Способ определения способности клеток костного мозга к делению



 


Владельцы патента RU 2537141:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности клинической биохимии, цитологии, патоморфологии и может быть использовано для определения способности клеток костного мозга к делению. Клетки хранят в стандартном растворе стабилизатора при комнатной температуре, отбирают из суспензии первую исходную пробу и через 3-3,5 часа хранения суспензии отбирают вторую пробу, пробы обрабатывают флуоресцентным потенциалчувствительным витальным зондом иодид 2-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиния, измеряют интенсивность флуоресценции зонда в клетках, рассчитывают долю клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. в каждой пробе, и при увеличении доли клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. более чем в 1,5 раза во второй пробе по сравнению с первой, судят о способности клеток костного мозга к делению. Способ позволяет оценить спонтанную способность ККМ к делению, обусловленную эффектом собственных ростовых факторов, и исключает причины, влияющие на деление и дифференцировку клеток. Способ методически прост и позволяет получить результаты через 3-3,5 часа. 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности клинической биохимии, цитологии, патоморфологии, и может быть использовано для определения способности клеток костного мозга (ККМ) к делению.

Известен способ определения колониеобразующей способности гемопоэтических стволовых клеток костного мозга для оценки их жизнеспособности, основанный на культивировании на различных полувязких и полутвердых питательных средах (метилцеллюлоза, коллаген, агар) с обязательным добавлением экзогенных ростовых факторов [С. Nissen-Druey, A. Tichelli, S. Meyer-Monard. Human Hematopoietic Colonies in Health and Disease. Acta Haemotologica (ISSN 0001-5792), V.113, №1, 2005]. Культуральные среды предназначены для поддержания оптимального режима жизнедеятельности изолированных клеток, фрагментов тканей и органов в искусственно создаваемых системах. Однако чаще всего используемые в качестве питательных сред агар и метилцеллюлоза влияют на пролиферацию и дифференцировку ККМ.

Известен модифицированный метод лимитирующих разведении (LDA) [Takaue Y., Reading C.L., Roome A.J., Dicke K.A., Tindle S., Chandran, M., Devaraj B. Limiting-Dilution Analysis of the Effects of Colony-Stimulating Factors, Phytohemagglutinin, and Hydrocortisone on Hematopoietic Progenitor Cell Growth. Blood, V.70, №5, 1987, P. 1611-1618], основанный на выращивании гемопоэтических клеток-предшественников в жидкой среде и позволяющий исключить влияние агара и метилцеллюлозы на колониеобразующую способность. Применение метода LDA позволило исследовать воздействие фитогемагглютенина, гидрокортизона и различных цитокинов на гемопоэтические клетки-предшественники.

Для изучения пролиферативной активности клеток используют метод с применением оксимочевины, которая подавляет синтез ДНК через действие на рибонуклеотидредуктазу. Клетки выделяют, отмывают и инкубируют с оксимочевиной, снова отмывают и переносят в питательную среду, инкубируют 7-9 дней (в контроле без оксимочевины) [Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск, 1992, под ред. д.м.н. Новицкого, 272 с.].

Общими недостатками приведенных способов являются:

- влияние ростовой среды на деление и дифференцировку клеток;

- добавление экзогенных колониестимулирующих факторов маскирует эффект собственных ростовых факторов и не позволяет оценить спонтанную способность клеток к делению;

- методическая сложность и длительность (результаты получают через 7-14 дней).

Техническим результатом заявленного изобретения является определение спонтанной способности ККМ к делению, обусловленной эффектом собственных ростовых факторов, а также упрощение способа, сокращение времени получения результатов.

Указанный технический результат достигается в способе определения способности клеток костного мозга к делению, в котором клетки хранят в стандартном растворе стабилизатора при комнатной температуре, отбирают из суспензии первую исходную пробу и через 3-3,5 часа хранения суспензии отбирают вторую пробу, пробы обрабатывают флуоресцентным потенциалчувствительным витальным зондом иодид 2-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиния (2-Di-1-ASP), измеряют интенсивность флуоресценции зонда в клетках, рассчитывают долю клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. в каждой пробе, и при увеличении доли клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. более чем в 1,5 раза во второй пробе по сравнению с первой, судят о способности клеток костного мозга к делению.

