Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)



Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)
Способ лечения аутоиммунного заболевания (варианты)

 


Владельцы патента RU 2539110:

БИОТЕСТ АГ (DE)

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Описаны способы лечения аутоиммунного заболевания. Способы предусматривают введение фармацевтической композиции, содержащей гуманизированное антитело к CD4. При этом антитело способно активировать CD4+ СВ25+ регуляторные T-клетки. Предложенная группа изобретений может быть использована в медицине. 4 н. и 29 з.п. ф-лы, 41 ил., 20 табл., 5 пр.

 

Настоящее изобретение относится к лечению аутоиммунных заболеваний. Изобретение относится к высокоэффективному средству, такому как гуманизированное моноклональное антитело, которое можно вводить пациенту в более низких дозировках, чем ранее известные дозировки. В частности, оно эффективно для пациентов, имеющих заболевания или характерные признаки, требующие более низких доз для эффективного их лечения. Изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело в эффективной концентрации, а также к применению и способам лечения с использованием композиций и лекарственных средств, содержащих это антитело.

Аутоиммунитет представляет собой неспособность организма распознавать его собственные составные части (вплоть до субмолекулярных уровней) как "свое", что приводит к иммунному ответу против его собственных клеток и тканей. Любое заболевание, которое является следствием такого нарушенного иммунного ответа, называют аутоиммунным заболеванием. Аутоиммунные заболевания включают рассеянный склероз (MS), ревматоидный артрит (RA), псориаз, псориатический артрит, язвенный колит, болезнь Крона, миастению гравис (MG), аутоиммунный полигландулярный синдром типа II (APS-II), тиреоидит Хашимото (HT), диабет 1 типа (T1D), системную красную волчанку (SLE) и аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (ALS).

Аутоиммунное заболевание возникает, когда T-клетки распознают "собственные" молекулы, т.е. молекулы, продуцируемые клетками хозяина, и реагируют с ними. Активация "аутореактивных" T-клеток путем представления аутоантигенов, процессированных антигенпредставляющими клетками (APC), приводит к их клональной экспансии и миграции в определенные ткани, где они индуцируют воспаление и разрушение ткани.

В норме T-клетки толерантны к аутологичной ткани и реагируют только на представление гетерологичных структур. Центральная толерантность и периферическая толерантность включает два механизма, посредством которых иммунная система препятствует индукции аутореактивными T-клетками их вредных функций. Центральная толерантность опосредуется негативной селекцией. Этот процесс включает элиминацию через клональную делецию аутореактивных T-клеток в процессе онтогенного развития тимуса.

Периферическая толерантность представляет собой резерв, доступный, если центральная толерантность является недостаточной и аутореактивные клетки покидают тимус. Этот механизм толерантности действует постоянно на протяжении жизни, сохраняя аутореактивные клетки под контролем путем иммунного безразличия (анергии), периферической делеции и/или активной супрессии.

Регуляторные T-клетки (Treg, ранее называемые "супрессорными клетками") в качестве части активной супрессии поддерживают периферическую толерантность и регулируют аутоиммунитет (Suri-Payer et al., J Immunol. 157: 1799-1805 (1996); Asano et al., J Exp. Med. 184:387-396 (1996); Bonomo et al., J. Immunol. 154: 6602-6611 (1995); Willerford et al., Immunity 3: 521-530 (1995); Takahashi et al., Int. Immunol. 10: 1969-1980 (1998); Salomon et al., Immunity 12: 431-440 (2000); Read et al., J Exp. Med. 192: 295-302 (2000)). Как правило, регуляторные T-клетки ингибируют активацию и/или функцию T-хелперов 1 типа (TH1) и эффекторных клеток TH2. Нарушение регуляции частоты или функционирования клеток Treg может привести к истощающим аутоиммунным заболеваниям (Baecher-Allan et al., Immunol. Review 212: 203-216 (2006); Shevach, Annu. Rev. Immunol. 18: 423-449 (2000); Salomon et al., Immunity 12: 431-440 (2000); Sakaguchi et al., Immunol. Rev. 182: 18-32 (2001)).

Охарактеризовано несколько подгрупп регуляторных T-клеток. Семейство Treg состоит из двух ключевых подгрупп: появляющиеся естественным образом, например CD4+CD25+ Treg, и периферически индуцированные, Tr1- и Th3-Treg. Более того, у человека и грызунов были описаны NKTreg и CD8+ Treg (Fehervari et al., J. Clin. Investigation 114: 1209-1217 (2004)).

Происходящие из тимуса клетки Treg (встречающиеся в природе CD4+CD25+Treg) являются главными регуляторными клетками, вовлеченными в регуляцию аутоиммунитета или патогенных иммунных ответов.

Основные признаки встречающихся в природе CD4+CD25+Treg являются следующими:

i) они представляют собой CD4+ T-клетки и составляют 5-10% от периферических CD4+ T-клеток;

ii) они созревают в тимусе;

iii) они, главным образом, характеризуются комбинированной экспрессией рецептора IL-2 (CD25), низкомолекулярной изоформы молекулы CD45, CD152 (CTLA-4) и фактора транскрипции FoxP3.

Роль Treg наилучшим образом иллюстрируется экспериментами, вовлекающими восстановление у иммунодефицитных мышей nude с помощью клеток CD4+ с истощением клеток CD25+. У мышей nude с восстановлением CD4+CD25- развиваются различные орган-специфические аутоиммунные заболевания, такие как гастрит, оофорит, орхит и тиреоидит (Suri-Payer et al.; J. Immunol. 160: 1212-1218 (1998)).

Включение подгруппы CD4+CD25+ в эксперименты по восстановлению с мышами nude препятствует возникновению этих заболеваний (Sakaguchi et al., J Immunol. 155: 1151-1164 (1995)). Защитное значение клеток CD4+CD25+ против орган-специфического аутоиммунитета также было показано в нескольких других моделях аутоиммунитета (например, аутоиммунный гастрит, простатит, оофорит, гломерулонефрит, эпидимит и тиреоидит), вызванного неонатальной тимэктомией, проведенной через 3 суток после рождения (d3Tx), или воспалительного заболевания кишечника, вызванного восстановлением у мышей SCID T-клетками CD45RBhigh, CD4+CD25-. Введение антитела к CD25 мышам in vivo также индуцирует локализованное в органе аутоиммунное заболевание.

Открытие важности регулятора транскрипции FoxP3 в функции регуляторных T-клеток CD4+CD25+ у мышей и предшествующие наблюдения, что пациенты с синдромом IPEX (нарушение иммунной регуляции, полиэндокринопатия, энтеропатия и X-сцепленное наследование), тяжелым воспалительным заболеванием, сходным с заболеванием, наблюдаемым у мышей с дефицитом регуляторных клеток CD4+CD25+ ("scurfy"-синдром), имеют мутации в FoxP3, обеспечило прямую корреляцию между аутоиммунной моделью на животных, регуляторными T-клетками мыши и аутоиммунным заболеванием у человека (Sakaguchi et al., J Immunol. 155: 1151-1164 (1995)).

Фармацевтический механизм регуляторных T-клеток не полностью ясен. Treg CD4+CD25+ ингибируют поликлональную и антиген-специфическую активацию T-клеток. Супрессия опосредуется зависимым от клеточных контактов механизмом, который требует активации Treg CD4+CD25+ через TCR, но Treg не демонстрируют пролиферативного ответа при активации или стимуляции TCR митогенными антителами (анергическими) (Shevach, Nature Rev. Immunol 2: 389 (2002)). После стимуляции они являются компетентными для супрессии независимым от антигена образом ответа CD4+ T-клеток и CD8+ T-клеток, а также ингибирования активации B-клеток и их клональной экспансии.

Существуют дополнительные данные, указывающие на то, что супрессорная активность CD4+CD25+ Treg частично также основана на противовоспалительных цитокинах, таких как TGF-β (Kingsley et al., J Immunol. 168: 1080 (2002); Nakamura et al., J Exp. Med. 194: 629-644 (2001)). Функциональное значение секреции TGF-β, более того, подтверждается данными, что у мышей с дефицитом TGF-β развивается аутоиммунное заболевание и что введение нейтрализующих антител к TGF-β препятствует in vivo предупреждению аутоиммунитета или индуцирующей толерантность активности CD4+ T-клеток в некоторых моделях.

В подгруппе CD4+ T-клеток могут существовать по меньшей мере 2 более отличающихся типа клеток с супрессивной функцией, которые индуцируются после воздействия специфического экзогенного антигена (называемые "адаптивными или индуцибельными регуляторными T-клетками"): регуляторные T-клетки 1 типа (Tr1) и клетки Th3. Эти типы клеток, по-видимому, отличаются от CD4+CD25+ Treg исходя из профилей продукции цитокинов. Однако взаимосвязь между этими различными типами неясна и способы действия являются перекрывающимися.

Tr1-клетки индуцируются повторяющейся стимуляцией TCR в присутствии IL-10, и было показано, что они, главным образом, подавляют иммунные ответы путем продукции высоких уровней IL-10 совместно с умеренными количествами TGF-β (Chen et al., J. Immunol. 171: 733-744 (2003)).

Th3-клетки (идентифицированные в модели EAE после пероральной доставки антигена) продуцируют высокие количества TGF-β и различные количества IL-4 и IL-10. Было показано, что IL-4 сам по себе является ключевым фактором для дифференцировки Th3-клеток в противоположность Tr1-клеткам, которые дифференцируются при помощи IL-10 (Chen et al., Science 265:1237-1240 (1994)).

Супрессия функции T-клеток с использованием иммуносупрессивных лекарственных средств является основной терапевтической стратегией, которую успешно использовали для лечения аутоиммунных заболеваний. Однако эти лекарственные средства индуцируют общую иммуносупрессию вследствие их плохой селективности, что приводит к ингибированию не только вредных функций иммунной системы, но также и полезных. Вследствие этого могут возникнуть различные типы риска, такие как риск инфекции, злокачественной опухоли и токсичности лекарственного средства.

Средства, препятствующие функции T-клеток, представляют собой основу терапии различных аутоиммунных заболеваний.

До настоящего времени было показано, что подход с использованием средств, нацеленных на активацию регуляторных T-клеток, для терапии аутоиммунных заболеваний, является крайне затруднительным. Активация Treg через TCR с использованием антитела-агониста к CD3 OKT-3 (Abramowicz et al., N Engl. J Med. 1992 Sep 3; 327(10):736) или через костимуляторную молекулу CD28 с использованием антитела-суперагониста к CD28 TGN1412 приводит к полному истощению популяции регуляторных T-клеток, а также других традиционных T-клеток и к системной индукции и высвобождению избыточных количеств провоспалительных цитокинов, включая IFN-γ, TNF-α, IL-1 и IL-2, что приводит к клинически выраженному синдрому высвобождения цитокинов (CRS) у человека (Suntharalingam et al., N Engl. J Med. 2006 Sep 7; 355(10):1018-28).

После первых двух или трех инъекций по 5 мг моноклонального антитела OKT3 у большинства пациентов развивается синдром высвобождения цитокинов с высокими уровнями фактора некроза опухоли-альфа, интерлейкина-2 и гамма-интерферона, появляющимися в кровотоке в течение 1-2 ч у реципиентов трансплантата почки. (Abramowicz et al., Transplantation. 1989 Apr; 47(4):606-8). Это приводит к узкому терапевтическому окну, которое ограничивает применимость этого антитела для лечения аутоиммунных заболеваний.

Лечение общей дозой 5-10 мг TGN1412 (0,1 мг антитела к CD28 на килограмм массы тела) приводит к системному воспалительному ответу с полиорганной недостаточностью в пределах 90 минут после введения однократной внутривенной дозы TGN1412 (Suntharalingam et al., N Engl. J Med. 2006 Sep 7; 355(10):1018-28).

Общепринято, что CD4 T-клетки играют основную роль в инициации и поддержании аутоиммунитета. Таким образом, было предложено применять mAb к поверхностным молекулам CD4 T-клеток и, в частности, mAb к CD4 в качестве иммуносупрессивных средств. Несмотря на то что множество клинических испытаний подтвердило потенциальный интерес этого подхода, они также выявили несколько проблем, которые необходимо решить для того, чтобы сделать mAb к CD4 более пригодными для применения в общепринятой клинической практике.

Было предложено несколько различных механизмов действия mAb к CD4, включая: (1) антагонизм взаимодействий CD4-MHC II, приводящий к ингибированию активации T-клеток, (2) модулирование рецептора CD4, определяемое по снижению экспрессии на клеточной поверхности CD4, (3) частичную передачу сигнала через рецептор CD4 в отсутствие связывания T-клеточного рецептора, которая может подавлять последующую активацию T-клеток и запускать апоптотическую гибель CD4 T-клеток, (4) Fc-опосредуемую комплементзависимую цитотоксичность (CDC) или антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), ведущую к истощению CD4 T-клеток, и (5) стимуляцию регуляторных T-клеток.

