Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах


 


Владельцы патента RU 2537036:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и заключается в проведении хроматографического анализа образца биопробы. Для этого образец наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр наносят радиально стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. Фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен. Интенсивность окраски пятна пробы сравнивают с окраской пятен стандартных калибровочных растворов, по которым и устанавливают концентрацию метронидазола в анализируемом образце. Способ позволяет быстро и достоверно проводить мониторинг содержания метронидазола и, тем самым, своевременно корректировать процесс лечения. 3 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для контроля содержания метронидазола в жидких средах (кровь, слюна, лимфа, ликвор, моча, гнойное отделяемое) и тканях организма.

Метронидазол используют для лечения неклостридиальной анаэробной инфекции. Контроль за уровнем этого препарата необходим, так как при снижении концентрации, ниже минимальной ингибирующей рост анаэробов в гнойном очаге, не подавляется. Превышение концентрации препарата связано с риском появления нежелательных побочных явлений, таких как тошнота, рвота, диарея, крапивница, головная боль, слабость, сонливость (Справочник Видаль Лекарственные препараты в России: Справочник. М.: АстраФарм Сервис, 1998, с.148).

Известен способ определения концентрации метронидазола в крови, включающий экстракцию образца (кровь, ткань и др.) этанолом, выдерживание в течение суток при нулевой температуре, снятие спектра образовавшейся надосадочной жидкости на спектрофотометре при длине волны 320 нм и расчете концентрации метронидазола с использованием калибровочной кривой. (Байсоголов Г.Д., Бердов Б.А., Коноплянников А.Г. и др. Непосредственные результаты лучевого и комбинированного лечения больных со злокачественными опухолями с использованием метронидазола. - Ж. Мед. радиол. - 1983, №2, с. 7-12).

К недостаткам данного способа следует отнести длительность выполнения анализа (24-30 часов).

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому и принятому за прототип является способ определения содержания метронидазола в биосубстратах путем проведения хроматографического анализа.

Для осуществления известного способа берут 1 мл или 1 г образца биосубстрата (кровь, слюна, ликвор, гнойное отделяемое, биоптат ткани), к которому добавляют 1 мл ацетонитрила для осаждения высокомолекулярной фракции. Полученную смесь центрифугируют 20 минут при 3000 об/мин, супернатант упаривают досуха в токе азота при температуре 80-90°С. Сухой остаток полностью растворяют в элюенте ацетонитрил-вода, взятых в соотношении 10:90, после чего центрифугируют в течение 20 минут. Полученную надосадочную жидкость вводят в хроматограф с подвижной фазой: ацетонитрил-вода (10:90), скорость потока 100 мкл/мин. Дегазация элюента гелием в течение 1-2 мин. Количественное определение метронидазола проводят при длине волны 318 нм. Время анализа, включая пробоподготовку, в среднем составляет 2 часа (Кузнецова Э.Э., Горохова В.Г., Андреева Т.А. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография пролонгированного метронидазола - метропола. Хим-фарм. ж-л. 2000, №8, с.46-47).

К недостаткам данного способа следует отнести использование дорогостоящего прибора, токсичных растворителей и многостадийность операций.

Задачей заявляемого технического решения является расширение диагностических возможностей лабораторного контроля за концентрацией метронидазола, содержащегося в крови пациента.

Техническим результатом предлагаемого способа является создание простого, доступного экспресс-метода определения концентрации метронидазола в жидких средах и тканях организма, позволяющего круглосуточно осуществлять его мониторинг.

Технический результат достигается тем, что способ определения содержания метронидазола в биосубстратах проводят путем хроматографического анализа образца.

Отличительные приемы заявляемого способа заключаются в том, что образец биопробы наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр, радиально, наносят стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. После этого фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен. Концентрацию метронидазола в анализируемом образце устанавливают по совпадению интенсивности окрашивания пятна пробы с пятном одного из стандартных калибровочных растворов.

Проведенный сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемый способ отличается от известных вышеперечисленными приемами и, следовательно, соответствует критерию изобретения «новизна».

Сравнение заявляемого технического решения не только с прототипом, но и с другими техническими решениями в медицине не позволило выявить в них признаки заявляемого изобретения. В доступной литературе авторами не выявлено способа определения содержания метронидазола в биосубстратах с использованием бумажной хроматографии.

Авторами предлагаемого способа экспериментальным путем установлено, что интенсивность окраски анализируемого образца находится в прямо пропорциональной зависимости при концентрации метронидазола 10-100 мкл.

Особенностью заявляемого способа является и то, что для определения содержания метронидазола в пробах не требуется предварительной пробоподготовки и специальных лабораторных приборов.

