Способ очистки почв от нефти в условиях низких положительных температур психротолерантными бактериями pseudomonas sp. иб-1.1

Авторы патента:

C12R1/38 - Схема кодирования для подклассов C12C-C12Q или C12S, относящаяся к микроорганизмам

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

B09C1/10 - микробиологическими способами или с использованием ферментов

Владельцы патента RU 2539148:

Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии Уфимского научного центра РАН (ФГБУН ИБ УНЦ РАН) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии защиты окружающей среды, в частности к способам очистки почв от нефтяных загрязнений в сокращенные сроки в условиях низких положительных температур. Способ включает внесение в почву суспензии микробного препарата на основе суспензии психротолерантного штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1. с титром не менее 2,0·10⁸ КОЕ/мл. Изобретение позволяет за 1 месяц провести биодеградацию нефти со степенью деструкции углеводородов свыше 90%. 1 табл.

Использование биологических средств для ликвидации нефтяных загрязнений почвы часто является единственно возможным способом восстановления экологически чистой обстановки в природных условиях без нарушения естественного биоценоза. В России большинство месторождений нефти расположено в северных регионах и в Западной Сибири. Поэтому для этих регионов оптимальным является внесение психроактивных микроорганизмов, которые обладают достаточной активностью при низкой температуре, приспособлены к сезонным колебаниям температур. Интродукция этих микроорганизмов, способных функционировать при низких положительных температурах, позволит продлить период очистки почвы от нефти на несколько месяцев.

Известен способ восстановления плодородия нефтезагрязненных почв микробным препаратом «Байкал ЭМ1» [1]. Недостатком его является неспособность деструкции нефти в условиях пониженных температур.

Известен способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими микроорганизмами Bacillus subtilis [2]. Недостатком является сравнительно высокий период очистки.

Технической задачей предлагаемого изобретения является разработка способа очистки почв от нефти в условиях низких положительных температур путем внесения в почву суспензии микробного препарата из штамма бактерий Pseudomonas sp.

Поставленная задача решается путем внесения микробного препарата, состоящего из микроорганизмов штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1, обладающего способностью разлагать нефтепродукты в условиях низких положительных температур.

Штамм депонирован во Всероссийскую коллекцию микроорганизмов с регистрационным номером ВКМ B - 1831D и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические и микроскопические особенности штамма.

Клетки палочковидные 1,5-2,0 мкм в длину, 0,5-0,7 мкм в диаметре, грамотрицательные. Колонии круглые диаметром 2,5 мм, выпуклые, желтоватые, полупрозрачные.

Условия, необходимые для культивирования штамма: селективная питательная среда - среда Раймонда + источник углерода.

Состав питательной среды (среда Раймонда), г/л: Na₂CO₃ - 0,1; CaCl₂ - 0,01; MnSO₄·7H₂O - 0,02; FeSO₄·7H₂O - 0,02; NaH₂PO₄ - 1,5; K₂HPO₄ - 1,0; MgSO₄·7H₂O - 0,2; NH₄NO₃ - 2,0; дизельное топливо - 1%; вода дистиллированная - до 1 л.

Для хранения культуры в коллекции на косяках в среду Раймонда добавляют пептон 1 г/л. Оптимальный интервал температур для роста 10-15°C, срок выращивания 3 суток. Штамм хранится лиофильно в ампулах. В холодильнике штамм хранится на скошенном агаре, среда Раймонда; пересев осуществляется один раз в два месяца.

Штамм бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1. выращивают на среде Раймонда pH 7,0-7,2 в течение 3 суток при 15°C в условиях аэрации до достижения титра микроорганизмов в культуральной жидкости величины не менее 10⁸ КОЕ/мл.

Пример конкретного выполнения.

Испытания способа очистки почв от нефти в условиях низких положительных температур проводили в условиях нефтезагрязненного участка территории ООО «РН-Пурнефтегаз» площадью 1,0 га. Участок разделен на две равные части. Одна из частей была обработана путем внесения суспензии микробного препарата, состоящего из микроорганизмов психротолерантного штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1 с титром 2,0·10⁸ КОЕ/мл. Расход составил 1 м². Вторая часть осталась без обработки в качестве контроля. В период испытания температура воздуха колебалась в интервале от 0 до 9°C.

Для оценки эффективности применения способа контролировали степень разложения углеводородов нефти в соответствии с ПНД Ф 16.1.41-2004 «Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в пробах почв гравиметрическим методом» (табл.).

На момент месячной экспозиции испытаний деструкция углеводородов на обработанной части составила свыше 90%, в контроле содержание нефти существенно не изменилось.

Таким образом, применение суспензии, состоящей из микроорганизмов психротолерантного штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1, очищает почву, загрязненную нефтью, и может быть использовано в восстановлении нефтезагрязненных земель в условиях пониженных положительных температур Крайнего Севера и Западной Сибири.

Таблица
Динамика изменения содержания нефтепродуктов в почве
Часть участка	Содержание нефтепродуктов, %
Исходное	Через 14 сут	Через 1 мес
С обработкой	4,88	2,61	0,44
Без обработки, контроль	4,88	4,85	4,80

Список литературы

1. Безуглова О.С., Мордвинова Д.В. Главный агроном, 2009. - №3. - С.16-17.

2. Патент РФ №2446900, кл. B09C 1/10, 2012.

