Способ моделирования воспалительного процесса в тканях репродуктивных органов женщин

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ моделирования воспалительного процесса в тканях репродуктивных органов женщин. Сущность способа заключается в том, что клеточную культуру выращивают из клеток желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла. Инкубируют ее со штаммом Е Chlamydia trachomatis. Выявляют через 72 часа признаки инфицирования клеток желтого тела и используют инфицированную культуру для изучения механизма патологического влияния Chlamydia trachomatis на органы репродуктивной системы женщин. Предложенное изобретение может быть использовано при изучении патологических механизмов хламидиоза тканей и органов репродуктивной системы женщин. Предложенное изобретение позволяет установить взаимосвязь урогенитальной хламидийной инфекции и патогенеза гормональных нарушений, оценить роль хламидийной инфекции в развитии гиперэстрогений. 8 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к экспериментальной биологии, медицине, к гинекологии и может быть использовано для изучения патологических механизмов хламидиоза тканей и органов репродуктивной системы женщин.

В последние годы в научном мире активно обсуждается проблема влияния хламидийной инфекции на гормональную функцию яичников (см. Keay S.D., Barlow R., Eley A., Masson G.M., Anthony F.W., Jenkins J.M. The relation between immunoglobulin Gantibodies to Chlamydia trachomatis and poorovarian respons to gonadotropin stimulation befor in vitro fertilization. // Fertil. Steril. - 1998. - v.70. - N. 2. - P. 214-218; Sharara F.I., Queenan J.T. Jr., Springer R.S., VT.L., Scoccia D., Scommegna A. Elevated serum Chlamydia trachomatis Ig G antibodies. What do they mean for IVF pregnancy rates and loss? // J. Reprod Med. 1997. - v.42. - N.5. - P.281-286).

Прослеживается связь между серологическими доказательствами первичной инфекции, вызванной Chlamydia trachomatis, и обструктивным бесплодием (см. Henry-Suchet J., Catalan F., Paris X., Loffredo V. Antibody titerto Chlamydia trachomatis to acutesalping it isand obstructive sterilities. // Chlamydial infections. Amstrdam, ′′Elsevier Biomedical Press′′. - 1982. - P. 183-87).

Исследования, направленные на определение дискриминационных значений титров антител к Chlamydia trachomatis у 2729 женщин с субфертильностью, показали значимость исследования титров антител к хламидиям в диагностике трубной окклюзии (см. Mol В.W, Dijkman В., Wertheim P., Lijmer J., Vander Veen F., Bossuyt P.M. The accuracy of serum Chlamydial antibodies in the diagnosis of tubal pathology: ameta-analysis. // FertilSteril. - 1997. - V.67. - N.6. - P. 1031-1037).

Антиген Chlamydia trachomatis идентифицирован в образцах эндометрия и фаллопиевых труб бесплодных женщин (см. Campbell L.A., Patton D.L., Moor D.E. etal. Detection of Chlamidial trachomatis deoxyribonucleic acid in Women with tubal infertility. Fertil. Steril. 1993. - V. 59. - P. 45-50).

При лапароскопии у женщин с острым сальпингитом Chlamydia trachomatis была выделена в аспиратах из труб и биоптатах фимбрий в 30% и 70% случаев соответственно (см. Mardh P. - A., Ripa К.Т., Svensson L., Westrom L. Chlamydia trachomatis in patients with acutes alpingitis // N. Engl. Med. - 1977. - v.296. - P. 1377-1380).

Тем не менее, имеющиеся данные не дают четкого представления о механизме повреждения репродуктивной системы женщин в процессе длительной персистенции в половых путях возбудителя хламидиоза, не установлены причины, приводящие к гормональным нарушениям.

Известна способность Chlamydia pneumonia и Chlamydia trachomatis типы Н и L2/434/BU инфицировать культивируемые клетки эндотелия вен (см. Fryer R.H. Schwobe E.P., Woods M.L., Rodgers G.M. Chlamydiaspecies infect human vascular endothelial cell and induce procoagulant activity. // J. Investig. Med. - 1997. - V.45. - N.4. - P. 168-174).

