Применение тетрапептида pro-gly-pro-val в качестве средства профилактики и лечения нарушений липидного обмена, способ профилактики и лечения нарушений липидного обмена, фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений липидного обмена и способ ее получения

Группа изобретений относится к медицине и касается применения тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val в качестве средства профилактики или лечения нарушений липидного обмена; способа профилактики или лечения нарушений липидного обмена, включающего интраназальное применение лекарственного средства, содержащего тетрапептид Pro-Gly-Pro-Val в эффективном количестве; фармацевтической композиции для профилактики или лечения нарушений липидного обмена, включающей пептид Pro-Gly-Pro-Val с гипохолестерин- и триглицеридемическим действием в качестве активного вещества и вспомогательное вещество в качестве консерванта. Группа изобретений обеспечивает повышение эффективности профилактики и лечения нарушений липидного обмена по сравнению с природным трипептидом Pro-Gly-Pro. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 пр., 5 табл.

 

Изобретение относится к медицине, фармакологии и касается лекарственного средства пептидной природы для лечения заболеваний, сопровождающихся нарушениями липидного обмена.

Известно, что принимаемые с пищей липиды способствуют синтезу и последующему выделению в кровь и желчь холестерина (Xiao et al., 2011), который необходим для синтеза гормонов и биологически активных веществ организма. Установлено ((Марцевич, 2005)), однако его избыток может привести к развитию атеросклероза и атеротромбоза. Холестерин откладывается в местах повреждений стенок сосудов и вызывает в последующем образование атеросклеротической бляшки (Ли и др., 2000), что уменьшает просвет сосуда и обусловливает развитие острых или хронических сосудистых заболеваний сердца, мозга, глаз, нижних конечностей и т.д. Риск развития сосудистых заболеваний сердца и других органов оценивается по содержанию в крови общего холестерина, липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП), липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), триглицеридов. Общий холестерин отражает степень его насыщения в крови, ЛПНП - степень отложения холестерина в стенке сосуда, а ЛПВП - интенсивность его выведения из организма. Триглицериды (ТГ) используются организмом для транспорта и хранения липидов, поэтому важны для оценки степени риска сосудистых заболеваний (Бубнова и др., 2010). Показано (Кроненберг и др., 2010, Xiao et al., 2011), что инсулин способствует выходу жира из депо и превращению углеводов в жиры. В то же время пептидные гормоны лептины, которые вырабатывает жировая ткань, участвуют в поддержании постоянства глюкозы в крови и контролируют в организме чувство голода (Harris et al., 2007). Поскольку важным проявлением нарушения обмена липидов в организме человека является атеротромбоз, то при дислипидемии наряду с другими мероприятиями проводят и антитромботическую терапию (Watson et al., 2004). Известно, что такие аминокислоты, как пролин, лизин, аргинин, метионин, глутамин, лейцин предотвращают отложение ЛПНП на стенках артерий; снижают риск развития атеротромбоза, атеросклероза и сахарного диабета (Egger et al, 2008; Kostapanos et al., 2008). Установлено, что регуляторные пептиды Pro-Gly-Pro, Pro-Gly, Pro-Gly-Pro-Arg, Pro-Gly-Arg, Gly-Pro-Arg снижают повышенный уровень глюкозы крови у крыс при развитии экспериментального аллоксанового диабета и обеспечивают сохранение нормальной функции инсулярной и противосвертывающей систем крови (Ашмарин, 2008; Ляпина и др., 2011). Известно, что такая незаменимая аминокислота, как валин, участвует в росте и синтезе тканей тела, необходима для нормального обмена азота в организме и входит в состав комплекса аминокислот (ВСАА), который состоит из лейцина, изолейцина и валина. Эти аминокислоты, действуя совместно, активно участвуют в биосинтезе холестерина (http^//max-body.ru/stati/pitanie-sportsmenov/302-pitanie-do-i-posle-trenirovki).