В клинике было разработано несколько нацеленных на T-клетки антител к CD4, (Schulze-Koops et al., J Rheumatol. 25(11): 2065-76 (1998); Mason et al., J Rheumatol. 29(2): 220-9 (2002); Choy et al., Rheumatology 39(10): 1139-46 (2000); Herzyk et al., Infect Immun. 69(2): 1032-43 (2001); Kon et al., Eur Respir J. 18(1): 45-52 (2001); Mourad et al., Transplantation 65(5): 632-41 (1998); Skov et al., Arch Dermatol. 139(11): 1433-9 (2003); Jabado et al., J Immunol. 158(1): 94-103 (1997)), главным образом, направленных на истощение CD4 клеток, среди которых только нескольким антителам к CD4 свойственен другой механизм, таким как TRX-1, TNX-355, IDEC-151, OKTcdr4A.

Клинический ответ при аутоиммунных заболеваниях коррелирует с блокадой CD4 традиционных CD4+ T-клеток прямо в области воспаления, но не с действием CD4+ T-клеток в периферической крови. Таким образом, для достижения клинической пользы необходимо использовать дозировки с высокими концентрациями антитела вплоть до 1000 мг в одном или нескольких курсах, предпочтительно в диапазоне 10-450 мг в одном или нескольких курсах (Schulze-Koops et al., J Rheumatol. 25(11): 2065-76 (1998); Mason et al., J Rheumatol. 29(2): 220-9 (2002); Choy et al., Rheumatology 39(10): 1139-46 (2000); Choy et al., Rheumatology 41: 1142-1148 (2002); Kon et al., Eur Respir J. 18(1): 45-52 (2001); Skov et al., Arch Dermatol. 139(11): 1433-9 (2003); Kuritzkes et al., J Infect Dis 2004, 189:286-91 (2004); Hepburn et al., Rheumatology 42(1):54-61 (2003)).

Антитело B-F5 (IgG1 мыши к CD4 человека) тестировали при различных аутоиммунных заболеваниях.

Антителом мыши B-F5 лечили небольшое количество пациентов с тяжелым псориазом, и были описаны некоторые положительные эффекты (Robinet et al., Eur J Dermatol. 1996; 6: 141-6, и Robinet et al., J Am Acad. Dermatol. 1997; 36: 582-8).

У пациентов с ревматоидным артритом результаты, наблюдаемые в плацебо-контролируемом испытании с суточной дозой B-F5, не показали значимого улучшения (Wendling et al. J Rheumatol; 25(8):1457-61, 1998).

У пациентов с рассеянным склерозом (MS) наблюдали некоторые положительные эффекты после лечения в течение 10 суток пациентов с ремитирующими формами, некоторые из которых не имели обострений в течение 6 месяцев после терапии (Racadot et al., J Autoimmun, 6(6):771-86, 1993). Сходные эффекты наблюдали Rumbach et al. (Mutt Scler; 1(4):207-12, 1996).

При тяжелой болезни Крона не наблюдали значимого улучшения у пациентов, получавших B-F5 в течение 7 последовательных суток (Canva-Delcambre et al., Aliment Pharmacol. Ther 10(5):721-7, 1996).

При профилактике отторжения аллотрансплантата было описано, что биодоступность B-F5 не была достаточной, чтобы позволить его применение для профилактики отторжения аллотрансплантата (Dantal et al. Transplantation, 27; 62(10): 1502-6, 1996).

Другим недостатком терапии моноклональными антителами у человека является то, что эти антитела, главным образом, получают из клеток мыши и вызывают противомышиные ответы у реципиентов-людей. Это приводит не только к более низкой эффективности лечения и, более того, какого-либо последующего лечения моноклональными антителами мыши, но также к повышенному риску анафилаксии.

Этого недостатка, в принципе, можно избежать путем применения гуманизированных антител, полученных пересадкой определяющих комплементарность областей (CDR) моноклонального антитела мыши, которые определяют антигенсвязывающую специфичность, в каркасные области (FR) молекулы иммуноглобулина человека. Целью гуманизации является получение рекомбинантного антитела, имеющего те же антигенсвязывающие свойства, что и моноклональное антитело мыши, из которого были получены последовательности CDR, и являющегося значительно менее иммуногенным у человека.

В некоторых случаях замена CDR человека на CDR из антитела мыши в каркасных областях человека является достаточной для переноса антигенсвязывающих свойств (включая не только специфичность, но также аффинность к антигену). Однако во многих антителах некоторые остатки FR важны для связывания антигена, поскольку они прямо контактируют с антигеном в комплексе антитело-антиген или поскольку они влияют на конформацию CDR и, таким образом, на их антигенсвязывающие характеристики.

Таким образом, в большинстве случаев также необходимо заменять один или несколько остатков FR человека соответствующими каркасными остатками из антитела мыши. Поскольку для предотвращения противомышиных реакций количество замещенных остатков должно быть настолько малым, насколько это возможно, задачей является определение того, какой аминокислотный остаток(ки) критичен для сохранения антигенсвязывающих свойств. Для предсказания более подходящих для замены участков были предложены различные способы. Несмотря на то что они обеспечивают общие принципы, которые могут несколько помочь на первых стадиях гуманизации, конечный результат варьирует от одного антитела к другому. Таким образом, для данного антитела очень трудно предсказать, какие замены обеспечат желаемый результат.

Ранее предпринимались попытки гуманизации B-F5 мыши, и был достигнут успех в продукции гуманизированного B-F5 (в дальнейшем в настоящем документе называемого hB-F5), имеющего сходные свойства связывания CD4 с исходным B-F5 мыши.

Таким образом, в WO 2004/083247 описано, что гуманизированное антитело BT061 (гуманизированное B-F5 или просто hB-F5) является пригодным для лечения ревматоидного артрита. В этой патентной заявке описаны композиции для парентерального введения в дозе 0,1-10 мг, предпочтительно 1-5 мг. Предусмотренные схемы дозирования представляют собой внутривенную дозу 1 мг в сутки и дозу 5 мг раз в двое суток для пациентов с ревматоидным артритом в течение 10 суток.

Это исследование также было описано Wijdenes et al. в реферате и постере, представленном на конференции EULAR в июне 2005 года. Было описано лечение 11 пациентов, страдающих ревматоидным артритом, 5 внутривенными инфузиями по 5 мг BT061 раз в двое суток с сопутствующим лечением 150 мг диклофенака (Wijdenes et al., Abstract and poster, EULAR conference, June 2005).

Антитело, описанное в этом исследовании, не раскрыто в качестве пригодного для применения в более низких дозах, и все еще является желательным нахождение способов лечения при более низких дозировках, так чтобы лечить большее количество пациентов.

Учитывая указанный выше уровень техники, целью настоящего изобретения является лечение пациентов, имеющих аутоиммунное заболевание, которые не отвечают удовлетворительно на существующие способы лечения. В частности, целью настоящего изобретения является поиск лекарственных средств от аутоиммунных заболеваний, которые можно применять у пациентов в более низких дозах, для повышения ответа на лечение у пациентов, которые не способны переносить существующие в настоящее время дозы.

Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения аутоиммунного заболевания, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и средство, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки, где композицию вводят субъекту в дозе от 0,2 мг до 30 мг средства.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения аутоиммунного заболевания, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и средство, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки, где композицию вводят субъекту в дозе средства от 0,10 до 20 мг/м2.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения аутоиммунного заболевания, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и средство, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки, где композицию вводят в дозе средства от 1 до 500 мкг/кг.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и средство, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки, где средство присутствует в концентрации от 10 мкг/мл до 150 мг/мл.

В предпочтительном аспекте изобретения средство представляет собой гуманизированное антитело к CD4 или его фрагмент или производное.

В частности изобретение относится к применению средства, определенного выше, для изготовления лекарственного средства для лечения аутоиммунного заболевания, где средство вводят субъекту в дозе, как определено выше. Кроме того, изобретение относится к средству, как определено выше, для применения при лечении аутоиммунного заболевания, где средство вводят субъекту в дозе, как определено выше.

Исходя из указанных выше дозировок понятно, что авторы изобретения неожиданно открыли, что низкие дозировки антитела BT061 обеспечивают эффективную и специфическую активацию встречающихся в природе регуляторных T-клеток (CD4+CD25+ Treg), обеспечивая in vivo клинический эффект при значительно более низких дозах, чем использованные ранее дозы, такие как дозы, раскрытые в WO 2004/083247. Кроме того, авторы изобретения неожиданно открыли, что гуманизированное антитело BT061 по существу не модулировало уровни провоспалительных цитокинов и не индуцировало их высвобождение по сравнению с другими взаимодействующими с T-клетками антителами, например антителами к CD3. Кроме того, антитело не вызывает существенного длительного истощения CD4+ лимфоцитов.

Концентрация средства по изобретению конкретно не ограничена, при условии что оно присутствует в концентрации, которая является низкой по сравнению с известными концентрациями. Однако предпочтительно концентрация средства составляет от 0,1 мкг/мл до 30 мг/мл или от 0,1 до 1000 мкг/мл и более предпочтительно 1-500 мкг/мл и 2-250 мкг/мл. Наиболее предпочтительно концентрация средства является (приблизительно) любой из 15 мкг/мл, 25 мкг/мл, 125 мкг/мл, 250 мкг/мл, 500 мкг/мл, 1 мг/мл, 12,5 мг/мл или 25 мг/мл.

Объем дозировки, вводимой субъекту с использованием композиции, конкретно не ограничен, при условии что он доставляет низкую общую дозировку по сравнению с уже известными дозировками, и, таким образом, пригоден для всех пациентов вследствие более низкого уровня побочных действий и особенно для лечения индивидуумов, которые не переносят дозы, описанные в WO 2004/083247. В частности, концентрация средства в объемах дозировок может варьировать для обеспечения требуемых доз, которые описаны в этой заявке.

Объем дозировки может варьировать в зависимости от способа введения. Предпочтительным является парентеральное введение. Примерами парентерального введения являются внутримышечное введение, внутривенное введение или подкожное введение. Когда композицию вводят внутривенной инфузией, объем дозировки может составлять от 0,1 или 0,5 мл до 500 мл, предпочтительно между 15 и 25 мл и, как правило, приблизительно 20 мл. Когда композицию вводят подкожной или внутримышечной инъекцией, объем дозировки может составлять между 0,1 и 3 мл, предпочтительно между 0,5 и 1,5 мл и, как правило, приблизительно 1 мл.

Однако в некоторых вариантах осуществления композиция может быть предоставлена в концентрированной форме и разбавлена до концентрации, требуемой для рассматриваемых индивидов. Предпочтительно в этих случаях композицию предоставляют в относительно небольших объемах приблизительно 1, 2, 3, 4 или 5 мл. В альтернативных вариантах осуществления композицию предоставляют в требуемой концентрации в объеме дозировки, описанном выше (т.е. в готовом для введения виде). В одном конкретном варианте осуществления фармацевтические композиции для подкожного введения предоставляют в готовой для введения форме, так что их может легко вводить лицо, не являющееся медицинским персоналом.

Как упоминалось, ранее не было известно, что средства, способные лечить аутоиммунное заболевание, можно вводить в низких дозировках, которые предусматриваются настоящим изобретением. Хотя известные дозы средств, способных лечить аутоиммунное заболевание, являются эффективными у некоторых индивидов или при некоторых типах заболеваний, понимание того, что они могут быть эффективны уже при более низких дозах, открыло путь для более эффективного лечения некоторых аутоиммунных заболеваний и классов пациентов.

Изобретение проиллюстрировано только в качестве примера с помощью следующих фигур.

На фиг.1 представлена зависимость от дозы связывания BT061 с периферическими лимфоцитами человека. Связывание BT061 в серии разведений выявляют с помощью меченного флуорохромом антитела против IgG человека. Средняя интенсивность флуоресцении определена проточным цитометрическим анализом.

На фиг.2 представлена схема очистки CD4+CD25+ регуляторных T-клеток и CD4+CD25- эффекторных клеток с помощью комбинированных стадий положительной и отрицательной селекции.

На фиг.3 показана нуклеотидная последовательность, кодирующая VH-область B-F5 мыши (SEQ ID NO:5).

На фиг.4 представлена нуклеотидная последовательность, кодирующая Vk-область B-F5 мыши (SEQ ID NO:6).

На фиг.5 представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:3) фрагмента плазмиды, кодирующая VH-область гуманизированного BF-5. Последовательность, кодирующая V-область, подчеркнута, и соответствующая полипептидная последовательность (SEQ ID NO:17) указана ниже нуклеотидной последовательности.

На фиг.6 представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:4) фрагмента плазмиды, кодирующая VK-область гуманизированного BF-5. Последовательность, кодирующая V-область, подчеркнута, и соответствующая полипептидная последовательность (SEQ ID NO:2) указана ниже нуклеотидной последовательности.

На фиг.7 представлены данные, полученные от свежих выделенных CD25+ Treg (донор-A) и СВ8+ T-клеток (донор-B), культивированных в присутствии облученных PBMC (донор-A) в присутствии/отсутствие различных mAb к CD4. Пролиферацию аллореактивных СВ8+ T-клеток определяли после культивирования в течение 4 суток путем добавления 37 кБк/лунка 3H-Tdr. Представлены средние значения cpm (в трех параллелях).