При этом обнаружено свойство инфицированных клеток экспрессировать прокоагулянтные тканевые факторы, отмечена адгезия тромбоцитов к инфицированным хламидиями клеткам разной степени выраженности. Оказалось, что указанные типы хламидий могут инфицировать человеческие эндотелиальные клетки вен и инициировать экспрессию тканевого фактора с пиком через 18 часов после инфицирования. Отмечено значительное повышение адгезии тромбоцитов при инфицировании эндотелиоцитов разными серотипами хламидий.

Однако представленный способ исследования, хотя и достаточно эффективен, но разработан для решения других задач.

Известно, что в системе in vitro фибробластоподобные синовиоциты способны поддерживать рост хламидий (см. Rodel J., Straube Е., Lungershausen W., Hartmann M., Groh A. Secretion of cytokines by humans ynoviocytes during in vitro infection with Chlamydia trachomatis. // J. Rheumatol. - 1998. - V.25. - N.11. - P.2161-2168), выбранный нами в качестве прототипа.

Штамм Е Chlamydia trachomatis стимулировал цитокиновый ответ инфицированных клеток, в частности, к продукции IL6, TGF-beta, GMCSF. Обработка интерфероном гамма способствовала высвобождению TNF-альфа в ответ на хламидийную инфекцию. В целом, индуцированный хламидиями цитокиновый ответ приводил к изменению синовиальной мембраны, вызывая воспаление.

Однако указанный способ предназначен для изучения причин воспаления в культуре фибробластов и не позволяет судить как о возможности культивирования клеток желтого тела, так и об адаптации штамма Е Chlamydia trachomatis к полученной культуре для изучения его патологического действия на ткани и органы репродуктивной системы женщин.

Полагаем, что доказательством взаимосвязи нарушений деятельности органов репродуктивной системы с инфицированием Chlamydia trachomatis могло бы явиться инфицирование культуры клеток желтых тел в эксперименте in vitro.

Предположение основано на способности хламидий расти и размножаться в различных клеточных культурах: McCoy, HeLa-229 и других (см. Kuo С.С, Wang S.P. Grayston J.T. Growt hof trachoma organisms in HeLa 229 cellculture. // Nongonococcal Uretrhritisand Relat. Infect. - Washington, DC-1977. - P. 328-336; Ripa K.T. and P. - A. Mardh. Cultivation of Chlamydia trachomatis incicloheximid - treated Mc Coy cells. // J. Clin. Microbiol. - 1977. - N. 6. - P. 328-331).

Техническим результатом изобретения является разработка модельной системы, содержащей желтые тела, выделенные из ткани яичников и Chlamydia trachomatis для выявления признаков инфицирования и воспаления.

Поставленная цель достигается тем, что ткань желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла, гомогенизируют при комнатной температуре в культуральной среде RPMI-1640 «Seromed», затем полученную клеточную смесь центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов в минуту, супернатант удаляют, осадок клеток отмывают в среде RPMI, оценивают выделенные клетки в инвертированном микроскопе MicroStar «Reichert» и переносят в ростовую среду, содержащую RPMI-1640 с 15% эмбриональной телячьей сывороткой «Seromed», 2 ммоль/л глутамина и 150 γ/мл гентамицина, для выращивания клеток используют матрацы из нейтрального стекла объемом 100 мл, ростовую среду вносят в количестве 15 мл; на 3-и сутки заменяют 1/3 объема среды культивирования, на 6-й день образовавшийся монослой снимают со стекла 0,02% раствором Версена с хемотрипсином, центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов в минуту, удаляют надосадочную жидкость, клеточный осадок ресуспендируют в той же среде до дозы 2,0×105 клеток в 1 мл и переносят по 1 мл в пенициллиновые флаконы, на дно которых предварительно помещают покровные стекла размером 7×7 мм, через 36 часов ростовую среду удаляют из флаконов, сформировавшийся монослой клеток еще раз промывают той же средой, затем во флаконы вносят по 40 мл культуры Chlamydia trachomatis, центрифугируют с использованием центрифуги с горизонтальным ротором при 2500 оборотов в минуту в течение 1 часа, образцы инкубируют при 37°C в течение 72 часов, затем покровные стекла извлекают из флаконов, подсушивают на воздухе и фиксируют охлажденным ацетоном в течение 10 минут, окрашивают и при микроскопии выявляют обилие клеток эксплантата с выраженными признаками деструкции, с ретикулярными тельцами и переходными формами возбудителя, экзоцитоз хламидий, лизис инфицированных клеток на фоне клеточного детрита и голых ядер, присутствие клеток, весь объем которых заполняли зрелые бочонкообразные включения Chlamydia trachomatis с заметным уплотнением поверхностных структур, увеличением периплазматического пространства. Способ поясняется фотографиями.

