Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах


 


Владельцы патента RU 2538685:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИНФ им. П.К. Анохина" РАМН) (RU)

Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах (ХИК). Сущность изобретения состоит в том, что преципитат иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности из сыворотки крови человека готовят путем обработки ее буфером, содержащим 10%-ый ПЭГ 3350, в соотношении 1:3, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Преципитат, содержащий ХИК, отделяют центрифугированием при 3100 g в течение 10 мин при 23°C, растворяют в буфере без ПЭГ, определяют содержание холестерина с использованием ферментативного набора и при уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень. Изобретение позволяет повысить точность количественного определения ХИК, проводить широкие скрининговые исследования для выявления атеросклероза как на доклинической стадии, так и контролировать эффективность проводимой терапии. 2 табл.

 

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для определения холестерина в иммунных комплексах (ХИК) в сыворотке крови человека.

В настоящее время в клинической лабораторной практике отсутствуют доступные для рутинных исследований методы определения ХИК. Учитывая важную патогенетическую роль иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ммЛПНП), при атеросклерозе, остается актуальной разработка простых, доступных для лабораторных исследований способов определения ХИК [1, 4].

Известны способы определения ХИК в сыворотке крови преципитацией их 2,5%, 3,5% и 4% растворами полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 (ПЭГ-6000). Агрегированные иммунные комплексы, содержащие множественно модифицированные ЛПНП (ммЛПНП), осаждают центрифугированием, промывают преципитат буфером, содержащим соответствующую концентрацию ПЭГ-6000 и определяют в преципитате холестерин после экстракции [2,5-7].

Недостатком приведенных способов является длительность процедуры, неполная преципитация иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности, и как следствие - низкие значения ХИК.

В качестве прототипа использован способ определения уровня циркулирующих иммунных комплексов с использованием полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3350 [3].

Задачей настоящего изобретения является разработка простого способа экспресс-определения уровня холестерина в иммунных комплексах для рутинных исследований с высокой точностью и с минимальной затратой времени.

Эта задача решается тем, что специфическую преципитацию циркулирующих иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП (ЦИК-ммЛПНП), проводят путем обработки сыворотки крови человека буферным раствором, содержащим препарат ПЭГ-3350, инкубируют в течение 10 минут при комнатной температуре, затем образовавшиеся агрегаты ЦИК-ммЛПНП осаждают центрифугированием, декантируют, полученный преципитат растворяют в буфере без ПЭГ-3350 и определяют содержание холестерина в преципитированных иммунных комплексах с использованием ферментативного набора. При уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень.

Способ определения ХИК включает:

1. Буфер-1 для преципитации ХИК содержит 10% полиэтиленгликоль с молекулярной массой 3350 в 0,01 М трис-HCl-буфере с pH 7,4, содержащем 0,15 М NaCl;

2. Буфер-2 для растворения преципитата ХИК - 0,01 М Трис-HCl-буфер, pH 7,4, содержащий 0,15 М NaCl.

Способ экспресс-определения холестерина иммунных комплексов осуществляют следующим образом. Проводят забор крови натощак из локтевой вены человека, отделяют сыворотку и определяют уровень холестерина в иммунных комплексах путем обработки сыворотки крови Буфером-1 для преципитации ХИК в соотношении 1:3, инкубацией в течение 10 мин при комнатной температуре, осаждением преципитата центрифугированием, декантацией и последующим растворением его в исходном объеме Буфера-2. Содержание ХИК определяют с использованием ферментативного набора «Холестерин» и при содержании ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень.

Комплемент-связывающую способность иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные ЛПНП, исследуют гемолитическим методом с использованием комплемента морской свинки, стандартизованных (1,5×108 кл/мл) эритроцитов барана, сенсибилизированных кроличьими антителами (EA), в вероналовом солевом буфере, содержащем 0,5 мМ MgCl2 и 0,15 мМ CaCl2 (VBS2+).

Содержание IgG в составе преципитата определяют с использованием реакции торможения гемагглютинации (РТГА) эритроцитов барана, сенсибилизированных гетерофильными антителами человека, антителами барана против IgG человека. В качестве стандарта используют препарат человеческого IgG с концентрацией 1 мг/мл.

Этап 1. Подбор оптимальной концентрации ПЭГ-3350 для осаждения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные ЛПНП (ЦИК-ммЛПНП) из пулированной сыворотки крови здоровых доноров.

