Новое цианопиримидиновое производное

Настоящее изобретение относится к новому N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамиду формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают безопасным и мощным агонистическим воздействием в отношении аденозинового A2a рецептора и могут найти применение для лечения или профилактики глазного заболевания, в частности глаукомы.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель, а также к способу лечения глазного заболевания, и к водному жидкому препарату для получения глазных капель. Водный жидкий препарат содержит указанную фармацевтическую композицию и, возможно, дополнительно содержит одну или несколько добавок, выбранных из фармацевтически приемлемого буфера, изотонического средства, консерванта, солюбилизатора и регулятора pH. Буфер обычно выбирают из янтарной кислоты, борной кислоты, фосфорной кислоты, аминокислоты и ее фармацевтически приемлемой соли. Предпочтительна янтарная кислота. Изотоническое средство представляет собой одно или два изотонических средства, выбранных из глюкозы, сорбита, маннита, хлорида натрия, хлорида калия, пропиленгликоля и глицерина. Консервант выбирают из хлорида бензалкония, хлорида бензетония, бромида бензододециния, глюконата хлоргексидина, метил-пара-оксибензоата, пропил-пара-оксибензоата, хлорбутанола и бензилового спирта. Значение pH составляет приблизительно от 5,0 до 9,0. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 15 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новому цианопиримидиновому соединению и к фармацевтической композиции и составу, содержащим данное соединение.

Уровень техники

Аденозин представляет собой вещество, которое может проявлять различную физиологическую активность при связывании с рецептором на поверхности клетки. Аденозиновый рецептор на поверхности клетки принадлежит к семейству рецепторов, сопряженных с G белками, и классифицирован на A1, A2a, A2b и A3. Среди них аденозиновые А1 и А3 рецепторы сопряжены с Gi-белком, и их активация приводит к снижению внутриклеточного содержания цАМФ. В дополнение, аденозиновые А2а и А2b рецепторы сопряжены с Gs-белком, и их активация приводит к повышению внутриклеточного содержания цАМФ. Указанные 4 вида подтипов аденозиновых рецепторов были клонированы.

Уже сообщалось об исследовании целого ряда агонистов и антагонистов, которые могут воздействовать на каждый из вышеперечисленных подтипов аденозиновых рецепторов. В них сообщалось, что агонисты аденозинового А2а рецептора не только проявляют мощное антигипертензивное действие и применимы в качестве упомянутых выше лекарств, таких как гипотензивное средство, лекарство для лечения/профилактики ишемической болезни сердца и головного мозга и антиартериосклеротическое средство, но также проявляет внутриглазное гипотензивное действие (см. J. Pharmcol. Exp. Ther. 320-326, 273 (1995).

В WO 2005/105778 раскрыты цианопиримидиновые соединения, которые являются агонистами аденозинового А2а рецептора. Однако в WO 2005/105778 не раскрыты какие-либо конкретные цианопиримидиновые соединения подобно настоящему изобретению.

Раскрытие сущности изобретения

Задача, подлежащая решению настоящим изобретением

Целью настоящего изобретения является предоставление нового соединения, обладающего безопасной и мощной агонистической активностью в отношении аденозинового А2а рецептора.

Средства решения задачи

Авторы настоящего изобретения провели обширные исследования для достижения упомянутой цели, и обнаружили, что следующие соединения проявили мощную агонистическую активность в отношении аденозинового А2а рецептора, а также превосходную безопасность. В дополнение, авторы настоящего изобретения также обнаружили, что следующие соединения проявили сосудорелаксирующее действие на цилиарную артерию глаза и нейропротекторное действие на ганглиозные клетки сетчатки. Настоящее изобретение было оформлено путем проведения дополнительных исследований, основанных на указанных открытиях.

Настоящее изобретение относится к цианопиримидиновому соединению, представленному в последующем Пункте 1, к содержащей соединение композиции и составу, к использованию соединения, к способу лечения или профилактики заболевания и к методу получения соединения.

Пункт 1. Цианопиримидиновое соединение формулы (1):

в которой R представляет собой атом водорода, гидрокси(низший алкил)группу, галоид(низший алкил)группу или (низшая алкокси)карбонил(низший алкил)группу,

или его соль.

Пункт 2. Цианопиримидиновое соединение по пункту 1, которое выбирают из группы, состоящей из

(1) N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида,

(2) N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида,

(3) N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(3-гидроксипропил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида,

(4) N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(2-фторэтил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида, и

(5) N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(2-метоксикарбонилэтил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида,

или его соли.

Пункт 3. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по пункту 1 или 2 или его соль и фармацевтически приемлемый носитель.

Пункт 4. Фармацевтическая композиция по пункту 3 для лечения или профилактики глазного заболевания.

Пункт 5. Фармацевтическая композиция по пункту 4 для лечения или профилактики глаукомы.

Пункт 6. Применение соединения по пункту 1 или 2 или его соли в качестве агониста аденозинового A2a рецептора.

Пункт 7. Способ лечения глазного заболевания, который включает введение млекопитающему или человеку, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по пункту 1 или 2 или его соли.

Пункт 8. Водный жидкий препарат, содержащий фармацевтическую композицию по пункту 3.

Пункт 9. Водный жидкий препарат по пункту 8, который дополнительно содержит одну или несколько добавок, выбранных из фармацевтически приемлемого буфера, изотонического средства, консерванта, солюбилизатора и регулятора pH.

Пункт 10. Водный жидкий препарат по пункту 9, где буфер выбирают из янтарной кислоты, борной кислоты, фосфорной кислоты, аминокислоты и ее фармацевтически приемлемой соли.

Пункт 11. Водный жидкий препарат по пункту 10, где буфер представляет собой янтарную кислоту.

Пункт 12. Водный жидкий препарат по пункту 8, где изотоническое средство представляет собой одно или два изотонических средства, выбранных из глюкозы, сорбита, маннита, хлорида натрия, хлорида калия, пропиленгликоля и глицерина.

Пункт 13. Водный жидкий препарат по пункту 9, где консервант выбирают из хлорида бензалкония, хлорида бензетония, бромида бензододециния, глюконата хлоргексидина, метил-пара-оксибензоата, пропил-пара-оксибензоата, хлорбутанола и бензилового спирта.

Пункт 14. Водный жидкий препарат по любому из пунктов 8-13, где значение pH составляет приблизительно от 5,0 до 9,0.

Каждая группа, определенная в упомянутой выше общей формуле, конкретно означает следующее.

Используемый в настоящем документе "атом галогена" включает атомы фтора, хлора, брома и йода.

Используемая в настоящем документе "(низшая алкокси)карбонильная группа" включает алкоксикарбонильную группу, в которой алкокси-фрагмент представляет собой неразветвленную или разветвленную алкоксигруппу, содержащую 1-6 атомов углерода. Более детально, она включает, например, метоксикарбонил, этоксикарбонил, н-пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, н-бутоксикарбонил, изобутоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, втор-бутоксикарбонил, н-пентилоксикарбонил, неопентилоксикарбонил, н-гексилоксикарбонил, изогексилоксикарбонил, 3-метилпентилоксикарбонил, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "галоид(низший алкил)группа" включает низшую алкильную группу (предпочтительно неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода), замещенную 1-7 атомами галогена, предпочтительно 1-3 атомами галогена. Более детально, она включает, например, фторметил, дифторметил, трифторметил, хлорметил, дихлорметил, трихлорметил, бромметил, дибромметил, фторметил, 2,2-дифторэтил, 2,2,2-трифторэтил, пентафторэтил, 2-фторэтил, 2-хлорэтил, 3,3,3-трифторпропил, гептафторпропил, 2,2,3,3,3-пентафторпропил, гептафторизопропил, 3-хлорпропил, 2-хлорпропил, 3-бромпропил, 4,4,4-трифторбутил, 4,4,4,3,3-пентафторбутил, 4-хлорбутил, 4-бромбутил, 2-хлорбутил, 5,5,5-трифторпентил, 5-хлорпентил, 6,6,6-трифторгексил, 6-хлоргексил, перфторгексил, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "гидрокси(низший алкил)группа" включает упомянутую выше низшую алкильную группу (предпочтительно неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода), замещенную 1-5 гидроксигруппами, предпочтительно 1-3 гидроксигруппами. Более детально, она включает, например, гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 1-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил, 2,3-дигидроксипропил, 4-гидроксибутил, 3,4-дигидроксибутил, 1,1-диметил-2-гидроксиэтил, 5-гидроксипентил, 6-гидроксигексил, 3,3-диметил-3-гидроксипропил, 2-метил-3-гидроксипропил, 2,3,4-тригидроксибутил, пергидроксигексил, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "(низшая алкокси)карбонил(низший алкил)группа" включает упомянутую выше низшую алкильную группу (предпочтительно неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода), содержащую 1-3 (предпочтительно 1-2) упомянутые выше (низшая алкокси)карбонильные группы (предпочтительно неразветвленные или разветвленные алкоксикарбонильные группы, содержащие 1-6 атомов углерода). Более детально, она включает, например, метоксикарбонилметил, этоксикарбонилметил, 1-метоксикарбонилэтил, 2-метоксикарбонилэтил, 2-этоксикарбонилэтил, 1-этоксикарбонилэтил, 2-трет-бутоксикарбонилэтил, 3-метоксикарбонилпропил, 3-этоксикарбонилпропил, 4-этоксикарбонилбутил, 5-изопропоксикарбонилпентил, 6-н-пропоксикарбонилгексил, 1,1-диметил-2-н-бутоксикарбонилэтил, 1-метил-1-метоксикарбонилэтил, 2-метил-1-метоксикарбонилпропил, 2-метил-3-трет-бутоксикарбонилпропил, 3-метил-1-метоксикарбонилбутил, диэтоксикарбонилметил, 1,2-диэтоксикарбонилэтил, 2-н-пентилоксикарбонилэтил, н-гексилоксикарбонилметил, и тому подобное.

Пиримидиновые производные, обозначенные упомянутой выше общей формулой (1), могут быть получены различными способами. В качестве примера, производные могут быть получены в соответствии со следующими схемами 1-4.

Схема 1

где Ra представляет собой гидрокси(низший алкил)группу, галоид(низший алкил)группу или (низшая алкокси)карбонил(низший алкил)группу; X представляет собой атом галогена или группу, которая может участвовать в реакции замещения подобно атому галогена.

Атом галогена, который обозначен как X в соединении формулы (2), включает атомы фтора, хлора, брома и йода.

Группа, которая может участвовать в реакции замещения подобно атому галогена, обозначенная как X, включает, например, уходящую группу, такую как (низший алкан)сульфонилоксигруппа и арилсульфонилоксигруппа.

Используемая в настоящем документе "(низший алкан)сульфонилоксигруппа" включает неразветвленную или разветвленную алкансульфонилоксигруппу, содержащую 1-6 атомов углерода; более детально, она включает, например, метансульфонилокси, этансульфонилокси, изопропансульфонилокси, н-пропансульфонилокси, н-бутансульфонилокси, трет-бутансульфонилокси, н-пентансульфонилокси, н-гексансульфонилокси, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "арилсульфонилоксигруппа" включает, например, фенилсульфонилоксигруппу, нафтилсульфонилоксигруппу, и тому подобное. Фенил может содержать 1-3 заместителя, выбранные из группы, состоящей, например, из неразветвленной или разветвленной алкильной группы, содержащей 1-6 атомов углерода, неразветвленной или разветвленной алкоксигруппы, содержащей 1-6 атомов углерода, нитрогруппы и атома галогена. Конкретные примеры арилсульфонилоксигруппы включают, например, фенилсульфонилокси, 4-метилфенилсульфонилокси, 2-метилфенилсульфонилокси, 4-нитрофенилсульфонилокси, 4-метоксифенилсульфонилокси, 2-нитрофенилсульфонилокси, 3-хлорфенилсульфонилокси, и тому подобное. Конкретные примеры нафтилсульфонилоксигруппы включают, например, α-нафтилсульфонилокси, β-нафтилсульфонилокси, и тому подобное.

Соединение формулы (1b) может быть получено путем осуществления взаимодействия Соединения (1a) и Соединения (2).

Реакцию, как правило, проводят в традиционном растворителе, который не сказывается негативно на реакции, например, в воде; в спиртовом растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, трифторэтанол и этиленгликоль; в кетоновом растворителе, таком как ацетон или метилэтилкетон; в эфирном растворителе, таком как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир и диглим; в сложноэфирном растворителе, таком как метилацетат или этилацетат; в апротонном полярном растворителе, таком как ацетонитрил, N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид; в галогенуглеводородном растворителе, таком как хлористый метилен и хлористый этилен; или в других органических растворителях. Кроме того, реакция может проводиться в смеси упомянутых выше традиционных растворителей.

Упомянутые выше реакции, как правило, проводят в присутствии основания. Основание включает, в общем, неорганическое основание или органическое основание.

