Способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте


 


Владельцы патента RU 2539629:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний сетчатки. Способ включает моделирование патологии сетчатки и профилактику ее введением лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина в качестве прекондиционирующего агента. Эритропоэтин вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг, за 30 минут до моделирования патологии. Способ приводит к выраженной коррекции ишемии сетчатки за счет механизма открытия АТФ-зависимых К+-каналов и последующего индуцирования механизмов метаболической адаптации при реализации эффекта прекондиционирования. 1 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии.

По известным литературным источникам - ишемия сетчатки является ведущим звеном в патогенезе ряда сосудистых заболеваний глазного дна (Нероев В.В. Ишемия сетчатки и оксид азота // Вестник Российской Академии медицинских наук. - 2003. №5. - С.37-40). Профилактику и коррекцию ишемии сетчатки теоретически возможно осуществить с помощью фармакологического прекондиционирования, суть которого состоит в активации эндогенных защитных механизмов, снижающих степень повреждения при последующем длительном ишемическом эпизоде (Колесник И.М. Фармакологическое прекондиционирование эритропоэтином - новые возможности оптимизации выживаемости ишемизированных тканей // Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье". - 2010. №3. - С.32-36). Наиболее перспективным для изучения прекондиционирующего действия на сетчатке является эритропоэтин. Рекомбинантный эритропоэтин в субэритростимулирующей дозе обладает выраженным цитопротекторным эффектом на модели изолированного кожного лоскута на питающей ножке (Колесник И.М. Влияние дистантного прекондиционирования и рекомбинантного эритропоэтина на выживаемость ишемизированных тканей и неоваскулогенез (экспериментальное исследование) [Текст]: автореф. дис… канд. мед. наук: 14.03.06, 14.01.17 / И.М. Колесник; Курск, гос. мед. ун-т. - Курск, 2010. - С.19).

Известен способ коррекции диборнолом острой ишемической ретинопатии в эксперименте (Цой Ю.Р. Влияние диборнола на морфофункциональное строение сетчатки крыс при моделировании тотальной транзиторной ишемии головного мозга // Всероссийская 69-я итоговая научная студенческая конференция, посвященная 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (Томск, 11-13 мая 2010 г.): сборник статей / под ред. В.В. Новицкого, Л.М. Огородовой. - Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2010. - С.376-378), который характеризуется тем, что эксперименты проведены на 30 белых половозрелых крысах-самках линии Wistar массой 230-250 г. Животные были разделены на 3 группы. Крысам первой группы (n=10) воспроизводили тотальную транзиторную ишемию головного мозга (ИГМ) по методу W.A. Pulsineli. За 1 сутки до моделирования тотальной транзиторной ИГМ у наркотизированных крыс (этаминал-натрий 60 мг/кг) производили термокоагуляцию обеих вертебральных артерий на уровне первого шейного позвонка. ИГМ воспроизводили под эфирным наркозом путем пережатия общих сонных артерий в течение 30 мин. Состоятельность модели оценивали по побледнению видимой части сосудистой оболочки глаза, расширению зрачков, развитию гипервентиляции. Реперфузию проводили снятием окклюдеров, после чего рану ушивали. Крысам второй группы (n=10) вводили диборнол в дозе 100 мг/кг в 1 мл крахмальной слизи один раз в сутки в течение 7 дней. Контрольная группа (n=10) - интактные животные, содержавшиеся в идентичных с экспериментальными условиях вивария. Материалом исследования служили сетчатки крыс, изъятые после их умерщвления.

Основным недостатком способа является то, что модель тотальной транзиторной ишемии головного мозга не является специфичной для исследования коррекции острой ишемической ретинопатии, так как помимо сетчатки ишемии подвергаются головной мозг, мягкие ткани головы, что приводит к развитию массивного постреперфузионного повреждения тканей и органов с возможностью развития краш-синдрома. Помимо этого использование данной модели не исключает наличия коллатерального кровообращения между бассейном общей сонной и подключичной артерий.