Клинические исследования авторов заявляемого способа свидетельствуют о том, что использование предлагаемого технического решения позволяет доступно, просто и быстро осуществлять мониторинг уровня препарата в биосубстратах и вносить соответствующие коррективы в процесс противоанаэробного лечения тяжелой категории больных.

Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии технического решения критерию «изобретательский уровень».

Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, а именно в клинической практике (терапия, гнойная хирургия, проктология, онкология и др.). Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке приемами и, следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость».

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

На бумажный фильтр микропипеткой наносят образец биопробы (сыворотка крови, слюна, моча, лимфа, ликвор, гнойное отделяемое, экссудат). На этот же фильтр радиально наносят и 10 стандартных калибровочных растворов метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. После этого на фильтр осторожно распыляют предварительно приготовленный реагент-проявитель, содержащий 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1. Затем этот фильтр помещают в термостат с температурой 100°С и сушат до появления окрашенных пятен. Интенсивность появившихся желтых пятен зависит от концентрации метронидазола. Концентрацию метронидазола в анализируемом образце устанавливают визуально по совпадению интенсивности окрашивания пятна пробы с пятном одного из стандартных калибровочных растворов. Общее время анализа составляет 20-30 минут.

Предложенный способ поясняется примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Больной В., история болезни №19140, поступил в реанимационное отделение гнойно-септического центра Областной клинической больницы с диагнозом - распространенный гнойный перитонит. Для подавления роста анаэробной неклостридиальной инфекции, выделенной у больного, был назначен метронидазол в дозе 500 мг внутривенно. Через 3 и 6 часов после введения метронидазола было проведено определение его содержания в сыворотке крови этого больного по заявляемому способу.

Через 3 часа концентрация введенного препарата составила 4,34 мкг/мл, через 6 часов концентрация метронидазола в сыворотке крови этого больного составила 3,24 мкг/мл.

Выявленное количество метронидазола оказалось ниже минимальной бактерицидной концентрации, что вызвало последующую коррекцию его дозы.

Пример 2. Больной Г., история болезни №17390, поступил в гнойно-септическое отделение ОКБ с диагнозом распространенный гнойный перитонит, анаэробная неклостридиальная инфекция. В комплекс лекарственной терапии был включен метронидазол эндолимфатически в дозе 500 мг.

Через 3, 6 и 9 часов после введения метронидазола было определенно его содержание в лимфе этого больного предлагаемым способом: через 3 часа - 35,3 мкг/мл, через 6 часов - 29,7 мкг/мл и через 9 часов - 25,3 мкг/мл.

Полученные данные свидетельствовали о том, что в исследуемый период содержание метронидазола превысило его минимальную бактерицидную концентрацию, что не потребовало внесения изменений в тактику антимикробной терапии.

Пример 3. Больной К., история болезни №21019, поступил в гнойно-септическое отделение ОКБ с диагнозом флегмона бедра. Из раны была выделена анаэробная инфекция (Bac. fragilis).

Пациенту был назначен метронидазол внутривенно в дозе 500 мг. Через 3 и 6 часов после введения было проведено определение содержания метронидазола в гнойном отделяемом из раны. Было определено: через 3 часа - 3,8 мкг/мл, через 6 часов - 2,9 мкг/мл.

Установленная концентрация метронидазола оказалось ниже минимальной бактерицидной, что потребовало увеличение его дозы.

Клинические исследования заявляемого способа проведены на базе клиники ФБГУ «НЦРВХ» СО РАМН в Областной клинической больнице. Было обследовано 39 больных, из них: с распространенным гнойным перитонитом - 20, панкреонекрозом - 9, флегмоной бедра - 5, язвенным колитом - 5.

Для сравнения концентрация метронидазола в сыворотке крови у этих больных так же была определена и методом спектрофотометрии. При сравнении полученных результатов ошибка определения не превысила 3,2%. При этом чувствительность предлагаемого способа составляет 89,8%, специфичность - 87,8%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет просто, быстро и достоверно определить содержание метронидазола в биосубстратах, что обеспечивает возможность проведения экспресс-анализа и, тем самым, позволяет своевременно внести коррективы в процесс лечения. Способ не предусматривает предварительной пробоподготовки и не требует специальной приборной техники.

Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах путем хроматографического анализа образца, отличающийся тем, что образец биопробы наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр радиально наносят стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл, после чего фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен, интенсивность окраски пятна пробы сравнивают с окраской пятен стандартных калибровочных растворов, по которым и определяют концентрацию метронидазола в анализируемом образце.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки степени тяжести внебольничной пневмонии. Сущность способа состоит в том, что у больного определяют в крови абсолютное количество лейкоцитов, относительное количество эритроцитов-макроцитов, абсолютное количество моноцитов 3-го класса с сегментированным лопастным ядром, относительное количество гранулярных лимфоцитов среднего размера, относительное количество нейтрофилов с 7-ю сегментами в ядре, количественный показатель C-реактивного белка, а также физиологический показатель числа дыхательных движений пациента в 1 минуту.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиоваскулярным заболеваниям, и может быть использовано для оценки тяжести эндотелиальной дисфункции у пациентов с ревматоидным артритом.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики отклонений в репродуктивном здоровье подростков мужского и женского пола с хронической патологией (ХПП).

