Способ получения анатоксина bordetella pertussis

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения бесклеточной коклюшной вакцины. Способ включает культивирование коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделение супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикацию его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбцию анатоксина на геле гидроокиси алюминия. В качестве продуцента коклюшного токсина используют штамм Bordetella pertussis №287. Детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток. Полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия. Изобретение позволяет повысить активность и снизить токсичность полученной бесклеточной коклюшной вакцины. 3 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для получения бесклеточной коклюшной вакцины.

Широкая иммунизация населения противококлюшными вакцинами привела к адаптации коклюшного микроба к сложившимся условиям, что послужило изменениям в его геноме, вследствие чего ген субъединицы А коклюшного токсина циркулирующих штаммов стал нести аллельный вариант ptx A1 (AJ245366), вместо ptx A2 (AJ245267) и ptx A4 (AJ245368), присущих вакцинным штаммам, что привело к возможности появления штаммов Bordetella pertussis с повышенной токсигенной активностью. Выделение этих штаммов и адаптация их для получения анатоксина B. pertussis может служить одним из способов повышения активности вакцинных препаратов.

Вследствие этого эффективность вакцинации населения коклюшными вакцинами, в том числе бесклеточными коклюшными вакцинами, снизилась, что привело к периодическим вспышкам заболевания. Поэтому повышение специфической активности бесклеточной коклюшной вакцины является актуальным и важным для ее совершенствования.

Известен способ получения анатоксина Bordetella pertussis путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта, выделение из него токсина осаждением 3-7%-ным раствором гексаметафосфата натрия в присутствии 0,002-0,006М растворов соляной, серной и трихлоруксусной кислот при pH=3,4-3,6; детоксикацию токсина проводят в 8-12%-ном растворе сахарозы.

(RU 1369042, A61К 39/10, 1995 г.)

Известен свежевыделенный штамм бактерий Bordetella pertussis - продуцент коклюшного токсина.

(RU 2407788 С1, 2010 г.)

Задачей изобретения является разработка способа получения бесклеточной коклюшной вакцины.

Техническим результатом заявленного способа является повышение активности и снижение токсичности полученной бесклеточной коклюшной вакцины.

Для достижения указанного технического результата в способе получения бесклеточной коклюшной вакцины путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикации его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбции анатоксина на геле гидроокиси алюминия, согласно изобретению в качестве продуцента коклюшного токсина используют свежевыделенный штамм Bordetella pertussis №287, при этом детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток, полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия.

Сущность изобретения поясняется на следующем примере.

Пример. Лиофилизированный свежевыделенный штамм Bordetella pertussis №287, культивируют на чашках Петри со средой Борде-Жангу в течение 2-3 суток, затем пересевают 10-15 типичных колоний на пробирки со средой Борде-Жангу. Смыв с пробирок 2-3 пассажа переносят в колбы Эрленмейера с полусинтетической жидкой питательной средой (100 мл) и анионообменной смолой, колбы помещают в шуттель аппарат и выращивают при r=36±1°C до конца экспоненциальной фазы. После морфологического контроля полученную маточную культуру пересевают в матрацы с синтетической жидкой питательной средой, добавляют анионообменную смолу и культивирование проводят в течение 120 часов в статических условиях при t=36±1°C.

После окончания культивирования надосадочную жидкость отделяют от микробных клеток центрифугированием при 12500 об/мин в течение 60 минут. Токсин из центрифугата отделяют осаждением с помощью 3-7% раствора гексаметафосфата натрия, 2н. серной, 2н. соляной, 2н. трихлоруксусной кислотами в изоэлектрической зоне pH=3,4-3,6, осадок отделяют центрифугированием при 12500 об/мин в течение одного часа, осторожно промывают дистиллированной водой, растворяют в 1/15М фосфатном буфере, гомогенизируют на электрическом гомогенизаторе в течение 12 секунд, затем добавляют сахарозу до концентрации 10% и выдерживают в холодильнике в течение одного часа при периодическом осторожном перемешивании. К смеси добавляют формалин до концентрации 0,4% и смесь помещают в термостат при 36,5°C. Обезвреживание проводят 19-20 суток, периодически осторожно перемешивая смесь. По окончании смесь помещают в холодильник. Полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5. Добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия (добавляют 1 мг геля гидроксида алюминия в 1 мл смеси (2 дозы для человека). Смесь шуттелируют на холоду в течение одного часа и переносят в холодильник.