Известен природный трипептид Pro-Gly-Pro, обладающий протекторной антидиабетогенной и антитромботической активностью (Патент РФ №2252778). Данный известный пептид может использоваться в качестве профилактики и лечения нарушений липидного обмена, гипергликемии и повышенной свертываемости крови, и он является прототипом предлагаемого изобретения.

Недостатком известного прототипа является его недостаточная стабильность в организме под действием N- и С-концевых монопептидаз.

Результат, получаемый при использовании настоящего изобретения, состоит в повышении эффективности профилактики и лечения нарушений липидного обмена.

Поставленный результат достигается применением тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val в качестве средства профилактики и лечения нарушений липидного обмена.

Поставленный результат достигается также способом профилактики и лечения нарушений липидного обмена, включающим интраназальное применение лекарственного средства на основе тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val в эффективном количестве.

Поставленный результат достигается также фармацевтической композицией для профилактики и лечения нарушений липидного обмена, приемлемой для интраназального введения и включающей пептид с гипохолестерин- и триглицеридемическим действием в качестве активного вещества и вспомогательное вещество в качестве консерванта, где в качестве пептида использован пептид общей формулы Pro-Gly-Pro-Val; в частности, такая композиция может быть выполнена в виде раствора следующего состава: пептид Pro-Gly-Pro-Val - 1÷10 г/л; нипагин - 0,9÷1,1 г/л в качестве консерванта, дистиллированная вода - до 1 литра.

Поставленный результат достигается также способом получения фармацевтической композиции для профилактики и лечения нарушений липидного обмена, включающим смешивание активного и вспомогательных веществ, где в качестве активного вещества используют пептид общей формулы Pro-Gly-Pro-Val; в частности, такую композицию получают в виде раствора следующего состава, приемлемого для интраназального введения:

пептид Pro-Gly-Pro-Val - 1÷10 г/л; нипагин - 0,9÷1,1 г/л в качестве консерванта, дистиллированная вода - до 1 литра.

Нижеследующие примеры иллюстрируют возможность достижения поставленного результата при реализации заявленной группы изобретений.

Пример 1

Эксперименты были проведены на 55 экспериментальных животных - белых лабораторных крысах-самцах с массой тела 450-600 г, содержащихся на жировой диете, обогащенной насыщенными жирными кислотами и холестерином (мука пшеничная и хлеб - 35%, сахарный песок - 10%, животные жиры (маргарин с гидрогенизированными жирами, майонез, сыр) - 35%, субпродукты - 10%, холестерин - 1%, сухой корм - 9%).

Спустя 1,5 месяца животные были разделены на две группы, 1-ая группа (опытная) 10-кратно интраназально получала пептид Pro-Gly-Pro-Val (PGPV) в дозе 200 мкг/ кг массы тела в объеме 0,02 мл на 200 г массы тела при продолжении поступления в организм жирной пищи, 2-ая группа (контрольная) также находилась на жировой диете и получала в те же сроки и в том же объеме вместо пептида его растворитель (0,85%-ный NaCl). В экспериментах использовали нормальных здоровых крыс (3-я группа), которые содержались на обычном лабораторном рационе и не получали никаких препаратов.

Через 1 час после последнего (10-го) введения пептида или физиологического раствора и через 7 и 18 суток после отмены применения препаратов при продолжающемся содержании животных на жировом рационе у них натощак брали кровь на анализы. Взятие крови осуществляли из v. jugularis в количестве 2 мл с использованием в качестве консерванта 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия в соотношении кровь:консервант как 9:1. Показатели жирового обмена в плазме крови исследовали энзиматическим колориметрическим методом с использованием набора реагентов фирмы Ольвекс-Диагностикум (Россия). При этом определяли концентрацию общего холестерина (ОХ), концентрацию холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), концентрацию триглицеридов (ТГ). Суммарную концентрацию холестерина липопротеидов низкой плотности и очень низкой плотности определяли по формуле: Хс(ЛПНП+ЛПОНП)=OX-Хс(ЛПВП). Результат выражали в ммоль/л и в %.