Используемое в настоящем документе "неорганическое основание" включает, например, щелочной металл, такой как натрий и калий; гидрокарбонат щелочного металла, такой как гидрокарбонат лития, гидрокарбонат натрия и гидрокарбонат калия; гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид цезия; карбонат щелочного металла, такой как карбонат лития, карбонат натрия, карбонат калия и карбонат цезия; низший алкоксид щелочного металла, такой как метоксид натрия и этоксид калия, гидрид щелочного металла, такой как гидрид натрия и гидрид калия; и тому подобное.

Используемое в настоящем документе "органическое основание" включает, например, триалкиламин, такой как триметиламин, триэтиламин и N-этилдиизопропиламин; пиридин; хинолин; пиперидин; имидазол; пиколин; диметиламинопиридин; диметиланилин; N-метилморфолин; 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (DBN); 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (DABCO); 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU); и тому подобное.

Основание может использоваться в качестве единственного ингредиента или в любом сочетании двух или более ингредиентов.

Количество используемого основания, как правило, является 0,5-10-кратным в молярном отношении относительно Соединения (1a), предпочтительно 0,5-6-кратным в молярном отношении относительно Соединения (1a). Если основание является жидким, то оно может также использоваться в качестве растворителя.

При необходимости, описанная выше реакционная среда может содержать йодид щелочного металла, такой как йодид калия или йодид натрия, в качестве ускорителя реакции.

Соотношение между Соединением (1a) и Соединением (2), используемыми в представленной выше Схеме 1, составляет, по крайней мере, 1 моль, предпочтительно 1-5 моль, Соединения (2) на 1 моль Соединения (1a).

Температура реакции не ограничивается, и реакция, как правило, может проводиться при охлаждении, при комнатной температуре или при нагревании. Предпочтительно, представленная выше реакция может проводиться приблизительно при комнатной температуре в течение 1-30 часов.

Схема 2

где значение R определено выше.

Соединение (1) может быть получено путем осуществления взаимодействия Соединения (3) или его реакционно-способного производного, в котором активирована карбоксильная группа, и Соединения (4) или его реакционно-способного производного, в котором активирована иминогруппа.

Предпочтительная реакционно-способная форма карбоксильной группы в Соединении (3) включает галоидангидрид, ангидрид кислоты, активный амид, активный сложный эфир, и тому подобное. Предпочтительные примеры реакционно-способной формы карбоксильной группы включают хлорангидрид; азид кислоты, смешанный ангидрид защищенной фосфорной кислоты (например, диалкилфосфорная кислота, фенилфосфорная кислота, дифенилфосфорная кислота, дибензилфосфорная кислота и галоидзамещенная фосфорная кислота), диалкилфосфорной кислоты, сернистой кислоты, тиосерной кислоты, серной кислоты, сульфоновой кислоты (например, метансульфоновая кислота), алифатической кислоты (например, уксусная кислота, пропионовая кислота, масляная кислота, изомасляная кислота, пивалевая кислота, валериановая кислота, изовалериановая кислота, 2-этилмасляная кислота, трихлоруксусная кислота) или ароматической кислоты (например, бензойная кислота); симметричный ангидрид кислоты; активный амид имидазола, 4-замещенного имидазола, диметилпиразола, триазола или тетразола; активный сложный эфир (например, сложный цианометиловый эфир, сложный метоксиметиловый эфир, сложный диметилиминометиловый эфир, сложный виниловый эфир, сложный пропаргиловый эфир, сложный пара-нитрофениловый эфир, сложный 2,4-динитрофениловый эфир, сложный трихлорфениловый эфир, сложный пентахлорфениловый эфир, сложный мезилфениловый эфир, и тому подобное) или сложный эфир с N-гидроксисоединением (например, N,N-диметилгидроксиламин, 1-гидрокси-2-(1H)-пиридон, N-гидроксисукцинимид, N-гидроксифталимид, 1-гидрокси-1H-бензотриазол, и тому подобное). В зависимости от типа подлежащего использованию Соединения (3) возможен выбор любого общедоступного соединения из указанных реакционно-способных производных.

В том случае, когда в представленной выше реакции Соединение (3) используют в качестве свободной кислоты или ее соли, реакцию предпочтительно проводят в присутствии конденсирующего агента. Конденсирующий агент включает традиционный и хорошо известный агент, например, N,N'-дихлоргексилкарбодиимид; N-циклогексил-N'-мофолиноэтилкарбодиимид; N-циклогексил-N'-(4-диэтиламиноциклогексил)карбодиимид; N,N'-диэтилкарбодиимид; N,N'-диизопропилкарбодиимид; N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид или его гидрохлорид; N,N'-карбонилбис(2-метилимидазол); пентаметиленкетен-N-циклогексилимин; дифенилкетен-N-циклогексилимин; этоксиацетилен, 1-алкокси-1-хлорэтилен; триалкилфосфит; этилполифосфат; изопропилполифосфат; оксихлорид фосфора (сульфонилхлорид); трихлорид фосфора; дифенилсульфонилазид; тионилхлорид; оксалилхлорид; (низший алкил)галоидформиат (например, этилхлороформиат, изопропилхлороформиат, и тому подобное); трифенилфосфин, соль 2-этил-7-гидроксибензизоксазолия; внутренняя соль 2-этил-5-(мета-сульфонфенил)изоксазолия гидроксида; бензотразол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат; 1-(пара-хлорбензолсульфонилокси)-6-хлор-1H-бензотриазол; реагент Вильсмайера, который получают путем осуществления взаимодействия N,N-диметилформамида с тионилхлоридом, фосгеном, трихлорметилхлороформиатом, оксихлоридом фосфора, и тому подобное. Более предпочтительно, реакцию проводят в присутствии упомянутого выше конденсирующего агента в сочетании с активным эстерифицирующим агентом, таким как N-гидроксисукцинимид, N-гидроксифталимид и 1-гидрокси-1H-бензотриазол.

Предпочтительное реакционно-способное производное иминогруппы в Соединении (4) включают иминогруппу типа основания Шиффа или ее таутомер типа енамина, который получают путем осуществления взаимодействия Соединения (4) и карбонильного соединения, такого как альдегид или кетон; силильное производное, которое получают путем осуществления взаимодействия Соединения (4) и силильного соединения, такого как бис(триметилсилил)ацетамид, моно(триметилсилил)ацетамид и бис(триметилсилил)мочевина; производное, которое получают путем осуществления взаимодействия Соединения (4) и трихлорид фосфора, фосген, и тому подобное.

Реакцию, как правило, проводят в традиционном растворителе, который не сказывается негативно на реакции, например, в воде; в спиртовом растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, трифторэтанол и этиленгликоль; в кетоновом растворителе, таком как ацетон или метилэтилкетон; в эфирном растворителе, таком как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир и диглим; в сложноэфирном растворителе, таком как метилацетат или этилацетат; в апротонном полярном растворителе, таком как ацетонитрил, N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид; в углеводородном растворителе, таком как н-пентан, н-гексан, н-гептан и циклогексан; в галогенуглеводородном растворителе, таком как хлористый метилен и хлористый этилен; или в других органических растворителях. Кроме того, реакция может проводиться в смеси упомянутых выше традиционных растворителей.

Представленная выше реакция может проводиться в присутствии основания. Основание включает целый ряд известных неорганических и органических оснований. Используемое в настоящем документе "неорганическое основание" включает, например, щелочной метал, такой как натрий и калий; гидрокарбонат щелочного металла, такой как гидрокарбонат лития, гидрокарбонат натрия и гидрокарбонат калия; гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид цезия; карбонат щелочного металла, такой как карбонат лития, карбонат натрия, карбонат калия и карбонат цезия; низший алкоксид щелочного металла, такой как метоксид натрия и этоксид калия, гидрид щелочного металла, такой как гидрид натрия и гидрид калия; и тому подобное. Используемое в настоящем документе "органическое основание" включает, например, триалкиламин, такой как триметиламин, триэтиламин и N-этилдиизопропиламин; пиридин; хинолин; пиперидин; имидазол; пиколин; диметиламинопиридин; диметиланилин; N-метилморфолин; 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (DBN); 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (DABCO); 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU); и тому подобное. Если основание является жидким, то оно может также использоваться в качестве растворителя. Основание может использоваться в качестве единственного ингредиента или в любом сочетании двух или более ингредиентов. Количество используемого основания, как правило, является 0,1-10-кратным в молярном отношении относительно Соединения (3), предпочтительно 0,1-3-кратным в молярном отношении относительно Соединения (3).

Соотношение между Соединением (3) и Соединением (4), используемыми в представленной выше Схеме 2, составляет, по крайней мере, 1 моль, предпочтительно 1-5 моль, Соединения (3) на 1 моль Соединения (4).

Температура реакции не ограничивается, и реакция, как правило, может проводиться при охлаждении, при комнатной температуре или при нагревании. Предпочтительно, представленная выше реакция может проводиться при температуре от комнатной температуры до 100°C в течение от 30 минут до 30 часов, предпочтительно в течение от 30 минут до 5 часов.

Соединение (3), использованное в качестве исходного вещества в представленной выше реакции, является хорошо известным соединением, и методика получения этого соединения описана ниже (Схема 4).

Схема 3

где W представляет собой N-защитную группу.

Соединение (6) может быть получено путем осуществления взаимодействия Соединения (3) и Соединения (5) способом, аналогичным представленному на Схеме 2. Кроме того, Соединение (1a) может быть получено путем удаления N-защитной группы.

N-защитная группа, обозначенная в настоящем документе как W, включает, например, (низшая алкокси)карбонильную группу, низшую алканоильную группу, арилзамещенную (низший алкил)группу, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "(низшая алкокси)карбонильная группа" включает неразветвленную или разветвленную алкоксикарбонильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, например, метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, бутоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, пентилоксикарбонил, гексилоксикарбонил, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "низшая алканоильная группа" включает неразветвленную или разветвленную алканоильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, например, формил, ацетил, пропионил, бутирил, изобутирил, пентаноил, трет-бутилкарбонил, гексаноил, и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "арилзамещенная (низший алкил)группа" включает, например, бензил, 2-фенилэтил, 1-фенилэтил, 3-фенилпропил, 4-фенилбутил, 5-фенилпентил, 6-фенилгексил, дифенилметил, тритил, и тому подобное, и неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, которая замещена 1-3 фенильными группами. Заместитель фенильной группы включает, например, неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена 1-3 группами, выбранными из группы, состоящей из атома галогена и гидроксигруппы (например, метил, этил, пропил, n-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил, гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 1-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил, 2,3-дигидроксипропил, 4-гидроксибутил, 1,1-диметил-2-гидроксиэтил, 5,5,4-тригидроксипентил, 5-гидроксипентил, 6-гидроксигексил, 1-гидроксиизопропил, 2-метил-3-гидроксипропил, трифторметил, трихлорметил, хлорметил, бромметил, фторметил, йодметил, дифторметил, дибромметил, 2-хлорэтил, 2,2,2-трифторэтил, 2,2,2-трихлорэтил, 3-хлорпропил, 2,3-дихлорпропил, 4,4,4-трихлорбутил, 4-фторбутил, 5-хлорпентил, 3-хлор-2-метилпропил, 5-бромгексил, 5,6-дихлоргексил, 3-гидрокси-2-хлорпропил, и тому подобное); неразветвленную или разветвленную алкоксигруппу, содержащую 1-6 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена 1-3 группами, выбранными из группы, состоящей из атома галогена и гидроксигруппы (например, метокси, этокси, пропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентилокси, н-гексилокси, гидроксиметокси, 2-гидроксиэтокси, 1-гидроксиэтокси, 3-гидроксипропокси, 2,3-дигидроксипропокси, 4-гидроксибутокси, 1,1-диметил-2-гидроксиэтокси, 5,5,4-тригидроксипентилокси, 5-гидроксипентилокси, 6-гидроксигексилокси, 1-гидроксиизопропокси, 2-метил-3-гидроксипропокси, трифторметокси, трихлорметокси, хлорметокси, бромметокси, фторметокси, йодметокси, дифторметокси, дибромметокси, 2-хлорэтокси, 2,2,2-трифторэтокси, 2,2,2-трихлорэтокси, 3-хлорпропокси, 2,3-дихлорпропокси, 4,4,4-трихлорбутокси, 4-фторбутокси, 5-хлорпентилокси, 3-хлор-2-метилпропокси, 5-бромгексилокси, 5,6-дихлоргексилокси, 3-гидрокси-2-хлорпропокси, и тому подобное); и атом галогена (например, атома фтора, брома, хлора, йода). В том случае, когда на фенильной группе присутствуют 2 или более заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

Удаление N-защитной группы: W может проводиться традиционным способом, таким как гидролиз и гидрирование. Реакцию, как правило, проводят в подходящем растворителе, который не сказывается негативно на реакции, например, в воде; в спиртовом растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, трифторэтанол и этиленгликоль; в кетоновом растворителе, таком как ацетон или метилэтилкетон; в эфирном растворителе, таком как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, диметоксиэтан и диглим; в сложноэфирном растворителе, таком как метилацетат или этилацетат; в апротонном полярном растворителе, таком как ацетонитрил, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид и N-метилпирролидон; в галогенуглеводородном растворителе, таком как хлористый метилен и хлористый этилен; или в других органических растворителях. Кроме того, реакция может проводиться в смеси упомянутых выше традиционных растворителей.