Протективные свойства коклюшных вакцин исследовали на модели интрацеребрального заражения мышей, иммунизированных коклюшной вакциной, полученной заявленным способом, в сравнении с таковой, полученной известным способом. Результаты исследований приведены в таблице 1.

Как следует из данных таблицы 1, несмотря на очень высокую заражающую дозу - 3846 LD50 (по требованию ВОЗ не менее 100 LD50), все препараты бесклеточной коклюшной вакцины обладали выраженной протективной активностью (по требованию ВОЗ не менее 8 МЗЕ/мл), при этом активность препаратов, полученных заявленным способом (20,8 МЗЕ/мл), в 2 раза превосходила таковую, полученную известным способом (9,0 МЗЕ/мл).

Результаты изучения безопасности бесклеточных коклюшных вакцин, полученных известным и заявленным способом, представлены в таблице 2.

Как следует из данных таблицы 2, все исследуемые препараты бесклеточных коклюшных вакцин были безопасны, поскольку по требованиям ВОЗ безопасными считаются препараты, после введения которых прирост массы тела мышей через 7 дней составляет не менее 60% по отношению к контролю.

Исследование сенсибилизирующих свойств препаратов проводили в опытах изучения их сенсибилизирующего действия к гистамину в опытах на мышах (таблица 3).

Как следует из данных таблицы 3, все препараты бесклеточных коклюшных вакцин не сенсибилизировали мышей к гистамину ни в одной, ни в двух иммунизирующих дозах для человека, что также свидетельствует о низких сенсибилизирующих свойствах этих препаратов.

Полученные данные свидетельствуют о высокой протективной активности препарата, полученного заявляемым способом, превышающей в 2 раза таковую препаратов, полученных известным способом. Данные препараты были нетоксичны в иммунизирующей дозе для человека и не сенсибилизировали мышей к гистамину в дозах, более 2 доз для человека.

Преимущество изобретения в том, что разработан способ получения высокоактивной и малотоксичной бесклеточной коклюшной вакцины, превышающей в 2 раза по протективной активности препараты, полученные известным способом. Способ может быть использован в практике здравоохранения для получения бесклеточной коклюшной вакцины для профилактики коклюшной инфекции.

Способ получения бесклеточной коклюшной вакцины путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикации его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбции анатоксина на геле гидроокиси алюминия, отличающийся тем, что в качестве продуцента коклюшного токсина используют штамм Bordetella pertussis № 287, при этом детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток, полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов Bordetella pertussis № 203 и № 305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения коклюшного компонента комплексных вакцин. Представленный способ включает выращивание культуры B.
Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота содержит поливалентный анатоксин против клостридиозов овец, культуральную жидкость штамма Escherichia coli А-5 с содержанием микробных клеток 7,0·108-1·109 КОЕ/мл и культуральную жидкость штамма Escherichia coli Б-5 с содержанием микробных клеток 7,0·108-1·109 КОЕ/мл в соотношении 1:1:1.
Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается способа изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота.