Популяция ККМ чрезвычайно гетерогенна и содержит большое количество форменных элементов крови и клеток-предшественников разной степени зрелости. [Воробьев А.И., Дризе Н.И., Чертков И.Л. Схема кроветворения. Пробл. Гематологии, 1995, т.1, №1, с.7-14]. Среди клеток-предшественников выделяют стволовые и прогениторные клетки, которые дают начало зрелым клеткам крови - колониеобразующие единицы (КОЭ). Стромальные клетки костного мозга вырабатывают фактор стволовых клеток (ФСК), который стимулирует пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических клеток.

Ранее авторами было установлено, что флуоресцентный потенциалчувствительный витальный зонд катионного типа 2-Di-1-ASP проникает в живые ККМ и флуоресцирует в них, причем его флуоресценция чувствительна к изменению энергетического потенциала ККМ [RU №2488826, опубл. 27.07.2013, бюл. №21].

При разработке заявленного способа были исследованы образцы суспензии нативных ККМ в стандартном растворе стабилизатора 20 доноров, которые хранились при комнатной температуре (примерно 25°С). Исходно доля живых клеток в образцах составляла 80-92% (тест с трипановым синим [Phelan M.C. Basic techniques for mammalian cell tissue culture. Current Protocols in Cell Biology. 0:1.1.1-1.1.10. 1998]).

В качестве стандартного раствора стабилизатора был использован препарат фирмы «Terumo Corporation, Tokyo, Japan», содержащий в 100 мл:

цитрат натрия 2,63 г
лимонная кислота 0,327 г
дигидрофосфат натрия 0,251 г
декстроза безводная 2,9 г
аденин 0,0275 г
дистиллированная вода остальное

Из образцов отбирали пробы клеток исходно (0 часов) и через 1 час, 2 часа, 3 часа, 5 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа хранения. Пробы инкубировали с 2-Di-1-ASP при 37°С, готовили препараты клеток, исследовали их на люминесцентном микроскопе и определяли среднюю интенсивность флуоресценции ( F ˜ ) ККМ. В каждом препарате определяли флуоресценцию массива 80-100 клеток. Все исследованные клетки в каждом препарате разделяли на 4 группы по величине интенсивности флуоресценции: I - от 10 до 30 усл.ед.; II - от 30 до 70 усл.ед.; III - от 70 до 100 усл.ед.; IV - от 100 усл.ед. и рассчитывали долю клеток в каждой группе. Количество ядросодержащих клеток определяли по известному методу [Клиническая лабораторная аналитика, том 2. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. Под общей редакцией Меньшикова В.В., М., «Лабинформ», РАМЛД, 1999.], результаты выражали в процентах по отношению к количеству клеток в исходной пробе (NC=C/Cисх.×100).

Статистическую обработку данных экспериментов проводили по t критерию Стьюдента [Бейли И.Н. Статистические методы в биологии. М., наука, 1963, 272 с.] и по коэффициенту корреляции рангов Спирмена [Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., Медицина, 1973, 142 с.].

В результате статистической обработки полученных данных было установлено, что через 3-3,5 часа хранения наблюдался рост F ˜ по сравнению с исходной, обусловленный увеличением доли клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. (NF>100), причем степень этого нарастания коррелировала с увеличением NF>100. Через 5 часов хранения начиналось снижение F ˜ из-за отсутствия питательных веществ в среде хранения, что также коррелировало со снижением NF>100. Показано, что чем выше NF>100 через 3-3,5 часа хранения, тем больше прирост концентрации ядросодержащих клеток в суспензии, который начинался через 5 часов хранения, что свидетельствовало о способности клеток к делению. При возрастании NF>100 через 3-3,5 часа хранения ККМ менее чем в 1,5 раза по сравнению с исходной величиной, концентрация ядросодержащих клеток практически не изменялась, что свидетельствовало о неспособности клеток к делению в данных условиях.

Способ может быть осуществлен, например, следующим образом.

Получение суспензии ККМ проводят по опубликованной методике [Фрегатова Л.М., Зубаровская Л.С., Эстрина М.А., Головачева А.А., Бабенко Е.В., Платонова Г.Г., Зуева Е.Е., Афанасьев Б.В. Методы получения стволовых клеток у больных и доноров для их последующей трансплантации. СПб, Изд. СПб ГМУ, кафедра гематологии, трансфузиологии, трансплантологии ФПО, 2004]. Полученные клетки помещают в стандартный раствор стабилизатора и хранят при комнатной температуре.

