Способ оценки ингибирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность карбоангидразы в эритроцитах периферической крови беременных

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической гипоксии у беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции. Для этого при обострении у беременной цитомегаловирусной инфекции в периферической крови измеряют титр антител IgG к цитомегаловирусу и активность продуктов гистохимической реакции на карбоангидразу в эритроцитах, и при титре IgG 1:1600 и показателях активности реакции на карбоангидразу до 0,015±0,002 усл.ед. в 65,0±2,2% эритроцитов, снижении оксигемоглобина до 95,0±1,5% определяют угрозу формирования гемической гипоксии. Способ позволяет оценить угрозу формирования гемической гипоксии на доклиническом уровне. 2 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к проблеме создания новых способов диагностики угрозы формирования гемической гипоксии при цитомегаловирусной инфекции у беременных.

Карбоангидраза - фермент, катализирующий обратимую реакцию гидратации диоксида углерода: C O 2 + H 2 O H 2 C O 3 H + + H C O 3 [3, 4]. Фермент обнаружен в эритроцитах, в поджелудочной и слюнной железе, в слизистой желудка, в почках, в ткани центральной нервной системы, в сетчатке глаза и во многих других местах организма. Имеются сведения об ее участии в управлении переносом дыхательных газов, в регуляции pH, в управлении реакциями биосинтеза с участием бикарбоната (глюконеогенез, синтез аминокислот, липогенез), в регуляции обновления костной ткани, в регуляции образования мочи, в реакциях, обеспечивающих образование соляной кислоты в железах желудка, бикарбонатов в соке поджелудочной железы, в слюне, в образовании цереброспинальной жидкости и во многих других процессах в организме.

Карбоангидраза эритроцитов ускоряет реакцию гидратации двуокиси углерода в цитоплазме эритроцита в 1500-2000 раз по сравнению с аналогичной реакцией, протекающей в плазме крови, не содержащей карбоангидразы. Карбоангидраза в зависимости от напряжения двуокиси углерода, pCO2 в среде, от ряда других факторов может ускорять реакцию гидратации молекул двуокиси углерода с образованием угольной кислоты и бикарбонатных ионов. Гемоглобин присоединяет положительно заряженный ион водорода - по два протона на каждые 4 освободившиеся молекулы кислорода, что способствует поддержанию буферных свойств крови.

В капиллярах микроциркуляторного русла легких кислород, наоборот, присоединяется к молекуле дезоксигемоглобина. Водород же присоединяется к бикарбонату, образуя угольную кислоту, которая диссоциирует на воду и углекислый газ. Это приводит к высвобождению двуокиси углерода из крови в альвеолярную смесь газов. В тканях при снижении pH гемоглобин легко отдает кислород. Это обратимое явление и есть эффект Бора, который характерен только для гемоглобина [2, 5, 6, 7].

Активность карбоангидразы в крови в норме довольно постоянна, но при некоторых патологических состояниях она значительно изменяется. Повышение активности карбоангидразы в крови отмечают при анемиях различного генеза, нарушениях кровообращения II-III степени, некоторых заболеваниях легких (бронхоэктазах, пневмосклерозе), а также при беременности. Снижение активности этого фермента в крови происходит при ацидозе почечного генеза, гипертиреозе. При внутрисосудистом гемолизе активность карбоангидразы появляется в моче, в то время как в норме она отсутствует. Поэтому контролировать активность карбоангидразы в крови целесообразно, так как она может служить критерием адаптивных возможностей организма при различного рода патологических состояниях.

Вместе с тем, проблема определения угрозы формирования гемической гипоксии при цитомегаловирусной инфекции у беременных до настоящего времени остается не решенной.

Для определения активности карбоангидразы в настоящее время применяют радиологические, иммуноэлектрофоретические, колориметрические и титриметрические методы. Определение производят в цельной крови, взятой с гепарином, или в гемолизированных эритроцитах. Для клинических целей используют колориметрические методы определения активности карбоангидразы (например, модификации метода Бринкмана), основанные на установлении времени, необходимого для сдвига pH инкубационной смеси с 9,0 до 6,3 в результате гидратации CO2 [1].

Существенным недостатком известного способа является достаточно низкая чувствительность, наличие дорогостоящего оборудования и условий для выполнения методики.