Способ очистки почвы от нефти в условиях низких положительных температур путем внесения в почву суспензии микробного препарата, отличающийся тем, что в качестве микробного препарата используют суспензию штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Bacillus subtilis - И5-12/23 обладает антагонистической активностью в отношении фитопатогенных грибов и бактерий.

Способ подавления жизнеспособности патогенных лептоспир // 2537271

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для подавления жизнеспособности патогенных лептоспир. Способ предусматривает выращивание штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП».

Способ получения бактериальной целлюлозы // 2536973

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения полисахаридов, а именно бактериальной целлюлозы. Способ предусматривает культивирование штамма бактерий Gluconacetobacter sucrofermentans H-110 (ВКПМ В-11267) в жидкой фазе послеспиртовой зерновой барды, полученной после механического отделения твердой фазы, в течение 3-5 суток при температуре 28±2°C и рН 3,9-4,4, а также отделение полученной бактериальной целлюлозы от культуральной среды и высушивание при 800С до постоянной массы.

Питательная среда для выявления гемолитической активности культур staphylococcus aureus и candida albicans // 2536964

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и биотехнологии, в частности к микробиологической лабораторной диагностике инфекционных болезней. Питательная среда содержит триптон, дрожжевой экстракт, глюкозу, хлорид натрия, эритроциты человека 0(I) группы Rh(+), сульфат железа(II), агар «Дифко» и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов.

Способ получения бактериальной целлюлозы // 2536257

Изобретение относится к области микробиологического получения полисахаридов, а именно бактериальной целлюлозы, и может быть использовано в медицине, промышленности.

Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов // 2536246

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, бентонит и воду.

Способ приготовления модифицированного природного каучука // 2535987

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ приготовления модифицированного природного каучука.

Продуцент ингибитора возбудителя бактериальной пятнистости тыквенных культур (acidovorax citrulli) // 2535983

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве. Штамм Trichoderma harzianum Rifai депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-180.

Биопрепарат для очистки объектов окружающей среды от угеводородного загрязнения, способ его получения и применения // 2535978

Изобретение относится к биотехнологии и экологии, а именно к защите окружающей среды. Биопрепарат для очистки объектов окружающей среды от нефтезагрязнений и ПАУ представляет собой консорциум микроорганизмов, состоящий из следующих штаммов бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371, взятых в равных соотношениях.

Иммуномодулирующие пробиотические молочно-кислые бактерии // 2535974

Группа изобретений относится к штаммам молочно-кислых бактерий, используемых в качестве лекарственного средства для лечения аллергии, а также к применению указанных штаммов для получения композиции для лечения аллергии.

Рекомбинантный штамм бактерий rhodococcus rhodochrous, обладающий конститутивной ацилирующей активностью, и способ синтеза n-замещенных акриламидов с использованием этого штамма в качестве биокатализатора // 2539033

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантному штамму бактерий Rhodococcus rhodochrous ВКПМ Ас1960, обладающему конститутивной ацилирующей активностью и полученному путем замещения в хромосоме штамма Rhodococcus rhodochrous ВКМ Ас-1515Д гена, кодирующего нитрилгидратазу на ген, кодирующий ациламидазу из штамма Rhodococcus erythropolis 37 ВКПМ Ас-1793, а также к способу синтеза N-замещенных акриламидов из акриламида и аминов с его использованием в качестве биокатализатора.

Средство для микробиологической защиты растений и способ микробиологической защиты растений с использованием этого средства // 2539025

Группа изобретений относится к сельскому хозяйству и может быть использована при микробиологической защите растений. Средство для микробиологической защиты растений включает смесь культуральных жидкостей Trichoderma viride, Azotobacter chroococcum, Bacillus megaterium, Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae с необходимым количеством воды.

Способ получения туберкулина для массовой диагностики и профилактики туберкулеза // 2538624

Группа изобретений относится к биохимии, в частности к получению аллергена туберкулопротеина - полуфабриката аллергена туберкулезного очищенного в стандартном разведении.

Штамм бактерий bacillus subtilis б 93 визр для защиты картофеля от болезней при хранении // 2538157

Способ повышения содержания гумуса почвы с применением штамма клубеньковых бактерий якутский №2 люцерны // 2537901

Способ повышения плодородия почвы включает предпосевную обработку семян люцерны жидким биопрепаратом, возделывание и скашивание зеленой массы люцерны. Для обработки семян используют жидкий бактериальный биопрепарат на основе штамма Sinorhizobium meliloti Якутский №2 ГНУ ВНИИСХМ RCAM00826.

Способ получения бактериальной целлюлозы // 2536973

Питательная среда для выявления гемолитической активности культур staphylococcus aureus и candida albicans // 2536964

Композиции, содержащие пробиотические и пребиотические компоненты и неорганические соли с лактоферрином // 2536939

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена пробиотическая композиция, содержащая пробиотический компонент, в качестве которого используют Bifidobacterium longum R175 и один или два вида бактерий, выбранных из группы бактерий, состоящей из Lactobacillus rhamnosus R11, Lactobacillus helveticus R52 и Lactobacillus plantarum R1012, и композицию-носитель.

Способ получения бактериальной целлюлозы // 2536257

Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов // 2536246

Способ активации сухой формы биопрепарата для очистки нефтезагрязненных грунтов // 2538404

Изобретение относится к экологии и биотехнологии. Для активации сухой формы биопрепарата для очистки нефтезагрязненных грунтов готовят водную суспензию с индуктором ферментных систем.