Суспензию клеток с концентрацией (~2-3)×107 объемом 0,9-1,0 мл хранят в пробирках типа Эппендорф емкостью 1,5 мл при комнатной температуре. Сразу после помещения клеток в пробирку суспензию перемешивают и отбирают из нее пробу объемом 30,0 мкл, помещают ее в пробирку типа Эппендорф емкостью 0,6 мл, добавляют раствор 2-Di-1-ASP в конечной концентрации 1·10-5-1·10-4 М и инкубируют в течение 45-90 мин при 37°С. После инкубации из суспензии окрашенных клеток берут каплю (3 мкл) суспензии, помещают на обезжиренное предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют препарат клеток на люминесцентном микроскопе Люмам-И2 (ЛОМО, Россия). Флуоресценцию зонда возбуждают ртутной лампой ДРШ-250-2 с длиной волны 405-436 нм. Для регистрации флуоресценции используют фотометрическую насадку ФМЭЛ-1 и интерференционный фильтр с максимумом пропускания 585 нм. Длина волны возбуждения 470 нм, интенсивность флуоресценции определяют при длине волны 560 нм. Регистрируют величину интенсивности флуоресценции каждой индивидуальной клетки. В каждом препарате определяют флуоресценцию массива 80-100 клеток, рассчитывают NF>100 в исходном образце (время хранения - 0 часов).

Через 3-3,5 часа хранения суспензии ККМ из пробирки емкостью 1,5 мл после перемешивания отбирают вторую пробу объемом 30,0 мкл, помещают ее в пробирку емкостью 0,6 мл, добавляют раствор 2-Di-1-ASP, инкубируют при 37°С и, после приготовления препарата окрашенных клеток, исследуют его на люминесцентном микроскопе, рассчитывают NF>100. При возрастании NF>100 через 3-3,5 часа хранения ККМ более чем в 1,5 раза по сравнению с исходной величиной судят о способности ККМ к делению.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Донор 1. ККМ хранили в среде стандартного стабилизатора при комнатной температуре. Через определенные временные интервалы отбирали пробы клеток, инкубировали их с 2-Di-1-ASP при 37°С, определяли F ˜ (средняя величина флуоресценции 80-100 индивидуальных клеток), рассчитывали NF>100. Для контроля способности к делению определяли количество ядросодержащих клеток. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1
Параметр Время хранения, час
Исх. 3 5 24 48 72 Р
F ˜ усл.ед. 81,05±3,70 126,8±4,4* 118,3±3,4* 88,5±2,7** 84,03±2,50** 75,7±3,0**
NF>100 % 26,6 67,2 45,8 25,0 36,3 23,1 0,025#
NC, % 100 115 170 209 190 200
* P=0,05; ** P=0,01 (t критерий Стьюдента), сравнение с F ˜ исх.
# - корреляция между F ˜ и NF>100 (коэффициент корреляции рангов Спирмена).

Полученные данные показывают, что в пробе, отобранной через 3 часа хранения, NF>100 возрастает по сравнению с исходной в 2,5 раза, что коррелирует с нарастанием F ˜ в 1,56 раза. Через 5 часов хранения при снижении доли клеток с F>100 наблюдается увеличение концентрации ядросодержащих клеток в 1,7 раза по сравнению с исходной, что свидетельствует об их интенсивном делении. Через 24 часа величина NF>100 практически возвращается к исходной, однако концентрация клеток продолжает нарастать (в 2 раза выше исходной). Через 72 часа NF>100 ниже исходного уровня, но концентрация клеток по-прежнему в 2 раза выше исходной.

Таким образом, увеличение NF>100 через 3 часа хранения ККМ в 2,5 раза свидетельствует об их способности к делению.

Пример 2. Донор 2. ККМ хранили в среде стандартного стабилизатора при комнатной температуре. Через определенные временные интервалы отбирали пробы клеток, инкубировали их с 2-Di-1-ASP при 37°С, определяли F ˜ , рассчитывали NF>100, определяли количество ядросодержащих клеток. Результаты исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2
Параметр Время хранения, час
Исх. 3,5 5 24 48 72 Р
F ˜ усл.ед. 82,03±4,2 107,1±3,9* 97,5±3,8* 63,6±4,0** 74,1±2,9** 64,5±3,3**
NF>100 % 31,0 53,3 38,0 21,6 16,2 10,0 0,025#
NC, % 100 103 150 160 150 150
* Р=0,05; ** Р=0,01 (t критерий Стьюдента), сравнение с F ˜ исх.
# - корреляция между F ˜ и NF>100 (коэффициент корреляции рангов Спирмена).