(i) Гидролиз:

Гидролиз предпочтительно проводят в присутствии основания или кислоты, включая льюисову кислоту.

Используемое в настоящем документе "основание" включает традиционные неорганические и органические основания. Предпочтительное неорганическое основание включает, например, щелочной метал, такой как натрий и калий; щелочно-земельный металл, такой как магний или кальций; гидроксид, карбонат или гидрокарбонат щелочного или щелочно-земельного металла. Предпочтительное органическое основание включает, например, триалкиламин, такой как триметиламин и триэтиламин; пиколин; 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен; и тому подобное.

Используемая в настоящем документе "кислота" включает традиционные неорганические и органические кислоты. Предпочтительная органическая кислота включает, например, алифатическую кислоту, такую как муравьиная кислота, уксусная кислота и пропионовая кислота; и тригалоидзамещенную уксусную кислоту, такую как трихлоруксусная кислота и трифторуксусная кислота. Предпочтительная неорганическая кислота включает, например, соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, хлороводород, бромоводород, и тому подобное. Используемая в настоящем документе "льюисова кислота" включает, например, бора трифторидэтерат, бора трибромид, алюминия хлорид, железа (III) хлорид, и тому подобное.

В том случае, когда в качестве кислоты используют тригалоидзамещенную уксусную кислоту или льюисову кислоту, реакцию предпочтительно проводят в присутствии ловушки катионов, такой как анизол или фенол.

Количество используемого основания или кислоты не ограничивается, пока количества достаточно для проведения гидролиза.

Температура реакции, как правило, составляет от 0 до 120°C, предпочтительно от комнатной температуры до 100°C, и более предпочтительно от комнатной температуры до 80°C. Продолжительность реакции, как правило, составляет от 30 минут до 24 часов, предпочтительно от 30 минут до 12 часов, и более предпочтительно от 1 до 8 часов.

(ii) Гидрирование:

Используемое в настоящем документе "гидрирование" может проводиться посредством традиционного/известного способа гидрирования. Традиционные способы гидрирования включают, например, химическое восстановление, каталитическое восстановление, и тому подобное.

Предпочтительный восстановитель, используемый при химическом восстановлении, включает гидрид, такой как йодоводород, сероводород, алюмогидрид лития, боргидрид натрия и цианоборгидрид натрия; или металл, такой как олово, цинк или железо; или сочетание металлосодержащего соединения (например, хлорид хрома, ацетат хрома, и тому подобное) и органической или неорганической кислоты (например, муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, трифторуксусная кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, соляная кислота, бромистоводородная кислота, и тому подобное).

Предпочтительный катализатор, используемый при каталитическом восстановлении, включает платиновый катализатор, такой как платиновая пластина, губчатая платина, платиновая чернь, коллоидная платина, диоксид платины и платиновая проволока; палладиевый катализатор, такой как губчатый палладий, палладиевая чернь, оксид палладия, палладированный уголь, палладия/бария сульфат, и палладия/бария карбонат; никелевый катализатор, такой как порошковый никель, оксид никеля и никель Ренея; кобальтовый катализатор, такой как порошковый кобальт и кобальт Ренея; железный катализатор, такой как порошковое железо; и тому подобное.

Если кислота, используемая при химическом восстановлении, является жидкой, то она может также использоваться в качестве растворителя.

Количество восстановителя или катализатора, используемого при каталитическом восстановлении, может без ограничения представлять собой обычно используемое количество.

Температура реакции, как правило, составляет от 0 до 120°C, предпочтительно от комнатной температуры до 100°C, и более предпочтительно от комнатной температуры до 80°C. Продолжительность реакции, как правило, составляет от 30 минут до 24 часов, предпочтительно от 30 минут до 10 часов, и более предпочтительно от 30 минут до 4 часов.

Схема 4

Соединение (3) может быть получено путем осуществления взаимодействия Соединения (5) и Соединения (6). Реакцию проводят в соответствии со ссылкой (El-Sharabsy, S.A.; Abdel Gawad, S.M.; Hussain, S.M.; J. Prakt. Chem., 1989, 331(2), 207) или сходным с ней способом.

Реакцию, как правило, проводят в подходящем растворителе, который не сказывается негативно на реакции, например, в воде; в спиртовом растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, трифторэтанол и этиленгликоль; в кетоновом растворителе, таком как ацетон или метилэтилкетон; в эфирном растворителе, таком как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, и диглим; в сложноэфирном растворителе, таком как метилацетат или этилацетат; в апротонном полярном растворителе, таком как ацетонитрил, N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид; в галогенуглеводородном растворителе, таком как хлористый метилен и хлористый этилен; или в других органических растворителях. Кроме того, реакция может проводиться в смеси упомянутых выше традиционных растворителей.

Представленная выше реакция может проводиться в отсутствие каталитического соединения или в присутствии кислого катализатора. Как правило, реакцию предпочтительно проводят в присутствии основания. Основание включает, в общем, неорганические и органические основания.

Используемое в настоящем документе "неорганическое основание" включает, например, щелочной метал, такой как натрий и калий; гидрокарбонат щелочного металла, такой как гидрокарбонат лития, гидрокарбонат натрия и гидрокарбонат калия; гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид цезия; карбонат щелочного металла, такой как карбонат лития, карбонат натрия, карбонат калия и карбонат цезия; низший алкоксид щелочного металла, такой как метоксид натрия и этоксид калия, гидрид щелочного металла, такой как гидрид натрия и гидрид калия; и тому подобное.

Используемое в настоящем документе "органическое основание" включает, например, триалкиламин, такой как триметиламин, триэтиламин и N-этилдиизопропиламин; пиридин; хинолин; пиперидин; имидазол; пиколин; диметиламинопиридин; диметиланилин; N-метилморфолин; DBN; DABCO; DBU; и тому подобное.

Основание может использоваться в качестве единственного ингредиента или в любом сочетании из двух или более ингредиентов.

Количество используемого основания, как правило, является 10-кратным в молярном отношении относительно Соединения (5), предпочтительно 3,5-кратным в молярном отношении относительно Соединения (5). Если основание является жидким, то оно может также использоваться в качестве растворителя.

Соотношение между Соединением (6) и Соединением (5) составляет, по крайней мере, 1 моль Соединения (5) на 1 моль Соединения (6), предпочтительно 1-5 моль Соединения (5) на 1 моль Соединения (6).

Температура реакции не ограничивается, и реакция, как правило, может проводиться при охлаждении, при комнатной температуре или при нагревании. Предпочтительно, представленная выше реакция может проводиться при нагревании с обратным холодильником в течение 1-30 часов.

Если в реакции в качестве промежуточного продукта получается дигидроформа Соединения (7), то Соединение (7) может быть далее окислено с получением Соединения (8).

Окисление Соединения (7) может проводиться способом, традиционным в данной области техники. Предпочтительный окислитель включает, например, 2,3-дихлор-5,6-дициано-пара-бензохинон (DDQ), N-бромсукцинимид (NBS), и тому подобное.

Реакцию окисления, как правило, проводят без разбавления или в подходящем растворителе, который не сказывается негативно на реакции, например, в спиртовом растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, трифторэтанол и этиленгликоль; в кетоновом растворителе, таком как ацетон или метилэтилкетон; в эфирном растворителе, таком как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, и диглим; в сложноэфирном растворителе, таком как метилацетат или этилацетат; в апротонном полярном растворителе, таком как ацетонитрил, N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид; в галогенуглеводородном растворителе, таком как хлористый метилен и хлористый этилен; или в других органических растворителях. Кроме того, реакция может проводиться в смеси упомянутых выше традиционных растворителей.

Количество используемого окислителя, как правило, составляет от каталитического до молярного избытка относительно Соединения (7).

Температура реакции не ограничивается, и реакция, как правило, может проводиться при охлаждении, при комнатной температуре или при нагревании. Предпочтительно, представленная выше реакция может проводиться при нагревании с обратным холодильником в течение 0,5-75 часов.

Соединение (7) в представленной выше Схеме 4 включает изомер по двойной связи кольца. Соединение (4), используемое в качестве исходного вещества, является известным доступным соединением.

Исходное вещество, используемое в представленной выше схеме, может находиться в форме его соответствующей соли, и целевые продукты каждой реакции также могут представлять собой соответствующие соли.

Желаемые для каждого процесса соединения, описанные в каждой представленной выше схеме, и соединения по настоящему изобретению могут быть выделены и очищены в соответствии с традиционным способом, например, путем разделения неочищенного продукта реакции путем охлаждения, фильтрации, концентрации, экстракции, и тому подобное, с последующей очисткой неочищенного продукта путем хроматографии, перекристаллизации, и тому подобное.

Предпочтительная соль Соединения (1) представляет собой фармацевтически приемлемую соль и включает, например,

соль с неорганическим основанием, такую как соль металла (например, соль щелочного металла, такая как соль натрия и соль калия, соль щелочно-земельного металла, такая как соль кальция и соль магния), соль аммония, карбонат щелочного металла (например, карбонат лития, карбонат калия, карбонат натрия и карбонат цезия, и тому подобное), гидрокарбонат щелочного металла (например, гидрокарбонат лития, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, и тому подобное) и гидроксид щелочного металла (например, гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид цезия, и тому подобное);

соль с органическим основанием, таким как три(низший алкил)амин (например, триметиламин, триэтиламин, N-этилдиизопропиламин, и тому подобное), пиридин, хинолин, пиперидин, имидазол, пиколин, диметиламинопиридин, диметиланилин, N-(низший алкил)морфолин (например, N-метилморфолин, и тому подобное), DBN, DBU и DABCO;

соль неорганической кислоты, такую как гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, сульфат, нитрат, фосфат; и

соль органической кислоты, такую как формиат, ацетат, пропионат, оксалат, малонат, сукцинат, фумарат, малеат, лактат, малат, цитрат, тартрат, карбонат, пикрат, метансульфонат, этансульфонат, пара-толуолсульфонат и глутамат.

Исходное вещество, используемое в представленных выше схемах, может представлять собой свою соль, подобно Соединению (1), и целевые соединения каждой реакции также могут представлять собой соответствующие соли.

Кроме того, в каждую общую формулу включены сольваты исходных веществ и целевых соединений (например, гидрат, этанолят, и тому подобное). Предпочтительный сольват включает гидрат.

Соединения по настоящему изобретению формулы (1) включают изомер, такой как геометрический изомер, стереоизомер и оптический изомер.

Настоящее изобретение также включает соединение формулы (1), в котором один или несколько из включенных в соединение атомов заменены одним или несколькими их изотопами. Примеры изотопа, который может быть включен в соединение по настоящему изобретению, включает, например, изотопы атомов водорода, углерода, азота, кислорода, серы, фтора и хлора, и более детально, ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O, ¹⁸O, ¹⁸F, ³⁶Cl, и тому подобное. Конкретное меченное изотопом соединение, содержащее упомянутый(ые) выше изотоп(ы) и/или изотоп(ы) другого(их) атома(ов), например, соединение, содержащее радиоизотоп(ы), такой(ие) как ³H и ¹⁴C, применимо для топографического анализа соединения и/или вещества. Мечение тритием (т.е., ³H) или мечение C-14 (т.е., ¹⁴C) соединение особенно предпочтительно в свете простоты получения и обнаружения. Кроме того, предполагается, что соединение, содержащее тяжелый(ые) изотоп(ы), такой как дейтерий (т.е., ²H), также привнесет некоторые терапевтические преимущества, такие как улучшение метаболической стабильности (например, увеличения времени полужизни in vivo) и снижение дозировки. Соединения по настоящему изобретению, содержащие изотопный(ые) атом(ы), как правило, могут быть получены посредством упомянутых выше схем и/или последующих примеров, с использованием любых доступных меченных изотопами реагентов.

Соединения по настоящему изобретению и их соли обладают агонистической активностью в отношении аденозинового A2a рецептора, и, таким образом, они применимы в качестве агониста аденозинового A2a рецептора млекопитающих, включая человека. Соответственно, настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям в качестве лекарственного средства, такого как агонист аденозинового A2a рецептора.

Далее в настоящем документе фармацевтическую композицию необязательно называют «фармацевтическая композиция по настоящему изобретению».

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в виде обычной лекарственной формы, содержащей эффективное количество, по крайней мере, одного соединения, выбранного из группы, состоящей из соединений по настоящему изобретению и их солей, и некоторые фармацевтически приемлемые носители. Фармацевтически приемлемые носители, используемые в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут представлять собой твердое вещество, такое как наполнитель, или жидкость, такую как разбавитель. Примеры указанных носителей включают, например, лактозу, стеарат магния, крахмал, тальк, желатин, агар, пектин, аравийскую камедь, оливковое масло, кунжутное масло, масло какао, этиленгликоль, очищенную воду, и тому подобное.

