;
и средневязкостная молекулярная масса сополимера Мµ равна 15-150 кДа.