На фиг.8, части A-H, представлены графики, на которых показаны данные клинических испытаний у пациентов с псориазом дозовой группы I, как описано в примере 3, в которой пациентам проводили внутривенную инъекцию 0,5 мг BT061 или плацебо. В частях A-H фиг.8 предоставлены графики показателей PASI для пациентов 1-8 в дозовой группе I соответственно.

На фиг.9, части A-H, представлены графики, на которых показаны данные клинических испытаний у пациентов с псориазом дозовой группы II, как описано в примере 3, в которой пациентам проводили внутривенную инъекцию 2,5 мг BT061 или плацебо. В частях A-H фиг.9 предоставлены графики показателей PASI для пациентов 1-8 в дозовой группе II соответственно.

На фиг.10 соответственно представлено высвобождение TFNα и IL-6, наблюдаемое в клиническом испытании с BT061 (однократная внутривенная инфузия или подкожная инъекция) у здоровых добровольцев по сравнению с уровнями, описанными для моноклональных антител к CD3. В фигуры включены уровни доз и время до выздоровления. Результаты для TRX4, указанные на фигурах в качестве "2)", описаны в Keymeulen et al., 2005 N. Engl. J. Med. Type 1 Diabetes patients. Результаты для теплизумаба, указанные на фигурах в качестве "3)", описаны в Herold et al., 2002 N. Engl. J. Med. Type 1 Diabetes patients. Нормальные значения, указанные на фигурах в качестве "4)", описаны в Straub et al., 2007, Athr. & Rheumat. "*)" соответствует однократной дозе, "**)" соответствует совокупной дозе до достижения пиковой концентрации.

На фиг.11 представлены уровни IL-2 и IFN-γ в плазме после введения однократной внутривенной или подкожной дозы BT061 у здоровых добровольцев. ULN = верхняя граница нормы (вычисленная исходя из уровней цитокинов, определенных у 39 здоровых субъектов; ULN = среднее значение + 2 × стандартное отклонение).

На фиг.12 представлена кинетика количества CD4-клеток (количество клеток на мл плазмы) у добровольцев, которым ввели однократную внутривенную дозу BT061. Представлены средние значения для 3 пациентов на группу. Пунктирная линия указывает на верхнюю границу нормы (ULN) и нижнюю границу нормы (LLN).

На фиг.13 представлена кинетика количества CD4-клеток (количество клеток на мл плазмы) у добровольцев, которым ввели однократную подкожную дозу BT061. Представлены средние значения для 3 пациентов на группу. Пунктирная линия указывает на верхнюю границу нормы (ULN) и нижнюю границу нормы (LLN), обе из которых вычислены исходя из количества CD4-клеток, определенного у 5 здоровых субъектов в качестве средней величины до введения дозы плюс (или минус) 2 × стандартное отклонение.

На фиг.14, части A и B, предоставлены фотографии клинического испытания у пациентов с псориазом, как описано в примере 3. Фотографии являются фотографиями пациента, являющегося представителем дозовой группы II. Фотография, представленная в части A, получена перед введением. Фотография, представленная в части B, получена через 28 суток после введения.

На фиг.15 представлены результаты клинического испытания у пациентов с ревматоидным артритом, как описано в примере 5. На фигуре представлена гистограмма процента пациентов из дозовых групп, в которых подкожно вводили 1,25 мг, 6,25 мг, 12,5 мг и 25 мг BT061, достигших по меньшей мере ответа ACR20. Шести пациентам в каждой группе вводили дозу антитела, в то время как двум пациентам вводили плацебо.

На фиг.16A и 16B представлены результаты клинического испытания у пациентов с ревматоидным артритом, как описано в примере 5. На фиг.16A представлена гистограмма числа болезненных суставов у пациентов из дозовой группы, в которой подкожно вводили 25 мг BT061. На фиг.16B представлена гистограмма для числа увеличенных суставов у пациентов из той же дозовой группы. Шести пациентам в каждой группе вводили дозу антитела, в то время как двум пациентам вводили плацебо.

На фиг.17A и 17B представлены результаты клинического испытания у пациентов с ревматоидным артритом, как описано в примере 5. На фигурах представлены изменения индивидуальных параметров (в %) для одного отвечающего пациента (фиг.17A) и одного неотвечающего пациента (фиг.17B) из группы подкожной дозы 25 мг. На фигурах "Pat GA" и "Phy GA" относятся к общей оценке пациентом и общей оценке врачом соответственно. Термин "PA боли" относится к оценке пациентом боли.

На фиг.18A и 18B предоставлены дальнейшие результаты клинического испытания у пациентов с ревматоидным артритом, как описано в примере 5. На фигурах представлено количество болезненных суставов у пациентов из группы подкожной дозы 1,25 мг (фиг.18A) и из группы подкожной дозы 6,25 мг (фиг.18B).

На фиг.19A и 19B предоставлены дальнейшие результаты клинического испытания у пациентов с ревматоидным артритом, как описано в примере 5. На фигурах представлено количество болезненных суставов у пациентов из группы подкожной дозы 50 мг (фиг.19A) и из группы внутривенной дозы 6,25 мг (фиг.19B).

На фиг.20 представлено выравнивание полипептидных последовательностей VK B-F5 мыши (SEQ ID NO:8), FK-001 (SEQ ID NO:9, 10, 11 и 12), L4L (SEQ ID NO:18) и L4M (SEQ ID NO:2) при конструировании гуманизированной формы B-F5 (т.е. BT061).

На фиг.21 представлено выравнивание полипептидных последовательностей VH B-F5 мыши (SEQ ID NO:7), M26 (SEQ ID NO:13, 14, 15 и 16), H37L (SEQ ID NO:1) и H37V (SEQ ID NO:17) при конструировании гуманизированной формы B-F5.

Далее изобретение описано более подробно.

Средства, которые пригодны для применения в настоящем изобретении, представляют собой средства, способные активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки. Средство может представлять собой полипептид, белок или антитело. Когда средство представляет собой антитело, оно может представлять собой моноклональное антитело. Предпочтительно антитело представляет собой моноклональное антитело к CD4. Также антитело может предпочтительно представлять собой IgG1-антитело, и оно может представлять собой немодифицированное IgG1-антитело.

В предпочтительном аспекте изобретения средство не вызывает существенного увеличения уровня провоспалительных цитокинов в плазме крови субъекта после введения по сравнению с антителами к CD3. В частности, уровни IFN-γ, TNF-α, IL-6 и/или IL-2 после введения средства по существу не повышаются по сравнению с уровнями плазмы, измеренными у здоровых субъектов (см. таблицу A1). Конкретно, если ULN для конкретного цитокина, приведенную в таблице A1, принять за X, тогда в пределах 96 часов после введения средства по изобретению X увеличивается менее чем в 20 раз. Предпочтительно X увеличивается менее чем в 10 раз. Более предпочтительно эти уровни представляют собой уровни в течение периода, составляющего от 10 минут после начала введения до 96 часов после завершения введения.

Возможно, что у пациентов с аутоиммунным заболеванием уровни цитокинов перед введением средства уже выше, чем уровни, наблюдаемые у здоровых субъектов (ULN, приведенная в таблице A1), например, вследствие модифицированного статуса активации иммунных клеток по сравнению со статусом активации клеток у здоровых субъектов. В этих случаях за X принимают концентрацию конкретного цитокина непосредственно перед введением, и в пределах 96 часов после введения средства по изобретению X увеличивается менее чем в 20 раз. Предпочтительно X увеличивается менее чем в 10 раз. Более предпочтительно эти уровни представляют собой уровни в течение периода, составляющего 10 минут после начала введения до 96 часов после завершения введения.

Таблица A1
Уровни цитокинов, измеренные в плазме здоровых добровольцев. ULN (верхняя граница нормы) вычислена исходя из средних значений, измеренных для 39 отдельных субъектов + 2 × стандартное отклонение
Цитокин ULN (пг/мл)
IL-2 19,4
IL-6 4,4
TNF-альфа 2,8
IFN-гамма 3,8

В следующем предпочтительном аспекте изобретения средство не вызывает существенного длительного снижения числа CD4+ лимфоцитов в плазме крови субъекта. Конкретно, в пределах периода от 72 до 96 часов после введения число CD4+ лимфоцитов в плазме крови субъекта может составлять более 250 клеток/мкл (или по меньшей мере 250 клеток/мкл).

Предпочтительно эффекты на цитокины и CD4+ лимфоциты, описанные выше, наблюдают по меньшей мере у 80% подвергаемых лечению пациентов.

Для предотвращения отрицательного влияния на иммунную систему, например снижения числа лимфоцитов или индукции высвобождения цитокинов, в данной области известно применение антител (особенно взаимодействующих с T-клетками антител) подкласса IgG2, IgG3 или IgG4, поскольку антитела подкласса IgG1 проявляют более высокие взаимодействия с Fc-рецептором. Также в данной области известна модификация антител (особенно взаимодействующих с T-клетками антител) путем мутации, дегликозилирования, модификации углеводной части или инженерии углеводной части Fc для уменьшения взаимодействий с Fc-рецептором.

В экспериментах, описанных в настоящем документе, авторы настоящего изобретения выявили, что для средства по настоящему изобретению не обязательны избежание антител подкласса IgG1 и модификации. В частности, данные, представленные в этой патентной заявке, указывают на то, что средство по настоящему изобретению не проявляет существенного или длительного истощения CD4+ клеток или не индуцирует существенного высвобождения цитокинов по сравнению с антителами к CD3.

Таким образом, в предпочтительном аспекте изобретения средство представляет собой немодифицированное антитело IgG1, т.е. антитело, которое не включает мутацию Fc и не подвергнуто дегликозилированию, модификации углеводной части или инженерии углеводной части для уменьшения взаимодействий с Fc-рецептором, или его фрагмент или производное.

Антитела, которые наиболее пригодны для применения в настоящем изобретении, представляют собой гуманизированные антитела к CD4 или их фрагменты или производные, которые способны активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки. Примеры антител, которые способны активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки, рассмотрены в Becker et al. (European Journal of Immunology (2007), Vol.37: pages 1217-1223).

Как правило, антитело, используемое в изобретении, содержит один или несколько вариабельных доменов, которые способы связываться с CD4. Антитело может содержать константную область (Fc) человека. Эту константную область можно выбирать из константных доменов любого класса иммуноглобулинов, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, и любого изотипа, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Предпочтительные константные области выбирают из константных доменов IgG, в частности IgG1.

Также настоящее изобретение включает любой фрагмент антитела, содержащий его V-области. Оно включает, в частности, Fab-, Fab'-, F(ab)'2-, Fv- и scFv-фрагменты.

В особенно предпочтительном аспекте настоящего изобретения антитело представляет собой гуманизированное антитело к CD4 или его фрагмент или производное, полученное из моноклонального антитела к CD4 мыши B-F5. Примером такого антитела является антитело BT061.

Антитело BT061, его фрагменты и производные

Гуманизированное антитело BT061 (hB-F5) происходит из mAb B-F5 мыши, и оно имеет V-домены, определенные следующими полипептидными последовательностями:

- V-домен H-цепи:

EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:1)

- V-домен L-цепи:

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:2).

Производные этого антитела также пригодны для применения в настоящем изобретении. Производные включают производные с V-доменами, определенными полипептидными последовательностями, имеющими, по меньшей мере, 80%, предпочтительно, по меньшей мере, 90%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 95% идентичность последовательности с SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2.

Особенно предпочтительные антитела представляют собой антитела, которые содержат определяющие комплементарность области (CDR) mAb B-F5 мыши и сохраняют способность hB-F5 активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки. Расположение CDR в VH- и VK-доменах представлено на фиг.20 и 21. Такие антитела необязательно могут иметь вариации в последовательности CDR, которые по существу не влияют на специфичность и/или аффинность связывания.

Как правило, антитело hB-F5, используемое в изобретении, кроме того, содержит константную область (Fc) человека. Как указано выше, эта константная область может быть выбрана из константных доменов иммуноглобулинов любого класса, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, и любого изотипа, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Предпочтительные константные области выбраны из константных доменов IgG, в частности IgG1.

Также настоящее изобретение включает любой фрагмент антитела BT061, содержащий его V-области. Оно включает, в частности, Fab-, Fab'-, F(ab)'2-, Fv- и scFv-фрагменты.

Полинуклеотид, кодирующий V-домен H-цепи или L-цепи антитела BT061, можно подвергать слиянию с полинуклеотидом, кодирующим константную область H- или L-цепи антитела, для экспрессии полных H- и L-цепей, полученных таким образом; также можно добавлять последовательность, кодирующую сигнальный пептид, позволяющий секрецию белка.

Также для изобретения используются экспрессирующие кассеты, где полинуклеотид, как описано выше, связан с соответствующими последовательностями контроля, позволяющими регуляцию его транскрипции и трансляции в выбранной клетке-хозяине, и рекомбинантные векторы, содержащие полинуклеотид или экспрессирующую кассету по изобретению.

Эти рекомбинантные конструкции ДНК можно получать и вводить в клетки-хозяева хорошо известными способами рекомбинантных ДНК и генной инженерии.