Из данных таблицы 2 видно, что через 3,5 часа хранения NF>100 возрастает по сравнению с исходной в 1,7 раза ( F ˜ возрастает в 1,3 раза). Через 5 часов при снижении NF>100 наблюдается увеличение концентрации ядросодержащих клеток в 1,5 раза по сравнению с исходной, что свидетельствует об их делении. Через 24 часа NF>100 ниже исходной, но концентрация клеток продолжает нарастать (в 1,6 раза выше исходной). Далее, до 72 часов концентрация клеток сохраняется практически на одном уровне.

Из данного примера видно, что увеличение NF>100 через 3,5 часа хранения ККМ в 1,7 раза свидетельствует об их способности к делению.

Пример 3. Донор 3. ККМ хранили в среде стандартного стабилизатора при комнатной температуре. Через определенные временные интервалы отбирали пробы клеток, инкубировали их с 2-Di-1-ASP при 37°С, определяли F ˜ , рассчитывали NF>100 определяли количество ядросодержащих клеток. Результаты исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3
Параметр Время хранения, час
Исх. 3 5 24 48 72 Р
F ˜ усл.ед. 67,4±2,5 79,0±4,6** 58,8±2,2** 59,2±3,3 32,4±2,3* 35,6±2,8*
NF>100, % 22,3 26,5 14,3 7,0 1,5 0,0 0,05#
NC, % 100 100 101,7 102,3 100 100
* Р=0,05; ** Р=0,01 (t критерий Стьюдента), сравнение с F ˜ исх.
# - корреляция между F ˜ и NF>100 (коэффициент корреляции рангов Спирмена).

Из таблицы 3 видно, что через 3 часа хранения в данном препарате NF>100 возрастает в 1,2, а F ˜ - в 1,17 раза. Через 5 часов NF>100 снижена в 1,6 раза по сравнению с исходной, нарастания концентрации ядросодержащих клеток нет, что свидетельствует об отсутствии деления клеток. Через 24 часа NF>100 продолжает снижаться (в 3,5 раза по сравнению с исходной), общая концентрация клеток не изменяется. Через 72 часа в пробе отсутствуют клетки с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед., деления клеток не происходит.

Данный пример показывает, что отсутствие увеличения NF>100 через 3 часа хранения ККМ в 1,5 раза свидетельствует о неспособности клеток к делению.

Использование заявленного способа позволяет оценить спонтанную способность ККМ к делению, обусловленную эффектом собственных ростовых факторов, и исключает причины, влияющие на деление и дифференцировку клеток. Способ методически прост и позволяет получить результаты через 3-3,5 часа.

Способ определения способности клеток костного мозга к делению, отличающийся тем, что клетки хранят в стандартном растворе стабилизатора при комнатной температуре, отбирают из суспензии первую исходную пробу и через 3-3,5 часа хранения суспензии отбирают вторую пробу, пробы обрабатывают флуоресцентным потенциалчувствительным витальным зондом иодид 2-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиния, измеряют интенсивность флуоресценции зонда в клетках, рассчитывают долю клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. в каждой пробе, и при увеличении доли клеток с интенсивностью флуоресценции более 100 усл.ед. более чем в 1,5 раза во второй пробе по сравнению с первой, судят о способности клеток костного мозга к делению.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и заключается в проведении хроматографического анализа образца биопробы. Для этого образец наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр наносят радиально стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки степени тяжести внебольничной пневмонии. Сущность способа состоит в том, что у больного определяют в крови абсолютное количество лейкоцитов, относительное количество эритроцитов-макроцитов, абсолютное количество моноцитов 3-го класса с сегментированным лопастным ядром, относительное количество гранулярных лимфоцитов среднего размера, относительное количество нейтрофилов с 7-ю сегментами в ядре, количественный показатель C-реактивного белка, а также физиологический показатель числа дыхательных движений пациента в 1 минуту.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиоваскулярным заболеваниям, и может быть использовано для оценки тяжести эндотелиальной дисфункции у пациентов с ревматоидным артритом.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики отклонений в репродуктивном здоровье подростков мужского и женского пола с хронической патологией (ХПП).