Новая техническая задача - разработка способа оценки угрозы формирования гемической гипоксии в зависимости от активности карбоангидразы в эритроцитах периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения.

В настоящем изобретении рассматривается возможность применения гистохимического метода, что позволит повысить точность функциональной и количественной оценки продуктов реакции на карбоангидразу в нативных эритроцитах, а следовательно, своевременно на доклинитческом уровне определять угрозу формирования гемической гипоксии у беременных при цитомегаловирусной инфекции.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Обследовано 25 беременных при сроке гестации 8-9 недель в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения (основная группа) и 15 беременных на тех же сроках гестации без таковой патологии (контрольная группа). У беременных симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение цитомегаловирусной инфекции - устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также ДНК цитомегаловируса. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

2. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител класса IgM и IgG, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере «Stat Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК цитомегаловируса методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

3. Карбоангидразу в эритроцитах периферической крови выявляли гистохимическим методом. Суть метода заключалась в инкубации 1 мл цельной крови, взятой утром натощак из локтевой вены в стандартизованные вакуумные пробирки (PUTH, К3 ЭДТА), с 2 мл свежеприготовленного и профильтрованного раствора субстрата, состоящего из 5 мл 8% NaHCO3 и 1 мл 10% CoCl2. Эритроциты инкубировали при комнатной температуре в течение 15-20 минут. Для отделения надосадочной жидкости кровь откручивали при 1500 g в течение 1-2 минут. Супернатант удаляли декантированием. Эритроциты отмывали 2 раза бикарбонатным буфером (pH 7,2-7,4) с последующим центрифугированием при 1500 g в течение 1-2 минут. К отмытым и открученным эритроцитам добавляли 1 мл 2% раствор сульфида аммония или натрия. Инкубировали в течение 2 минут. Эритроциты отмывали 2 раза бикарбонатным буфером (pH 7,2-7,4) с последующим центрифугированием при 1500 g в течение 1-2 минут. После чего готовили монослойный мазок на центрифуге «Diffe Spin-2» (USA). Полученные мазки высушивали и изучали при иммерсии под цифровым микроскопом МТ (Япония), который связан с программно-аппаратным комплексом «SCION Corporation» (USA), позволяющим выделять на изображении с мазка каждую клетку в отдельности и после выделения клетки определять ее площадь с выявленным продуктом реакции на карбоангидразу. При этом автоматически выдавался показатель плотности в пикселях в зависимости от интенсивности реакции на карбоангидразу, которую принимали за условные единицы измерения (усл.ед.).

4. Статистическую обработку данных осуществляли по критерию Манна-Уитни, гипотезу о статистической значимости различий двух выборок - с помощью t критерия Стьюдента. Значения считали достоверными при p<0.05.

Исследования показали, что при обострении цитомегаловирусной инфекции при сроке 8-9 недель, которое характеризовалось наличием IgM к цитомегаловирусу, титром антител IgG 1:1600, индекса авидности 87% и маркера репликации вируса ДНК цитомегаловируса в соскобе цервикального канала, в периферической крови беременных определялось снижение числа эритроцитов до 65,0±2,2%, имеющих реакцию на карбоангидразу в пределах значений 0,015±0,002 усл.ед. (фиг.1) при контроле 0,059±0,004 усл.ед., приходящихся на 85,0±3,2% эритроцитов (фиг.2). При этом количество оксигемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией снижалось до 95,0±1,5% при контроле 99,0±1,0%.

Таким образом, обострение цитомегаловирусной инфекции сопровождается подавлением активности карбоангидразы в эритроцитах периферической крови беременных, что приводит к снижению интенсивности процессов оксигенации гемоглобина и угрозе формирования гемической гипоксии.

Литература

1. Андриевская И.А. Характер дыхательной активности крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Фундаментальные аспекты оценки фетоплацентарной недостаточности при вирусных заболеваниях во время беременности. Благовещенск: Изд-во АМГУ, 2008. С.54-72.

2. Воробьев Л.И. Руководство по гематологии. М.: Ньюдиамед, 2007. 275 с.

3. Тиц Н.У. Клиническая оценка лабораторных тестов. М., 1986. 196 с.