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и неонатологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения и возможного исхода ретинопатии у недоношенных детей.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина и оксигемоглобина в эритроцитах новорожденного.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, может быть использовано для уточнения стадии обострения или ремиссии для пациентов с рассеянным склерозом (РС).
Изобретение относится к области онкологии и представляет собой способ выявления факторов наследственной предрасположенности к раку молочной железы, включающий регистрацию генетических маркеров путем массивного параллельного секвенирования с последующим отбором и детальным анализом только вредоносных мутаций среди больных раком молочной железы, отличающийся тем, что для выявления рецессивных факторов наследственной предрасположенности к раку молочной железы в исследование включают больных, имеющих в анамнезе ранний возраст начала заболевания, первично-множественный рак и не имеющих в семье родственников, больных раком молочной железы или раком яичников, при этом анализируют только те мутации, которые присутствуют в гомозиготном состоянии.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики нарушений менструальной функции, возникающих на фоне синдрома поликистозных яичников (СПКЯ).

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и может быть использовано для оценки травматичности липосакции. Сущность способа: липоаспират собирают в контейнер, производят забор жидкой части липоаспирата из нижней части контейнера, разводят его в физиологическом растворе и производят подсчет эритроцитов в камере Горяева в пяти больших квадратах, каждый из которых состоит из 16-ти малых, по формуле: где х - количество эритроцитов в 1 литре аспирата; а - количество эритроцитов, подсчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева; n - разведение аспирата в n раз; 80 - количество малых квадратов в камере Горяева; 4000 - множитель, приводящий к объему 1 мкл; 106 - количество мкл в 1 литре.

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию и анализу медицинских препаратов, и может быть использовано при стандартизации лекарственного растительного сырья.

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах.
Заявленное изобретение относится к области контроля качества лекарственных препаратов и представляет собой способ определения подлинности и количественного содержания бензэтония хлорида в лекарственных препаратах, включающий разделение компонентов препарата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, где в качестве элюента используют смесь ацетонитрила, гидрофосфата тетрабутиламмония, двузамещенного фосфата калия и воды, при содержании гидрофосфата тетрабутиламмония в количестве 2,5 мМ, двузамещенного фосфата калия в количестве 5 мМ, при этом разделение компонентов препарата проводят при длине колонки 125 мм.

Изобретение относится к способу скрининга нетератогенного вещества, который включает приведение испытуемого вещества в контакт с цереблоном или фрагментом цереблона, оценку способности испытуемого вещества связываться с цереблоном или фрагментом цереблона и отбор испытуемого вещества, не связывающегося с цереблоном или фрагментом цереблона, или испытуемого вещества, характеризующегося более низкой способностью связываться с цереблоном или фрагментом цереблона по сравнению с талидомидом.
Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов.

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к вольтамперометрическому способу определения молочной кислоты, используемой во многих областях пищевой промышленности, ветеринарии, косметологии и играющей огромную роль в физиологическом процессе человека.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. Способ заключается в использовании в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы и каталазы для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, причем предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла пихты сибирской разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1.

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство для вовлечения мезенхимальной стволовой клетки костного мозга в периферическую кровь из костного мозга, которое вводят в кровеносный сосуд или мышцу и которое содержит любой из компонентов: (a) белок HMGB1; (b) клетка, которая секретирует белок HMGB1; (c) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB1; (d) белок HMGB2; (e) клетка, которая секретирует белок HMGB2; (f) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB2; (g) белок HMGB3; (h) клетка, которая секретирует белок HMGB3; и (i) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB3.

Изобретение относится к области аналитической химии. Способ характеризуется тем, что электрохимически концентрируют бензойную кислоту на поверхности графитового электрода в течение 90 с при потенциале электролиза (-0,500) В на фоне 0,1 моль/л натрия гидрофосфата, затем регистрируют поляризационные кривые при линейной скорости развертки потенциала 25 мВ/с и по высоте пика в диапазоне потенциалов 0,5-1,6 В относительно хлорсеребряного электрода определяют концентрацию бензойной кислоты. Способ позволяет с высокой чувствительностью и экспрессностью определить бензойную кислоту в лекарственных препаратах. 3 пр., 6 табл.
Наверх