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и неонатологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения и возможного исхода ретинопатии у недоношенных детей.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина и оксигемоглобина в эритроцитах новорожденного.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, может быть использовано для уточнения стадии обострения или ремиссии для пациентов с рассеянным склерозом (РС).
Изобретение относится к области онкологии и представляет собой способ выявления факторов наследственной предрасположенности к раку молочной железы, включающий регистрацию генетических маркеров путем массивного параллельного секвенирования с последующим отбором и детальным анализом только вредоносных мутаций среди больных раком молочной железы, отличающийся тем, что для выявления рецессивных факторов наследственной предрасположенности к раку молочной железы в исследование включают больных, имеющих в анамнезе ранний возраст начала заболевания, первично-множественный рак и не имеющих в семье родственников, больных раком молочной железы или раком яичников, при этом анализируют только те мутации, которые присутствуют в гомозиготном состоянии.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики нарушений менструальной функции, возникающих на фоне синдрома поликистозных яичников (СПКЯ).
Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для прогнозирования развития у детей кариеса временных зубов с незаконченной минерализацией. Для осуществления способа прогнозирования развития кариеса у детей исследуют анамнез и собранную натощак нестимулированную ротовую жидкость ребенка. Согласно анамнезу определяют продолжительность грудного вскармливания ребенка (ПР), в целых месяцах, показатель использования (ПИ) в течение первых трех лет жизни ребенка одной или более пищевых фторсодержащих, витаминных, иммуномодулирующих добавок и/или пробиотиков, величине которого, в случае их использования, присваивают числовое значение, равное «1», в случае отсутствия использования - «0». В нестимулированной ротовой жидкости ребенка определяют концентрацию кальция (Ca) в мМоль/л, концентрацию фосфора (Р) в мМоль/л и рассчитывают их соотношение (Ca/P), а также определяют уровень лактоферрина (УЛ) в мкг/мл. После этого рассчитывают коэффициент прогнозирования (КП) по формуле: КП=1,44-2,28×(Ca/P)-0,07×ПР-0,12×ПИ+0,16×УЛ и при выполнении условия КП≥0,7 прогнозируют развитие у ребенка кариеса временных зубов с незаконченной минерализацией. Предлагаемый способ позволяет с высокой достоверностью прогнозировать развитие у ребенка кариеса временных зубов с незаконченной минерализацией, при этом не требует длительного времени на проведение исследования. 2 пр.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для оценки эффективности фармакотерапии в первые 7 суток лечения клебсиеллеза птиц антибактериальными препаратами. Для чего методом двухволнового люминесцентного спектрального анализа изучают гистологические срезы ткани железистого желудка птиц, окрашенных специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида. При этом проводят исследование гистологических срезов ткани железистого желудка здоровой и обследуемой птицы. На каждом гистологическом срезе определяют зону эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, в которой выделяют пять участков с наибольшей степенью интенсивности люминесценции. Получают спектр люминесценции и спектр оптической плотности каждого участка. Проводят их цифровую обработку: в спектре люминесценции регистрируют величину интенсивности люминесценции при длине волны, характерной для белков 528 нм, и при длине волны, 624 нм, характерной для нуклеиновых кислот. В спектре оптической плотности регистрируют величину оптической плотности при длине волны 648 нм, которую используют в качестве толщины фотометрируемого участка, затем в каждом участке определяют количество белков по формуле B = I b D × Э и нуклеиновых кислот по формуле N = I n D × Э , где B - количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия, Ib - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия при длине волны 528 нм, N - количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия, In - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка, D - величина оптической плотности фотометрируемого участка; Э - величина интенсивности люминесценции уранового стекла. Затем вычисляют среднее значение количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах. Рассчитывают показатели состояния внутриклеточного обмена белков и нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы. И при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков более 0,95 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот более 0,87 устанавливают низкую эффективность фармакотерапии. При значениях показателей состояния внутриклеточного обмена белков 0,95-0,25 и нуклеиновых кислот 0,87-0,21 - среднюю эффективность фармакотерапии. При значениях показателей состояния внутриклеточного обмена белков менее 0,25 и нуклеиновых кислот менее 0,21 - высокую эффективность фармакотерапии обследуемой птицы. Способ позволяет повысить точность диагностики состояния внутриклеточного обмена белков и нуклеиновых кислот в железистом желудке птиц. 2 табл., 2 ил.