4. Медицинская энциклопедия. 1991-1992.

5. Coburn R., Williams W., White P., Kahn S.B. The production of carbon monoxide from hemoglobin in vivo. J. Clin. Invest., 1967; 46: 346-356.

6. White P., Coburn R., Williams W. Carbon monooxide production associated with ineffective erythropoiesis. J. Clin. Invest., 1967; 46(12): 1986-1998.

7. Stevenson O.R., Vreman H.J. Carbon monooxide and bilirubin production in neonates. Pediatrics, 1997; 100: 252-254.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на карбоангидразу в эритроцитах периферической крови беременных при сроке 8-9 недель и обострении цитомегаловирусной инфекции (титр 1:1600). Показатели интенсивности продуктов реакции на карбоангидразу - 0,015±0,002 усл.ед. Количество эритроцитов, проявляющих реакцию на карбоангидразу, - 65,0±2,2%.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на карбоангидразу в эритроцитах периферической крови практически здоровых беременных, серонегативных в отношении цитомегаловируса, при сроке 8-9 недель. Показатели интенсивности продуктов реакции на карбоангидразу - 0,059±0,004 усл.ед. Количество эритроцитов, проявляющих реакцию на карбоангидразу, - 85,0±3,2%.

Способ оценки угрозы формирования гемической гипоксии при обострении у беременной цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение у беременной в периферической крови титра антител IgG к цитомегаловирусу и активности продуктов гистохимической реакции на карбоангидразу в эритроцитах, и при титре IgG 1:1600 и показателях активности реакции на карбоангидразу до 0,015±0,002 усл. ед. в 65,0±2,2% эритроцитов, снижении оксигемоглобина до 95,0±1,5% определяют угрозу формирования гемической гипоксии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации.
Изобретение относится к медицине, в частности к вопросу изучения антиадгезивной активности противохолерных иммуноглобулинов и усиления ее для совершенствования специфической профилактики холеры.

Группа изобретений относится к способу обнаружения множественных цитокинов из отдельно взятых клеток и предназначено для создания набора иммунологических характеристик заболеваний.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской диагностике, и описывает способ качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки губы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента.
Изобретение относится к медицине, в частности к элюированию сконцентрированного на магнитной матрице патогена. Способ элюции осуществляется следующим образом: 0,1 мл 10% взвеси магнитно-иммунного сорбента (МИС) туляремийного, чумного или бруцеллезного инкубируют с микробными взвесями возбудителей туляремии, бруцеллеза или чумы в течение 30 мин, удаляют надосадок, далее МИС инкубируют с 0,5 мл элюирующего раствора в течение 10 мин, pH элюата возвращают к физиологическому значению, проводят постановку реакции непрямой гемагглютинации или реакции агглютинации латекса.

Изобретение относится к медицине и касается способа проведения иммунохроматографического анализа с диссоциирующей флуоресцентной меткой, в котором на мембранной тест-полоске формируют комплексы, в состав которых входят молекулы антигена или антигенов, специфичные к ним антитела и молекулы метки.
Изобретение относится к медицине и касается способа количественного определения D-антигена полиовирусов 1-3 типов иммуноферментным анализом (ИФА). В качестве иммуносорбента используют поливалентный (к трем типам полиовируса) аффинно очищенный иммуноглобулин класса Y (IgY), полученный из яичных желтков куриц, иммунизированных полиовирусами, а в качестве детекторных антител - аффинно очищенный препарат IgG кролика против каждого из трех полиовирусов.