Фиг. 1 - пласт клеток желтого тела. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (16×7).

Фиг. 2 - изолированно расположенные клетки желтого тела. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (40×10).

Фиг. 3 - клетка желтого тела. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (40×10).

Фиг. 4 - микроколонии Chlamydia trachomatis в культуре клеток желтого тела через 48 часов после инфицирования. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (40×10).

Фиг. 5 - микроколонии Chlamydia trachomatis в культуре клеток желтого тела через 48 часов после инфицирования. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (40×7).

Фиг. 6 - микроколонии Chlamydia trachomatis в культуре клеток желтого тела через 72 часа после инфицирования. Лизис клеток. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (40×7).

Фиг. 7 - микроколонии Chlamydia trachomatis в культуре клеток желтого тела через 72 часа после инфицирования. Лизис клеток, клеточный детрит. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (40×7).

Фиг. 8 - разрушенная Chlamydia trachomatis клетка желтого тела через 72 часа после инфицирования. Тельца включений бочонкообразной формы. Окраска по Май-Грюнвальд-Гимзе (10×1000).

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве агента инфицирования выбран штамм Е Chlamydia trachomatis с титром - 106IFU/мл, полученный роллерным культивированием в клеточных линиях McCoy (см. Бартеньева Н.С., Фуэнтос И., Деева Ф.В., Лефебр Ж.Ф. и др. Индукция тумор-некротического фактора хламидиями. // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. - М. - 1990. - С.30-32).

Инфицирование культурой Chlamydia trachomatis осуществляли с применением центробежной силы по стандартной методике (см. Dunlop Е.М.С., Vaughan-Jackson J.R., Darougar S. // Chlamydial infection improved methods of collection of material for coutuceion from the urogenital tract and rectum. // Brit. J. Vener. Dis. - 1972. - v.48. - K6. - P. 421-424).

Ткань желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла, тщательно гомогенизируют при комнатной температуре в культуральной среде RPMI-1640 («Seromed»).

Полученную клеточную смесь центрифугируют в течение 10 мин при 1000 об/мин на Т-34. После центрифугирования супернатант удаляют, а осадок клеток отмывают в среде RPMI.

После оценки выделенных клеток в инвертированном микроскопе (MicroStar «Reichert») клеточную взвесь переносят в ростовую среду, содержащую RPMI-1640 с 15% эмбриональной телячьей сывороткой («Seromed»), 2 ммоль/л глутамина и 150 у/мл гентамицина.

Для выращивания клеток используют матрацы из нейтрального стекла объемом 100 мл. Ростовую среду вносят в количестве 15 мл.

На 3-и сутки проводят замену 1/3 объема среды культивирования.

На 6-й день образовавшийся монослой снимают со стекла 0,02% раствором Версена с хемотрипсином, центрифугируют в течение 10 мин при 1000 об/мин.

После удаления надосадочной жидкости клеточный осадок ресуспендируют в той же среде до дозы 2,0×105 клеток в 1 мл и переносят по 1 мл в пенициллиновые флаконы, на дно которых предварительно помещают покровные стекла размером 7×7 мм.