Также для изобретения используют клетку-хозяина, трансформированную полинуклеотидом по изобретению. Пригодные клетки-хозяева в рамках настоящего изобретения могут представлять собой прокариотические или эукариотические клетки. Среди пригодных эукариотических клеток в качестве примера могут быть упомянуты клетки растений, клетки дрожжей, таких как Saccharomyces, клетки насекомых, таких как Drosophila или Spodoptera, и клетки млекопитающих, такие как HeLa, CHO, 3T3, C127, BHK, COS и т.д.

Конструирование экспрессирующих векторов, использованных в изобретении, и трансформацию клеток-хозяев можно проводить стандартными способами молекулярной биологии.

Антитело BT061 (hB-F5), используемое в изобретении, можно получать культивированием клеток-хозяев, содержащих экспрессирующий вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую указанное антитело, в условиях, пригодных для его экспрессии, и выделением указанного антитела из культуры клеток-хозяев.

Конструирование гуманизированного B-F5

Конструирование гуманизированных V H - и V K -областей B-F5

Последовательности ДНК, кодирующие VH- и VK-области B-F5 мыши, соответственно, представлены на фиг.3 и фиг.4 и под идентификаторами последовательностей SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:6. VH и VK человека, в которые пересажены CDR мыши, отбирали поиском в базах данных VH человека, наиболее сходных с оригинальными VH и VK B-F5 мыши. VH-область антител человека (M26; регистрационный номер A36006) имела наиболее высокую гомологию с VH B-F5. VK-область другого антитела человека (FK-001; NAKATANI et al., Biotechnology, 7 (1989), 805-810)) имела наиболее высокую гомологию с VK B-F5.

Было сконструировано два типа VK, отличающихся между собой тем, что их 4-й остаток представлял собой лейцин или метионин, и их обозначили как L4L и L4M. Было сконструировано два типа VH, отличающихся между собой тем, что их 37-й аминокислотный остаток представлял собой лейцин или валин, и обозначили их как H37L и H37V. Выравнивание полипептидных последовательностей B-F5, FK-001, L4L и L4M представлено на фиг.19. Выравнивание полипептидных последовательностей B-F5, M26, H37L и H37V представлено на фиг.20. Остатки FR, ранее описанные в качестве важных для сворачивания CDR (Chothia et al., Nature 342(1989), 877; Foote et al., J. Mol. Biol., 224(1992), 487), заключены в рамки.

Комбинированием этих VH и VK было сконструировано 4 варианта V-областей.

Экспрессия гуманизированного B-F5

Последующие стадии продукции гуманизированного B-F5 были такими же, как и стадии, раскрытые в патенте США 5886152 для гуманизированного B-B10.

В кратком изложении экспрессирующие плазмиды для H-цепи (гуманизированная VH-область, слитая с константной областью y-1-цепи человека (TAKAHASHI et al., Cell, 29 (1982), 671-679)) и L-цепи (гуманизированная VK-область, слитая с константной областью K-цепи FK-001) гуманизированного B-F5 конструировали по отдельности. В этих плазмидах экспрессия гуманизированного B-F5 запускается промотором/энхансером гена моноклонального IgM человека, FK-001. На фиг.5 и 6 соответственно представлены фрагменты плазмиды, кодирующей VH- и VK-области гуманизированного BF-5. Последовательности, кодирующие V-область, подчеркнуты, и соответствующие полипептидные последовательности указаны под нуклеотидной последовательностью. Обе плазмиды и pSV2neo одновременно вводили в клетки миеломы мыши Sp2/0 (ATCC CRL-1581) с использованием Lipofectineni. Трансфектомы, продуцирующие IgG человека, отбирали посредством ELISA с использованием антитела к IgG человека (y-цепь) и антитела к K-цепи Ig человека.

Охарактеризация различных вариантов гуманизированного B-F5

Оценка связывающей активности CD4

Культуральные супернатанты трансфектом четырех вариантов hB-F5 собирали и концентрировали. Различные антитела очищали из культуральных супернатантов аффинной хроматографией с использованием сефарозы с белком A и оценивали в отношении их активности связывания CD4 путем измерения, способами конкурентного ELISA, их ингибиторной активности в отношении связывания биотинилированного mB-F5 с растворимым CD4, нанесенным на микропланшеты для титрования. Время инкубации составляло 2 часа при 37°C и ночь при 4°C.

Относительная связывающая активность hB-F5 (связывающую активность mB-F5 приняли за 100%) представлена в таблице A ниже:

Таблица A
Антитело Температура (°C) Относительная активность связывания (% от mB-F5)]
H37L/L4L 4 80
37 30
H37L/L4M 4 80
37 30
H37V/L4L 4 10-20
37 10
H37V/L4M 4 10-20
37 10

Из результатов, представленных в таблице A, следует, что 37 остаток лейцина является критическим для поддержания активности связывания hB-F5 с CD4, поскольку активности связывания CD4 в несколько раз снижается при преобразовании 37Leu в 37Val. Напротив, выявлено, что 4-й остаток VK не является настолько важным для активности связывания CD4. Поскольку структурное различие между 37Leu и 37Val в VH не продемонстрировано явно путем молекулярного моделирования, превосходство H37L над H37V в активности связывания CD4 было неожиданным.

Для оценки были выбраны H37L/L4L и H37L/L4M.

Исследование in vitro видов биологической активности гуманизированного B-F5

Оценивали виды биологической активности in vitro B-F5 мыши и гуманизированных B-F5 (H37L/L4M IgG1 и H37L/L4L IgG1). Также тестировали гуманизированные B-F5 типа IgG2 (H37L/L4M IgG2 и H37L/L4L IgG2).

Виды биологической активности mB-F5 и четырех типов hB-F5 оценивали in vitro с использованием мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) от здоровых доноров. PBMC активировали посредством ConA (2,5 пг/мл, 3 суток) или PPD (10 пг/мл, 4 суток) в присутствии B-F5 мыши или hB-F5 и проводили мониторинг их пролиферативных ответов по включению 3H-тимидина.

B-F5 мыши и hB-F5 могли умеренно ингибировать индуцированную ConA пролиферацию, но их виды активности варьировали от антитела к антителу и/или от донора к донору. Также B-F5 мыши и hB-F5 были способны ингибировать Ag-специфическую пролиферацию PBMC, индуцированную PPD.

hB-F5 типа IgG1 ингибировало индуцируемую PPD пролиферацию более эффективно (ингибирование до 70%), чем mB-F5. Тип IgG1 оказался более эффективным, чем тип IgG2, ингибиторная активность которого была практически такой же, как и у mB-F5. В случае типа IgG1 H37L/L4M было не более эффективным, чем H37L/L4L. Тип IgG2 H37L/L4M и H37L/L4L имел практически одинаковую ингибиторную активность. Вкратце ингибиторная активность B-F5 в отношении индуцированной PPD пролиферации PBMC была следующей: H37L/L4M IgG1 > H37L/L4L IgG1 > H37L/L4M IgG2 = H37L/L4L IgG2 = mB-F5.

Учитывая эффективность биологической активности in vitro и меньшее количество аминокислот мыши, для дальнейшей оценки было выбрано H37L/L4M IgG1, и оно представляет собой антитело, которое названо BT061 и используется для демонстрации настоящего изобретения в разделе "Примеры", предоставленном в данной заявке.

Композиция и применения

Как упоминалось, фармацевтическая композиция и лекарственные средства, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно способны лечить аутоиммунное заболевание у пациентов, для которых являются полезными более низкие дозы. Такие пациенты включают всех пациентов вследствие более низкого уровня побочных действий, но особенно индивидуумов, которые не переносят дозы, описанные в WO 2004/083247.

В одном аспекте настоящее изобретение также относится к применению гуманизированного антитела к CD4 или его фрагмента или производного для изготовления лекарственного средства, эффективного против аутоиммунного заболевания, где гуманизированное антитело способно активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки и где лекарственное средство содержит антитело в концентрации от 10 мкг/мл до 150 мг/мл, предпочтительно от 0,5 мг/мл до 75 мг/мл.

Кроме того, изобретение относится к применению гуманизированного антитела к CD4 или его фрагмента или производного для изготовления лекарственного средства, эффективного против аутоиммунного заболевания, где гуманизированное антитело способно активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки и где лекарственное средство вводят субъекту в однократной дозе или во множестве доз с антителом в количестве антитела от 0,2 до 30 мг на дозу.

Также настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения аутоиммунного заболевания, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и средство, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки, где композицию также вводят субъекту в дозе средства от 0,2 мг до 30 мг, от 0,2 до 20 мг на дозу, от 0,3 до 7,5 мг, от 0,3 мг до 5 мг на дозу или предпочтительно от 0,3 до 1 мг на дозу. Количество миллиграммов на дозу находится в диапазоне между 0,3 мг и 0,9 мг или 0,3 и 0,99 мг.

В одном аспекте изобретения субъекту вводят множество доз. В этих ситуациях является пригодным, чтобы дозировка в течение периода 10 суток составляла от 0,2 до менее чем 25 мг, более предпочтительно от 0,2 до 20 мг и наиболее предпочтительно от 0,2 до менее чем 10 мг. Кроме того, дозировка в течение 5 суток должна составлять от 0,2 до менее чем 15 мг, предпочтительно от 0,2 до 12 мг и наиболее предпочтительно от 0,2 до менее чем 5 мг.

В этом аспекте изобретения предпочтительно, чтобы, когда дозу вводят внутривенно, дозировки в течение 10 суток составляли от 0,2 до менее чем 10 мг, наиболее предпочтительно от 0,2 до 7,5 мг. Альтернативно, когда дозы вводят подкожно или внутримышечно предпочтительно, чтобы дозировки в течение 10 суток составляли от 1 мг до 30 мг, более предпочтительно от 5 мг до 30 мг.

Дозу также можно вычислять исходя из площади поверхности тела (BSA) субъекта. Площадь поверхности тела (BSA) можно вычислять любым известным способом. Примеры способов вычисления BSA являются следующими:

формула Mosteller: (BSA (м2)=([рост (см) × масса тела (кг)]/3600)1/2

(Mosteller RD: Simplified Calculation of Body Surface Area. N Engl J Med 1987 Oct 22; 317(17):1098)

Формула DuBois и DuBois: BSA (м2)=0,20247 × рост (м)0,725 × масса тела (кг)0,425

(DuBois D; DuBois EF: A formula to estimate the approximate surface area if height and weight be known. Arch Int Med 1916 17:863-71).

Формула Haycock: BSA (м2)=0,024265 × рост (см)0,3964 × масса тела (кг)0,5378

(Haycock G.B., Schwartz G.J., Wisotsky D.H. Geometric method for measuring body surface area: A height weight formula validated in infants, children and adults. The Journal of Pediatrics 1978 93:1:62-66)

Формула Gehan и George: BSA (м2)=0,0235 × рост (см)0,42246 × масса тела (кг)0,51456

(Gehan EA, George SL, Estimation of human body surface area from height and weight. Cancer Chemother Rep 1970 54:225-35)

Формула Boyd: BSA (м2)=0,0003207 × рост (см)0,3 × вес (грамм)(0,7285-(0,0188×LOG(граммы))

Согласно изобретению доза средства для субъекта составляет от 0,10 до 20 мг/м2 площади поверхности тела пациента, предпочтительно от 0,12 до 15 мг/м2, более предпочтительно от 0,20 до 10 мг/м2 и наиболее предпочтительно от 0,30 до 0,50 мг/м2.

Кроме того, дозу можно вычислять исходя из массы тела субъекта. Согласно изобретению доза средства для субъекта составляет от 1 до 500 мкг/кг, предпочтительно от 2 до 400 мкг/кг, более предпочтительно от 2 до 250 мкг/кг и наиболее предпочтительно от 2,5 до 20 мкг/кг.

В этих аспектах изобретения, когда доза основана на площади поверхности тела или на массе тела субъекта, предпочтительно, чтобы доза в течение периода 10 суток составляла между 0,20 и 10 мг/м2, более предпочтительно между 0,20 и 4 мг/м2 или между 2 и 250 мкг/кг, более предпочтительно между 2 и 100 мкг/кг. Альтернативно, когда дозы вводят подкожно или внутримышечно, предпочтительно, чтобы дозировки в течение периода 10 суток составляли между 0,30 и 20 мг/м2, более предпочтительно между 0,5 и 20 мг/м2 или между 2,5 и 500 мкг/кг, более предпочтительно между 20 и 500 мкг/кг.

Частота введения конкретно не ограничена, при условии что она не препятствует эффективности лечения. Для изобретения предпочтительно, чтобы множество доз вводили по меньшей мере одним из следующих способов: раз в сутки, раз в двое суток, раз в неделю, раз в 4 недели, раз в 6 недель, раз в 12 недель, раз в 24 недели, раз в календарный месяц, раз в 3 календарных месяца, раз в 6 календарных месяцев или раз в год. Таким образом, дозы могут быть разделены по меньшей мере на одни сутки, или альтернативно по меньшей мере на одну неделю, по меньшей мере на один месяц, по меньшей мере на 3 месяца, по меньшей мере на 6 месяцев или по меньшей мере на один год (что означает, что дозы вводят по меньшей мере каждый день, каждую неделю, каждый месяц, каждые 6 месяцев или каждый год). В следующей альтернативе множество доз вводят каждые 1-31 суток или каждые 1-12 месяцев.