1.1. Приготовление преципитата сыворотки крови при возрастающих концентрациях ПЭГ-3350. К 100 мкл пулированной сыворотки крови здоровых доноров добавляют от 100 до 500 мкл раствора Буфера-1, тщательно перемешивают и инкубируют 10 мин при комнатной температуре. Образовавшиеся агрегаты иммунных комплексов осаждают центрифугированием при 3100 g в течение 5 мин при 23°C. Супернатант тщательно декантируют и преципитат растворяют в 100 мкл Буфера-2.

1.2. Определение холестерина в ПЭГ-преципитатах. В преципитатах после растворения в 100 мкл Буфера-2 определяют содержание холестерина с использованием наборов реагентов фирмы «ЗАО Эколаб» (Россия). Полученные результаты представлены в таблице 1.

1.3. Определение степени связывания комплемента морской свинки циркулирующими иммунными комплексами в преципитатах, приготовленных при возрастающих концентрациях ПЭГ-3350. К 10 мкл растворов преципитатов, разбавленных в соотношении 1:99 буфером VBS2+ добавляют 20 мкл раствора разбавленного 1:19 раствора комплемента морской свинки. Общий объем доводят до 0,3 мл буфером VBS2+,и инкубируют 20 мин при 37°C. После предварительной инкубации добавляют 200 мкл EA и повторно инкубируют 30 мин при 37°C. После 30-минутной инкубации реакцию останавливают добавлением 2,5 мл холодного раствора 0,15 М NaCl, центрифугируют и определяют величину лизиса эритроцитов по выходу гемоглобина в супернатант. Контрольная проба не содержит преципитата иммунных комплексов. Пониженный гемолиз в опытных пробах по сравнению с контролем свидетельствует о наличии связывания комплемента циркулирующими иммунными комплексами. Степень лизиса эритроцитов (Y) определяют по формуле:

Y(%)=[(X-R)/(H-R)×100],

где H, R и X - величины оптической плотности A405 в гемолитических системах контрольной пробы, в контроле спонтанного лизиса EA и в опытной пробе, соответственно. Степень связывания комплемента (ССК) определяют по формуле:

CCK(%)=100-Y.

Полученные результаты представлены в таблице 1.

1.4. Определение содержания IgG в ПЭГ-преципитате.

Предварительно титруют преципитаты иммунных комплексов, разведенные 1:99, на 12 лунок в 96-луночных круглодонных иммунологических плашках. В качестве стандарта титруют препарат IgG с исходной концентрацией 1 мг/мл. После титрования преципитатов и стандартного препарата IgG добавляют равный объем разбавленного раствора антител против IgG человека, содержащего 4 гемагглютинирующие единицы (ГАЕ), т.е. препарат антител был разбавлен 1:8100. Тщательно перемешивают и добавляют равный объем 1% суспензии иммунных комплексов эрироцитов барана, сенсибилизированных антителами человека (EAч), тщательно перемешивают и инкубируют в течение 1-1,5 ч при комнатной температуре. После инкубации определяют для каждой пробы лунку, где наблюдается торможение гемагглютинации. Расчеты проводят с использованием результатов по торможению гемагглютинации стандартным раствором IgG человека. Полученные данные представлены в таблице 1.

Из данных, представленных в таблице 1, следует, что при концентрации от 7,5% до 8,0% ПЭГ-3350 в сыворотке наблюдается агрегация иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины (ммЛПНП). Дальнейшее увеличение концентрации ПЭГ-3350 выше 8,0% в системе приводит к агрегации и преципитации нативных ЛПНП. Сохранение степени связывания комплемента на уровне 80% и возрастание концентрации холестерина в преципитатах при увеличении концентрации ПЭГ-3350 (более 7,5%) свидетельствует, с одной стороны, о полной агрегации иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, с другой стороны, об агрегации нативных ЛПНП, которые не обладают комплемент связывающей способностью. Наличие IgG в преципитахах, приготовленных в присутствии ПЭГ, свидетельствует об иммунных комплексах, содержащих ммЛПНП, также как постоянный уровень IgG в преципитатах, полученных при концентрации ПЭГ от 7,5% и выше, свидетельствует о специфической преципитации иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП.

Таким образом, при концентрации ПЭГ-3350 от 7,5% до 8,0% наблюдается избирательная агрегация и преципитация иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, и не наблюдается агрегация и преципитация как нативных ЛПНП, так и свободных IgG.