Полученные данные анализов показателей липидного профиля и крови приведены в таблице 1.

Таблица 1
Параметры жирового обмена - уровень общего холестерина (ОХ), холестерина липопротеидов низкой плотности+холестерина липопротеидов очень низкой плотности (ЛПНП+ЛПОНП), уровень триглицеридов (ТГ), уровень холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) и показатели гемостаза, уровень сахара крови через 1 час после 10-кратного введения крысам с гиперхолестеринемией Pro-Gly-Pro-Val (опыт) или NaCl (контроль) (M±m).
Показатель	Норма	Контроль (0.85%-ный NaCl)	Опыт (пептид PGPV)
ОХ, моль/л (%)	0.89±0.091	1.072±0.065 (100%)	0.838±0.004 (78%)*
ЛПНП+ЛПОНП, ммоль/л (%)	0.197±0.045	0.53±0.061 (100%)	0.283±0.053 (53%)**
ЛПВП, моль/л (%)	0.79±0.08	0.70±0.053 (100%)	0.748±0.061 (107%)
ТГ, ммоль/л (%)	0.794±0.071	1.224±0.062 (100%)	0.880±0.044 (72%)*
Уровень сахара, ммол/л (%)	3.7±0.06	4.3±1.5(100%)	3.9±1.5(91%)
АЧТВ, сек (%)	30.1±0.7	23.9±4.4 (100%)	51.4±4.25 (215%)**
СФА, мм2(%)	36.0±0.5	30.4±1.7(100%)	57.5±14.1 (189%)*
НФ, мм2(%)	20.6±0.5	21.6±3.7 (100%)	33.5±2.7 (155%)*
Агрегация тромбоцитов, индекс(%)	1.15±0.17	3.8±0.49 (100%)	1.6±0.38 (42%)**
ФФ, мм2	15.3±3.4	8.8±1.0(100%)	23.4±7.5 (266%)*
Т продолжительность свертывания, мин (%)	175.0±7.1	235.0±34.1 (100%)	183.0±9.5 (78%)

Примечание. Статистические показатели рассчитаны относительно соответствующих проб контроля с 0,85%-ым раствором NaCl: * р<0.05, **р<0.01,

где ОХ - уровень общего холестерина, (ЛПНП+ЛПОНП) - холестерин липопротеидов низкой плотности+холестерин липопротеидов очень низкой плотности, ТГ - уровень триглицеридов, ЛПВП - уровень холестерина липопротеидов высокой плотности (в ммоль/л), АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время, СФА - суммарная фибринолитическая активность, НФ - неферментативная фибринолитическая активность, ФФ - ферментативная фибринолитическая активность, Т - показатель продолжительности свертывания электрокоагулограммы.

Как видно из таблицы 1, через 1 час на фоне 10 -кратного интраназального применения пептида Pro-Gly-Pro-Val совместно с жировой диетой в опытной группе крыс достоверно снизился со 100% (1,072 ммоль/л в контроле) до 78% (0,838 ммоль/л) уровень общего холестерина (в норме он составлял 0,89 ммоль/л); уровни ЛПНП+ЛПОНП со 100% (0,53 ммоль/л в контроле) до 53% (0,283 ммоль/л) (в норме - 0,197 ммоль/л). При этом уменьшился уровень ТГ со 100% (1,224 ммоль/л в контроле) до 72% (0,88 ммоль/л, в норме он составлял 0,794 ммоль/л). Таким образом, по сравнению с соответствующими значениями в контрольной группе крыс, параметры жирового обмена у опытных крыс, получавших пептид, приближались или даже соответствовали тем же показателям у здоровых крыс (норма).

Таким образом, исследуемый пептид восстанавливал нормальные значения показателей липидного профиля даже при одновременном употреблении в пищу продуктов, приводящих к повышению уровня холестерина крови и преатерогенных липопротеинов низкой и очень низкой плотности, а также триглицеридов. Это, возможно, связано с гипохолестериновым действием самого пептида, что впервые обнаружено.