Наиболее близким к заявленному решению является Способ профилактики ишемии сетчатки в эксперименте путем предварительного введения эритропоэтина в качестве защищающего сетчатку агента (MOWAT, F.M. Endogenous erythropoietin protects neuroretinal function in ischemic retinopathy / F.M. Mowat, F. Gonzalez, U.F. Luhmann et. al. // Am J Pathol. - 2012/ - Apr. №180(4). - P/1726-1739).

Основным недостатком способа является то, что введение рекомбинантного эритропоэтина проводят внутрибрюшинно, начиная с 14 дня постнатального развития и заканчивая 25 днем дозой 5000 ЕД/кг, что ведет к изменению гематокрита и ангиогенезу.

Задачей предлагаемого изобретения является способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте, включающий рекомбинантный эритропоэтин в качестве прекондиционирующего агента.

Задача достигается тем, что в способе, включающем моделирование патологии сетчатки путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут и профилактику ее введением лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина, причем рекомбинантный эритропоэтин вводят в качестве прекондиционирующего агента однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг за 30 минут до моделирования патологии.

Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что:

- в качестве прекондиционирующего агента вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно рекомбинантный эритропоэтин в субэритростимулирующей дозе (50 МЕ/кг массы тела животного), за счет этого через 30 мин (первое защитное окно) после введения открываются АТФ-зависимые К+-каналы, что в последующем приводит к повышению резистентности тканей сетчатки, через 12-48 ч после введения рекомбинантного эритропоэтина открывается 2 защитное окно, в котором эффект прекондиционирования реализуется в основном за счет действия оксида азота (NO) и дальнейшего включения механизмов метаболической адаптации. Кроме того, эритропоэтин в субэритростимулирующей дозе (50 МЕ/кг массы тела животного) вводят однократно, в результате чего показатели микроциркуляции в ишемизированной сетчатке улучшаются не за счет образования новых капилляров, а прекондиционирующего действия.

Способ приводит к выраженной коррекции ишемии сетчатки, так как рекомбинантный эритропоэтин в данной дозе открывает АТФ-зависимые К+-каналы и в дальнейшем индуцирует механизмы метаболической адаптации, за счет чего реализуется эффект прекондиционирования.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проведены на 40 белых лабораторных крысах обоих полов массой 180-220 г. Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа - группа интактных животных, вторая группа - с ишемией сетчатки (контроль), третья группа - с дистантным ишемическим прекондиционированием (ДИП); четвертая группа - с фармакологическим прекондиционированием рекомбинантным эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг массы тела животного.

Моделирование ишемии сетчатки производили путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента. Подтверждением формирования ишемии служило отсутствие глазного кровотока (побеление глаза лабораторного животного).

В третьей группе животных ДИП проводили в 1 день эксперимента 10-минутным пережатием бедренной артерии за 40 мин до моделирования ишемии сетчатки, после чего следовал 30-минутный эпизод реперфузии. ДИП проводили путем наложения жгута на проксимальную треть бедра. Контролем правильности наложения жгута служило отсутствие пульса на артерии голени.

В четвертой группе животных за 30 мин до моделирования патологии вводили рекомбинантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медико-биологического агентства г. Санкт-Петербург, Россия) внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг однократно. За 15 мин до моделирования ишемии осуществляли наркотизацию внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг массы тела животного.

О выраженности противоишемического эффекта судили по уровню микроциркуляции в сетчатке крыс при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США) на 72 час реперфузии после моделирования патологии. Для этого под наркозом животное фиксировали и производили регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке в десяти точках по окружности склеры.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Оценку микроциркуляции проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг массы тела животного, внутрибрюшинно) животное фиксировали и производили регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке в десяти точках по окружности склеры с шагом 1 мм. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 20 секунд в каждой точке. Из полученных десяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке в данной группе животных.