Этап 2. Определение содержания холестерина в иммунных комплексах в сыворотках крови доноров и неврологических больных с атеросклерозом каротидных артерий.

2.1. Приготовление преципитата сыворотки крови при условиях 7,5% ПЭГ-3350. К 100 мкл сыворотки крови больных с атеросклерозом каротидных артерий и относительно здоровых доноров добавляли 300 мкл буфера-1 и инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Образовавшиеся агрегаты иммунных комплексов осаждали центрифугированием при 23°C в течение 5 мин при 3100 g. Супернатант декантировали и осадок растворяли в 100 мкл буфера-2. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Как видно из данных, представленных в таблице 2, в группе относительно здоровых доноров средний уровень холестерина в иммунных комплексах составил 6,2±1,7 мг/дл при колебаниях от 2,3 до 8,4 мг/дл. Следовательно, уровень ХИК до 8,4 мг/дл можно предварительно считать нормальным уровнем у здоровых людей при использовании условий, разработанных в предлагаемом способе. В группе неврологических больных с инструментально подтвержденным атеросклерозом каротидных артерий в 100% случаев определяется повышенный уровень ХИК, и колебания составили от 11,0 до 38,0 мг/дл.

Таким образом, способ позволяет повысить точность количественного определения холестерина в циркулирующих иммунных комплексах сыворотки крови человека. Выявление повышенного уровня ХИК при широких скрининговых обследованиях может быть предиктором атеросклероза на доклинической стадии. Доступность реагентов и простота способа определения ХИК в лабораторной практике позволит проводить углубленное исследование патогенеза атеросклеротических заболеваний. С другой стороны, реализация изобретения позволит как контролировать эффективность проводимого лечения, так и выявлять доклинические состояния атеросклероза.

Литература

1. Собенин И.А., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Холестерин иммунных комплексов как индикатор атеросклероза // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2012. - №3. - С.99-103.

2. Тертов В.В., Качарава А.Г., Саядян Х.С.и др. Холестеринсодержащие циркулирующие иммунные комплексы - компонент сыворотки крови больных с ишемической болезнью сердца, обуславливающий ее атерогенность // Кардиология. - 1989. - Т.29, №8. - С.35-38.

3. Шойбонов Б.Б., Борголов В.М., Баронец В.Ю., Панченко Л.Ф., Кубатиев А.А. Способ и тест-система определения циркулирующих иммунных комплексов // Патент РФ №2452962 от 10.06.2012 г. Бюл. №16.

4. Burut D.F.P., Karim Y., Ferns G.A.A. The Role of Immune Complexes in Atherosclerosis // Angiology. - 2010. - V.61, №7. - P.679-689.

5. Lopes-Virella M.F., Brent McHenry M., Lipsitz S., et al. Immune complexes containing modified lipoproteins are related to the progression of internal carotid intima-media thickness in patients with type 1 diabetes // Atherosclerosis. - 2007. - V.190. - P.359-369.

6. Szondy E., Mezey Z., Fust G. et al. Serial measurement of circulating immune complexes in myocardial infarction // Br Heart J. - 1981. - V.46, - P.93-98.

7. Virella G., Carter R.E., Saad A., et al. Distribution of IgM and IgG antibodies to oxidiesed LDL in immune complexes isolated from patients with type 1 diabetes and its relationship with nephropathy // Clin. Immunol. - 2008. - V.127, №3. - P.394-400.

Таблица 1
Содержание холестерина, IgG в преципитатах и степень связывания комплемента (CCK) иммунными комплексами, содержащими ммЛПНП, приготовленными из пулированной сыворотки крови доноров, в зависимости от концентрации ПЭГ-3350
Концентрация ПЭГ-3350, % 5 6 6,7 7,1 7,5 7,8 8,0 8,2 8,3
Холестерин, мг/дл 3,0 6,9 9,3 11,0 13,1 14,2 14,5 20,0 21,8
IgG мг/мл 0,163 0,324 0,648 0,648 0,648 0,648 0,648 0,648 0,648
CCK, % 19 20 61 69 80 80 77 87 85
Таблица 2
Содержание холестерина иммунных комплексов (ХИК) в сыворотках крови доноров и неврологических больных
Доноры ХИК, мг/дл Больные ХИК, мг/дл
1 5,2 1 11,0
2 6,4 2 26,1
3 2,3 3 20,9
4 4,5 4 15,9
5 9,2 5 18,5
6 6,4 6 20,4
7 5,0 7 10,6
8 6,0 8 24,9
9 5,3 9 21,0
10 5,7 10 18,3
11 6,8 11 20,6
12 7,8 12 31,3
13 8,4 13 10,6
14 6,2 14 14,0
15 7,4 15 38,0
M±m 6,2±1,7 M±m 20,1±7,7