В указанный период времени после 10-кратного введения пептида были обнаружены достоверные изменения в антикоагулянтной активности плазмы (в сторону удлинения АЧТВ на 115%); в фибринолитической активности - СФА увеличилась на 89%, НФ - на 55%, ФФ - на 166% по сравнению с контрольными пробами (у крыс на жировой диете и, в меньшей мере, на обычной). Агрегация тромбоцитов, индуцированная АДФ, была ниже на 58% по сравнению с контрольным уровнем у крыс на жировой диете, но превышала этот показатель. Следовательно, пептид Pro-Gly-Pro-Val при многократном интраназалыюм введении в организм животных оказывает активирующее влияние на функцию противосвертывающей системы (обладает антикоагулянтными и фибринолитическими свойствами, уменьшает повышенную способность тромбоцитов к агрегации). Дополнительно к этому была установлена некоторая тенденция к снижению уровня сахара крови в опыте на 9%.

Таким образом, тетрапептид Pro-Gly-Pro-Val при его многократном в течение 10 суток интраназальном введении в ежедневной дозе 200 мкг/кг на фоне жирового рациона приводит к лечебному нормохолестериновому действию: отмечается нормальный уровень холестерина у опытных крыс, соответствующий его уровню у здоровых животных; значимому уменьшению дислипидемии, нормализации уровня триглицеридов. При этом показатели гемостаза (СФА, НФ, АЧТВ), в отличие от контроля достоверно приближались или даже превышали уровень, наблюдаемый у здоровых животных. По данным электрокоагулограммы наблюдались достоверные изменения в параметре Т - продолжительности свертывания крови.

Интраназальное применение 0,85%-го раствора NaCl вместо тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val в данных условиях эксперимента не приводило к снижению холестеринемии и повышенной свертываемости крови.

Пример 2

Установление лечебного действия тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val на параметры жирового обмена и свертывающей системы крови проводили в отдаленные сроки после отмены введения тетрапептида на фоне жирового рациона спустя 7 суток (таблица 2) и 18 суток (таблица 3).

Результаты экспериментов через 7 суток после отмены введения тетрапептида представлены в таблице 2.

Таблица 2
Параметры жирового обмена - уровень общего холестерина (ОХ), холестерина липопротеидов низкой плотности+холестерина липопротеидов очень низкой плотности (ЛПНП+ЛПОНП), уровень триглицеридов (ТГ), уровень холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) и показатели гемостаза крови через 7 суток после отмены введения крысам с гиперхолестеринемией Pro-Gly-Pro-Val (опыт) или NaCl (контроль) при продолжающемся содержании животных на жировой диете (M±n).
Показатель	Норма	Контроль (0.85%-ный NaCl)	Опыт (пептид PGPV)
ОХ, моль/л (%)	1.143±0.068	1.481±0.084(100%)	1.094±0.042 (73.8%)**
ЛПНП+ЛПОНП, ммоль/л (%)	0.301±0.055	0.888±0.065 (100%)	0.299±0.049 (38.7%)**
ЛПВП, ммоль/л (%)	1.119±0.038	0.544±0.031 (100%)	0.795±0.055 (146%)**
ТГ, ммоль/л (%)	0.778±0.045	1.370±0.095 (100%)	0.870±0.031 (64%)**
АЧТВ, сек(%)	33.6±0.7	20.2±3.0 (100%)	52.1±2.7 (258%)**
СФА, мм2(%)	34.0±0.7	27.2±0.9 (100%)	46.7±1.3 (172%)**
НФ, мм2(%)	22.0±0.5	20.2±0.9 (100%)	31.7±1.1 (157%)**
ФФ, мм2 (%)	12.0±0.1	7.0±1.6(100%)	14.0±1.1 (200%)**
Продолжительность свертывания, Т мин (%)	185±49.5	125±26.5 (100%)	255±34.1 (204%)**
Коагуляционная активность, усл. ед. (%)	5.9±1.1	9.7±1.1 (100%)	5.7±1.3 (59%)*