Результаты оценки уровня микроциркуляции в сетчатке крыс на 72 час реперфузии после моделирования ишемии сетчатки и ее коррекции рекомбинантным эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг представлены в таблице.

Таблица
Результаты оценки уровня микроциркуляции в сетчатке крыс на 72 час реперфузии (М±m), п.е. (перфузионные единицы)
Интактные (n=10) 743,9±5,0
Ишемия сетчатки (n=10) 353,3±11,7*
Коррекция ДИП (n=10) 638,5±15,8**
Коррекция эритропоэтином, 50 МЕ/кг (n=10) 724,0±4,1**
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных; ** - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией сетчатки

Уровень микроциркуляции в сетчатке интактных крыс составил 743,9±5,0 п.е. (перфузионных единиц). Уровень микроциркуляции после моделирования ишемии в группе контроля составил на 72 ч реперфузии 353,3±11,7 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных животных (р<0,001). На фоне коррекции патологии ДИП уровень микроциркуляции в сетчатке на 72 ч реперфузии достоверно возрастает до 638,5±15,8 п.е. (р<0,001) по сравнению с группой контроля. При коррекции ишемии сетчатки эритропоэтином уровень микроциркуляции в группе возрастает до 724,0±4,1 п.е. и достоверно отличается от значений в группе контроля (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной коррекции ишемических повреждений глаза в условиях модели ишемии сетчатки крыс рекомбинантным эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг массы тела животного при однократном системном введении.

Способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте, включающий моделирование патологии сетчатки и профилактика ее введением лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина, отличающийся тем, что рекомбинантный эритропоэтин вводят в качестве прекондиционирующего агента однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг, за 30 минут до моделирования патологии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к исследованиям в области ортопедии, и касается моделирования дефект-псевдоартроза большеберцовой кости.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии, и касается изучения вопросов коррекции тестикулярной дисфункции, индуцированной адаптацией организма к низким температурам.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии, и касается изучения вопросов коррекции тестикулярной дисфункции, индуцированной адаптацией организма к низким температурам.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано при воспроизведении метастатического процесса в печени.
Изобретение относится к медицине, в частности к вопросу изучения антиадгезивной активности противохолерных иммуноглобулинов и усиления ее для совершенствования специфической профилактики холеры.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной нефрологии, и может быть использовано для моделирования генерализованного амилоидоза у животных для изучения патогенеза, профилактики и лечения амилоидоза.

Изобретение относится к медицинской технике. Устройство содержит ударный механизм, выполненный в виде маятника с регулируемым усилием удара, содержащего две штанги с крепежными отверстиями с двумя ударными площадками, с продольным пазом, в котором размещена подвижная, фиксируемая на задаваемом радиусе грузовая платформа со стержнем, несущим сменные грузы, подвижную каретку для установки объекта повреждения, фрикционный тормоз, совмещенный с подвижной кареткой и выполненный в виде упругой разрезной втулки, охватывающей направляющую ось, вдоль которой перемещается каретка.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Осуществляют однократное тестирование белых крыс в установке «открытое поле».