Длительность лечения конкретно не ограничена, и, как правило, при лечении аутоиммунных заболеваний лечение протекает неопределенно долго или до тех пор, пока симптомы не снизятся до допустимого уровня для пациента. Как правило, дозу вводят субъекту в течение по меньшей мере 1 месяца.

Также изобретение относится к набору для применения, как определено выше, где набор содержит множество дозировок лекарственных средств, как определено выше, для одновременного, последовательного или разделенного введения субъекту.

Также предусматривается способ лечения аутоиммунного заболевания, который включает введение фармацевтической композиции, как определено выше, субъекту.

Также предусматривается способ лечения аутоиммунного заболевания, который включает введение лекарственного средства субъекту, где лекарственное средство включает средство, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные T-клетки и где лекарственное средство вводят субъекту в количестве, как описано выше.

Предпочтительно, чтобы средство представляло собой гуманизированное антитело к CD4 или его фрагмент или производное, полученное из моноклонального антитела к CD4 мыши B-F5.

Главным образом, фармацевтическая композиция и лекарственные средства, используемые согласно настоящему изобретению, предназначены для лечения аутоиммунного заболевания. Предпочтительно аутоиммунное заболевание выбрано из псориаза, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, диабета 1 типа, воспалительных заболеваний кишечника, болезни Крона, аутоиммунного тиреоидита, аутоиммунной миастении гравис, системной красной волчанки, язвенного колита, атопического дерматита, миокардита и связанных с трансплантацией заболеваний, таких как реакции "трансплантат против хозяина" или "хозяин против трансплантата" или общие проблемы толерантности органов.

В предпочтительном аспекте изобретения аутоиммунное заболевание представляет собой псориаз.

Псориаз представляет собой нарушение, которое приводит к псориатическим очагам повреждения или бляшкам на коже больного.

Показатель индекса псориатического индекса площади и тяжести (PASI) широко используется для оценки и регистрации уровня псориаза, проявляемого больными. Оценка PASI вовлекает оценку эритемы (E), инфильтрации (I) и десквамации (D) и вовлечение площади поверхности тела (A) в 4 областях тела (голова (h), туловище (t), верхние (u) и нижние (l) конечности). В таблице B, ниже, показано, как работает оценочная система.

Таблица B
Система оценки PASI
Степень тяжести (на область тела) Присваиваемое значение Вовлеченная поверхность (на область организма) Присваиваемое значение
Нет симптомов 0 <10% 1
Незначительные симптомы 1 10-29% 2
Умеренные симптомы 2 30-49% 3
Выраженные симптомы 3 50-69% 4
Очень выраженные симптомы 4 70-89% 5
90-100% 6

Поскольку голова, верхние конечности, туловище и нижние конечности соответствуют приблизительно 10, 20, 30 и 40% площади поверхности тела, соответственно, показатель PASI вычисляют по формуле:

PASI=0,1(Eh+Ih+Dh)Ah+0,2(Eu+Iu+Du)Au+0,3(Et+It+Dt)At+0,4(El+Il+Dl)Al

Показатель PASI находится в диапазоне 0-72. Показатель 0 означает отсутствие псориаза, а показатель 72 соответствует наиболее тяжелому псориазу.

В предпочтительном варианте осуществления этого аспекта фармацевтическая композиция по настоящему изобретению способна лечить псориаз путем обеспечения, по меньшей мере, 40% и предпочтительно, по меньшей мере, 50% улучшения показателя PASI у пациента. Предпочтительно субъект перед лечением имеет показатель PASI, по меньшей мере, 10. Эти эффекты могут наблюдаться по меньшей мере через 56 суток после введения, более предпочтительно, по меньшей мере, через 75 суток после введения. В частности, эти эффекты можно наблюдать, по меньшей мере, у 80% подвергнутых лечению пациентов.

В следующем варианте осуществления этого аспекта изобретения фармацевтическую композицию вводят внутривенно, подкожно или внутримышечно в дозировках, указанных в настоящем документе. В частности, когда дозу вводят внутривенно, предпочтительно, чтобы доза составляла между 0,2 мг и 7,5 мг, более предпочтительно между 0,3 и 5 мг. Когда пациенту вводят множество доз, дозировка в течение периода 10 суток предпочтительно составляет от 0,2 до менее чем 10 мг. Альтернативно, когда дозу вводят подкожно или внутримышечно, предпочтительно, чтобы доза составляла от 0,2 мг до 30 мг, более предпочтительно от 5 мг до 30 мг. Когда пациенту вводят множество доз, дозировка с течение 10 суток предпочтительно составляет от 0,2 до менее чем 25 мг.

В следующем аспекте настоящего изобретения фармацевтические композиции предназначены для лечения ревматоидного артрита.

Ревматоидный артрит представляет собой аутоиммунное заболевание, которое вызывает хроническое воспаление суставов и окружающих тканей и также может поражать другие ткани и органы организма.

Улучшение при ревматоидном артрите, проявляемое подвергнутым лечению пациентом, обычно оценивают с использованием основного набора параметров American College of Rheumatology (ACR) (Felson et al., Arthritis & Rheumatism, 1995, 38(6), 727-735). Эта система определяет величину ACR20 как 20% улучшение показателя болезненных и увеличенных суставов и 20% улучшение 3 из 5 остальных основных показателей ACR: общая оценка пациента и врача, боль, нетрудоспособность и реактант острой фазы, такой как C-реактивный белок (CRP).

В частности, фармацевтические композиции для лечения ревматоидного артрита предпочтительно вводят внутримышечно или подкожно в дозировках, указанных в настоящем документе.

Современное лечение артрита включает лекарственные средства первой линии для устранения боли и воспаления, классифицируемые как противовоспалительные лекарственные средства (NSAID), например аспирин, ибупрофен, напроксен и т.д. Вторичное лечение артрита включает кортикостероиды (например, преднизон и дексаметазон), антиревматические лекарственные средства замедленного действия (SAARD) или модифицирующие заболевание антиревматические лекарственные средства (DMARD), например метотрексат, пенициллинамин, циклофосфамид, соли золота, азотиоприн, лефлуномид и т.д.

Кортикостероиды, синтетические варианты гормона - кортизона в организме, используют для ингибирования прогрессирования RA (например, преднизон и дексаметазон).

Также для лечения RA была разработана другая группа лекарственных средств, называемая модификаторами биологического ответа (BRM), включающая антагонисты TNF-альфа (адалимумаб, инфликсимаб, этанерцепт), которые действуют путем связывания с его рецептором или прямого связывания с белком TNF-альфа.

В одном варианте осуществления этого аспекта изобретения композиции вводят в сочетании с лекарственными средствами, в настоящее время используемыми для лечения ревматоидного артрита. В частности, композиции вводят с одним из лекарственных средств, упомянутых выше, предпочтительно метотрексатом.

Известные лекарственные средства, такие как метотрексат, и фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить одновременно, последовательно или по отдельности.

Далее изобретение описано в связи с конкретными вариантами осуществления.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Связывание BT061 с первичными периферическими лимфоцитами человека (результаты представлены на фиг.1)

Способ

PBMC человека выделяли центрифугированием в градиенте плотности и окрашивали меченным FITC антителом к CD3 (345763; Becton/Dickinson) и серийными разведениями BT061. Детекцию связывания BT061 проводили с помощью меченного фикоэритрином IgG-антитела человека (109-116-098; Jackson, Immunoresearch). С помощью проточного цитометрического анализа определяли среднюю интенсивность флуоресценции CD3+ лимфоцитов, связывающих BT061.

Результаты представлены на фиг.1.

Результаты

BT061 связывается с лимфоцитами человека в низких концентрациях. В концентрации ниже 10 нг/мл наблюдают полумаксимальное насыщение связывания. Насыщение выявлено в концентрации 100 нг/мл. Концентрации являются такими, как и ожидалось для пациентов, которым вводили дозы 30 и 300 мкг.

Пример 2

Ингибирование пролиферации CD8+ T-клеток стимулированными BT061 клетками Treg (результаты представлены на фиг.7)

Способ

Выделение популяций T-клеток человека

CD25high Treg отделяли из лейкоцитарных пленок и/или при лейкаферезе здоровых добровольцев путем разделения клеток с помощью магнитных гранул согласно следующему протоколу.

CD4+CD25+ регуляторные T-клетки выделяли из лейкоцитарных пленок здоровых добровольцев в 2 стадиях. На первой стадии проводили положительную селекцию CD4+ T-клеток с использованием 2-4 мкл CD4-MACS-Multisort-Beads (Miltenyi Biotec) на 107 PBMC. После инкубации в течение 15 минут проводили магнитное разделение. На следующей стадии из положительных выделенных клеток устраняли экспрессирующие CD25 клетки, не являющиеся CD4, с помощью CD8-, CD19- и CD14-Dynabeads (Dynal, Oslo, Norway). Полученные CD4+CD25+ T-клетки были на 95-98% чистыми. Нетронутые CD4+CD25- T-клетки выделяли с помощью отрицательной селекции из PBMC путем устранения клеток, экспрессирующих CD8, CD 19, CD56, CD14, CD235a, CD25 и CD45RO, с помощью Dynabeads. Схема очистки представлена на фиг.2.

Анализ в кокультуре

Для оценки влияния mAb к CD4 на функцию CD25+ Treg человека свежие выделенные CD25+ Treg человека кокультивировали с сингенными PBMC с устраненными T-клетками (CD3) (CD3 Dynabeads, Dynal) и аллогенными CD8+ T-клетками в присутствии различных mAb к CD4. В кратком изложении 1×105 свежих выделенных CD25+ Treg инкубировали с 3×105 облученных (50 Гр) сингенных PBMC в присутствии различных количеств mAb к CD4. Либо сразу, либо через 24 ч в культуры добавляли 1×105 аллогенных CD8+ T-клеток и через 72 часа определяли пролиферацию. В этом анализе тестировали различные mAb к CD4 в концентрациях от 0,01 мкг/мл до 50 мкг/мл. CD8+ T-клетки выделяли с использованием CD8-Microbeads.

Результаты представлены на фиг.7.

Результаты

BT061 воспроизводимым образом индуцирует супрессивную активность в Treg дозозависимым образом, что приводит к ингибированию пролиферации аллореактивных CD8+ T-клеток. BT061 стимулирует CD4+CD25+ Treg, которые прямо ингибируют CD8+ T-клетки.

В частности, результаты подтверждают, что уже в концентрации 10 нг/мл, соответствующей применению у пациентов низкой дозы 30 мкг, происходит ингибирование пролиферации CD8+ T-клеток.

Пример 3

Клиническое испытание BT061 у пациентов с хроническим псориазом от умеренного до тяжелого (результаты представлены на фиг.8A-8H, фиг.9A-9H и на фиг.14A и 14B)

Способность hB-F5 BT061 лечить аутоиммунное заболевание тестируют на 56 пациентах, страдающих хроническим псориазом от умеренного до тяжелого. Испытание включает исследование с возрастающей однократной дозой для оценки безопасности и эффективности hB-F5.

Условия испытания являются следующими:

56 пациентов разделяют на семь дозовых групп по восемь индивидуумов в каждой. В пяти дозовых группах (дозовые группы I-V) вводят антитело или плацебо путем внутривенного введения и в двух дозовых группах (дозовые группы VI и VII) вводят антитело или плацебо путем подкожного введения. Двум пациентам в каждой дозовой группе вводят плацебо, а остальным шести пациентам в каждой дозовой группе вводят дозу BT061. В дозовой группе I шести пациентам внутривенно вводят 0,5 мг BT061. В дозовых группах II-V шести пациентам вводят 2,5 мг, 5 мг, 10 мг или 20 мг BT061 соответственно. В дозовых группах VI и VII, где введение является подкожным, шести пациентам вводят 12,5 мг или 25 мг BT061 соответственно.

Для внутривенного введения антитело/плацебо инфузируют в вену предплечья согласно принятым в медицине процедурам. В данном случае общий объем вводят в качестве однократной непрерывной внутривенной инфузии в течение 2 часов через перфузатор (Fresenius Pilot C, Fresenius AG, Germany). Каждую дозу антитела разбавляют инъекционным 0,9% хлоридом натрия (B. Braun Melsungen AG, Germany) до общего объема 20 мл.

Для подкожного введения антитело вводят в качестве однократной подкожной инъекции. Ту же процедуру проводят для плацебо.

Уровень псориаза, который проявляет каждый пациент, регистрируют с использованием шкалы псориатического индекса площади и тяжести (PASI). Как описано выше, более высокие показатели PASI соответствуют более высокому уровню псориаза. Пациенты, включенные в испытание, имеют хронический псориаз от умеренного до тяжелого, т.е. показатель PASI, равный 10 или выше.

Показатель PASI пациента оценивают до испытания для получения "исходного" значения на 0 сутки и повторно в ходе испытания на 5, 7, 14, 21, 28, 42, 56 и 75 сутки.

Дозовая группа I

Шести пациентам из дозовой группы I проводили однократное внутривенное введение 0,5 мг BT061, в то время как двум пациентам из дозовой группы I вводили плацебо. Доза на массу тела и доза на площадь поверхности тела (BSA) для каждого пациента представлены в таблице С. Площадь поверхности тела вычисляли по формуле Mosteller, описанной в настоящем документе.