Статистические показатели рассчитаны относительно соответствующих проб контроля: *р<0.05, **р<0.01

Как видно из таблицы 2, спустя 7 суток после отмены применения пептида наблюдались более выраженные и достоверные изменения в липидном профиле: уровень холестерина снизился до 78,3%, уровень ЛПНП+ЛПОНП снизился на 66,3%, ТГ - на 36%. Уровень ЛПВП достоверно повысился на 46%, в то время как неделю назад этот показатель практически не отличался от контроля. Таким образом, можно говорить о сохранении гипохолестеринемического и снижающего уровень триглицеридов действия пептида Pro-Gly-Pro-Val в отдаленные сроки даже при его отмене. Наряду с этим установлено достоверное повышение антикоагулянтных и фибринолитических свойств плазмы у крыс, получавших пептид по сравнению с контрольным уровнем. Так, АЧТВ повысился на 158%, СФА - на 72%, НФ - на 57%, ФФ - на 100%. Обращает на себя внимание факт резкого увеличения АЧТВ и СФА, что, возможно, обусловлено способностью препарата пептида оказывать противосвертывающий эффект в отдаленные сроки.

В опытной группе животных через 7 суток после отмены применения пептида также сохраняется удлинение продолжительности свертывания крови, а также снижение коагуляционной активности в плазме крови. Таким образом, пептид Pro-Gly-Pro-Val обладает отсроченным гипокоагуляционным действием.

На данном примере продемонстрировано, что многократное в течение 10-ти суток интраназальное применение тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val на фоне холестериновой диеты через 7 суток после отмены его введения животным при продолжающемся поступлении в организм жирной пищи защищало организм от развития гиперхолестеринемии, дислипидемии, гипертриглицеридемии, препятствовало активации свертывающей системы. В контроле (интраназальное введение 0,85%-го физиологического раствора на фоне жировой диеты) наблюдалось развитие гиперхолестеринемии, о чем свидетельствовало повышение концентрации холестерина крови, снижение антикоагулянтного и фибринолитического звеньев противосвертывающей системы и изменение показателей электрокоагулограммы.

В более отдаленные сроки, спустя 18 суток после отмены введения тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val получены следующие данные, представленные в таблице 3.

Таблица 3
Параметры жирового обмена - уровень общего холестерина (ОХ), холестерина липопротеидов низкой плотности+холестерина липопротеидов очень низкой плотности (ЛПНП+ЛПОНП), уровень триглицеридов (ТГ), уровень холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) и показатели гемостаза крови через 18 суток после отмены введения крысам с гиперхолестеринемией Pro-Gly-Pro-Val (опыт) или NaCl (контроль) при продолжающемся содержании животных на жировой диете (M±m).
Показатель крови	Норма	Контроль (0.85%-ный NaCl)	Опыт (пептид PGPV)
ОХ, ммоль/л (%).	1.304±0.079	1.674±0.104 (100%)	1.473±0.064 (87%)
ЛПНП+ЛПОНП, ммоль/л (%)	0.205±0.058	0.557±0.036 (100%)	0.382±0.039 (68.5%)**
ЛПВП, ммоль/л (%)	1.162±0.051	1.078±0.059(100%)	1.091±0.083 (103%)
ТГ, ммоль/л (%)	0.686±0.071	1.442±0.094(100%)	1.268±0.046 (88%)
АЧТВ, сек (%)	40.2±0.7	29.8±2.4 (100%)	37.9±2.2 (127%)*
СФА, мм2(%)	37.5±1.1	28.7±2.5 (100%)	37.7±1.5 (132%)*
НФ, мм2(%)	25.7±0.7	20.1±0.8(100%)	24.3±1.2 (121%)
ФФ, мм2 (%)	11.7±0.3	9.6±1.0(100%)	13.4±0.7 (140%)
Агрегация тромбоцитов, индекс(%)	1,23±0,24	1.8±0.32 (100%)	1.2±0.16(67%)
Продолжительность свертывания Т, мин (%)	185.0±7.1	125.0±20.8 (100%)	184.0±23.0 (147%)*
Коагуляционная активность, усл. ед. (%)	5.3±2.1	17.2±2.5 (100%)	12.6±0.9 (73%)*