Группа изобретений относится к отбору проб, в частности к способу и устройству получения образцов для исследования и взятия проб в жидком или текучем состоянии в условиях невесомости. Способ заключается в том, что размещают фильтр в отдельном держателе с отверстием, наносят пробу на открытую часть фильтра и после взятия пробы оставляют фильтр в держателе до полного высыхания пробы. Перед отбором пробы распечатывают и извлекают пинцетом аналитические аэрозольные двусторонние фильтры АФА-Х из пакетов типа ZipLock, затем фильтр укладывают на нижнюю пластину держателя своей рабочей ворсистой стороной в сторону отверстия в верхней пластине держателя. При этом используют винипластовые держатели и производят отбор пробы на открытую часть фильтра. После высыхания пробы фильтр извлекают из держателя, помещают в отдельный пакет ZipLock и сохраняют при температуре окружающей среды. Устройство содержит фильтры, размещаемые в держателе, а именно по меньшей мере два аналитических аэрозольных двусторонних фильтра АФА-Х с одной ворсистой стороной и по меньшей мере два держателя фильтра из листового винипласта, выполненные с возможностью их крепления к рабочему столу. Каждый держатель состоит из двух прямоугольных пластин - верхней и нижней, со скругленными краями и отверстием по центру, и снабжен текстильной застежкой из номекса, выполненной из двух частей - крючковой и петельной. Технический результат заключается в повышении надежности устройства при увеличении срока хранения взятой пробы. 2 н.п. ф-лы.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования возможных отрицательных последствий стоматологической имплантации. Исследуют костную ткань с помощью гистологического исследования костной крошки с места подготовки ложа для имплантата, выявляют морфологические изменения костной ткани в зоне предполагаемой стоматологической имплантации, исследуют диаметр гаверсовых каналов, толщину костных балок губчатого вещества, линию склеивания, реакцию пролиферации мезенхимальных клеток при отсутствии воспаления, наличие коллагеновых волокон, нарушение архитектоники губчатого слоя, интенсивность кровоснабжения кости, фиброз и гиалиноз сосудистой стенки, наличие или отсутствие реологических расстройств, наличие или отсутствие отложения остеоида, наличие или отсутствие воспалительных явлений. При преобладании морфологических критериев, характеризующих процессы созидания, над морфологическими критериями, характеризующими процессы разрушения, оценивают состояние костной ткани в зоне предполагаемой стоматологической имплантации как хорошее и прогнозируют положительный результат операции. Способ позволяет повысить точность оценки состояния костной ткани на этапе планирования имплантации. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и судебно-медицинской экспертизе, и может быть использовано для верификации смерти больного от фибрилляции желудочков при инфаркте миокарда. Для этого у больных, умерших от инфаркта миокарда, во время аутопсии на основании макроскопической картины определяют давность патологического процесса. В зависимости от этого выбирают зоны исследования в сердце на одном уровне с очагом некроза. В поле зрения на увеличении х600 с применением окраски гематоксилином и эозином подсчитывают абсолютные значения (AЗ) следующих клеточных популяций: лимфоциты в пограничной с некрозом зоне (Lfп) при инфаркте миокарда давностью 1-2 дня, нейтрофильные гранулоциты (NGн) и фибробласты в зоне некроза (Fbн) при инфаркте миокарда давностью 3-5 дней. Сравнивают полученные абсолютные значения с пороговыми значениями (ПЗ), при этом ПЗ Lfп=2, ПЗ NGн=38, ПЗ Fbн=1. Для каждого поля зрения присваивают диагностический коэффициент (ДК), который при давности инфаркта миокарда 1-2 дня равен 1,9, если AЗ Lfп<2 или -3,9, если AЗ Lfп>2; при давности инфаркта миокарда 3-5 дней равен -2,1, если AFbн<1 или 7,2 если AЗ Fbн>1, равен 1,36, если AЗ NGн<38 или -11, если AЗ NGн>38. Затем подсчитывают сумму (ΣДК), двигаясь от поля зрения к полю зрения в исследуемой зоне, и, если ΣДК>12,78, то смерть больного наступила от фибрилляции желудочков, если ΣДК<-12,78, то смерть от других причин. Изобретение обеспечивает информативность и достоверность исследования при проведения судебно-медицинской экспертизы. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) у больных операбельным базальноподобным трипл-негативным раком молочной железы. Эффективность НАХТ у больных рассчитывают по формуле: P=eY/(1+eY), где P (значение вероятности развития признака), Y - значение уравнения регрессии; e - математическая константа, равная 2,72. Значение уравнения регрессии Y определяют по формуле: Y=(42,8-1,86X1-9,3X2-2,14X3+3,19X4), где (42,8) - значение коэффициента регрессии свободного члена; X1 - подтипы базальноподобного трипл-негативного рака (1 - подгруппа с экспрессией только СК 5/6; 2 - подгруппа с экспрессией только EGFR1; 3 - подгруппа с экспрессией СК 5/6 и EGFR1), (1,86) - значение коэффициента регрессии этого признака; X2 - уровень экспрессии EGFR1 в биопсийном материале (1 - высокий уровень, 2 - низкий уровень), (9,3) - значение коэффициента регрессии этого признака; X3 - уровень экспрессии Ki-67 в биопсийном материале (1 - низкий уровень, 2 - высокий уровень), (2,14) - значение коэффициента регрессии этого признака; X4 - схема химиотерапии (1-FAC, 2-САХ), (3,19) - значение коэффициента регрессии этого признака. При P<0,5 прогнозируют низкую эффективность, а при Р>0,5 высокую эффективность НАХТ. Использование данного способа позволяет планировать предоперационное лечение больных с индивидуализацией подхода к выбору химиотерапии. 4 пр., 4 табл.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования риска развития плоскоклеточной метаплазии в респираторном эпителии бронхов с наличием изолированной базальноклеточной гиперплазии. Сущность способа: определяют позитивную ядерную экспрессию маркера пролиферации Ki67 и мембранную экспрессию маркера дифференцировки клеток плоского эпителия CD 138 в бронхиальном эпителии. При уровне экспрессии Ki67≥25%, a CD138 - ≤3,5% прогнозируют риск развития плоскоклеточной метаплазии в респираторном эпителии бронхов. Способ обладает большой информативностью и позволяет на ранних этапах сформировать группу больных с высоким риском развития плоскоклеточного рака легкого и соответственно оптимизировать тактику ведения таких пациентов. 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах (ХИК). Сущность изобретения состоит в том, что преципитат иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности из сыворотки крови человека готовят путем обработки ее буфером, содержащим 10%-ый ПЭГ 3350, в соотношении 1:3, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Преципитат, содержащий ХИК, отделяют центрифугированием при 3100 g в течение 10 мин при 23°C, растворяют в буфере без ПЭГ, определяют содержание холестерина с использованием ферментативного набора и при уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень. Изобретение позволяет повысить точность количественного определения ХИК, проводить широкие скрининговые исследования для выявления атеросклероза как на доклинической стадии, так и контролировать эффективность проводимой терапии. 2 табл.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и клинической диагностике. Изобретение представляет способ оценки длительной гипергликемии, основанный на определении содержания глюкозы в плазме крови, отличающийся тем, что содержание глюкозы определяют дважды: сразу после взятия крови и через 24 часа после хранения плазмы крови над слоем форменных элементов, затем подсчитывают уменьшение содержания глюкозы в процентах от исходного уровня, по которому дают оценку длительной гипергликемии, причем хранение плазмы крови производят при t=4,0±0,5°C. Изобретение обеспечивает оптимизацию и снижение времени оценки длительной гипергликемии, повышение достоверности результата и возможность обследования максимального количества людей в минимальное время и выявление группы риска. 2 табл.

Изобретение относится к области агропромышленных технологий и может быть использовано для анализа выноса с луговой травой биохимических веществ. Для этого проводят учет колебаний урожайности в зависимости от структуры фитоценоза в виде травяного покрова. Проведение статистической обработки данных испытаний проб травы с пробных площадок на прирусловых, центральных и притеррасных поймах, а также на лугах с неравномерным и мозаичным размещением видов трав. Причем до закладки пробных площадок проводят рекогносцировку местности с выбранным для измерений травяным покровом, составляют карту-схему расположения компонент травяного покрова, после этого на каждой компоненте травяного покрова в виде делянки закладывают, по крайней мере, одну временную пробную площадку, по срезанной пробе травы взвешиванием определяют сырую и воздушно-сухую массу пробы. При этом дополнительно на высушенных пробах травы проводят испытания по биохимическому анализу для определения концентрации, по крайней мере, у трех химических питательных веществ в виде азота подвижного, оксидов калия и фосфора, затем суммированием концентраций этих трех веществ вычисляют общий суммарный вынос веществ из надземной части травы на всех пробных площадках. Изобретение позволяет определить продуктивность лугов. 8 з.п. ф-лы, 12 ил., 4 табл., 1 пр.
Наверх