Способ экспресс-определения уровня холестерина в иммунных комплексах (ХИК), включающий приготовление преципитата из сыворотки крови человека в растворе полиэтиленгликоля, его центрифугирование, растворение, определение содержания холестерина с использованием стандартных ферментативных наборов, отличающийся тем, что преципитат готовят путем обработки сыворотки крови буфером для преципитации ХИК, содержащим 10% ПЭГ 3350, в соотношении 1:3, инкубацией в течение 10 мин при комнатной температуре, центрифугировании при 3100 g в течение 10 мин при 23°C, и при уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования риска развития плоскоклеточной метаплазии в респираторном эпителии бронхов с наличием изолированной базальноклеточной гиперплазии.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) у больных операбельным базальноподобным трипл-негативным раком молочной железы.

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и судебно-медицинской экспертизе, и может быть использовано для верификации смерти больного от фибрилляции желудочков при инфаркте миокарда.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования возможных отрицательных последствий стоматологической имплантации. Исследуют костную ткань с помощью гистологического исследования костной крошки с места подготовки ложа для имплантата, выявляют морфологические изменения костной ткани в зоне предполагаемой стоматологической имплантации, исследуют диаметр гаверсовых каналов, толщину костных балок губчатого вещества, линию склеивания, реакцию пролиферации мезенхимальных клеток при отсутствии воспаления, наличие коллагеновых волокон, нарушение архитектоники губчатого слоя, интенсивность кровоснабжения кости, фиброз и гиалиноз сосудистой стенки, наличие или отсутствие реологических расстройств, наличие или отсутствие отложения остеоида, наличие или отсутствие воспалительных явлений.
Группа изобретений относится к отбору проб, в частности к способу и устройству получения образцов для исследования и взятия проб в жидком или текучем состоянии в условиях невесомости.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для оценки эффективности фармакотерапии в первые 7 суток лечения клебсиеллеза птиц антибактериальными препаратами.
Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для прогнозирования развития у детей кариеса временных зубов с незаконченной минерализацией.

Изобретение относится к медицине, в частности клинической биохимии, цитологии, патоморфологии и может быть использовано для определения способности клеток костного мозга к делению.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и заключается в проведении хроматографического анализа образца биопробы. Для этого образец наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр наносят радиально стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки степени тяжести внебольничной пневмонии. Сущность способа состоит в том, что у больного определяют в крови абсолютное количество лейкоцитов, относительное количество эритроцитов-макроцитов, абсолютное количество моноцитов 3-го класса с сегментированным лопастным ядром, относительное количество гранулярных лимфоцитов среднего размера, относительное количество нейтрофилов с 7-ю сегментами в ядре, количественный показатель C-реактивного белка, а также физиологический показатель числа дыхательных движений пациента в 1 минуту.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и клинической диагностике. Изобретение представляет способ оценки длительной гипергликемии, основанный на определении содержания глюкозы в плазме крови, отличающийся тем, что содержание глюкозы определяют дважды: сразу после взятия крови и через 24 часа после хранения плазмы крови над слоем форменных элементов, затем подсчитывают уменьшение содержания глюкозы в процентах от исходного уровня, по которому дают оценку длительной гипергликемии, причем хранение плазмы крови производят при t=4,0±0,5°C. Изобретение обеспечивает оптимизацию и снижение времени оценки длительной гипергликемии, повышение достоверности результата и возможность обследования максимального количества людей в минимальное время и выявление группы риска. 2 табл.