Монослой клеток формируется при вертикальном положении флаконов в атмосфере 5% CO2 при 37°C в CO2-инкубаторе («Sanyo»).

Процесс формирования монослоя клеток желтых тел состоит из 2-х этапов: начало образования монослоя - пласты клеток распадаются на отдельные клетки, последние свернуты в трубочки; завершение образования монослоя - клетки «разворачиваются», принимают свою обычную форму, располагаются отдельно или небольшими группами, морфологически идентифицируемы (Фиг.1, 2, 3).

Через 36 часов ростовую среду удаляют из флаконов, сформировавшийся монослой клеток еще раз промывают той же средой, после чего во флаконы вносят по 40 мл культуры Chlamydia trachomatis.

С целью повышения репродукции хламидий в культуре клеток и усиления адсорбции инокулята на монослой применяют центрифугирование с использованием центрифуги с горизонтальным ротором при 2500 об/мин в течение 1 часа.

После центрифугирования образцы инкубируют при 37°C в течение 72 часов.

Оценку результатов взаимодействия инфекционного агента с клеточной линией производят через 48 часов и по истечении 72 часов.

В указанные сроки покровные стекла извлекают из флаконов, подсушивают на воздухе и фиксируют охлажденным ацетоном в течение 10 мин.

Одно из стекол окрашивают по методу Май-Грюнвальда-Гимзы (см. Кост Е.А., Смирнова Л.Г. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. - М.: Медицина. - 1964. - 960 с), другое - методом прямой иммунофлюоресценции (см. Кутилин А.В., Дробышевская Э.И., Шаткин А.П. и др. Получение антихламидийных моноклональных антител // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. - Москва, 1990. - С.23-25).

При микроскопии препаратов, полученных через 48 часов после инфицирования, клетки желтого тела располагались разрозненно и небольшими группами.

Обращало внимание наличие значительного количества инфекционных частиц как внутри клеток (ретикулярные тельца), так и во внеклеточном пространстве (элементарные тельца), что объясняет обилие этих частиц в клеточной культуре. (Фиг.4, 5).

Через 72 часа в препаратах, полученных после более длительного контакта клеточной линии желтого тела с культурой Chlamydia trachomatis, значительная часть монослоя была разрушена.

Обращало внимание обилие клеток эксплантата с выраженными признаками деструкции, «нашпигованных» ретикулярными тельцами и переходными формами возбудителя. Наблюдалась картина экзоцитоза хламидий, лизиса инфицированных клеток (Фиг.6, 7) на фоне клеточного детрита и голых ядер. Особо привлекали внимание клетки, весь объем которых заполняли зрелые бочонкообразные включения Chlamydia trachomatis с заметным уплотнением поверхностных структур, увеличением периплазматического пространства (Рис.8).

Итак, уже через 72 часа после инфицирования определялись явные признаки лизиса инфицированных клеток желтого тела. Процесс сопровождался освобождением сотен инфекционных частиц хламидий, каждая из которых способна инициировать новый раунд инфекции.

При отсутствии доказательств о различиях между циклом развития инфекционного процесса in vivo от такового in vitro можно предположить, что при естественном инфицировании развитие хламидий происходит аналогичным образом, с продукцией инфекционного потомства.

С целью подтверждения вирулентности культуры клеток желтого тела, инфицированных штаммом Е Chlamydia trachomatis, было выполнено по описанной выше методике несколько повторных заражений монослоя клеток желтых тел. Получен аналогичный первому эксперименту результат.

Пример применения способа.

Ткань желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла, тщательно гомогенизировали при комнатной температуре в культуральной среде RPMI-1640 («Seromed»).

Полученную клеточную смесь центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин на Т-34.

Супернатант удаляли, а осадок клеток отмывали в среде RPMI.