Статистические показатели рассчитаны относительно соответствующих проб контроля: *р<0.05 **р<0.01.

Показано, что спустя 18 суток после отмены применения пептида сохранялись достоверные изменения только в уровне ЛПНП+ЛПОНП, который был ниже на 31.5% у крыс на жировой диете, получавших пептид по сравнению с крысами на жировой диете, получавшими 0,85%-ный NaCl. При этом сохранялась тенденция снижения уровня ОХ и ТГ. Таким образом, к 18-м суткам после отмены применения пептида Pro-Gly-Pro-Val показатели липидного профиля приближались к контрольному уровню, сохраняя позитивное действие на уровень ЛПНП+ЛПОНП.

Через 18 суток после отмены применения пептида Pro-Gly-Pro-Val антикоагулянтная и суммарная фибринолитическая активность крови у крыс на жировой диете, получавших пептид, оставалась выше, чем в контрольной группе у крыс на жировой диете, получавших 0,85%-ный NaCl и соответствовала аналогичным показателям у крыс на обычной диете.

Агрегация тромбоцитов у крыс на жировой диете, получавших пептид соответствовала нормальным значениям и была ниже, чем у крыс на жировой диете, получавших 0.85%-ный NaCl.

Пример 3

Способность тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val предотвращать накопление массы тела крыс при длительном содержании их на жировом рационе.

В нижеследующей таблице 4 представлены результаты измерения массы тела животных до и после интраназального десятикратного введения пептида PGPV при содержании животных на жировой диете.

Таблица 4
Условия	Контроль	Опыт
Исходная масса тела, г	528.3±15.8(100%)	535.0±13.3 (100%)
Масса тела после 10-кратн. введения PGPV на фоне жировой диеты в течение 1,5 мес, г	618.8±12.3 (117%)	585.0±14.1 (109%)
Привес за время введения препаратов, г	+90.5±10.1	+50.0±10.2*
Масса тела через 7 сут после отмены препаратов на фоне продолжающейся жировой диеты, г	623.3±15.9 (118%)	577.5±14.3 (108%)
Привес через 7 сут после отмены препаратов, г	+94.4±11.3	+42.5±5.13**
Суммарный привес за все время нахождения на жировой диете, г	+105.5±10.2 (100%)	+51.5±9.24 (48.8%)**

Достоверность различий относительно контроля: *р<0.05, **р<0.01. Как видно из таблицы 4, содержание животных на жировом рационе в течение практически двух месяцев привело к прибавке веса контрольных крыс более чем на 100 г (18%). В опытной группе, получавшей десятикратно пептид Pro-Gly-Pro-Val на фоне постоянной жировой диеты, привес у животных за все время проведения эксперимента был почти в 2 раза меньше, чем в контрольной группе (48,8% по сравнению с привесом у контрольных животных). Это замедление в прибавке веса наблюдалось сразу же после 10-кратного применения пептида и сохранялось после его отмены на протяжении последующих 7 суток.

Таким образом, эксперимент показал эффективность действия пептида Pro-Gly-Pro-Val в профилактике накопления жировой массы (т.е. избыточную прибавку в весе) у крыс, находящихся на жировой диете. Исследуемый пептид оказывал лечебное действие при нарушениях липидного обмена. Он предотвращал накопление жировой массы или восстанавливал нормальные значения показателей холестерина, в частности холестерина липопротеидов низкой плотности и холестерина липопротеидов очень низкой плотности при его лечебном применении, или препятствовал повышению концентрации холестерина даже при одновременном употреблении в пищу продуктов, которые обычно способствуют увеличению холестерина крови. Также впервые установлены антикоагулянтно-фибринолитические и антитромбоцитарные эффекты этого пептида в крови крыс, постоянно употребляющих жирную пищу с избытком насыщенных жирных кислот.