Изобретение относится к области агропромышленных технологий и может быть использовано для анализа выноса с луговой травой биохимических веществ. Для этого проводят учет колебаний урожайности в зависимости от структуры фитоценоза в виде травяного покрова. Проведение статистической обработки данных испытаний проб травы с пробных площадок на прирусловых, центральных и притеррасных поймах, а также на лугах с неравномерным и мозаичным размещением видов трав. Причем до закладки пробных площадок проводят рекогносцировку местности с выбранным для измерений травяным покровом, составляют карту-схему расположения компонент травяного покрова, после этого на каждой компоненте травяного покрова в виде делянки закладывают, по крайней мере, одну временную пробную площадку, по срезанной пробе травы взвешиванием определяют сырую и воздушно-сухую массу пробы. При этом дополнительно на высушенных пробах травы проводят испытания по биохимическому анализу для определения концентрации, по крайней мере, у трех химических питательных веществ в виде азота подвижного, оксидов калия и фосфора, затем суммированием концентраций этих трех веществ вычисляют общий суммарный вынос веществ из надземной части травы на всех пробных площадках. Изобретение позволяет определить продуктивность лугов. 8 з.п. ф-лы, 12 ил., 4 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к пульмонологии, кардиологии, геронтологии и спортивной медицине, и может быть использована для оценки легочного кровотока путем исследования капиллярного кровотока легких и внутрилегочных вено-артериальных шунтов. Для этого измеряют ЧСС в мин, концентрацию гемоглобина (Hb г/л), общее потребление кислорода организмом (ПО2(ОБЩ) мл/мин), насыщение кислородом артериальной крови (SART % или в десятичных долях 1) и насыщение смешанной венозной крови в большом круге кровообращения (БК) (Sv% или в десятичных долях 1). Вычисляют МОК (л/мин) по измеренным значениям Hb, ПО2, SART, SV. Затем по определенным математическим формулам рассчитывают величину капиллярного кровотока легких и величины внутрилегочных вено-артериальных шунтов. Предложенные варианты способа позволяют точно определить вентилляционно-перфузионные отношения в легких, а также исключить сложные прямые инструментальные способы измерения капиллярного кровотока в легких. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к области лабораторной диагностики. Устройство для автоматического обнаружения аналита в пробе телесной жидкости содержит матрицу адресуемых блоков анализа для проведения химической реакции, которая дает различимый сигнал, несущий информацию о наличии или отсутствии аналита; матрицу адресуемых блоков реагентов, в которой обращаются к индивидуальному адресуемому блоку реагента, соответствующему индивидуальному адресуемому блоку анализа, и в которой индивидуальный блок реагента выполнен с возможностью калибровки по опорному сигналу соответствующего индивидуального блока анализа до сборки матриц на устройстве, причем индивидуальный блок анализа содержит наконечник для количественного анализа, имеющий внутреннюю поверхность, содержащую реагенты, фиксированные на поверхности, для обнаружения аналита. Группа изобретений относится также к варианту указанного устройства, дополнительно содержащему блок отбора пробы, а также к системам, содержащим указанные устройства, способам анализа с использованием указанных устройств, способу сборки указанного устройства и способу отбора плазмы из пробы крови в указанных системах. Группа изобретений обеспечивает повышение гибкости и надежности системы, а также предотвращает перекрестное загрязнение блоков устройства. 10 н. и 55 з.п. ф-лы, 21 ил., 3 табл., 7 пр.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, микровязкость мембран эритроцитов путем эксимеризации липидного бислоя и белок-липидного слоя, количество дегенеративных форм эритроцитов, мишеневидных эритроцитов и эхиноцитов, содержание оксигемоглобина. При титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, выявлении снижения эксимеризации липидного бислоя до 0,59±0,006 FЭ/FМ, белок-липидного слоя до 0,70±0,004 FЭ/FМ, увеличении количества дегенеративных форм эритроцитов до 10,5±0,3%, эхиноцитов до 8,0±0,5%, мишеневидных эритроцтов до 11,5±0,9%, снижении содержания оксигемоглобина до 89,8±1,5% оценивают угрозу формирования гипоксии.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к птицеводству. Целью изобретения является разработка способа прогнозирования мясной продуктивности цыплят-бройлеров на основе определения соотношения между активностью белкового и липидного обмена веществ, определяющего скорость роста птицы и уровень мясной продуктивности. Предложенный способ позволяет прогнозировать уровень прироста массы тела бройлерных цыплят по биохимическим показателям крови. Указанная цель достигается путем расчета липопротеинового индекса (ЛПИ) в усл.ед. по формуле: Л П И = Н Э Ж К ⋅ C l ( Э Х С + Т Г + Ф Л ) ⋅ A l b ⋅ 100 , где ЭХС - концентрация этерифицированного холестерина, ммоль/л; ТГ - концентрация триглицеридов, ммоль/л; ФЛ - концентрация фосфолипидов, ммоль/л; Gl - концентрация глобулинов, ммоль/л; НЭЖК - концентрация неэтерифицированных, ммоль/л; Alb - концентрация альбуминов в сыворотке крови; 100 - нормализующий коэффициент. Установлено, что значение индекса ЛПИ зависит от активности белкового и липидного обменов и определяет уровень прироста массы тела цыплят-бройлеров. Изобретение можно использовать для своевременной корректировки рационов кормления, достижения эффективных приростов массы тела и повышения рентабельность птицефабрики. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики хронического простатита с помощью выявления дисфункции регионального микрососудистого эндотелия. Сущность изобретения состоит в том, что проводят ионофоретические пробы в ходе лазерной допплеровской флоуметрии, измеряют показатели резерва капиллярного кровотока при ионофорезе ацетилхолина и нитропруссида натрия на коже живота над лоном в точке проекции простаты, вычисляют коэффициент эндотелиальной функции (КЭФ) и при значении КЭФ ниже 1,0 диагностируют наличие хронического простатита. Использование заявленного способа позволяет упростить раннюю диагностику хронического простатита с помощью оценки функционального состояния регионарного микрососудистого эндотелия. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности. Сущность способа: супернатант аспирационной жидкости из полости матки или менструальных выделений в количестве 0,2 мл наносят на поверхность предметного стекла в форме капли, высушивают при комнатной температуре в течение суток, после чего полученные образцы (фации) микроскопируют. При наличии комплекса морфологических элементов, включающего токсические бляшки, языковые и дискообразные структуры, прогнозируют высокий риск развития неразвивающейся беременности. Предлагаемое изобретение направлено на упрощение и повышение чувствительности способа прогнозирования неразвивающейся беременности и дает возможность в короткие сроки на малом объеме биологического материала прогнозировать течение и исход беременности. 4 пр., 3 ил.