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для прогноза течения ишемического инсульта у больных сахарным диабетом.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, предназначено для прогнозирования патологии в родах, в частности дискоординации родовой деятельности (дистоции шейки матки). Сущность способа: при доношенной беременности в начале I периода родов в сыворотке крови женщин иммуноферментным методом определяют содержание кортикотропин-рилизинг гормона, субстанции Р, нейрокининов А и В, интерлейкинов 6 и 8, релаксина и кортизола, и рассчитывают прогностическую вероятность П по формуле: П=(-0,0011229·CRH+(-0,15119·NA)+(-0,0071961·NB)+(-0,021071·IL6)+0,0032637·IL8+(-0,00085785·pF2α)+9,5773·REL+(-0,0098088·SP)+0,0058058·cort)·2,719. При уровне вероятности П больше 0,51 прогнозируют высокий риск развития дискоординации родовой деятельности и завершения родового процесса экстренным оперативным путем. Применение изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования дискоординации родовой деятельности, что позволит своевременно сформировать группу высокого риска, дифференцировать характер нарушения РД, тем самым выбрать адекватную тактику ведения пациентки. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, экспериментальной и клинической фармакологии. Суть способа: окисленный декстран растворяют в трис-ацетатном буферном растворе с рН 5,0-5,5, добавляют к полученному раствору гидразид биотина в соотношении к окисленному декстрану, равном 1:(20-25), после чего полученный раствор нагревают до 80-90°С и выдерживают в течение 30-60 минут. Технический результат: получение биотинилированного производного окисленного декстрана высокого качества, обеспечивающее повышение чувствительности его иммуноферментного анализа в сыворотке крови. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к определению содержания микроорганизмов в различных объектах и средах. Способ предусматривает конъюгацию бактерий с электрохимической меткой, в качестве которой используют Fe0, MgFe2O4 или Fe3O4, осуществляемую в водной среде при заданных параметрах. Осуществляют отделение несвязавшихся наночастиц с использованием магнитного поля и помещение рабочего электрода, изготовленного из золота, платины или графитсодержащих материалов, поверхность которого предварительно модифицирована антителами, специфичными к определяемому штамму бактерий, в исследуемый раствор. Электрод выдерживают при заданных параметрах с образованием иммунокомплекса на его поверхности и промывают буферным раствором, содержащим нормальную лошадиную сыворотку и Твин-20. Электрод извлекают из раствора и помещают в электрохимическую ячейку, содержащую LiClO4, растворенный в ацетонитриле, диметилформамиде или диметилсульфоксиде, определяют содержание бактерий по величине аналитического окисления наночастиц, локализованных в иммунокомплексе на поверхности рабочего электрода. Изобретение позволяет увеличить чувствительность анализа, повысить производительность и упростить анализ. 7 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования исходов мышечно-инвазивного рака мочевого пузыря. Способ включает проведение исследования активности 26S протеасом и содержания NF-кВ р65 и р50 в опухолевой ткани. При активности 26S протеасом более 18-1000 Ед/мг белка и при коэффициенте NF-кВ р65/р50 более 1,0 прогнозируют низкую вероятность развития рецидива; при активности 26S протеасом менее 18-1000 Ед/мг белка и при коэффициенте NF-кВ р65/р50 менее 1,0 прогнозируют высокую вероятность развития рецидива опухоли. Изобретение может быть использовано для определения прогрессирования заболевания в виде появления рецидивов опухоли после проведения трансуретральной резекции опухоли и полихимиотерапии по схеме M-VAC. Применение изобретения обеспечивает повышение точности и информативности прогнозирования исхода рака мочевого пузыря. 2 пр., 2 ил.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования риска развития плоскоклеточной метаплазии в респираторном эпителии бронхов с наличием изолированной базальноклеточной гиперплазии. Сущность способа: определяют позитивную ядерную экспрессию маркера пролиферации Ki67 и мембранную экспрессию маркера дифференцировки клеток плоского эпителия CD 138 в бронхиальном эпителии. При уровне экспрессии Ki67≥25%, a CD138 - ≤3,5% прогнозируют риск развития плоскоклеточной метаплазии в респираторном эпителии бронхов. Способ обладает большой информативностью и позволяет на ранних этапах сформировать группу больных с высоким риском развития плоскоклеточного рака легкого и соответственно оптимизировать тактику ведения таких пациентов. 2 табл., 3 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа оценки того, имеет ли беременная женщина повышенный риск развития преэклампсии, заключающегося в том, что с использованием моноклонального антитела, обладающего реактивностью в отношении Н2-релаксина, измеряют концентрацию Н2-релаксина в биологическом образце, полученном из организма беременной женщины до проявления симптома преэклампсии, где моноклональное антитело получено с помощью гибридомы, депонированной в Американской коллекции типовых культур под регистрационным номером РТА-8423; и определяют, что беременная женщина имеет повышенный риск развития преэклампсии, если концентрация Н2-релаксина меньше предельного значения нижнего квартиля концентрации, характерной для беременной женщины; способа оценки того, имеет ли беременная женщина преэклампсию; способа ослабления преэклампсии. Группа изобретений обеспечивает возможность оценить повышенный риск развития преэклампсии или диагностировать ее. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 пр., 6 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу диагностики снижения поствакцинального иммунитета к коклюшу у детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов, таких как хром и марганец. Для этого определяют содержание в крови ребенка хрома, марганца и определяют количество поствакцинальных антител класса иммуноглобулина IgG к возбудителю коклюша. При одновременном повышенном содержании в крови ребенка хрома более 0,004 мг/дм3 и марганца более 0,011 мг/дм3 и пониженным по сравнению с протективным уровнем количеством поствакцинальных антител класса IgG к возбудителю коклюша, диагностируют снижение поствакцинального иммунитета ребенка к коклюшу. Использование данного способа позволяет выявить детей с низким поствакцинальным иммунитетом на ранней стадии без клинических проявлений. 2 ил., 4 табл.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использована для лечения глазной болезни, ассоциированной со связанными с амилоидом-бета патологическими аномалиями/изменениями в тканях зрительной системы. Для этого пациенту вводят фармацевтическую композицию, которая содержит терапевтически эффективное количество гуманизированного антитела или его антигенсвязывающий фрагмент, где гуманизированное антитело или его фрагмент способно(ен) связывать амилоид-бета. Также предложено предупреждение, лечение или облегчение симптомов глазной болезни, снижение загрузки бляшками ганглиозных клеток сетчатки, диагностика глазной болезни и диагностика предрасположенности к глазной болезни, прогнозирование чувствительности пациентов, которых лечат фармацевтической композицией для лечения глазной болезни. Группа изобретений обеспечивает эффективное лечение указанной глазной патологии за счет применения композиции, содержащей высокоспецифичные антитела, которые специфически распознают и связываются со специфическими эпитопами различных β-амилоидных белков. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 18 ил., 9 табл., 18 пр.