Пример 4

Сравнение гипохолестеринемического и противосвертывающего лечебного действия трипептида Pro-Gly-Pro (прототип) с тетрапептидом Pro-Gly-Pro-Val при нарушениях липидного обмена при их интраназальном введении проводили следующим образом. Для изучения лечебного эффекта тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val (группа 1) или трипептида Pro-Gly-Pro (группа 2) животные предварительно содержались на жировой диете в течение 1 месяца, после чего каждой из групп интраназально вводили соответствующий пептид в дозе 200 мкг/кг массы тела в объеме 0,02 мл физиологического раствора в течение 7-10 суток через каждые 24 часа. Кровь на анализы брали через 1 час, 7 и 18 суток после отмены введения препаратов. Определяли концентрацию холестерина, фибринолитическую и антикоагулянтную активность плазмы, а также агрегацию тромбоцитов. В таблице 5 приведены экспериментальные данные по сравнительному действию тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val и трипептида Pro-Gly-Pro.

Таблица 5
Сравнение лечебного гипохолестеринемического и противосвертывающего действия трипептида Pro-Gly-Pro (прототип) с тетрапептидом Pro-Gly-Pro-Val (предлагаемый препарат)
Показатели	Pro-Gly-Pro (прототип)	Pro-Gly-Pro-Val (предлагаемый препарат)
Лечебный эффект (% от контроля - введение 0.85% NaCl, принятого за 100%) через 1 час после последнего введения / через 7 суток после последнего введения / через 18 суток после последнего введения
Холестерин (общий)	84.3/80	78.0/73.8/ 87.0
ЛПНП+ЛПОНП	Не определено	53.0/38.8/68.5
Триглицериды	Не определено	72.0/64.0/88.0
Антикоагулянтная активность (по тесту АЧТВ)	136.0/119	215.0/258.0/ 127.0

Суммарная фибринолитическая активность	271.0/130.0	189.0/ 172.0/ 132.0
Агрегация тромбоцитов	100.0/100.0	42.0/-/67.0
Суммарный привес за все время проведения эксперимента
г, (% от исходной массы тела)	+67.5±10.2 (64.0%)*	+51.5±9.24 (48.8%)**

Сравнительные данные, приведенные в таблице 5, показывают, что при сравнении лечебных эффектов двух пептидов отмечается более выраженная способность тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val снижать концентрацию общего холестерина, повышать антикоагулянтную и фибринолитическую активность, снижать агрегацию тромбоцитов в течение всего периода наблюдения (до 18 суток после отмены применения тетрапептида на фоне жирового рациона) по сравнению с трипептидом Pro-Gly-Pro. Следует отметить высокую степень снижения липопротеинов низкой плотности при применении тетрапептида.

Наиболее значительная разница при сравнении действия двух пептидов установлена по изменению суммарного привеса за все время проведения эксперимента: при применении тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val суммарный привес был в два раза ниже (48,8% по сравнению с привесом у контрольных животных), в то время как при использовании трипептида Pro-Gly-Pro привес в группе опытных животных составил 64,0% от контроля, что свидетельствует о возможности применения тетрапептида при ожирении.

Таким образом, применение тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val в качестве средства лечения заболеваний, сопровождающихся нарушениями липидного обмена при его интраназальном использовании превосходит прототип.

Список литературы

1. Ашмарин И.П., Ляпина Л.А., Андреева Л.А., Ульянов A.M., Пасторова В.Е., Оберган Т.Ю., Алфеева Л.Ю., Мясоедов Н.Ф. Лечебный эффект глипролинов Pro-Gly и Pro-Gly-Pro при развитии экспериментального инсулинзависимого диабета // Тромбоз, гемостаз и реология. 2008. Т. 34. №2. С.38-43.