После оценки выделенных клеток в инвертированном микроскопе (MicroStar «Reichert») клеточную взвесь переносили в ростовую среду, содержащую RPMI-1640 с 15% эмбриональной телячьей сывороткой («Seromed»), 2 ммоль/л глутамина и 150 γ/мл гентамицина.

Для выращивания клеток использовали матрацы из нейтрального стекла объемом 100 мл. Ростовую среду вносили в количестве 15 мл.

На 3-и сутки заменяли 1/3 объема среды культивирования.

На 6-й день образовавшийся монослой снимали со стекла 0,02% раствором Версена с хемотрипсином, центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин.

После удаления надосадочной жидкости клеточный осадок ресуспендировали в той же среде до дозы 2,0×105 клеток в 1 мл и переносили по 1 мл в пенициллиновые флаконы, на дно которых предварительно помещают покровные стекла размером 7×7 мм.

Через 36 часов ростовую среду удаляли из флаконов, сформировавшийся монослой клеток еще раз промывали той же средой, после чего во флаконы вносили по 40 мл культуры Chlamydia trachomatis, центрифугировали с использованием центрифуги с горизонтальным ротором при 2500 об/мин в течение 1 часа.

После центрифугирования образцы инкубировали при 37°C в течение 72 часов.

Оценку результатов взаимодействия инфекционного агента с клеточной линией производили через 48 часов и по истечении 72 часов.

Для изучения патологического воздействия Chlamydia trachomatis на женские органы репродуктивной системы мы инъецировали суспензию инфицированных Chlamydia trachomatis клеток желтого тела интравагинально самкам белых беспородных крыс:1 группа - 14 крыс в лютеиновой фазе аналогично эксперименту с индукцией бесплодия у самок мышей С3Н (см. Pal S., Hui W., Peterson E.M., de 1a Maza L.M. Factors influencing the induction of infertility in amous model of Chlamydia trachomatis as cending genitaltract infection // J. Med. Microbiol. 1998. - v.47. - N. 7. - P. 599-605), 2 группа - 12 беременных крыс.

Через 6 дней в материале из половых путей всех крыс первой группы получены признаки диссеминации хламидий; у 7 крыс (58,3%) второй группы отмечены выкидыши, у остальных крыс второй группы в дальнейшем получено ослабленное потомство.

Таким образом, в эксперименте in vitro получены данные, подтверждающие способность клеток желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла, к активному росту и размножению на поверхности покровных стекол.

Показана способность штамма Е Chlamydia trachomatis инфицировать и продуктивно размножаться в первично культивируемых клетках желтого тела, а также чувствительность культуры клеток желтого тела к Chlamydia trachomatis. Более того, инфицированные штаммом Е Chlamydia trachomatis клетки желтого тела способны поддерживать рост хламидий в системе in vitro и in vivo.

По нашему мнению, клетки желтого тела яичника могут служить своеобразной экологической нишей для хламидийной инфекции, являться реальными клетками-хозяевами для них, функционируя в организме как естественный резервуар инфекции. Сами Chlamydia trachomatis могут являться независимым фактором риска, ассоциированным с нарушением гормональной функции яичников.

Изобретение «Способ моделирования воспалительного процесса в тканях репродуктивных органов женщин» является новым, так как оно не известно из уровня техники в области экспериментальной биологии и медицины.

Новизна изобретения состоит в том, что наряду с получением культуры клеток желтого тела производится инфицирование монослоя этих клеток штаммом Е Chlamydia trachomatis, что, в свою очередь, позволяет выявить признаки инфицирования и воспаления.

Технико-экономическая эффективность способа моделирования воспалительного процесса в тканях репродуктивных органов женщин заключается в том, что полученная экспериментальная модель стабильной культуры клеток желтого тела, которую культивировали с Chlamydia trachomatis, представляет собой прямое доказательство взаимосвязи урогенитальной хламидийной инфекции и нарушений функции репродуктивной системы женщин.