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования в эксперименте интоксикации мелких лабораторных животных газообразными продуктами горения веществ с низкой и средней температурой горения на примере древесных опилок.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для изучения физиологических функций всасывания различных веществ и моторики в изолированном участке тонкого кишечника по Тири-Велла в эксперименте.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и к устройствам для пульсирующей подачи активного вещества в слезный канал. Устройство содержит трубку, вставленную в полость пробки для слезной точки.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для лечения дискомфорта глаз. Для лечения дискомфорта глаз применяют жидкую композицию, содержащую охлаждающий агент.
Изобретение относится к медицине и касается офтальмологической композиции для лечения сухости глаз, которая составлена в виде жидкого раствора на водной основе, содержащей ребамипид, меглумин и борную кислоту и/или фосфорную кислоту, где количество неорганического катиона, другого, чем ион гидроксония, в офтальмологической композиции составляет менее 15 мЭкв.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) где пиридиновые кольца А, В и С являются независимо незамещенными или замещенными одним или несколькими заместителями, которые независимо выбраны из группы, состоящей из: C1-6-алкила, галогеналкила, имеющего 1-6 атомов углерода, Hal или OR13; L1 и L2 независимо выбраны из остатков, имеющих формулу (а) или (b) где, по меньшей мере, один из L1 или L2 имеет формулу (b); R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, C1-6-алкила и фенила; R3 выбран из водорода и C1-6-алкила; R4, R5, R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и C1-6-алкила; R8, R9, R10 и R11 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и C1-6-алкила; R12 выбран из группы, состоящей из водорода и C1-6-алкила; R13 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6-алкила и фенила; р равно 1 или 2; q равно 0, 1 или 2 и Hal выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br, и I, которые могут быть использованы при лечении группы расстройств и нарушений, связанных с амилоидным белком.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой продукт в форме набора, содержащий первую композицию, включающую приблизительно от 5% до 10% вес.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и офтальмоонкологии, и может быть использовано для фотодинамической обработки склерального ложа после эндорезекции внутриглазного новообразования.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и офтальмоонкологии, и может быть использовано для комбинированной обработки склерального ложа после эндорезекции внутриглазного новообразования.

Изобретение относится к новым аминопроизводным структурной формулы (А), обладающим свойствами ингибитора изомеразной активности ретиноидного цикла. В формуле (А) Z представляет собой -С(R9)(R10)-С(R1)(R2)- или -X-C(R31)(R32); Х представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2- или -N(R30)-; G выбран из -C(R41)2-C(R41)2-R40, -C(R42)2-S-R40, -C(R42)2-SO-R40, -C(R42)2-SO2-R40 или -C(R42)2-O-R40; R40 выбран из -C(R16)(R17)(R18), С6-10арила; каждый R6, R19, R34, R42 независимо выбран из водорода или С1-С5алкила; каждый R1 и R2 независимо друг от друга выбран из водорода, галогена, С1-С5алкила или -OR6; или R1 и R2 вместе образуют оксо; каждый R3, R4, R30, R31, R32, R41 представляет собой водород; каждый R9 и R10 независимо друг от друга выбран из водорода, галогена, С1-С5алкила или -OR19; или R9 и R10 образуют оксо; или возможно R9 и R1 вместе образуют прямую связь для обеспечения двойной связи; или возможно R9 и R1 вместе образуют прямую связь и R10 и R2 вместе образуют прямую связь для обеспечения тройной связи; n равно 0 или 1; значения радикалов R11, R12, R16-R18, R23, R33 приведены в формуле изобретения.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы, включающий растворение исходного терапевтического компонента с избыточной вязкостью в фосфатном буфере, фильтрацию и стерилизацию до получения требуемого значения вязкости, отличающийся тем, что в качестве исходного терапевтического компонента используют 3% раствора нативной гиалуроновой кислоты, после растворения вводят 1% пептидный комплекс, состоящий из аминокислоты десмозин и следующих короткоцепочных пептидов-олигопептидов: GlyTrpIle; IleAspIle; PheArgPro; GlnHisHis; ProHisTyr; ThrTrpTrp; LysPheThr; LysArgMet; PheCysMet; IleIle; AspLysLys; TrpPro; GluThr, а стерилизацию проводят ионизирующим излучением в диапазоне радиационного излучения от 78×107 Мрад до 11×108 Мрад.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для лечения возрастной макулярной дистрофии. Для этого в альвеолярный отросток верхней и нижней челюсти в область корней зубов вводят мезенхимальные стволовые клетки.

Изобретение относится к области биотехнологии. Охарактеризовано применение терапевтически эффективного количества пептида GGF2, содержащего домен, подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный), в лечении или профилактике сердечной недостаточности у млекопитающего путем инъекции указанного пептида каждые 48 часов дозой, составляющей от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг.
Наверх