2. Берковский А.Л. и др. Пособие по изучению адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов. М.: НПО «Ренам» РАМН, 2003. С.3-28.

3. Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза М.: Изд-во мин-ва здравоохр. и соц. развития РФ, 2005. 227 с.

4. Ли Е.Д., Лазебник Л.Б., Коноплева Г.Е., Шухов B.C., Шухова А.В. Терапия гиперлипидемий в амбулаторной практике // Международный медицинский журнал, 2000. - N 3. - С.265-268.

5. Ляпина Л.А., Андреева Л.А., Ульянов A.M., Оберган Т.Ю., Шубина Т.А., Мясоедов Н.Ф., Ашмарин И.П. Противосвертывающие и антидиабетогенные эффекты трипептида Gly-Pro-Arg при развитии экспериментального инсулинзависимого диабета // Тромбоз, гемостаз и реология. 2011. №2 (46). С.53-58.

6. Марцевич С.Ю. Атеросклероз. Клиническая значимость и возможность предупреждения. М.: ООО «Сервиском». 2005. С.3-16.

7. Egger Е., Jean-Paul Schmid J.P., Schmid R.W., Saner H., and von Kanel R. Depression and anxiety symptoms affect change in exercise capacity during cardiac rehabilitation // European Journal of Cardiovascular Prevention & Rehabilitation, Dec 2008; 15: 704 - 708.

8. Kostapanos M.S., Haralampos J. Milionis, and Moses S. Elisaf An Overview of the Extra-Lipid Effects of Rosuvastatin// Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics, 2008; 13: 157-174.

9. Kudrjashov B.A., Lyapina L.A. Nonenzymatic fibrinolysis and its role in the organism // Thrombosis and thrombolysis / Eds Chazov E.I., Smirnov V.N. N. Y.: Consultants Bureau, 1986. P. 33-65.

10. Watson Т., Arya A.,Sulke N., and Lip G. Y. H. Antithrombotic therapy: Relationship of Indices of Inflammation and Thrombogenesis to Arrhythmia Burden in Paroxysmal Atrial Fibrillation//Chest, 2010; 137: 869 - 876.

11. Xiao C, Hsieh J., Adeli K., and Lewis G.F. Gut-liver interaction in triglyceride-rich lipoprotein metabolism // Am J Physiol Endocrinol Metab, 2011; 301: E429 - E446.

1. Применение тетрапептида Pro-Gly-Pro-Val в качестве средства профилактики или лечения нарушений липидного обмена.

2. Способ профилактики или лечения нарушений липидного обмена, включающий интраназальное применение лекарственного средства, содержащего тетрапептид Pro-Gly-Pro-Val в эффективном количестве.

3. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения нарушений липидного обмена, включающая пептид с гипохолестерин- и триглицеридемическим действием в качестве активного вещества и вспомогательное вещество в качестве консерванта, отличающаяся тем, что композиция выполнена приемлемой для интраназального введения, при этом в качестве пептида использован пептид Pro-Gly-Pro-Val.

4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что она выполнена в виде раствора следующего состава: пептид Pro-Gly-Pro-Val - 1÷10 г/л; нипагин - 0,9÷1,1 г/л в качестве консерванта, дистиллированная вода - до 1 литра.

5. Способ получения фармацевтической композиции для профилактики или лечения нарушений липидного обмена, включающий смешивание активного и вспомогательных веществ, отличающийся тем, что в качестве активного вещества используют пептид Pro-Gly-Pro-Val.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что композицию получают в виде раствора следующего состава, приемлемого для интраназального введения: пептид Pro-Gly-Pro-Val - 1÷10 г/л; нипагин - 0,9÷1,1 г/л в качестве консерванта, дистиллированная вода - до 1 литра.