Способ моделирования воспалительного процесса в тканях репродуктивных органов женщин, включающий получение клеточной культуры, инфицирование штаммом Е Chlamydia trachomatis, отличающийся тем, что ткань желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла, гомогенизируют при комнатной температуре в культуральной среде RPMI-1640 «Seromed», затем полученную клеточную смесь центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов в минуту, супернатант удаляют, осадок клеток отмывают в среде RPMI, оценивают выделенные клетки в инвертированном микроскопе MicroStar «Reichert» и переносят в ростовую среду, содержащую RPMI-1640 с 15% эмбриональной телячьей сывороткой «Seromed», 2 ммоль/л глутамина и 150 γ/мл гентамицина, для выращивания клеток используют матрацы из нейтрального стекла объемом 100 мл, ростовую среду вносят в количестве 15 мл; на 3-и сутки заменяют 1/3 объема среды культивирования, на 6-й день образовавшийся монослой снимают со стекла 0,02% раствором Версена с хемотрипсином, центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов в минуту, удаляют надосадочную жидкость, клеточный осадок ресуспендируют в той же среде до дозы 2,0×105 клеток в 1 мл и переносят по 1 мл в пенициллиновые флаконы, на дно которых предварительно помещают покровные стекла размером 7×7 мм, через 36 часов ростовую среду удаляют из флаконов, сформировавшийся монослой клеток еще раз промывают той же средой, затем во флаконы вносят по 40 мл культуры Chlamydia trachomatis, центрифугируют с использованием центрифуги с горизонтальным ротором при 2500 оборотов в минуту в течение 1 часа, образцы инкубируют при 37°C в течение 72 часов, затем покровные стекла извлекают из флаконов, подсушивают на воздухе и фиксируют охлажденным ацетоном в течение 10 минут, окрашивают и при микроскопии выявляют обилие клеток эксплантата с выраженными признаками деструкции, с ретикулярными тельцами и переходными формами возбудителя, экзоцитоз хламидий, лизис инфицированных клеток на фоне клеточного детрита и голых ядер, присутствие клеток, весь объем которых заполняли зрелые бочонкообразные включения Chlamydia trachomatis с заметным уплотнением поверхностных структур, увеличением периплазматического пространства.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для лечения рецидива острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в медицине. Способ включает масштабирование диплоидных клеток линии М-20 из криобанка ИПВЭ им.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточной продукции рекомбинантных белков, и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора VIII.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению клеток плацентарного перфузата человека в получении лекарственного средства для подавления пролиферации опухолевых клеток у индивида.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и онкологии. Способ предусматривает: а) выделение постнатальных тканеспецифичных мультипотентных аутологичных стволовых клеток (АСК) и/или аутологичных прогениторных клеток (АПК) для их последующего протеомного и полнотранскриптомного анализов; б) выделение АСК и/или АПК и/или мультипотентных аллогенных HLA-гаплоидентичных стволовых клеток (HLA-CK) для последующего ремоделирования их протеомного профиля; в) выделение РСК из опухоли пациента; г) протеомный анализ АСК и/или АПК и РСК; д) полнотранскриптомный анализ АСК и/или АПК и РСК; е) определение набора белков, каждый из которых содержится в протеомных профилях как АСК и/или АПК, так и РСК; ж) анализ ранее определенного набора белков для идентификации в РСК внутриклеточных сигнальных путей, не подвергшихся неопластической трансформации в результате канцерогенеза, и определения белков-мишеней, являющихся мембранными акцепторами идентифицированных сигнальных путей; з) анализ полнотранскриптомного профиля экспрессии генов РСК и подтверждение сохранности и функциональной значимости структурных компонентов идентифицированных сигнальных путей в РСК; и) определение белков-лигандов, способных активировать белки-мишени; к) сравнительный анализ полнотранскриптомных профилей АСК и/или АПК с транскриптомными профилями, содержащимися в известных базах данных транскриптомов, для определения пертурбогенов, способных модифицировать профиль экспрессии генов АСК и/или АПК и/или HLA-CK, выделенных для ремоделирования их протеомного профиля, в направлении секреции ранее определенных белков-лигандов; л) ремоделирование протеомного профиля АСК и/или АПК и/или HLA-CK пертурбогенами с получением модифицированного транскриптомного профиля различных клеточных систем, способных оказывать регуляторное воздействие на РСК пациента.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в медицине. Популяцию мононуклеарных клеток или неэмбриональных стволовых клеток, обогащенную клетками моноцитарной линии дифференцировки, содержащей промоноциты, применяют для лечения ишемии у субъекта.