Изобретение относится к области медицины и иммунологии, и направлено на выявление неблагоприятного воздействия формальдегида на организм человека, а именно на клеточный иммунитет. Сущность способа: производят отбор пробы венозной крови у работников, устанавливают в ней концентрацию формальдегида, определяют количество лимфоцитов - основных параметров T-клеточного иммунитета, затем устанавливают критериальный показатель, по которому судят о нарушении клеточного иммунитета. В качестве основных параметров T-клеточного иммунитета определяют в процентах число активированных T-лимфоцитов CD3+CD95+ и также определяют в процентах число T-регуляторных лимфоцитов CD4+CD25+CD127-, а в качестве критериального показателя используют интегральный показатель, равный отношению установленного процента числа CD3+CD95+ - лимфоцитов к проценту числа CD4+CD25+CD127- - лимфоцитов. При значении этого интегрального показателя, равного и более 40, диагностируют нарушение клеточного иммунитета у работников химических производств при воздействии формальдегида. Использование изобретения обеспечивает повышение информативности оценки влияния ксенобиотика - формальдегида, на нарушение клеточного иммунитета организма работников химических производств. 2 табл., 2 пр.

Изобретение касается способа определения биологической активности эмбрионированных яиц Trichuris. Охарактеризованный способ включает осуществление по меньшей мере 3-х анализов, выбранных из: - оценки и/или подтверждения стадии эмбрионального развития яиц с помощью метода количественной ПЦР с использованием пригодных маркерных последовательностей для определения количества копий геномной ДНК, - оценки метаболической активности эмбрионированных яиц с помощью биохимических и/или молекулярно-биологических методов, - оценки индуцибельности генной экспрессии в эмбрионированных яйцах, - оценки подвижности личинок Trichurs с помощью микроскопа в течение продолжительных периодов наблюдения после предварительной инкубации при повышенных температурах и/или - оценки коэффициента вылупляемости личинок Trichuris в организме лабораторного животного. Представленное изобретение может быть использовано при получении безопасных фармацевтических продуктов, терапевтически эффективных при применении у человека. 14 з.п. ф-лы, 10 ил., 11 табл., 6 пр.
Наверх