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к молекулярной биологии, микробиологии и хирургии, и может быть использовано в диагностических целях для идентификации синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa в клиническом биоматериале. Способ идентификации синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa включает посев исследуемого материала на твердую питательную среду, инкубирование посева в аэробных условиях при 37°С в течение 16-18 часов. Полученную бактериальную массу в количестве одной бактериологической петли помещают в 300 мкл физиологического раствора и прогревают при 98-99°С в течение 20-30 минут, центрифугируют при 12000 об/мин в течение 30 секунд. В супернатант добавляют краситель для электрофоретической детекции в количестве 0,5 мкл и 20 мкл вносят в лунку размером 4×1 мм 1,2% агарозного геля на ТАЕ-буфере с 10 мкл 1% бромистого этидия. Параллельно в контрольную лунку вносят 3 мкл раствора стандартного ДНК-маркера 1 kb, содержащего фрагменты ДНК в диапазоне 250-10000 bp. Проводят горизонтальный электрофорез в течение 15-20 минут, и при выявлении на полученной электрофореграмме исследуемой бактериальной массы трех светящихся в ультрафиолетовом свете полос, одна из которых соответствует фрагментам стандартного ДНК-маркера размером 10000 bp, вторая соответствует фрагментам стандартного ДНК-маркера размером 6000-8000 bp и третьей полосы в конце трека в форме «метелки», соответствующей фрагментам стандартного ДНК-маркера размером менее 750 bp, идентифицируют Pseudomonas aeruginosa в исследуемой бактериальной массе. Способ позволяет быстро и полно идентифицировать пигментообразующие и беспигментные штаммы Pseudomonas aeruginosa в исследуемой бактерийной массе. 5 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования риска прогрессирования периферических витреохориоретинальных дистрофий (ПВХРД) на парном глазу после операций по поводу регматогенной отслойки сетчатки (РОС). В субретинальной жидкости (СРЖ), полученной во время хирургического вмешательства на глазу с РОС, исследуют содержание IL18, если его уровень превышает 550 пкг/мл, то прогнозируют прогрессирование ПВХРД на парном глазу. Изобретение обеспечивает возможность проведения превентивного лечения на парном глазу при наличии риска прогрессирования ПВХРД до возникновения клинических проявлений прогрессирования ПВХРД у лиц с оперированной отслойкой сетчатки на другом глазу. 6 пр.
Наверх