Изобретение относится к области биотехнологии и клеточной технологии. Заявленное изобретение направлено на создание плюрипотентных, мультипотентных и/или самообновляющихся клеток, которые способны начать дифференцироваться в культуре в различные типы клеток и способны к дальнейшей дифференцировке in vivo.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для отбора сперматозоидов в методах вспомогательных репродуктивных технологий. Способ предусматривает размещение в чашке Петри капли спермы и капли культуральной среды на расстоянии друг от друга не более 5 см, соединение капель полосой из вязкой среды с параметрами вязкости 1-4 Па·с, затем инкубируют чашку с содержимым в течение 30-90 мин в условиях, моделирующих естественную среду цервикального канала женского репродуктивного тракта.

Изобретение относится к области медицины, биотехнологии и клеточных технологий. Способ дифференцирования плюрипотентных стволовых клеток, представляющих собой линию клеток человека, в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы, включает обработку плюрипотентных стволовых клеток средой, отличающейся тем, что она не содержит активин А и содержит GDF-8, в течение периода времени, достаточного для того, чтобы плюрипотентные стволовые клетки дифференцировались в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены варианты олигопептида, выделенные из белка RAB6KIFL (KIFL20A), которые способны индуцировать цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) в составе комплекса с молекулой HLA-A*0201.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии. Заявлена генетически модифицированная мезенхимальная стволовая клетка для селективной экспрессии цитотоксического белка, содержащая экзогенную нуклеиновую кислоту, содержащую область, кодирующую цитотоксический белок, функционально связанную с промотором или комбинацией промотор/энхансер, где промотор или комбинация промотор/энхансер вызывают селективную экспрессию цитотоксического белка, когда генетически модифицированная мезенхимальная стволовая клетка подходит близко к стромальной ткани опухоли. 3 н. и 27 з. п. ф-лы, 10 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, молекулярной биологии и биофармакологии. Предложен способ определения иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стромальных клеток человека путем измерения уровня экспрессии молекулы HLA-DR на поверхности мембран клеток и измерение в клетках уровня экспрессии молекул IDO, iNOS и СОХ-2. Критерием оценки служит двухкратное увеличение уровня экспрессии HLA-DR на поверхности мембран МСК и/или мРНК генов IDO, iNOS и СОХ-2 в клетках. Изобретение может быть использовано для оценки иммуносупрессивных свойств клеток в диагностических целях. 6 ил, 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ нагрузки антигеном антигенпрезентирующей клетки. Способ предусматривает выделение и очистку специфического для рецептора дендритной клетки (ДК) антитела или его фрагмента, к которому прикреплен Gag антиген. При этом к специфическому для ДК-рецептора антителу или его фрагменту или к Gag антигену необязательно прикреплен Nef антиген. Сам Gag антиген является менее чувствительным к протеолитическому распаду путем отщепления одного или более протеолитических сайтов. Далее приводят специфическое для ДК-рецептора антитело или его фрагмент, к которому прикреплен Gag антиген для образования комплекса антитело-антиген, в контакт с антигенпрезентирующей клеткой. При этом, специфическое для ДК-рецептора антитело или его фрагмент, к которому прикреплен Gag антиген для образования комплекса антитело-антиген, обрабатывают и представляют для Т-клеточного распознавания. 3 н. и 29 з.п. ф-лы, 33 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выращенную прикрепленной к субстрату клетку из плаценты. Данная клетка культивирована в трехмерных (3D) условиях культивирования, которые обеспечивают возможность размножения клетки. Вышеуказанные условия содержат культивирование в течение по меньшей мере 3 дней при продолжительной перфузии с культуральной средой. Указанная клетка не проявляет остеогенную дифференциацию в условиях и в культуральной среде, в которых выращенная прикрепленной к субстрату клетка из костного мозга проявляет остеогенную дифференциацию. Указанная клетка экспрессирует CD73, CD90, CD29, CD105 и D7-fib. Предложенное изобретение позволяет снижать пролиферацию лимфоцитов. 7 з.п. ф-лы, 35 ил., 9 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области медицины, офтальмологии и биотехнологии. Предложен способ подготовки клеточных культур в виде сфероидов для формирования передних слоев искусственной роговицы, включающий использование кусочков лимба. Изобретение может использоваться для конструирования передних слоев искусственной роговицы с целью компенсации поврежденных тканей роговицы глаза. 1 пр.