Показатели PASI для пациентов в дозовой группе I представлены в таблице С вместе с процентным улучшением показателя PASI относительно исходного уровня.

Дозовая группа II

Шести пациентам из дозовой группы II проводили однократную внутривенную инъекцию 2,5 мг BT061, в то время как двум пациентам из дозовой группы II вводили плацебо. Доза на массу тела и доза на площадь поверхности тела (BSA) для каждого пациента представлены в таблице D1.

Показатели PASI для пациентов в дозовой группе II представлены в таблице D1 вместе с процентным улучшением показателя PASI относительно исходного уровня.

Дозовая группа III

Шести пациентам из дозовой группы III проводили однократную внутривенную инъекцию 5,0 мг BT061, в то время как двум пациентам из дозовой группы III вводили плацебо. Доза на массу тела и доза на площадь поверхности тела (BSA) для каждого пациента представлены в таблице D2.

Показатели PASI для пациентов в дозовой группе III представлены в таблице D2 вместе с процентным улучшением показателя PASI относительно исходного уровня.

Дозовая группа IV

Шести пациентам из дозовой группы IV проводили однократную внутривенную инъекцию 10,0 мг BT061, в то время как двум пациентам из дозовой группы IV вводили плацебо. Доза на массу тела и доза на площадь поверхности тела (BSA) для пациентов представлены в таблице D3.

Показатели PASI для пациентов в дозовой группе IV представлены в таблице D3 вместе с процентным улучшением показателя PASI относительно исходного уровня.

Кроме того, показатели PASI с течением времени для отдельных пациентов представлены в графической форме на фиг.8A-8H и на фиг.9A-9H. На графиках, показанных на фиг.8A-8H, представлены показатели PASI для пациентов из дозовой группы I, а на графиках, показанных на фиг.9A-9H, представлены показатели PASI для пациентов из дозовой группы II.

Как можно видеть из результатов, представленных в таблицах C и D, 75% всех пациентов из дозовой группы I и дозовой группы II демонстрируют явное улучшение их показателей PASI, т.е., по меньшей мере, 40% улучшение относительно исходного значения после однократной дозы. Следует отметить, что 25% пациентов в дозовой группе I и в дозовой группе II вводили плацебо.

Действительно, в обеих дозовых группах у 50% пациентов было выявлено, по меньшей мере, 50% улучшение их показателей PASI, а у одного пациента в дозовой группе II показано 88% улучшение показателя PASI на 56 сутки (т.е. у пациента 3 в таблице D). Более того, терапевтический эффект является длительным даже при этих низких дозах, причем в конце испытания, через 75 суток после введения, улучшения наблюдались у многих пациентов.

У пациентов в дозовой группе III также выявлено улучшение их показателей PASI, причем у шести из восьми пациентов было показано более чем 20% улучшение и у двух из них было показано более чем 30% улучшение после введения. Однако улучшение не было настолько существенным, как наблюдалось у пациентов из дозовой группы I и дозовой группы II, которым вводили более низкую дозу антитела. Некоторую эффективность также наблюдали у пациентов дозовой группы IV. В частности, у пациентов 1, 4, 5 и 8 в этой дозовой группе (как показано в таблице D3) выявлено явное улучшение их показателей PASI, хотя оно являлось ограниченным по сравнению с пациентами дозовых групп I-III.

Количество пациентов, у которых было показано по меньшей мере 40%, 50%, 60% и 75% улучшение показателя PASI, представлено в таблице E.

Таблица E
Обобщение результатов для дозовых групп I-III
Дозовая группа I* 0,5 мг BT061 Дозовая группа II* 2,5 мг BT061 Дозовая группа III* 5,0 мг BT061
Улучшение ≥40% 6/8 пациентов 6/8 пациентов 1/8 пациентов
Улучшение ≥50% 4/8 пациентов 4/8 пациентов 0/8 пациентов
Улучшение ≥60% 1/8 пациентов 2/8 пациентов 0/8 пациентов
Улучшение ≥75% 0/8 пациентов 1/8 пациентов 0/8 пациентов
* на дозовую группу: 75% пациентам вводили BT061, 25% пациентам вводили плацебо.

На фиг.14A и 14B предоставлены фотографические доказательства повышения уровня псориаза до и после введения. На фиг.14A представлена область псориаза на коже пациента в дозовой группе II перед введением. На фиг.14B представлена та же область псориаза через 28 суток после введения. Области улучшения показаны на фиг.14B черными рамками.

Из этих результатов можно явно видеть, что BT061 обеспечивает эффективное лечение умеренного и тяжелого хронического псориаза уже в дозе 0,5 мг. Кроме того, однократная доза обеспечивает терапевтический эффект, который все еще можно наблюдать через восемь недель после ее введения.

Пример 4

Безопасность и переносимость возрастающих доз BT061 (результаты представлены на фиг.10-13)

Проводили исследование для мониторинга безопасности и переносимости BT061 с использованием возрастающих доз антитела у здоровых мужчин- и женщин-добровольцев в возрасте от ≥18 до ≤75 лет.

Тридцати добровольцам вводили BT061 путем внутривенного введения в 10 дозовых группах, по 3 добровольца на группу. Кроме того, в 5 дозовых группах, также по 3 добровольца на группу, 15 добровольцам вводили BT061 путем подкожного введения. Внутривенное введение BT061 проиллюстрировано в таблице F, ниже:

Таблица F
Внутривенная доза BT061
Введение BT061
Общая доза mab BT061 Объем BT061 - 12,5 мг Объем BT061 - 25 мг Объем BT061 - 50 мг
3,5 мкг 0,28 мкл - -
20 мкг 1,6 мкл - -
100 мкг 8 мкл - -
500 мкг 40 мкл - -
2,5 мг 0,2 мл - -
5 мг 0,4 мл - -
10 мг 0,8 мл - -
20 мг - 0,8 мл -
40 мг - - 0,8 мл
60 мг 0,8 мл - 1 мл

Каждую дозу разбавляли 0,9% хлоридом натрия для инъекций вплоть до общего объема 20 мл. Дозу вводили в качестве однократной непрерывной внутривенной инфузии в течение 2 часов.

Введение BT061 подкожно проиллюстрировано в таблице G, ниже:

Таблица G
Подкожная доза BT061
Введение BT061
Общая доза mab BT061 Объем BT061 - 12,5 мг Объем BT061 - 25 мг Объем BT061 - 50 мг
5 мг 0,4 мл - -
10 мг 0,8 мл - -
20 мг - 0,8 мл -
40 мг - - 0,8 мл
60 мг - - 1 мл + 0,2 мл

Каждую дозу инъецировали в качестве однократной болюсной инъекции.

Добровольцев оценивали в течение 3 месяцев после инъекции.

Для подкожного применения проводили взятие образцов плазмы до введения и через 3, 6, 12, 24, 36, 48, 56, 72, 88, 96, 120, 144 и 168 часов после введения и на 75 сутки.

Для внутривенного применения взятие образцов плазмы проводили до введения и через 30 минут, 1, 2, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144 и 168 часов после введения.

Образцы плазмы анализировали с использованием стандартных способов ELISA для определения уровней цитокинов. Соответствующие проанализированные цитокины включали: IFN-γ, TNF-α, IL-6 и IL-2.

Также образцы плазмы анализировали с использованием стандартных способов проточной цитометрии для определения количества CD4+ лимфоцитов.

Результаты

Было выявлено, что внутривенные и подкожные дозы вплоть до 60 мг, главным образом, хорошо переносились.

Уровни цитокинов

Индукция высвобождения цитокинов является частым немедленным осложнением, происходящим при применении взаимодействующих с T-клетками терапевтических антител, таких как ATG, OKT3, CAMPATH-1H и гуманизированные mAb к CD3 (TRX4, висилизумаб и теплизумаб). Симптомы, главным образом, включают умеренную лихорадку, головные боли и самоограничивающиеся желудочно-кишечные проявления. Побочные эффекты, коррелирующие с индукцией цитокинов после введения антитела, требуют применения дополнительных лекарственных средств, таких как антигистамин дифенгидрамина гидрохлорид и/или противовоспалительное средство ибупрофен.

При использовании OKT3 (муромонаб-CD3), специфичного к CD3 терапевтического моноклонального антитела мыши, была описана гибель и тяжелые побочные эффекты, ограничивающие клиническое применение этого антитела, главным образом, пациентами с иммуносупрессией.

Несмотря на то что гуманизированные не связывающие FcR специфичные к CD3 моноклональные антитела, которые в настоящее время используют в клинике для лечения аутоиммунного заболевания (теплизумаб и TRX4), проявляют уменьшение побочных эффектов, индуцированных активацией T-клеток и/или активацией экспрессирующих Fc-рецептор клеток после первой дозы, по сравнению со связывающими FcR специфичными к CD3 антителами, такими как OKT3, тем не менее, наблюдается некоторая степень активации T-клеток и активации экспрессирующих Fc-рецептор клеток, которая ведет к высвобождению цитокинов, как правило, связанному с зависимыми от цитокинов побочными эффектами.

В настоящем исследовании было неожиданно выявлено, что индукция цитокинов, наблюдаемая у здоровых добровольцев после внутривенного или подкожного введения BT061, была низкой и временной по сравнению с антителами к CD3. Индукция цитокинов, как правило, возрастала при увеличении дозировки. Однако даже при наиболее высоких дозировках от 40 до 60 мг индукция цитокинов являлась значительно более низкой, чем индукция, наблюдаемая в случае других взаимодействующих с T-клетками моноклональных антител.

Срединные пиковые концентрации для цитокинов, наблюдаемые в любой момент времени в пределах 96 часов после введения, при использовании наиболее высоких доз (от 40 мг до 60 мг BT061), представлены на фиг.10 и 11.

Срединную пиковую концентрацию для каждого цитокина вычисляют следующим образом: медиана наиболее высоких концентраций цитокинов, наблюдаемых после введения антитела.

На фиг.10A и B представлено высвобождение TNFα и IL-6, наблюдаемое у здоровых добровольцев после внутривенного или подкожного введения BT061 по сравнению с высвобождением после введения моноклональных антител к CD3, теплизумаба и TRX4. Нормальные значения для этих цитокинов были взяты из Straub et al. (2007, Arthr. & Rheumat). На фиг.8 представлены уровни IL-2 и IFN-γ после внутривенного или подкожного введения BT061. Срединные пиковые уровни вычисляли в дозовых группах 40 и 60 мг, измеряя их в течение 4 суток после инъекции антитела. Верхнюю границу нормы (ULN) вычисляли исходя из уровней цитокинов, определенных у 39 здоровых субъектов, где ULN = среднее значение + 2 × стандартное отклонение.

По сравнению с теплизумабом и TRX4 (результаты взяты из Herold et al., 2002, New Engl. J. Med, и Keymeulen et al., 2005 New Engl. J. Med соответственно) BT061 индуцировал только крайне малое и временное высвобождение цитокинов. Уровни TNF-α и IL-6 немного повышались. На фиг.10A и B показано, что медианные пиковые значения уровней цитокинов IL-6 и TNFα, выявленные в плазме после применения BT061 (40 и 60 мг), были ниже уровней, наблюдаемых после введения специфичных к CD3 терапевтических антител теплизумаба и TRX4.

Кроме того, в противоположность mAb к CD3 BT061 не приводит к существенному повышению уровней IFN-γ и IL-2 (фиг.11), как было описано для применения TRX4 (Keymeulen et al. 2005, New Engl. J. Med. Type 1 Diabetes patients).

CD4+ лимфоциты

Кроме того, испытание также включало исследование количеств CD4-положительных лимфоцитов в собранных образцах плазмы.

Результаты внутривенного введения представлены ниже в таблицах H, J и K. В таблице L представлены результаты испытания с подкожным введением. Результаты графически представлены на фиг.12 и 13.

В частности, на фиг.12 представлено количество CD4 клеток (количество клеток на мл плазмы) у добровольцев, которым вводили однократную внутривенную дозу BT061. Данные представляют собой средние значения для 3 пациентов в каждой дозовой группе. Пунктирной линией указана верхняя граница нормы (ULN) и нижняя граница нормы (LLN). ULN и LLN вычисляли исходя из количества клеток, определенного у 11 здоровых добровольцев с использованием методики, идентичной методике, использованной для определения количества клеток у добровольцев, которым вводили BT061. ULN и LLN (среднее значение + (или -) стандартное отклонение) были вычислены исходя из количества клеток здоровых добровольцев как 443 CD4 клеток на мкл (нижняя граница нормы; LLN) и 1324 CD4 клеток на мкл (верхняя граница нормы; ULN).

На фиг.13 представлено количество CD4 клеток (количество клеток на мл плазмы) у добровольцев, которым вводили однократную подкожную дозу BT061. Как и на фиг.12, данные представляют собой средние значения для 3 пациентов в каждой дозовой группе. Пунктирная линия указывает на верхнюю границу нормы (ULN) и нижнюю границу нормы (LLN).