В дополнение, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в виде стандартной лекарственной формы, приемлемой для введения. Примеры включают твердую и жидкую лекарственную форму, приемлемую для перорального введения, такую как таблетка, пилюля, капсула, гранула, порошок и жидкость, а также лекарственную форму для парентерального введения, такую как инъекция (внутривенная инъекция, внутримышечная инъекция, и тому подобное), глазные капли, офтальмическая мазь, суппозиторий, чрескожно всасываемое средство, и тому подобное. В частности, предпочтительной фармацевтической композицией являются глазные капли, так как считается, что фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может применяться в качестве средства, снижающего внутриглазное давление, лекарственного средства для лечения глаукомы, и тому подобное, исходя из ее агонистической активности в отношении аденозинового A2a рецептора.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в виде водной жидкости и далее применяться в качестве офтальмической фармацевтической композиции. Например, такая водная жидкая лекарственная форма может быть приготовлена следующим образом.

При необходимости, к соединению по настоящему изобретению (включая его соль, то же и далее в настоящем документе) необязательно добавляют одну или несколько добавок, выбранных из фармацевтически приемлемого буфера, изотонического вещества, консерванта, солюбилизатора и регулятора pH, и приготавливают желаемую водную лекарственную форму посредством стандартной технологии.

Буфер, используемый в водной жидкой лекарственной форме, включает, например, неорганическую кислоту, такую как борная кислота и фосфорная кислота; органическую кислоту, такую как аминокислота и янтарная кислота; и фармацевтически приемлемую соль. Предпочтительным буфером является янтарная кислота, фосфорная кислота и фосфорнокислый натрий. Буфер может применяться в качестве единственного ингредиента или в любом сочетании двух или нескольких ингредиентов.

Препарат, в котором в качестве буфера используют янтарную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, может предотвратить выпадение в осадок активного ингредиента в процессе продолжительного хранения, поскольку соль активного ингредиента с янтарной кислотой обладает высокой растворимостью.

Концентрация буфера в водном жидком препарате предпочтительно представляет собой концентрацию, минимально необходимую для предотвращения изменения pH, например, не более чем 2% (мас./об.), предпочтительно не более чем 0,6% (мас./об.), и наиболее предпочтительно не более чем 0,2% (мас./об.).

Регулятор pH, используемый в водном жидком препарате, включает, например, соляную кислоту, серную кислоту, молочную кислоту, уксусную кислоту, гидроксид калия, гидроксид натрия, гидроксид кальция, гидроксид магния, моноэтаноламин, триэтаноламин, диизопрапаноламин, триизопропаноламин и их фармацевтически приемлемые соли. Предпочтительный регулятор pH включает соляную кислоту и гидроксид натрия. Регулятор pH может применяться в качестве единственного ингредиента или в любой комбинации двух или нескольких ингредиентов.

Изотоническое вещество, используемое в водном жидком препарате, применяется для приготовления препарата, изотоничного по отношению к слезе. Используемое в настоящем документе изотоническое вещество представляет собой общепринятое для глазных капель вещество, и включает хлорид натрия, хлорид калия, борную кислоту, борат натрия, маннит, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, мальтозу, сахарозу, сорбит, глюкозу, и тому подобное, предпочтительно глицерин, глюкозу, маннит, пропиленгликоль и сорбит; наиболее предпочтительно глицерин. Изотоническое вещество может применяться в качестве единственного ингредиента или в любой комбинации двух или нескольких ингредиентов.

Препарат, в котором в качестве изотонического вещества применяется глицерин, может предотвращать осаждение активного ингредиента или родственных веществ в процессе продолжительного хранения, поскольку глицерин не сказывается негативно на растворимости активного ингредиента. Осмотическое давление водного жидкого препарата, который содержит изотоническое вещество, составляет, например, от 170 до 460 мОсм/кг, предпочтительно от 229 до 372 мОсм/кг, и наиболее предпочтительно от 256 до 316 мОсм/кг.

Используемый в настоящем документе консервант включает, например, соль четвертичного аммония, такую как бензалконий, бензетоний и бензододециний; катионное соединение, такое как хлоргексидин; параоксибензоат, такой как метилпараоксибензоат и пропилпараоксибензоат; и спиртовое соединение, такое как хлорбутанол и бензиловый спирт. Предпочтительный консервант включает хлорид бензалкония и бромид бензододециния, и наиболее предпочтительно хлорид бензалкония и бромид бензододециния, в котором алкильная цепь состоит лишь из 12 атомов углерода.

При необходимости, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать солюбилизатор. Используемый в настоящем документе солюбилизатор включает, например, полимер, такой как поливинилпирролидон, макрогол (полиэтиленгликоль), поливиниловый спирт и гидроксипропилметилцеллюлоза; поверхностно-активное вещество, такое как полисорбат, полиоксиэтилен гидрогенизированного касторового масла и полиоксиэтиленполиоксипропилен; многоатомный спирт, такой как пропиленгликоль; органическую кислоту, такую как бензойная кислота и сорбиновая кислота; аминокислоту, такую как аспарагиновая кислота, гистидин, глицин и лизин; и производное ксантина, такое как кофеин. Предпочтительный солюбилизатор включает поливинилпирролидон, макрогол, поливиниловый спирт, бензойную кислоту, сорбиновую кислоту и альгиновую кислоту; особенно поливинилпирролидон и макрогол. Солюбилизатор может применяться в качестве единственного ингредиента или в любой комбинации двух или нескольких ингредиентов.

Значение pH водного жидкого препарата, содержащего фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, составляет приблизительно от 4 приблизительно до 9, предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 8, особенно предпочтительно приблизительно от 6 приблизительно до 7, и наиболее предпочтительно от 6,3 до 6,9.

Твердая лекарственная форма по настоящему изобретению для перорального введения, такая как таблетка, порошок и гранула, может быть приготовлена путем смешивания соединения по настоящему изобретению, по крайней мере, с одним инертным носителем, таким как лактоза, маннит, глюкоза, гидроксипропилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, поливинилпирролидон, мета-кремниевая кислота и алюминат магния, и составления смеси в соответствии с общепринятым способом. В состав препарата также могут быть включены дополнительные подходящие добавки, например, смазка, такая как стеарат магния; разрыхлитель, такой как гликолят целлюлозы кальция; стабилизатор, такой как лактоза; солюбилизирующее вещество, такое как глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота; и тому подобное. В его состав также могут быть включены подсластитель, отдушка, ароматизатор, консервант, и тому подобное. При необходимости, таблетка и пилюля может быть покрыта тонкой сахарной оболочкой и внутрижелудочно- или кишечнорастворимой оболочкой, с использованием сахарозы, желатина, гидроксипропилцеллюлозы и фталата гидроксипропилметилцеллюлозы.

Жидкое лекарственное средство для перорального введения, такое как эмульсия, раствор, суспензия, сироп и эликсир, может быть приготовлено путем растворения или диспергирования соединения по настоящему изобретению в традиционно используемом инертном разбавителе, таком как очищенная вода и этанол. Жидкое лекарственное средство также может содержать вспомогательное вещество, такое как увлажняющее вещество и вещество, способствующее суспендированию, подсластитель, отдушка, ароматизатор, консервант, и тому подобное.

Инъецируемая форма для парентерального введения включает асептический водный или неводный раствор, суспензию, эмульсию, и тому подобное, и водная инъецируемая форма может быть приготовлена в соответствии с общепринятым способом, например, с использованием в качестве разбавителя дистиллированной воды для инъекций и солевого раствора. Неводная инъецируемая форма может быть приготовлена в соответствии с общепринятым способом, например, с использованием разбавителя или носителя, такого как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль или растительное масло, такое как оливковое масло; спиртов, таких как этанол; полисорбата 80. Инъецируемая форма может дополнительно содержать вспомогательное вещество, такое как консервант, увлажняющее вещество, эмульгатор, вещество, способствующее диспергированию, стабилизатор (например, лактоза) и солюбилизирующее вещество (например, глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота). Инъецируемую форму стерилизуют в соответствии с общепринятым способом, например, путем фильтрации через фильтр для удаления бактерий, добавления противомикробного средства или облучения, такого как гамма-излучения. В дополнение, инъецируемая форма также может быть приготовлена в виде быстро приготавливаемой лекарственной формы, когда приготовленное асептическое твердое лекарственное средство перед применением растворяют в асептической воде или асептическом растворителе для инъекций.

Схема приема фармацевтической композиции по настоящему изобретению в каждом составлении будет определяться в каждом случае в зависимости от состояния пациента, которому вводят фармацевтическую композицию (субъект введения), возраста, пола, и так далее. В целом, дозировка глазных капель, которые содержат фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, может быть определена в таком количестве, чтобы глазные капли, содержащие активное соединение в концентрации 0,0001-10% (мас./об.), предпочтительно 0,001-1,0% (мас./об.), наиболее предпочтительно 0,01-0,3% (мас./об.), можно было закапывать или использовать при промывании тампоном от одного до нескольких раз в сутки. Количество глазных капель для одного применения взрослым человеком составляет, как правило, приблизительно 0,001-1 мл.

В случае перорального лекарственного средства или инъецируемой формы фармацевтической композиции по настоящему изобретению дозировка может быть определена таким образом, что соединение по настоящему изобретению может быть введено в количестве 0,001-1000 мг в сутки для взрослого человека. Суточная доза может быть введена однократно, но предпочтительно может быть разделена на несколько приемов. Вышеупомянутая дозировка представляет собой только рекомендацию и, следовательно, она также может быть увеличена или уменьшена. Как упомянуто выше, является желательным определение дозировки в случае каждого использования в зависимости от различных условий. Соответственно, в зависимости от условий, уменьшенная дозировка может, тем не менее, показывать удовлетворительный результат.

Эффект настоящего изобретения

К качестве агониста аденозинового А2а рецептора фармацевтические композиции и соединения по настоящему изобретению могут обладать различной активностью, такой как внутриглазное гипотензивное действие, увеличение притока крови к диску зрительного нерва, защита зрительного нерва, вазодилатация, коронарная дилатация, снижение кровяного давления, ингибирование агрегации тромбоцитов, антитромботический эффект, противовоспалительный эффект, бронхоэктаз и иммуносупрессия.

Поэтому, фармацевтические композиции и соединения по настоящему соединению могут быть адаптированы для лечения глазного заболевания, такого как глаукома (например, глаукома с нормальным давлением, глаукома с повышенным внутриглазным давлением, послеоперационная вторичная глаукома, и тому подобное), повышение внутриглазного давления, диабетическая ретинопатия, возрастная макулярная дегенерация (ВМД), пигментный ретинит (ПР) и заболевания сетчатки, вызванные глаукомой; гипертензии; застойной сердечной недостаточности; сердечной недостаточности; стенокардии; атеросклероза; ишемической болезни сердца; цереброваскулярной ишемии; реперфузионного повреждения; тромбоза; эпилепсии; ринита; синусита; эмфиземы; хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ); бронхиальной астмы; бронхита; респираторных заболеваний; синдрома дыхательной недостаточности; септического шока; пневмосклероза; гастрита; метастатического гастрита; неспецифического язвенного колита; болезни Крона; заживления ран; экземы; кожной гиперчувствительности; дерматита; псориаза; хронического ревматоидного артрита; сахарного диабета; рассеянного склероза; аутоиммунного заболевания; и тому подобное.

В дополнение, фармацевтические композиции и соединения по настоящему соединению могут быть использованы в качестве диагностического средства для инфаркта миокарда.

Далее в настоящем документе, настоящее изобретение проиллюстрировано Справочными примерами для получения исходных соединений и Примерами для получения соединений и составов по настоящему изобретению, а также экспериментальными фармакологическими тестами, но не должно истолковываться как ограниченное ими.

Спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) в представленных ниже примерах измеряли в следующих условиях. Сокращения определены следующим образом.

Прибор: JNM-AL300 (JEOL)

Внутренний стандарт: TMS

с: синглет, д: дублет, т: триплет, кв: квартет, квинт: квинтет, секст: секстет

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фигуре 1 представлены значения выживаемости клеток при добавлении соединения Примера 1 в концентрации 0,25, 0,5 и 1 мМ к клеткам эпителия роговицы.

На фигуре 2 представлены эффекты соединения Примера 1 на цилиарную артерию кроликов.

На фигуре 3 представлены эффекты соединения Примера 1 на выживаемость ганглиозных клеток сетчатки.

НАИЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Справочный пример 1

Метил-(E)-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)акрилат

2-Бромпиридин-6-метанол (50,0 г) растворяли в безводном N,N-диметилформамиде (250 мл). К раствору добавляли метилакрилат (47,9 мл), хлорид тетра(н-бутил)аммония (73,9 г), гидрокарбонат натрия (47,7 г) и Молекулярные Сита 3A(1/16) (50,0 г), а затем в атмосфере аргона добавляли ацетат палладия (II) (2,98 г). Смесь перемешивали при 80°C в течение 5 часов. После охлаждения реакционной смеси полученный осадок отфильтровывали, и добавляли воду к фильтрату, который экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 50,2 г метил-(E)-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)акрилата. Коричневый порошок.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,72 (1Н, т, J=7,5 Гц), 7,68 (1Н, д, J=15,6 Гц), 7,32 (1Н, д, J=7,5 Гц), 7,21 (1Н, д, J=7,5 Гц), 6,97 (1Н, д, J=15,6 Гц), 4,78 (2H, д, J=4,2 Гц), 3,85 (1Н, т, J=4,2 Гц), 3,83 (3H, c).