Изобретение относится к области генетической инженерии, молекулярной биологии и биотехнологии. Предложен способ дифференцировки популяции полипотентных стволовых клеток в популяцию клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической энтодермы, которая ко-экспрессирует PDX1, NKX6.1, но не экспрессирует CDX2 и NGN3В. Способ может быть использован для медицинских и биотехнологических целей. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ дифференцировки популяции полипотентных стволовых клеток, полученных из установленных линий полипотентных стволовых клеток, в популяцию клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической энтодермы, которая ко-экспрессирует PDX1, NKX6.1, но не экспрессирует CDX2 и NGN3. Способ может быть использован для медицинских и биотехнологических целей. 9 ил., 2 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть применено в качестве способа лечения гормонозависимой/гормонорезистентной формы язвенного колита, осложненного оппортунистическими инфекциями. Для этого определяют IgG к вирусу простого герпеса I типа, IgG к вирусу герпеса 6 типа, IgG к цитомегаловирусу, IgG к микоплазмам, IgG к хламидиям. При значении IgG к вирусу простого герпеса I типа - 185 Ед/мл и выше, IgM - 0,4 Ед/мл и выше, IgG к вирусу герпеса 6 типа - 1,5 Ед/мл и выше, IgG к цитомегаловирусу - 185 Ед/мл и выше, IgM - 3,4 Ед/мл и выше, IgG к микоплазмам - 119 Ед/мл и выше, IgM - 0,4 Ед/мл и выше, IgG к хламидиям - 105 Ед/мл и выше, IgM - 0,8 Ед/мл и выше больному проводят системную трансплантацию аллогенных МСК в дозе 150-250 млн клеток. Использование данного способа позволяет повысить эффективность терапевтического лечения гормонозависимой/гормонорезистентной формы язвенного колита, способствует элиминации ЦМВ без проведения противовирусной терапии и преодолению гормонозависимости/гормонорезистентности. 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α-продуцент моноклональных антител, специфичных к гранулоцитарному колониестимулирующему фактору (GCSF) человека, депонированный в Специализированной коллекции клеточных культур Института цитологии РАН под номером РККК (П) 662 Д. Изобретение позволяет расширить арсенал штаммов, продуцирующих моноклональные антитела, специфичные к GCSF, используемые для научно-исследовательских и медицинских целей. 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения прогениторных клеток из образцов миокарда млекопитающего. Представленный способ включает измельчение образцов, посадку их на культуральные чашки с покрытием, обеспечивающим их адгезию, культивирование образцов в условиях гипоксии, обеспечивающей адгезию образцов, с образованием клеточной культуры, извлечение клеток из клеточной культуры посредством обработки ее ферментами, культивирование извлеченных клеток до момента образования клеточных агрегатов и обработку клеточных агрегатов раствором ферментов для получения прогениторных клеток миокарда. Представленное изобретение может быть использовано в медицине и ветеринарии для изучения механизмов регенерации миокарда и биологии стволовых клеток, а также для лечения заболеваний сердца. 9 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.
Наверх