Многие специфичные к CD4 моноклональные антитела, известные в данной области (такие, как антитела, рассмотренные в Strand et al., 2007), вызывают иммуносупрессию путем истощения CD4-положительных лимфоцитов. Недостатком этих антител является то, что подвергаемые лечению индивиды становятся иммунодефицитными и чувствительными к другим инфекциям.

В противоположность этому данное исследование показало, что BT061 не индуцировало массового длительного истощения CD4-положительных клеток. Однако наблюдали временное снижение уровня CD4-положительных лимфоцитов с восстановлением до нормальных значений в периферической крови в пределах 72 ч после введения антитела.

В момент времени 72 ч после введения BT061 для количеств CD4 клеток у четырех здоровых добровольцев в группах внутривенных доз были показаны уровни CD4, которые были ниже этих нормальных значений, следующим образом: 1 доброволец с внутривенной дозой 100 мкг: 400 CD4 клеток на мкл; 1 доброволец группы 5 мг: 419 CD4 клеток на мкл; 1 доброволец группы 10 мг: 440 CD4 клеток на мкл; и 1 доброволец группы 20 мг: 392 CD4 клетки на мкл.

Однако эти значения были только немного ниже нормальных значений. Количества CD4 клеток у остальных 26 добровольцев в группах внутривенных доз находились в пределе нормальных значений через 72 часа после введения BT061.

В группах подкожных доз через 72 ч только у одного из 15 добровольцев было выявлено количество CD4 клеток ниже нормальных значений.

В заключение, в противоположность истощающим специфичным к CD4 mAb, даже при высоких дозах BT061 индуцировало только временное снижение уровней CD4-положительных клеток с последующим общим восстановлением. Из временного снижения и быстрого общего восстановления до нормальных значений можно заключить, что происходило временное перераспределение CD4-положительных клеток, а не истощение этих клеток.

Пример 5

Клиническое испытание BT061 у пациентов с ревматоидным артритом

Способность BT061 лечить ревматоидный артрит тестируют у пациентов, страдающих этим заболеванием. Испытание включает испытание с многократными дозами, вовлекающее 96 пациентов, подразделенных на 12 групп. В каждой группе двум пациентам вводят плацебо, а 6 пациентам вводят BT061. Пациентам вводят дозу раз в неделю в течение 6 недель.

Пациентов подразделяют на пациентов, которым вводят антитело подкожно, и на пациентов, которым вводят антитело внутривенно. Группы подкожных доз представляют собой: 1,25 мг, 6,25 мг, 12,5 мг, 25 мг, 50 мг, 75 мг и 100 мг. Группы внутривенных доз представляют собой: 0,5 мг, 2 мг, 6,25 мг, 12,5 мг и 25 мг.

В группе подкожной дозы 1,25 мг пациентов нумеруют как 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 и 108. В группе подкожной дозы 6,25 мг пациентов нумеруют как 201-208. В группе подкожной дозы 12,5 мг пациентов нумеруют как 301-308. В группе подкожной дозы 25 мг пациентов нумеруют как 401-408. В группе подкожной дозы 50 мг пациентов нумеруют как 501-508. В группе внутривенной дозы 6,25 мг пациентов нумеруют как 601-608.

Способ внутривенного и подкожного введения был таким же, как описано в примере 3 для испытания псориаза.

Уровень ревматоидного артрита регистрируют раз в неделю путем оценки параметров ACR и, в частности, исследования количества болезненных и увеличенных суставов и установления уровней C-реактивного белка (CRP) и скорости оседания эритроцитов (ESR). Эти параметры оценивают до испытания для получения "исходного" значения на 0 сутки и повторно в течение периода испытания и после этого через 8, 22 и 43 сутки после окончания периода введения (т.е. в ходе наблюдения (FU) на 8 сутки, на 22 сутки FU и на 43 сутки FU).

В таблицах ниже представлены данные, полученные после испытания. Конкретно, в таблицах M-S представлено количество болезненных и увеличенных суставов в ходе испытания.

На фиг.15 представлен процент пациентов из дозовых групп, в которых подкожно вводили 1,25 мг, 6,25 мг, 12,5 мг и 25 мг BT061, достигших по меньшей мере 20% улучшения соответствующих параметров ACR в ходе испытания, и процент пациентов, достигших по меньшей мере ответа ACR20 на 7 неделе.

В частности, можно видеть, что 50% пациентов в группе подкожной дозы 25 мг (т.е. 4 из 8 пациентов, где 2 пациентам вводили плацебо) достигли по меньшей мере 20% улучшения соответствующих параметров ACR на 6 неделе. Эти показатели возросли до 5 из 8 пациентов на 7 неделе, т.е. 5 из 8 пациентов достигли по меньшей мере ACR20. Один пациент в этой дозовой группе достиг более чем 50% улучшения соответствующих параметров ACR на 5 и 6 неделях (полный набор данных не представлен).

Положительные результаты также были получены пациентами в других дозовых группах. Один пациент в группе подкожной дозы 6,25 мг достиг по меньшей мере 50% улучшения соответствующих параметров ACR на 4 неделе, в то время как другой достиг по меньшей мере 70% улучшения соответствующих параметров ACR на 3 неделе (полный набор данных не представлен).

На фиг.16A и 16B представлены результаты для количества болезненных и увеличенных суставов у пациентов из группы подкожной дозы 25 мг BT061 в течение шести недель. У нескольких пациентов было выявлено снижение количества болезненных и увеличенных суставов в ходе лечения. Результаты для одного отвечающего пациента и одного неотвечающего пациента из этой дозовой группы представлены на фиг.17A и 17B соответственно. У отвечающего пациента выявлено значимое улучшение в количестве болезненных и увеличенных суставов и уровнях боли.

Снижение количества болезненных и увеличенных суставов также наблюдается у пациентов из других дозовых групп. На фиг.18A, 18B, 19A и 19B представлено количество болезненных суставов в группах подкожных доз 1,25 мг, 6,25 мг, 50 мг и внутривенной дозы 6,25 мг соответственно в течение испытания и в последующие недели.

Эти результаты демонстрируют эффективность средства по настоящему изобретению в отношении лечения ревматоидного артрита в диапазонах доз, описанных в настоящем документе.

1. Способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и гуманизированное антитело к CD4, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные Т-клетки, где композицию вводят субъекту в дозе указанного гуманизированного антитела к CD4 от 0,2 мг до 5 мг, и ее вводят внутривенно, где композицию вводят каждую неделю, каждые две недели, каждые четыре недели, каждый календарный месяц или каждые шесть недель,
и где указанное гуманизированное антитело к CD4 содержит V-домен Н-цепи, V-домен L-цепи и константный домен IgG1, где указанный V-домен Н-цепи содержит последовательности DCRMY, VISVKSENYGANYAESVRG и SYYRYDVGAWFAY, а указанный V-домен L-цепи содержит последовательности RASKSVSTSGYSYIY, LASILES и QHSRELPWT.

2. Способ по п.1, где композицию вводят субъекту в дозе указанного гуманизированного антитела к CD4 от 0,3 мг до 1 мг.

3. Способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и гуманизированное антитело к CD4, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные Т-клетки, где композицию вводят субъекту внутривенно в дозе указанного гуманизированного антитела к CD4 в течение периода в 10 суток между 0,2 и 7,5 мг, где указанный субъект получает множество доз,
и где указанное гуманизированное антитело к CD4 содержит V-домен Н-цепи, V-домен L-цепи и константный домен IgG1, где указанный V-домен Н-цепи содержит последовательности DCRMY, VISVKSENYGANYAE SVRG и SYYRYDVGAWFAY, а указанный V-домен L-цепи содержит последовательности RASKSVSTSGYSYIY, LASILES и QHSRELPWT.

4. Способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и гуманизированное антитело к CD4, способное активировать CD4+CD25+ регуляторные Т-клетки, где композицию вводят субъекту внутривенно в дозе указанного гуманизированного антитела к CD4 от 2 до 20 мкг/кг массы тела указанного субъекта, где композицию вводят каждую неделю, каждые две недели, каждые четыре недели, каждый календарный месяц или каждые шесть недель,
и где указанное гуманизированное антитело к CD4 содержит V-домен Н-цепи, V-домен L-цепи и константный домен IgG1, где указанный V-домен Н-цепи содержит последовательности DCRMY, VISVKSENYGANYAESVRG и SYYRYDVGAWFAY, а указанный V-домен L-цепи содержит последовательности RASKSVSTSGYSYIY, LASILES и QHSRELPWT.

5. Способ по п.4, где композицию вводят субъекту в дозе гуманизированного антитела к CD4 в 20 мкг/кг.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где аутоиммунное заболевание выбрано из псориаза, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, диабета 1 типа, воспалительных заболеваний кишечника, болезни Крона, аутоиммунного тиреоидита, аутоиммунной миастении гравис, системной красной волчанки и связанных с трансплантацией заболеваний, таких как реакция ′′трансплантат против хозяина′′ или общие проблемы толерантности органов.

7. Способ по п.6, где заболевание представляет собой псориаз.

8. Способ по п.7, где указанное лечение обеспечивает, по меньшей мере, 40% улучшения показателя псориатического индекса площади и тяжести (PASI) у пациента.

9. Способ по п.8, где указанное лечение обеспечивает, по меньшей мере, 50% улучшения показателя псориатического индекса площади и тяжести (PASI) у пациента.

10. Способ по п.6, где заболевание представляет собой ревматоидный артрит.

11. Способ по п.1, где композиция предоставлена в объеме дозировки от 0,5 до 500 мл или в форме для разведения до объема дозировки от 0,5 до 500 мл.

12. Способ по п.11, где объем дозировки составляет от 15 до 25 мл.

13. Способ по любому из пп.1-5, где дозу вводят один раз каждую неделю, один раз каждые две недели или один раз каждые четыре недели.

14. Способ по п.13, где аутоиммунное заболевание представляет собой псориаз и дозу вводят один раз каждые две недели.

15. Способ по п.13, где аутоиммунное заболевание представляет собой псориаз и дозу вводят один раз каждые четыре недели.

16. Способ по п.13, где аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит и дозу вводят один раз каждые две недели.

17. Способ по п.13, где аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит и дозу вводят один раз каждые четыре недели.

18. Способ по любому из пп.1-5, где указанное гуманизированное антитело к CD4 присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации от 10 до 250 мкг/мл.

19. Способ по п.18, где объем композиции составляет от 15 до 25 мл.

20. Способ по п.1, где в течение периода от 10 мин после начала введения до 96 часов после завершения введения уровень цитокина в плазме крови субъекта менее чем в 20 раз превышает уровень непосредственно перед введением и где цитокин выбран из IFN-γ, TNF-α, IL-6 и IL-2.

21. Способ по п.1, где в течение периода от 10 мин после начала введения до 96 часов после завершения введения уровень цитокина в плазме крови субъекта менее чем в 20 раз превышает значение верхней границы нормы (ULN), где цитокин выбран из IFN-γ, TNF-α, IL-6 и IL-2 и где величина ULN составляет 3,8, 2,8, 4,4, и 19,4 пг/мл соответственно.

22. Способ по п.1, где в течение периода времени от 72 до 96 часов после введения количество CD4+ лимфоцитов в плазме крови субъекта составляет, по меньшей мере, 250 клеток/мкл.

23. Способ по любому из пп.1-5, где: (i) V-домен Н-цепи содержит последовательности DCRMY, VISVKSENYGANYAESVRG и SYYRYDVGAWFAY и имеет, по меньшей мере, 95% идентичность последовательности SEQ ID NO: 1; и (ii) V-домен L-цепи содержит последовательности RASKSVSTSGYSYIY, LASILES и QHSRELPWT и имеет, по меньшей мере, 95% идентичность последовательности SEQ ID NO: 2.

24. Способ по любому из пп.1-5, где указанное гуманизированное антитело к CD4 получают из моноклонального антитела к CD4 мыши B-F5.

25. Способ по п.13, где аутоиммунное заболевание представляет собой псориаз и дозу вводят один раз каждую неделю.

26. Способ по п.13, где аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит и дозу вводят один раз каждую неделю.

27. Способ по п.1, где в течение периода от 3 до 6 часов после введения количество CD4+ лимфоцитов в плазме крови субъекта составляет менее 250 клеток/мкл.

28. Способ по п.1, где в течение периода от 72 до 96 часов после введения количество CD4+ лимфоцитов в плазме крови субъекта составляет или превышает 50% от количества клеток непосредственно перед введением.

29. Способ по п.8, где доза указанного гуманизированного антитела к CD4 составляет 0,5 мг.

30. Способ по п.8, где доза указанного гуманизированного антитела к CD4 составляет 2,5 мг.

31. Способ лечения аутоиммунного заболевания, который включает введение фармацевтической композиции субъекту, где композиция содержит гуманизированное антитело к CD4, где указанную фармацевтическую композицию вводят внутривенно субъекту в дозе указанного гуманизированного антитела к CD4: (i) от 0,2 мг до 5 мг; или (ii) от 2 до 20 мкг/кг массы тела указанного субъекта, и где указанное гуманизированное антитело к CD4 содержит константный домен IgG1, V-домен Н-цепи, имеющий SEQ ID NO: 1, и V-домен L-цепи, имеющий SEQ ID NO: 2.

32. Способ по п.31, где аутоиммунное заболевание является таким, как определено в пп. 6, 7 или 10.