Справочный пример 2

Метил-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)пропионат

Метил-(E)-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)акрилат (50,2 г) почти растворяли в изопропиловом спирте (502 мл). К раствору добавляли 5% палладий на активированном угле (2,51 г), и перемешивали смесь при 50°C в условиях нормального давления в атмосфере водорода в течение 2,5 часов. После охлаждения реакционной смеси катализатор отфильтровывали, и концентрировали фильтрат в условиях вакуума с получением 50,0 г метил-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)пропионата. Коричневое масло.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,58 (1Н, т, J=7,5 Гц), 7,09 (1Н, д, J=7,5 Гц), 7,03 (1Н, д, J=7,5 Гц), 4,71 (2H, c), 4,01 (1Н, ушир. c), 3,69 (3H, c), 3,15 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,81 (2H, т, J=7,2 Гц).

Справочный пример 3

Метил-3-(6-метансульфонилоксиметилпиридин-2-ил)пропионат

Метил-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)пропионат (50,0 г) растворяли в этилацетате (1000 мл). К раствору добавляли триэтиламин (53,5 мл), и перемешивали смесь на льду в течение 10 минут. К смеси по каплям в течение 10 минут добавляли метансульфонилхлорид (23,8 мл), и перемешивали полученную смесь на льду в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли воду, смесь переносили в делительную воронку, промывали водным насыщенным гидрокарбонатом натрия и солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 63,0 г метил-3-(6-метансульфонилоксиметилпиридин-2-ил)пропионата. Коричневое масло.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,63 (1Н, т, J=7,5 Гц), 7,26 (1Н, д, J=7,5 Гц), 7,19 (1Н, д, J=7,5 Гц), 5,28 (2H, c), 3,67 (3H, c), 3,12 (2H, т, J=7,2 Гц), 3,07 (3H, C), 2,79 (2H, т, J=7,2 Гц).

Справочный пример 4

Метил-3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил]пиридин-2-ил}пропионат

4-Ацетамидбензальдегид (1000 г) растворяли в этаноле (16000 мл). К смеси добавляли малононитрил (607 г) и пиперидин (40 г), и перемешивали полученную смесь при нагревании с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем перемешивали в течение 30 минут. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали этанолом (2000 мл) и сушили с получением 1049 г N-[4-(2,2-дициановинил)фенил]ацетамида в виде желтого порошка.

Метил-3-(6-метансульфонилоксиметилпиридин-2-ил)пропионат (7,0 г) растворяли в метаноле (75 мл), а затем добавляли тиомочевину (1,85 г). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1,5 часов. После охлаждения реакционной смеси добавляли триэтиламин (10,7 мл), и перемешивали смесь в течение некоторого времени. Последовательно добавляли метанол (75 мл), полученный ранее N-[4-(2,2-дициановинил)фенил]ацетамид (4,33 г), а затем N-бромсукцинимид (3,67 г), и перемешивали смесь в течение 1 часа. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали метанолом (40 мл), и сушили с получением 5,5 г метил-3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил]пиридин-2-ил}пропионата. Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,23 (1Н, c), 8,20-7,60 (2H, ушир. c), 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц), 7,72 (2H, д, J=8,7 Гц), 7,63 (1Н, т, J=7,8 Гц), 7,35 (1Н, д, J=7,8 Гц), 7,15 (1Н, д, J=7,8 Гц), 4,45 (2H, c), 3,57 (3H, c), 2,96 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,74 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,09 (3H, c).

Справочный пример 5

3-{6-[4-(4-Ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил]пиридин-2-ил}пропионовая кислота

Метил-3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил]пиридин-2-ил}пропионат (5 г) суспендировали в содержащем 50% воды ацетонитриле (150 мл). К суспензии добавляли моногидрат гидроксида лития (1,35 г), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем к реакционной смеси постепенно добавляли раствор лимонной кислоты (4,11 г) в воде (20 мл), и дополнительно перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали водой (75 мл), и сушили с получением 5 г 3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил]пиридин-2-ил}пропионовой кислоты. Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,25 (1Н, c), 7,84 (2H, д, J=8,7 Гц), 7,72 (2H, д, J=8,7 Гц), 7,64 (1Н, т, J=7,8 Гц), 7,36 (1Н, д, J=7,8 Гц), 7,16 (1Н, д, J=7,8 Гц), 4,47 (2H, c), 2,95 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,65 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,09 (3H, c).

Справочный пример 6

1-трет-Бутоксикарбонил-4-(пиперазин-1-ил)метилпиперидин

1-трет-Бутоксикарбонил-4-пиперидилметанол (10 г) растворяли в этилацетате (150 мл). К раствору добавляли триэтиламин (12,8 мл), и перемешивали смесь на льду в течение некоторого времени. К смеси медленно по каплям добавляли метансульфонилхлорид (5,4 мл), и перемешивали реакционную смесь на льду в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли воду, смесь переносили в делительную воронку, промывали водой (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл, дважды). Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. Остаток растворяли в ацетонитриле (200 мл), и добавляли к раствору пиперазин (18 г). Смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали в условиях вакуума, а затем отфильтровывали выпавший в осадок пиперазин. К фильтрату добавляли солевой раствор (50 мл) и этилацетат (50 мл), и перемешивали смесь в течение ночи. Смесь переносили в делительную воронку, органический слой разделяли, промывали солевым раствором (50 мл, дважды) и концентрировали в условиях вакуума. К остатку добавляли воду (50 мл), и нейтрализовали смесь добавлением 1н соляной кислоты при охлаждении на льду. Добавляли этилацетат (100 мл), и перемешивали смесь в течение некоторого времени. Затем смесь переносили в делительную воронку, и разделяли водный слой. Водный слой сильно подщелачивали добавлением 5н гидроксида натрия при охлаждении на льду. Смесь экстрагировали этилацетатом, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 9,96 г 1-трет-бутоксикарбонил-4-(пиперазин-1-ил)метилпиперидина. Бесцветное масло.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 4,11-4,05 (2H, м), 2,87 (4H, т, J=4,8 Гц), 2,72-2,64 (2H, м), 2,36 (4H, ушир.с), 2,14 (2H, д, J=6,9 Гц), 1,74-1,65 (3H, м), 1,45 (9H, м), 1,13-0,99 (2H, м).

Справочный пример 7

4-((4-(3-(6-((4-(4-ацетамидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)-1-трет-бутоксикарбонилпиперидина дигидрохлорид

3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил]пиридин-2-ил}пропионовую кислоту (2,16 г) суспендировали в ацетоне (44 мл). К суспензии добавляли 1-гидрокси-1H-бензотриазол (781 мг), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид (1,1 г) и 1-трет-бутоксикарбонил-4-(пиперазин-1-ил)метилпиперидин (1,5 г) в указанном порядке, и нагревали смесь с обратным холодильником в течение 1 часа. Ацетон удаляли в условиях вакуума, затем добавляли этилацетат (30 мл) и воду (30 мл), и перемешивали смесь в течение 30 минут. Смесь переносили в делительную воронку, промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. Остаток полностью растворяли в метаноле (25 мл), затем при охлаждении на льду медленно по каплям добавляли конц. соляную кислоту (0,85 мл), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли этанол (50 мл), и перемешивали смесь при 50°C в течение 1 часа. После охлаждения реакционной смеси выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре и сушили с получением 2,95 г 4-((4-(3-(6-((4-(4-ацетамидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)-1-трет-бутоксикарбонилпиперидина дигидрохлорида. Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,30 (1Н, c) 10,15 (1Н, ушир.с) 8,00-7,81 (4H, м) 7,72 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,65 (1Н, ушир.с) 7,40 (1Н, ушир.с) 4,57 (2H, c) 4,36-4,31 (1Н, м) 4,02-3,89 (3H, м) 3,70-3,30 (8H, м) 3,17-2,73 (8H, м) 2,09 (3H, c) 1,99 (1Н, м) 1,78-1,73 (2H, м) 1,39 (9H, c).

Пример 1

N-(4-(6-Амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида тригидрохлорид

К 4-((4-(3-(6-((4-(4-ацетамидфенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)1-трет-бутоксикарбонилпиперидина дигидрохлориду (40 г) добавляли 400 мл хлороводорода (1 моль/л в этилацетате), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Осадок собирали на фильтре и промывали этилацетатом (80 мл). Осадок сушили с получением белого нечищеного кристаллического вещества. Неочищенное кристаллическое вещество растворяли в воде (245 мл) при комнатной температуре и фильтровали. К фильтрату медленно добавляли ацетон (875 мл), и перемешивали смесь с затравочным кристаллом в течение 6 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали ацетоном (140 мл), а затем сушили с получением 29,8 г N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида тригидрохлорида. Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 11,23 (1Н, ушир.с) 10,43 (1Н, c) 9,05 (1Н, ушир.с) 8,93 (1Н, ушир.с) 8,30 (1Н, т, J=7,8 Гц) 7,96 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,81 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,78-7,73 (3H, м) 4,77 (2H, c) 4,36-4,31 (1Н, м) 4,02-3,74 (3H, м) 3,53-3,45 (2H, м) 3,26-3,23 (5H, м) 3,02-2,81 (8H, м) 2,10-1,91 (6H, м) 1,50-1,39 (2H, м).

Пример 2

N-(4-(6-Амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида малеат

N-(4-(6-Амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида тригидрохлорид (1,01 г) растворяли в безводном N,N-диметилформамиде (15 мл). К раствору добавляли 2-хлорэтанол (186 мкл), триэтиламин (0,6 мл), карбонат калия (386 мг) и йодид натрия (300 мг), и перемешивали смесь при 50°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали в условиях пониженного давления, и очищали остаток по методу хроматографии на силикагеле (хлористый метилен:метанол:28% водный аммиак = 100:10:1) с получением 220 мг N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)-метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида. Соединение растворяли в метаноле (5 мл), и добавляли малеиновую кислоту (38,8 мг). Смесь перемешивали в течение некоторого времени. Раствор концентрировали в условиях вакуума с получением 250 мг N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-(4-((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-оксопропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида малеата. Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,25 (1Н, c) 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,71 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,63 (1Н, т, J=7,5 Гц) 7,35 (1Н, д, J=7,5 Гц) 7,15 (1Н, д, J=7,5 Гц), 6,04 (2H, c) 5,76 (1Н, ушир.с) 4,47-4,35 (4H, м) 3,71 (2H, ушир.с) 3,45-3,32 (9H, м) 3,11 (2H, ушир.с) 2,97-2,87 (4H, м) 2,73-2,69 (2H, м) 2,36-2,19 (3H, м) 2,09 (3H, c) 1,88-1,83 (3H, м) 1,35-1,31 (2H, м).

Соединения последующих примеров 3-5 получали в соответствии с методикой, аналогичной представленной в Примере 2.

Пример	R	Данные ЯМР-спектроскопии	Соль
1	H	1H-ЯМР (DMSO-d6) 11,23 (1Н, ушир.с) 10,43 (1Н, с) 9,05 (1Н, ушир.с) 8,93 (1Н, ушир.с) 8,30 (1Н, т, J=7,8 Гц) 7,96 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,81 (2Н, д, J=8,7 Гц) 7,78-7,73 (3Н, м) 4,77 (2Н, с) 4,36-4,31 (1Н, м) 4,02-3,74 (3Н, м) 3,53-3,45 (2Н, м) 3,26-3,23 (5Н, м) 3,02-2,81 (8Н, м) 2,10-1,91 (6Н, м) 1,50-1,39 (2Н, м).	тригидрохлорид
2		DMSO-d6: 10,25 (1H, с) 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,71 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,63 (1H, т, J=7,5 Гц) 7,35 (1H, д, J=7,5 Гц) 7,15 (1H, д, J=7,5 Гц), 6,04 (2H, с) 5,76 (1H, ушир.с) 4,47-4,35 (4H, м) 3,71 (2H, ушир.с) 3,45-3,32 (9H, м) 3,11 (2H, ушир.с) 2,97-2,87 (4H, м) 2,73-2,69 (2H, м) 2,36-2,19 (3H, м) 2,09 (3H, с) 1,88-1,83 (3H, м) 1,35-1,31 (2H, м)	малеат
3		DMSO-d6: 10,25 (1H, с) 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,72 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,62 (1H, т, J=7,8 Гц) 7,34 (1H, д, J=7,8 Гц) 7,14 (1H, д, J=7,8 Гц), 4,46 (2H, с) 3,44-3,29 (8H, м) 2,94 (2H, т, J=7,5 Гц) 2,87-2,83 (2H, м) 2,73-2,66 (2H, м) 2,34 (2H, ушир.с) 2,20-2,18 (4H, м) 2,09 (3H, с) 2,03 (2H, д, J=7,2 Гц) 1,87 (2H, ушир.с) 1,64-1,43 (4H, м) 1,09-1,01 (2H, м)
4		CDCl3: 7,99 (2Н, д, J=8,7 Гц) 7,75-7,60 (2Н, м) 7,51 (1Н, т, J=7,5 Гц) 7,27 (1Н, д, J=7,5 Гц) 7,07 (1Н, д, J=7,5 Гц), 5,85 (ушир.с, 2Н) 4,65 (1Н, т, J=5,1 Гц) 4,53-4,42 (1Н, м) 4,49 (2Н, с) 3,59 (1Н, т, J=4,8 Гц) 3,53-3,40 (2Н, м) 3,13 (2Н, т, J=6,9 Гц) 3,00-2,90 (2Н, м) 2,80 (2Н, т, J=6,9 Гц) 2,73 (1Н, т, J=4,8 Гц) 2,63 (1Н, т, J=4,8 Гц) 2,38-2,25 (4Н, м) 2,21 (3Н, с) 2,14 (2Н, д, J=7,5 Гц) 2,10-1,97 (2Н, м) 1,85-1,60 (2Н, м) 1,55-1,40 (1Н, м) 1,35-1,15 (2Н, м)
5		DMSO-d6: 10,25 (1Н, с) 7,84 (2Н, д, J=8,7 Гц) 7,72 (2Н, д, J=8,7 Гц) 7,62 (1Н, т, J=7,8 Гц) 7,34 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,14 (1Н, д, J=7,8 Гц) 4,46 (2Н, с) 3,59 (3Н, с) 3,50-3,25 (4Н, м) 2,98-2,76 (3Н, м) 2,75-2,50 (3Н, м) 2,50-2,40 (4Н, м) 2,25-2,13 (4Н, м) 2,09 (3Н, с) 2,04 (2Н, д, J=7,2 Гц) 1,68-1,55 (2Н, м) 1,50-1,35 (1Н, м) 1,15-0,98 (2Н, м)

Пример 6

N-(4-(6-Амино-5-циано-2-(6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацет-D3-амида тригидрохлорид (6-3)

трет-Бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацет-D3-амидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата дигидрохлорид (6-2)

трет-Бутил-4-(4-(3-(6-((4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (6-1) (3,4 г) растворяли в хлористом метилене (68 мл). К раствору при охлаждении на льду добавляли триэтиламин (1,4 мл), и перемешивали смесь в течение некоторого времени. По каплям медленно добавляли ацетил-D3-хлорид (532 мкл), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду, и переносили смесь в делительную воронку. Водный слой экстрагировали хлористым метиленом (дважды), комбинированный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали по методу хроматографии на силикагеле (хлористый метилен/метанол=25/1) с получением 3,1 г трет-бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацет-D3-амидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата. Соединение полностью растворяли в метаноле (20 мл), затем при охлаждении на льду по каплям медленно добавляли конц. HCl (1,7 мл), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли этанол (40 мл), и перемешивали смесь при 50°C в течение 1 часа. После охлаждения реакционной смеси выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре и сушили с получением 2,06 г трет-бутил-4-((4-(3-(6-((4-(4-ацет-D3-амидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата дигидрохлорида (6-2). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,29 (1Н, c) 10,15 (1Н, ушир.с) 8,00-7,90 (1Н, м) 7,82 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,73 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,59 (1Н, м) 7,40 (1Н, м) 4,57 (2H, c) 4,36-4,31 (1Н, м) 4,02-3,89 (3H, м) 3,70-3,30 (8H, м) 3,17-2,73 (8H, м) 1,99 (1Н, м) 1,78-1,73 (2H, м) 1,39 (9H, c).

N-(4-(6-амино-5-циано-2-(6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацет-D3-амида тригидрохлорид (6-3)

К терт-бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацет-D3-амидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата дигидрохлориду (6-2) (2,0 г) добавляли 20 мл хлороводорода (1 моль/л в этилацетате), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 41 часа. Осадок собирали на фильтре и промывали этилацетатом (4,0 мл). Неочищенное кристаллическое вещество растворяли в воде (10 мл) при комнатной температуре и фильтровали. К фильтрату медленно добавляли ацетон (40 мл), и перемешивали смесь с затравочным кристаллом в течение 2 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали ацетоном (4 мл), а затем сушили с получением 1,75 г N-(4-(6-амино-5-циано-2-(6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацет-D3-амида тригидрохлорида (6-3). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 11,06 (1Н, ушир.с) 10,38 (1Н, c) 8,94-8,81 (2H, м) 8,16 (1Н, т, J=7,8 Гц) 7,83-7,80 (3H, м) 7,75 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,64 (1Н, д, J=7,8 Гц) 4,70 (2H, c) 4,36- 4,31 (1Н, м) 4,02-3,74 (3H, м) 3,53-3,45 (2H, м) 3,26-3,23 (5H, м) 3,02-2,81 (8H, м) 2,10-1,91 (3H, м) 1,50-1,39 (2H, м).

Пример 7

Метил-4-нитробензоат-2,3,5,6-D4 (7-2)

4-Нитробензойную-D4 кислоту (7-1) (5 г) растворяли в метаноле (100 мл). К раствору добавляли конц. соляную кислоту (1,0 мл), и нагревали смесь с обратным холодильником в течение 15 часов. Реакционную смесь концентрировали в условиях вакуума, а затем добавляли к остатку воду. Смесь экстрагировали хлористым метиленом. Органический слой промывали водным гидрокарбонатом натрия, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 5,3 г метил-4-нитробензоата-2,3,5,6-D4 (7-2). Белый порошок.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 3,99 (3H, c).

4-Нитробензил-2,3,5,6-D4 спирт (7-3)

Метил-4-нитробензоат-2,3,5,6-D4 (7-2) (5,3 г) суспендировали в смеси диоксана (53 мл) и воды (53 мл). К суспензии добавляли боргидрид натрия (9,4 г), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 6 часов. После завершения реакции реакционную смесь слегка подкисляли добавлением 5н. HCl и переносили в делительную воронку. Водный слой экстрагировали этилацетатом, комбинированный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 3,75 г 4-нитробензил-2,3,5,6-D4 спирта (7-3). Желтый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 5,53 (1Н, т, J=5,7 Гц) 4,64 (2H, д, J=5,7 Гц).

4-Аминобензил-2,3,5,6-D4 спирт (7-4)

4-Нитробензил-2,3,5,6-D4 спирт (7-3) (3,75 г) растворяли в смеси этилацетата (37 мл) и диметилформамида (10 мл). К раствору добавляли 5% палладий на активированном угле (400 мг), и перемешивали смесь при атмосферном давлении водорода в течение 6 часов. После завершения реакции катализатор отфильтровывали, и концентрировали фильтрат в условиях вакуума с получением 2,65 г 4-аминобензил-2,3,5,6-D4 спирта (7-4). Желтое масло.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 4,56 (2H, c).

4-Ацетамидобензил-2,3,5,6-D4 ацетат (7-5)

4-Аминобензил-2,3,5,6-D4 спирт (7-4) (2,65 г) растворяли в этилацетате (53 мл). К раствору при охлаждении на льду добавляли триэтиламин (12,9 мл), и перемешивали смесь в течение некоторого времени. Затем по каплям медленно добавляли ацетилхлорид (5,5 мл), и перемешивали смесь в течение 1 часа. После завершения реакции к реакционной смеси добавляли воду, и переносили смесь в делительную воронку. Водный слой экстрагировали этилацетатом, комбинированный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 4,28 г 4-ацетамидобензил-2,3,5,6-D4 ацетата (7-5). Желтое масло.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 4,99 (2H, c) 2,09 (6H, c).

N-(4-(Гидроксиметил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-6)

4-Ацетамидобензил-2,3,5,6-D4 ацетат (7-5) (4,28 г) растворяли в метаноле (80 мл). К раствору добавляли карбонат калия (2,9 г), и перемешивали смесь в течение 1,5 часов. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали в условиях вакуума с получением 3,4 г N-(4-(гидроксиметил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамида (7-6). Желтое масло.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,07 (1Н, c) 4,42 (2H, c) 2,02 (3H, c).

N-(4-Формилфенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-7)

N-(4-(Гидроксиметил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-6) (3,4 г) растворяли в диметилформамиде (68 мл). К раствору добавляли диоксид марганца (17 г), и перемешивали смесь при 60°C в течение 6 часов. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали. К фильтрату добавляли воду, и экстрагировали смесь этилацетатом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума с получением 2,5 г N-(4-формилфенил-2,3,5,6-D4)ацетамида (7-7). Белый порошок.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 9,93 (1Н, c) 7,50 (1Н, ушир.с) 2,23 (3H, м).

N-(4-(2,2-дициановинил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-8)

N-(4-Формилфенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-7) (2,5 г) растворяли в этаноле (50 мл). К раствору добавляли малононитрил (1,1 г) и пиперидин (2 капли), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 8 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали этанолом и сушили с получением 2,1 г N-(4-(2,2-дициановинил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамида (7-8). Желтый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,52 (1Н, c) 8,37 (1Н, c) 2,12 (3H, c).

N-(4-(6-амино-5-циано-2-меркапто-3,4-дигиропиримидин-4-ил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-9)

К 20 мл этанольного раствора металлического натрия (276 мг) добавляли тиомочевину (760 мг), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли N-(4-(2,2-дициановинил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-8) (2,1 г), и перемешивали смесь при нагревании с обратным холодильником в течение 3 часов. После завершения реакции удаляли этанол в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в теплой воде и слегка подкисляли добавлением уксусной кислоты. Осадок собирали на фильтре и сушили с получением 2,91 г N-(4-(6-амино-5-циано-2-меркапто-3,4-дигиропиримидин-4-ил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамида (7-9). Желтый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 9,99 (1Н, c) 9,69 (1Н, c) 6,13 (2H, м) 4,93 (1Н, c) 2,07 (3H, c).

Метил-3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионат(7-10)

N-(4-(6-Амино-5-циано-2-меркапто-3,4-дигиропиримидин-4-ил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамид (7-9) (2,91 г) растворяли в диметилформамиде (60 мл). К раствору добавляли метил-3-(6-метансульфонилоксиметилпиридин-2-ил)пропионат (2,73 г) и карбонат калия (2,76 г), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Затем добавляли N-бромсукцинимид (1,77 г), и перемешивали смесь еще в течение часа. После завершения реакции к реакционной смеси добавляли воду, и экстрагировали смесь этилацетатом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали по методу хроматографии на силикагеле (хлористый метилен/метанол = 20/1) с получением 3,52 г метил-3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионата (7-10). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,26 (1Н, c) 7,63 (1Н, т, J=7,8 Гц) 7,36 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,16 (1Н, д, J=7,8 Гц) 4,46 (2H, c) 3,57 (3H, c) 2,99 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,73 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,09 (3H, c).

3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионовая кислота (7-11)

Метил-3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионат (7-10) (3,52 г) суспендировали в содержащем 50% воды ацетонитриле (100 мл). К суспензии добавляли моногидрат гидроксида лития (331 мг), и нагревали смесь с обратным холодильником в течение 2 часов. Затем к реакционной смеси постепенно добавляли раствор лимонной кислоты (1,59 г) в воде (10 мл), и перемешивали реакционную смесь при 50°C в течение 1 часа. После охлаждения реакционной смеси выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали водой и сушили с получением 2,29 г 3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионовой кислоты (7-11). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,25 (1Н, c), 7,64 (1Н, т, J=7,8 Гц), 7,36 (1Н, д, J=7,8 Гц), 7,16 (1Н, д, J=7,8 Гц) 4,46 (2H, c) 2,92 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,65 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,09 (3H, с).

трет-Бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацетамидофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата дигидрохлорид (7-12)

3-(6-(4-(4-Ацетиламинофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионовую кислоту (7-11) (2,29 г) суспендировали в ацетоне (46 мл). К суспензии добавляли 1-гидрокси-1H-бензотриазол (820 мг), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид (1,16 г) и трет-бутил-4-пиперазин-1-илметилпиперидин-1-карбоксилат (1,43 г) в указанном порядке, и нагревали смесь с обратным холодильником в течение 1 часа. Ацетон удаляли в условиях вакуума, затем добавляли этилацетат (23 мл) и воду (23 мл), и перемешивали смесь в течение 30 минут. Смесь переносили в делительную воронку. Органический слой промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. После полного растворения остатка в метаноле (22,5 мл) при охлаждении на льду по каплям медленно добавляли конц. HCl (1,43 мл), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли этанол (45 мл), и перемешивали смесь при 50°C в течение 1 часа. После охлаждения реакционной смеси выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре и сушили с получением 2,35 г трет-бутил-4-((4-(3-(6-((4-(4-ацетамидофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата дигидрохлорида (7-12). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,30 (1Н, c) 7,95 (1Н, м) 7,65 (1Н, м) 7,45 (1Н, м) 4,59 (2H, c) 4,40-4,31 (1Н, м) 4,10-3,85 (3H, м) 3,70-3,30 (8H, м) 3,17-2,73 (8H, м) 2,09 (3H, c) 1,99 (1Н, м) 1,78-1,74 (2H, м) 1,39 (9H, c).