33. Способ по п.31 или 32, где указанную композицию вводят субъекту в дозе указанного гуманизированного антитела к CD4 от 0,3 мг до 1 мг.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено применение блинатумомаба (MT103) для получения фармацевтической композиции для лечения, уменьшения интенсивности или устранения острого лимфобластного лейкоза (ALL), где блинатумомаб (MT103) переводит MRD (минимальное остаточное заболевание) - позитивный острый лимфобластный лейкоз ALL в MRD-негативное состояние ALL.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено применение блинатумомаба для получения фармацевтической композиции для лечения, уменьшения интенсивности или устранения острого лимфобластного лейкоза (ALL) у детей, где блинатумомаб переводит MRD (минимальное остаточное заболевание) - позитивный острый лимфобластный лейкоз ALL в MRD-негативное состояние ALL.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен полипептид, содержащий два связывающих фрагмента, представленных антителами, причем первый из них связывается с эпитопом СD3ε(эпсилон)-цепи человека и примата, не являющегося шимпанзе, в частности Callithrix jacchus, Saguinus oedipus и Saimirí sciureus, а второй - с EGFR, Her2/neu или IgE человека и/или примата, не являющегося шимпанзе, причем упомянутый эпитоп СD3ε включает аминокислотную последовательность Gln-Asp-Gly-Asn-Glu.

Изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты антагонистических антител, которые связываются с рецептором интерлейкина-7 (IL-7R).

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Представлена молекула, специфически связывающаяся с CD37, содержащая от N-конца до С-конца: (a) CD37-специфическую scFV, содержащую от N-конца до С-конца: (i) гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 GYNMN, CDR2 NIDPYYGGTTYNRKFKG и CDR3 SVGPFDS, (ii) линкер, имеющий от 5 до 30 аминокислот, включительно, и (iii) гуманизированную вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 RASENVYSYLA, CDR2 FAKTLAE и CDR3 QHHSDNPWT; (b) шарнирную область; и (c) иммуноглобулиновые области CH2 и СН3.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой фармацевтическую комбинацию для лечения ревматического заболевания, содержащую гуманизированное анти-CD4 антитело, способное к активации CD4+CD25+ регуляторных Т-клеток, и метотрексат.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены варианты антител против NR10 человека или яванского макака, в том числе гуманизированные.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело, специфически связывающееся с эпитопом на CD43 и CEA и имеющее модификации в константной области тяжелой и/или легкой цепи.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено выделенное моноклональное антитело к интегрину α5β1 человека.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено лекарственное средство для лечения ревматоидного артрита, хронического артрита у детей или болезни Кастлемена, представляющее собой антитело против рецептора IL-6, полученное на основе антитела TOCILIZUMAB.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены: антитело, связывающееся с интерлейкином-17 (ИЛ-17), характеризующееся 6 CDR из лёгкой и тяжёлой цепи, а также кодирующая нуклеиновая кислота и вектор для экспрессии указанного антитела.

Изобретение относится к области медицины и касается фармацевтической композиции для лечения кожных заболеваний. Композиция включает в качестве действующего вещества такролимус в терапевтически эффективном количестве, гидрофобный компонент, гидрофильный компонент, эмульгатор и стабилизатор - динатрий эдетат и феноксиэтанол.

Изобретение относится к замещенным изохинолинам и изохинолинонам формулы (I) и к их стереоизомерным и/или таутомерным формам и/или их фармацевтически приемлемым солям, где R1 является H, OH или NH2; R3 является H; R4 является H, галогеном или (C1-C6)алкилен-R′; R5 является H, галогеном, (C1-C6)алкилом; R7 является H, галогеном, (C1-C6)алкилом, O-(C1-C6)алкилом; R8 является H; R6 отсутствует; или является одним (C1-C4)алкиленом, связанным с циклоалкильным кольцом, в котором (C1-C4)алкилен образует вторую связь с другим углеродным атомом циклоалкильного кольца с образованием бициклической кольцевой системы, R10 является H, фенилом, или пиридином, где фенил является незамещенным или замещенным; R11 является H, (C1-C6)алкилом; или R11 и R12 вместе с углеродным атомом, к которому они присоединены, образуют (C3)циклоалкил; R12 является (C1-C6)алкилом, (C3-C8)циклоалкилом или фенилом; или R12 является H, при условии, что r=2 и другой R12 не является H; или R11 и R12 вместе с углеродным атомом, к которому они присоединены, образуют (C3)циклоалкил; R13 и R14 являются независимо друг от друга H, (C1-C6)алкилом, (C1-C6)алкилен-R′, C(O)O-(C1-C6)алкилом, n равно 0; m равно 1 или 2; s равно 1 или 2; r равно 1 или 2; L является O, NH; R′ является (C3-C8)циклоалкилом, (C6-C10)арилом; где в остатках R11 и R12 алкил является незамещенным или необязательно замещен одним OCH3; где в остатках R11 и R12 алкил является незамещенным или необязательно замещен одним или более галогеном; где в остатках R10 и R12 (C6-C10)арил является незамещенными или необязательно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из галогена, CN, (C1-C6)алкила, O-(C1-C6)алкила, SO2-(C1-C6)алкила, CF3 и OCF3.

Изобретение относится к соединениям формулы I, в которой R обозначает C1-6алкил, C1-6галогеналкил, гидрокси-C1-6алкил, гидроксигруппу или галоген; m, n равно 0 или 1; Z1 обозначает CH или NH; Z2 обозначает CH или N; Z3 обозначает CR1, N или NR2; R1 обозначает H, C1-6алкил, C3-7циклоалкил, цианогруппу, циано-C1-6алкил или галоген; R2 обозначает H или C1-6алкил; X обозначает CH, CR′ или N; X′ обозначает CH, CR′ или N; r равно 1; Y обозначает CH или CR′; R′ обозначает R′a или R′b; R′a обозначает галоген или цианогруппу; R′b обозначает C1-6алкил, гетероциклоалкил, выбранный из пиперазинила, морфолинила, пиперидинила, тиоморфолинила, азетидинила, пирролидинила, OR″, SR″, S(=O)2R″ или NR″R″, необязательно замещенный одним или более R′c; R′c обозначает гидроксигруппу, оксогруппу, цианогруппу, C1-6алкил, пиридинил, карбокси-C1-6алкил, аминокарбонил-C1-6алкиламиногруппу, C1-6алкиламиногруппу, C1-6диалкиламиногруппу или C1-6алкоксигруппу; R″ обозначает H, C1-6алкил, гидрокси-C1-6алкил, пиперидинил, C3-7циклоалкил или пиридинил; Q обозначает S(=O)2Q1, C(=O)Q2, C(=O)OQ3 или Q4; Q1 обозначает C1-6алкил, C3-7циклоалкил-C1-6алкил, C1-6алкиламиногруппу или C1-6диалкиламиногруппу, необязательно замещенный одним или более Q1′; каждый Q1′ независимо обозначает C1-6алкил или цианогруппу; Q2 обозначает C1-6алкил, необязательно замещенный одним или более Q2′; каждый Q2′ независимо обозначает цианогруппу; Q3 обозначает C1-6алкил; Q4 обозначает C1-6алкил, оксетанил, необязательно замещенный одним или более Q4′; каждый Q4′ независимо обозначает галоген, цианогруппу, циано-C1-6алкил; p равно 0, 1 или 2; q равно 1 или 2; каждый означает ординарную связь или двойную связь; и при условии, что связи между Z1 и Z2, и Z3 и Z3 не обе являются двойными связями и не обе являются ординарными.

Изобретение относится к соединению формулы (I) в которой, каждый из R1 и R2 независимо выбран из группы, состоящей из атома водорода, нитро и NR6R7; R3 представляет собой C1-C8алкил; каждый из R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из C1-C8алкокси, фенокси и фенил(C1-C8алкилен)окси; каждый из R6 и R7 независимо выбран из группы, состоящей из атома водорода, C1-C8алкила, C(O)R8 и SO2R8;R8 выбран из группы, состоящей из атома водорода, C1-C8алкила, галогензамещенного C1-C8-алкила, C1-C8-алкила, замещенного (C1-C8-алкилзамещенный амино), C1-C8-алкила, замещенного пиперидином и C1-C8-алкила, замещенного морфолином, которые могут быть использованы для снижения активности фермента PDE4 или для лечения заболеваний или состояний, опосредованных ферментом PDE4.6 н.и 15 з.п.

Изобретение относится к соединению структурной формулы I-b, обладающему ингибирующей активностью в отношении ВТК, TEC, BMX, ITK, ErbB1, ErbB4 и/или JAK3 киназ. В формуле (I-b) кольцо A и кольцо B представляют собой фенил; Ry представляет собой -CN, -CF3, C1-4 алифатическую группу, C1-4галогеналифатическую группу, -OR, -C(O)R или -C(O)N(R)2; каждая группа R независимо представляет собой водород или группу, выбранную из C1-6алифатической группы, возможно содержащей в качестве заместителя галоген, -(CH2)0-4R°, -(CH2)0-4OR°, -(CH2)0-4N(R°)2, -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°, -(CH2)0-4C(O)R°, -(CH2)0-4S(O)2R°, или 5-6-членного насыщенного или арильного кольца, содержащего 1-2 гетероатома, независимо выбранных из азота или кислорода, возможно замещенного группой =O, -(CH2)0-4R°, -(CH2)0-4N(R°)2 или -(CH2)0-4OR°; фенила; 5-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1-2 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, возможно замещенного группой -(CH2)0-4R°, -(CH2)0-4OR° или =O; или 6-членного моноциклического гетероарильного кольца, содержащего 1 атом азота; W1 и W2 представляют собой -NR2-; R2 представляет собой водород, C1-6алифатическую группу или -C(O)R; m и p независимо равны 0, 1, 2, 3 или 4; Rx независимо выбран из -R, -OR, -O(CH2)qOR или галогена, где q=2; Rv независимо выбран из -R или галогена; значения радикалов R1 и R° приведены в формуле изобретения.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен полипептид, содержащий два связывающих фрагмента, представленных антителами, причем первый из них связывается с эпитопом СD3ε(эпсилон)-цепи человека и примата, не являющегося шимпанзе, в частности Callithrix jacchus, Saguinus oedipus и Saimirí sciureus, а второй - с EGFR, Her2/neu или IgE человека и/или примата, не являющегося шимпанзе, причем упомянутый эпитоп СD3ε включает аминокислотную последовательность Gln-Asp-Gly-Asn-Glu.
Группа изобретений относится к штаммам молочно-кислых бактерий, используемых в качестве лекарственного средства для лечения аллергии, а также к применению указанных штаммов для получения композиции для лечения аллергии.
Изобретение относится к кормлению свиней. Способ применения кормовой добавки для свиней, включающей молочную закваску на основе консорциума живых молочнокислых и пропионовокислых бактерий трех комплексов: 1-й из штаммов молочнокислых бактерий S.

Изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты антагонистических антител, которые связываются с рецептором интерлейкина-7 (IL-7R).

Группа изобретений относится к области органической химии, а именно к соединению формулы I и к их фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру, в которой W обозначает C(H)2, C(H)2-C(H)2 или C(H)(CH3); X выбран из группы, включающей: (1) O, (2) N(H), (4) S, (5) S(O) и (6) S(O)2; Y обозначает углерод или азот; R1 выбран из группы, включающей: (1) водород, (2) галоген, (3) метил, необязательно замещенный фтором, (4) C1-7алкоксигруппу, необязательно замещенную фтором, (5) цианогруппу и (6) C1-7алкилсульфонил; R2 обозначает водород, фтор, хлор или C1-7алкоксигруппу; R3 обозначает водород, фтор, хлор, бром или метил; R4 выбран из группы, включающей: (1) водород, (2) галоген, (3) C1-7алкил, необязательно замещенный фтором, (4) C3-7циклоалкил, и (5) этенил; R5 и R6 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей: (1) водород, (2) галоген, (3) C1-7алкил, (4) цианогруппу и (5) C3-7циклоалкил; R7 обозначает цианогруппу или S(O)2-R8, где R8 выбран из группы, включающей: (1) C1-7алкил, (2) C3-7циклоалкил, (4) С1-7алкиламиногруппу, (5) С1-7диалкиламиногруппу, (6) низш. гетероциклоалкил, необязательно замещенный галогеном, C1-7алкил, или C1-7алкоксикарбонил и (7) 2-окса-6-азаспиро[3.3]гепт-6-ил, где ″низш. гетероциклоалкил″ означает насыщенный или частично ненасыщенный неароматический кольцевой фрагмент, содержащий от 3 до 7 атомов, связанных вместе с образованием кольцевой структуры, в которой один, два или три кольцевых атома являются гетероатомами, тогда как остальные кольцевые атомы являются атомами углерода; и фармацевтически приемлемые сложные эфиры представляют собой метиловые и этиловые эфиры кислот формулы I применимые в качестве пролекарств. Также изобретение относится к фармацевтической композиции на основе соединения формулы I. Технический результат: получены новые соединения, обладающие активностью в качестве антагонистов или частичных агонистов рецептора CRTH2. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 90 пр.
Наверх