N-(4-(6-амино-5-циано-2-(6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамида тригидрохлорид (7-13)

К трет-бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацетамидофенил-2,3,5,6-D4)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата дигидрохлориду (7-12) (2,35 г) добавляли 23 мл хлороводорода (1 моль/л в этилацетате), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Осадок собирали на фильтре и промывали этилацетатом (4,7 мл). Неочищенное кристаллическое вещество растворяли в воде (10 мл) при комнатной температуре и фильтровали. К фильтрату медленно добавляли ацетон (40 мл), и перемешивали смесь с затравочным кристаллом в течение 2 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали ацетоном (4,7 мл), а затем сушили с получением 1,93 г N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил-2,3,5,6-D4)ацетамида тригидрохлорида (7-13). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSOd₆) 11,04 (1Н, ушир.с) 10,38 (1Н, c) 8,92-8,80 (2H, м) 8,10 (1Н, м) 7,79 (1Н, м) 7,59 (1Н, м) 4,67 (2H, c) 4,37-4,33 (1Н, м) 4,07-4,03 (1Н, м) 3,70-2,82 (17H, м) 2,10-1,98 (6H, м) 1,48-1,37 (2H, м).

Далее в настоящем документе в качестве справочных примеров представлены методики для следующих соединений.

3-(6-(4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илтио-метил)пиридин-2-ил)пропионовая кислота (8-2)

3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионовую кислоту (8-1) (230 мг) суспендировали в ацетонитриле (20 мл). К суспензии добавляли 5н соляную кислоту (2 мл), и перемешивали смесь при 60°C в течение ночи. После охлаждения реакционной смеси постепенно добавляли водную лимонную кислоту для нейтрализации реакционной смеси. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали этанолом и сушили с получением 150 мг 3-(6-(4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илтиометил)пиридин-2-ил)пропионовой кислоты (8-2). Светло-желтый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,74 (1Н, т, J=7,5 Гц) 7,30 (1Н, д, J=7,5 Гц) 7,12 (1Н, д, J=7,5 Гц) 6,61 (2H, д, J=8,7 Гц) 5,90 (2H, ушир.с) 4,44 (2H, c) 2,91 (2H, т, J=7,5 Гц) 2,48 (2H, т, J=7,5 Гц).

трет-Бутил-4-(4-(3-(6-((4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (8-3)

3-(6-(4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил)пиридин-2-ил)пропионовую кислоту (8-2) (2,58 г) суспендировали в ацетоне (50 мл). К суспензии добавляли 1-гидрокси-1H-бензотриазол (1,28 г), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид (1,8 г) и трет-бутил-4-пиперазин-1-илметилпиперидин-1-карбоксилат (1,8 г) в указанном порядке, и нагревали смесь с обратным холодильником в течение 1 часа. Ацетон удаляли в условиях вакуума, затем добавляли этилацетат (30 мл) и воду (30 мл), и перемешивали смесь в течение 30 минут. Смесь переносили в делительную воронку. Органический слой промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали по методу хроматографии на силикагеле (хлористый метилен/метанол/28% водный аммиак = 100/10/1) с получением 3,9 г трет-бутил-4-(4-(3-(6-(4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата (8-3). Светло-желтый порошок.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,95 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,50 (1Н, т, J=7,5 Гц) 7,28 (1Н, д, J=7,5 Гц) 7,08 (1Н, д, J=7,5 Гц) 6,71 (2H, д, J=8,7 Гц) 5,70 (2H, ушир.с) 4,51 (2H, c) 4,16-4,09 (4H, м) 3,59 (2H, т, J=4,8 Гц) 3,45 (2H, т, J=4,8 Гц) 3,13 (2H, т, J=7,5 Гц) 2,80 (2H, т, J=7,5 Гц) 2,75-2,65 (2H, м) 2,34-2,30 (4H, м) 2,13 (2H, д, J=7,2 Гц) 1,72-1,64 (1Н, м) 1,46 (9H, c) 1,07-1,02 (2H, м).

4-Амино-6-(4-аминофенил)-2-(6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-5-карбонитрил тетрагидрохлорид (8-4)

К трет-бутил-4-(4-(3-(6-(4-амино-6-(4-аминофенил)-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)пиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилату (8-3) (3,6 г) добавляли 54 мл хлороводорода (1 моль/л в этилацетате), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали этилацетатом и сушили с получением 4,3 г 4-амино-6-(4-аминофенил)-2-(6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-5-карбонитрила тетрагидрохлорида (8-4). Светло-желтый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 11,23 (1Н, ушир.с) 9,05 (1Н, ушир.с) 8,93 (1Н, ушир.с) 8,30 (1Н, т, J=7,5 Гц) 7,79-7,68 (4H, м) 6,92 (2H, д, J=8,7 Гц) 4,77 (2H, c) 4,40-4,31 (8H, м) 3,36-3,18 (4H, м) 3,02-2,75 (6H, м) 2,21-1,98 (3H, м) 1,52-1,34 (2H, м).

Далее в настоящем документе в качестве справочных примеров представлены методики для следующих соединений.

Метил-3-(6-гидроксиметил-1-оксипиридин-2-ил)пропионат (9-2)

Метил-3-(6-гидроксиметилпиридин-2-ил)пропионат (9-1) (1,37 г) растворяли в хлористом метилене (15 мл), медленно добавляли раствор мета-хлорпербензойной кислоты (1,46 г) в хлористом метилене, и перемешивали смесь в течение 2 часов. Реакционный раствор промывали 10% водным сульфитом натрия, водным гидрокарбонатом натрия и водой в указанном порядке. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния с получением 880 мг метил-3-(6-гидроксиметил-1-оксипиридин-2-ил)пропионата (9-2). Белый порошок.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,48-7,29 (1Н, м) 7,25-7,22 (2H, м) 5,01 (1Н, м) 4,80 (2H, C) 3,67 (3H, c) 3,23 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,87 (2H, т, J=7,2 Гц).

N-(4-(6-амино-5-циано-2-меркаптопиримидин-4-ил)фенил)ацетамид (9-4)

Тиомочевину (1,52 г) суспендировали в этаноле (15 мл), затем добавляли карбонат натрия (2,12 г), и перемешивали смесь при 60°C в течение 30 минут. Затем добавляли N-(4-(2,2-дициановинил)фенил)ацетамид (9-3) (4,22 г), и перемешивали смесь при нагревании с обратным холодильником в течение 5 часов. После завершения реакции удаляли этанол в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в теплой воде и слегка подкисляли добавлением уксусной кислоты. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре и сушили с получением 1,87 г N-(4-(6-амино-5-циано-2-меркаптопиримидин-4-ил)фенил)ацетамида (9-4). Желтый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,29 (1Н, c) 7,73 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,64 (2H, д, J=8,7 Гц) 2,09 (3H, c).

Метил-3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил]-1-оксипиридин-2-ил}пропионат (9-5)

Метил-3-(6-гидроксиметил-1-оксипиридин-2-ил)пропионат (9-4) (880 мг) растворяли в хлористом метилене (18 мл). К раствору добавляли триэтиламин (1,15 мл), и перемешивали смесь на льду в течение 10 минут. По каплям медленно добавляли метансульфонилхлорид (0,48 мл), и перемешивали смесь на льду в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли воду, и переносили смесь в делительную воронку. Органический слой промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия и солевым раствором. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния с получением метил-3-(6-метансульфонилоксиметил-1-оксипиридин-2-ил)пропионата. Затем соединение растворяли в диметилформамиде (10 мл), добавляли N-(4-(6-амино-5-циано-2-меркаптопиримидин-4-ил)фенил)ацетамид (1,14 г) и карбонат калия (1,1 г), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции добавляли воду. Осадок собирали на фильтре и сушили с получением 580 мг метил-3-(6-(4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил)-1-оксипиридин-2-ил)пропионата (9-5). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,26 (1Н, c) 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,74-7,69 (3H, м) 7,37 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,23 (1Н, т, J=7,8 Гц) 4,50 (2H, c) 3,59 (3H, c) 3,05 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,76 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,09 (3H, c).

3-{6-[4-(4-Ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил]-1-оксипиридин-2-ил}пропионовая кислота (9-6)

Метил-3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил]-1-оксипиридин-2-ил}пропионат (9-5) (580 мг) суспендировали в содержащем 50% воды ацетонитриле (17 мл). К суспензии добавляли моногидрат гидроксида лития (53 мг), и перемешивали смесь при 80°C в течение 2 часов. Затем добавляли лимонную кислоту (253 мг), и перемешивали смесь при 50°C в течение 1 часа. После охлаждения реакционной смеси выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали водой и сушили с получением 540 мг 3-{6-[4-(4-ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил]-1-оксипиридин-2-ил}пропионовой кислоты (9-6). Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 10,25 (1Н, c) 7,83 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,74-7,68 (3H, м) 7,37 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,23 (1Н, т, J=7,8 Гц) 4,50 (2H, c) 3,02 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,67 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,09 (3H, c).

трет-Бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацетамидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)-1-оксипиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (9-7)

3-{6-[4-(4-Ацетиламинофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илсульфанилметил]-1-оксипиридин-2-ил}пропионовую кислоту (9-6) (520 мг) растворяли в смеси ацетона (10 мл) и диметилформамида (10 мл). К раствору добавляли 1-гидрокси-1H-бензотриазол (224 мг), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид (318 мг), трет-бутил-4-пиперазин-1-илметилпиперидин-1-карбоксилат (315 мг) в указанном порядке, и нагревали смесь с обратным холодильником в течение 2 часов. Ацетон удаляли в условиях вакуума, затем добавляли этилацетат и воду, и перемешивали смесь в течение 30 минут. Смесь переносили в делительную воронку, органический слой промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали по методу хроматографии на силикагеле (хлористый метилен/метанол = 50/1) с получением 470 мг трет-бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацетамидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)-1-оксипиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата (9-7). Белый порошок.

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,98 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,69-7,61 (3H, м) 7,43 (1Н, дд, J=7,8, 1,8 Гц) 7,31 (1Н, дд, J=7,8, 1,8 Гц) 7,09 (1Н, т, J=7,8 Гц) 5,75 (2H, c) 4,65(2H, c) 4,12-4,00 (2H, м) 3,55 (2H, ушир.с) 3,46 (2H, ушир.с) 3,24 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,87 (2H, т, J=7,2 Гц) 2,71-2,63 (2H, м) 2,32-2,29 (4H, м) 2,23 (3H, c) 2,11 (2H, д, J=6,9 Гц) 1,71-1,67 (3H, м) 1,46 (9H, c) 1,07-0,97 (2H, м).

N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)-1-оксипиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида тригидрохлорид (9-8)

К трет-бутил-4-(4-(3-(6-(4-(4-ацетамидофенил)-6-амино-5-цианопиримидин-2-илтио)метил)-1-оксипиридин-2-ил)пропаноил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилату (450 мг) добавляли 4,5 мл хлороводорода (1 моль/л в этилацетате), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Осадок собирали на фильтре, промывали этилацетатом и сушили с получением белого неочищенного кристаллического вещества. Неочищенное кристаллическое вещество растворяли в воде (2,5 мл) при комнатной температуре и фильтровали. К фильтрату медленно добавляли ацетон (10 мл), и перемешивали смесь в течение 6 часов. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество собирали на фильтре, промывали ацетоном, а затем сушили с получением 230 мг N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)-1-оксипиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамида тригидрохлорида. Белый порошок.

¹H-ЯМР (DMS0-d₆) 10,65 (1Н, м) 10,33 (1Н, c) 8,80-8,66 (2H, м) 7,82 (2H, д, J=8,7 Гц) 7,75-7,69 (3H, м) 7,43 (1Н, д, J=7,8 Гц) 7,25 (1Н, т, J=7,8 Гц) 4,50 (2H, c) 4,42-4,38 (1Н, м) 4,18-4,09 (1Н, м) 3,74-3,25 (8H, м) 3,08-3,01 (4H, м) 2,87-2,70 (4H, м) 2,09 (3H, c) 2,08-1,97 (2H, м) 1,47-1,39 (2H, м).

Далее в настоящем документе представлен несколько примеров фармацевтических композиций, содержащих соединения по настоящему изобретению.

Пример 8

В лабораторный стакан из нержавеющей стали емкостью 5 л добавляли очищенную воду (приблизительно 4,5 кг). К ней добавляли концентрированный глицерин (130 г) в качестве изотонического средства и янтарную кислоту (3,5 г) в качестве буфера, и перемешивали смесь для растворения. Затем к раствору добавляли N-(4-(6-амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамид (соединение Примера 1) (0,5 г), и перемешивали смесь для растворения. К раствору добавляли бромид бензододециния (0,3 г) в качестве консерванта, и осторожно перемешивали смесь. Полное растворение подтверждали визуально. К раствору постепенно добавляли 4% (об./об.) водный гидроксид натрия для корректировки значения pH до 6,6. После корректировки pH к раствору добавляли очищенную воду до общей массы 5,0 кг, и осторожно перемешивали раствор. Раствор асептически фильтровали, затем фильтрат асептически помещали в бутыль для глазных капель, и герметично закрывали бутыль.

Пример 9

Фармацевтическую композицию Примера 9 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве буфера дигидрофосфата натрия (3,00 г) вместо янтарной кислоты.

Пример 10

Фармацевтическую композицию Примера 10 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве изотонического средства глюкозы (275 г) вместо концентрированного глицерина.

Пример 11

Фармацевтическую композицию Примера 11 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве изотонического средства маннита (255 г) вместо концентрированного глицерина.

Пример 12

Фармацевтическую композицию Примера 12 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве изотонического средства концентрированного глицерина (68 г) и пропиленгликоля (50 г) вместо концентрированного глицерина.

Пример 13

Фармацевтическую композицию Примера 13 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве изотонического средства концентрированного глицерина (105 г) и сорбита (43 г) вместо концентрированного глицерина.

Пример 14

Фармацевтическую композицию Примера 14 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве изотонического средства пропиленгликоля (50 г), маннита (100 г) и сорбита (43 г) вместо концентрированного глицерина.

Пример 15

Фармацевтическую композицию Примера 15 приготавливали способом, аналогичным описанному в Примере 8, с использованием в качестве консерванта бензалкония хлорида (0,5 г) вместо бензододециния бромида.

Далее описаны примеры фармакологических тестов с использованием соединений по настоящему изобретению.

Тест 1: цАМФ-генерирующее действие на клетки, экспрессирующие аденозиновый А2а рецептор

Тест проводили, как указано ниже, со ссылкой на методику, раскрытую в библиографической ссылке (Klotz K. N. et al., Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., (1998) 357, 1-9; Shryock J. C. et al., Molecular Pharmacology, (1998) 53, 886-893).

Что касается клеток, подлежащих использованию в тесте, то использовали клетки HEK293, экспрессирующие аденозиновый А2а рецептор (человеческий) (PerkinElmer Life Sciences, код № RBHA2AC).

Что касается питательной среды, то использовали модифицированную по Дульбекко среду Игла (DMEM), содержащую 10% FBS (эмбриональной бычьей сыворотки) и 1 мМ пирувата натрия.

Клетки помещали в 96-луночный планшет (1×10⁵/лунку) и выращивали в течение ночи. После удаления надосадочной жидкости в каждую лунку добавляли 0,1 мл DMEM (без FBS), содержащей 20 мМ HEPES, 0,1 мМ IBMX (3-изобутил-1-метилксантин) и 2 единицы/мл аденозиндезаминазы и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. Затем в каждую лунку добавляли 0,1 мл питательной среды, содержащей тестируемое соединение в ДМСО в заданной концентрации, и инкубировали еще в течение 30 минут. После удаления надосадочной жидкости в лунку добавляли цитолитический раствор для гашения реакции. Количество цАМФ в каждой лунке измеряли с использованием системы для иммуноферментного анализа (EIA) цАМФ (Amersham Biosciences, код № RPN225).

Тот же анализ повторяли с использованием CGS-21680 (2-пара-карбоксиэтил)фенэтиламино-5'-N-этилкарбоксамидоаденозина гидрохлорида (Sigma, код C141) в качестве эталонного соединения.

Количество цАМФ, образующегося в эталонной среде под действием 1 мкМ эталонного соединения, принимали за 100%. Измеряли количество цАМФ, образующегося в каждой тестируемой среде, и на основании результатов для каждого тестируемого соединения в заданной концентрации, рассчитывали концентрацию, приводящую к продукции 50% цАМФ, которую определяли как значение EC₅₀.

Результаты описанного выше теста, полученные с использованием следующих соединений по настоящему изобретению, полученных в указанных выше примерах, представлены в следующей Таблице.

Результат

Пример	Агонистическая активность в отношении A2a (EC50, нМ)
1	3,3
2	2,9
3	1,8
4	6,1
5	8,4

Тест 2: Действие соединения Примера 1 на клетки эпителия роговицы

Метод

В качестве клеток для теста использовали клетки эпителия роговицы кролика (KURABO). К клеткам эпителия роговицы кролика, помещенным в 96-луночный планшет, добавляли соединение Примера 1, и инкубировали образец в течение 60 минут. Затем, образец облучали УФА (3,5 мВт/см²) в течение 70 минут с использованием имитатора солнечного излучения (SOL500). После этого, клетки отмывали буфером. Спустя 24 часа оценивали жизнеспособность клеток путем анализа поглощения нейтрального красного.

Результат

Результат представлен на Фигуре 1. Жизнеспособность клеток после добавления соединения Примера 1 (0,25, 0,5 и 1 мМ) с последующим облучением имитатором солнечного излучения составляла 106,3%, 115,0% и 100,7%, соответственно, и таким образом снижение жизнеспособности клеток вовсе не наблюдалось.

Исходя из представленных выше результатов, очевидно, что данный препарат может быть использован в высокой концентрации даже вне помещения на солнце, поскольку соединение по настоящему изобретению не проявило какой-либо цитотоксичности даже при использовании его в высокой концентрации, и что препарат по настоящему изобретению представляет собой лекарственное средство, которое может безопасно использоваться.

Тест 3: Релаксация сосудов

Нарушение кровообращения глаза происходит при глаукоме, пигментном ретините, макулярной дегенерации, ишемической оптической невропатии, окклюзии артерии сетчатки, окклюзии вены сетчатки, диабетической ретинопатии и иридоциклите. В особенности, нарушение кровообращения в диске зрительного нерва считается важным фактором при глаукоме.

Глазной кровоток обладает двумя циркуляторными системами. Одна представляет собой путь через цилиарную артерию, а вторая представляет собой путь через центральную артерию сетчатки. Цилиарная артерия проходит к артериям в сосудистой оболочке глаза, диске зрительного нерва и цилиарном теле. С другой стороны, центральная артерия сетчатки проходит к артерии в сетчатке, и часть центральной артерии сетчатки ответвляется к диску зрительного нерва.

Соединение Примера 1 расслабляет цилиарную артерию, что как считается, улучшает кровообращение глаза. Поэтому считается, что соединение Примера 1 представляет собой эффективное лекарство для терапии заболеваний глаза, таких как глаукома, пигментный ретинит, макулярная дегенерация, ишемическая оптическая невропатия, окклюзия артерии сетчатки, окклюзия вены сетчатки, диабетическая ретинопатия и иридоциклит.

Материалы и методы

Кроликов умерщвляли путем внутривенного введения смертельной дозой пентобарбитала натрия. Извлекали глаза и выделяли цилиарные артерии. Из цилиарных артерий вырезали сосудистые кольца длиной 2 мм и помещали в Danish Multi Myograph System 610M (Danish myo technology) при наблюдении под микроскопом. Сосуды уравновешивали в насыщенном кислородом растворе Кребса с 5% CO₂ и 95% O₂ при 37°C.

Для подтверждения повреждения эндотелия сосудов исследовали релаксацию цилиарной артерии 100 мкМ карбахолина. Если релаксация карбахолином составляла более 30%, то сосуды, эндотелий которых не был поврежден, использовали для экспериментов.

После того, как цилиарную артерию сужали раствором Кребса с высоким содержанием K⁺, в камеру вводили соединение Примера 1 в серии разведений от 0,3 мкМ до 300 мкМ. Давление измеряли с помощью Myodaq ver 2.01 (Danish myo technology).

Результат

Результаты представлены в последующей таблице и на Фигуре 2. Соединение Примера 1 дозозависимо расслабляет цилиарную артерию кроликов, а значение EC₅₀ для него составляло 17,0 мкМ. Таким образом, было сделано заключение, что соединение Примера 1 вызывает релаксацию цилиарной артерии.

Концентрация (мкМ)	Релаксация (%)
0,3	2,6±0,5
1	4,8±1,2
3	7,9±2,3
10	35,3±14,4
30	65,6±9,5
100	82,4±3,7
300	90,1±2,4

Тест 4: Нейропротекция

При глаукоме, одном из ведущих к слепоте глазных заболеваний, избирательно повреждаются ганглиозные клетки сетчатки (RGC). Затем повреждается зрительный нерв и в завершение появляется дефект поля зрения. Окклюзия артерии сетчатки, окклюзия вены сетчатки, диабетическая ретинопатия и ишемическая оптическая невропатия также являются глазными заболеваниями, связанными с нарушениями зрительного нерва. В дополнение, макулярная дегенерация, пигментный ретинит и наследственная глазная невропатия Лебера являются глазными заболеваниями, связанными с повреждением нервных клеток в сетчатке.

Соединения Примера 1 проявляет нейропротекторные эффекты в отношении RGC и, как полагают, является нейропротекторным лекарством, которое используют в терапии глазных заболеваний, таких как окклюзия артерии сетчатки, окклюзия вены сетчатки, диабетическая ретинопатия, ишемическая оптическая невропатия, макулярная дегенерация, пигментный ретинит и наследственная глазная невропатия Лебера.

Материалы и методы

Данный эксперимент проводили в соответствии со способом, описанным Otori et al. (Invest Opthalmol Vis Sci. 39: 972-981, 1998).

У крыс Long Evans в возрасте 7 дней извлекали глаза. Из глаз выделяли сетчатку. Сетчатку диссоциировали путем инкубации с содержащей 15 ед/мл папаина средой Neurobasal, при 37°C в течение 30 минут. Приготавливали суспензию клеток сетчатки.

Суспензию клеток сетчатки инкубировали в покрытой анти-SIRP антителами (Chemicon) колбе при комнатной температуре в течение 30 минут. Неприкрепленные клетки помещали в покрытую анти-thy-1 антителами (Chemicon) колбу. Клетки инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. В заключение, прикрепленные клетки в колбе промывали средой Neurobasal. После центрифугирования при 800 об/мин в течение 5 минут приготавливали очищенные RGC. Клетки высевали на стеклянные покровные стекла, которые были покрыты поли-L-лизином и ламинином. Очищенные RGC выращивали в среде Neurobasal, содержащей добавку B27, 1 мМ глутамина, 50 нг/мл CNTF, 10 мкМ Forskolin. Культуру клеток поддерживали при 37°C во влажной атмосфере, содержащей 5% CO₂ и 95% воздуха. Сразу после высевания клеток добавляли BDNF (50 нг/мл) или соединение Примера 1 в конечной концентрации 0 нМ (контроль), 3 нМ, 10 нМ или 30 нМ.

Выживаемость клеток (жизнеспособность клеток) определяли путем подсчета окрашенных RGC. Спустя 5 суток после начала выращивания культуры RGC окрашивали 1 мкМ кальцеином-AM (Molecular probe). Число RGC подсчитывали с использованием флуоресцентного микроскопа. Процент выживаемости клеток (жизнеспособность клеток) рассчитывали, используя сосчитанное число в контрольной группе, принятое за 0%, и сосчитанное число в группе с добавлением BDNF, принятое за 100%.

Результат

Результаты представлены в последующей таблице и на Фигуре 3. Соединение Примера 1 дозозависимо увеличивало выживаемость клеток. Этот результат указывает на то, что соединение Примера 1 обладало нейропротекторными эффектами в отношении RGC.

Группы	n	Выживаемость клеток (%)
Контроль	8	0,0±6,5
Пример 1 3 нМ	8	10,9±7,0
Пример 1 10 нМ	8	46,5±7,0
Пример 1 30 нМ	8	41,9±,5
Значение = среднее±стандартная ошибка

Выживаемость клеток рассчитывали, используя сосчитанное число в контрольной группе, принятое за 0%, и сосчитанное число в группе с добавлением BDNF, принятое за 100%.

1. N-(4-(6-Амино-5-циано-2-((6-(3-оксо-3-(4-(пиперидин-4-илметил)пиперазин-1-ил)пропил)пиридин-2-ил)метилтио)пиримидин-4-ил)фенил)ацетамид формулы (1)

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами агониста аденозинового рецептора А2а, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Фармацевтическая композиция по п.2 для лечения или профилактики глазного заболевания.

4. Фармацевтическая композиция по п.3 для лечения или профилактики глаукомы.

5. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве агониста аденозинового А2а рецептора.

6. Способ лечения глазного заболевания, включающий введение эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.

7. Водный жидкий препарат для получения глазных капель, содержащий фармацевтическую композицию по п.2.

8. Водный жидкий препарат по п.7, который дополнительно содержит одну или несколько добавок, выбранных из фармацевтически приемлемого буфера, изотонического средства, консерванта, солюбилизатора и регулятора pH.

9. Водный жидкий препарат по п.8, где буфер выбирают из янтарной кислоты, борной кислоты, фосфорной кислоты, аминокислоты и ее фармацевтически приемлемой соли.

10. Водный жидкий препарат по п.9, где буфер представляет собой янтарную кислоту.

11. Водный жидкий препарат по п.7, где изотоническое средство представляет собой одно или два изотонических средства, выбранных из глюкозы, сорбита, маннита, хлорида натрия, хлорида калия, пропиленгликоля и глицерина.

12. Водный жидкий препарат по п.8, где консервант выбирают из хлорида бензалкония, хлорида бензетония, бромида бензододециния, глюконата хлоргексидина, метил-пара-оксибензоата, пропил-пара-оксибензоата, хлорбутанола и бензилового спирта.

13. Водный жидкий препарат по любому из пп.7-12, где значение pH составляет приблизительно от 5,0 до 9,0.