Изобретение относится к технологии производства медицинских иммунобиологических препаратов и касается способа получения холерогена-анатоксина. Способ включает выделение холерогена-анатоксина методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по мол.
Изобретение касается способа получения бруцеллезного L-антигена. Представленный способ включает стадии.
Представленная группа изобретений касается комбинированной вакцины, ее применения и способа получения. Охарактеризованная вакцина включает смесь антигенов для защиты от таких заболеваний, как дифтерия (D), столбняк (Т), ацеллюлярный коклюш (аР) и инфекций, вызываемых Haemophilus influenzae (Hib b) и полиовирусами (IPV).
Представленная группа изобретений касается комбинированной вакцины, ее применения и способа получения. Охарактеризованная вакцина включает смесь антигенов для защиты от таких заболеваний, как дифтерия (D), столбняк (Т), ацеллюлярный коклюш (аР) и инфекций, вызываемых Haemophilus influenzae (Hib b) и полиовирусами (IPV).
Группа изобретений относится к ветеринарии и медицине, в частности к получению и использованию биопрепаратов для иммунотерапии экопатологий. Группа изобретений включает получение белкового антигена из смеси анатоксинов из трех энтеропатогенных вирулентных штаммов возбудителя эшерихиоза телят E.
Изобретение относится к ветеринарии и медицине, а именно к профилактике и лечению бруцеллезной инфекции. Способ экстренной профилактики и лечения бруцеллеза, включающий одновременное внутримышечное введение антибиотикорезистентного варианта вакцинного штамма бруцелл и противобруцеллезного препарата, отличающийся тем, что в качестве специфического препарата используют ципролетрезистентный вариант штамма бруцелл В.abortus 82 CR в дозе 1.109 м.к., а в качестве антибактериального препарата используют ципрофлоксацин (ципролет), который вводят в дозе 1 и 3 мл/кг 2 раза в день в течение 5-7 дней.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Изобретение относится к способу получения антигенного эритроцитарного диагностикума для обнаружения антител к антигенам возбудителей сапа и мелиоидоза. Указанный способ включает стерилизацию культуры авирулентного штамма Burkholderia pseudomallei 107, суспендирование высушенной бактериальной массы в 0,15 М растворе NaCl, обработку полученной суспензии ультразвуком, центрифугирование взвеси разрушенных клеток с последующим отделением супернатанта и высаливание из него гликопротеиновой фракции, на основе которой получают диагностикум. Изобретение позволяет определять в реакции непрямой гемагглютинации специфические антитела в ранние сроки как сапной, так и мелиоидозной инфекций. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения конъюгата капсульного полисахарида Haemophilus influenzae тип b (Hib) с антигенами. Представленный способ включает получение смеси столбнячного и дифтерийного анатоксинов, адсорбированных на геле гидроокиси или фосфата алюминия, которую используют в качестве антигена. Указанную смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, полученный осадок связывают карбодиимидным способом через дигидразид адипиновой кислоты с 3 мг капсульного полисахарида Hib, растворенного в 1 мл дистиллированной воды. Конъюгат отмывают 0,9% раствором натрия хлорида при центрифугировании 3000 об/мин в течение 5 мин и доводят 0,9% раствором натрия хлорида до объема 100 мл. Охарактеризованный способ позволяет исключить лиофилизацию получаемых конъюгатов и тем самым снизить антигенную нагрузку на иммунизируемый организм. 1 табл.
Изобретение относится к области ветеринарии к диагностике инфекционных болезней, а именно бруцеллеза. Способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки включает однократное введение смеси антигена (100 млрд м.к. убитой культуры штамма В.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. На 18-20-й день проводят пробное крововзятие, а двукратное взятие крови от каждого животного-продуцента из расчета 16-20 мл крови на 1 кг живой массы или производственное кровопускание производят на 24-30-й день после гипериммунизации. Сыворотку от каждого животного-продуцента сливают отдельно в стерильные сосуды и консервируют добавлением 4%-ной сухой борной кислоты, после чего прогревают в водяной бане при температуре 54-56°C в течение 40 минут при постоянном перемешивании, а затем ставят на 10 дней в холодильник при температуре 2-8°C. Затем пробу сыворотки крови подвергают проверке на стерильность, активность и специфичность. Сыворотка должна быть стерильной и иметь титр в РА не ниже 1000 МЕ, в РСК не ниже 1:20. Техническим результатом является снижение трудоемкости процесса и эпидемическая безопасность. 2 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и биотехнологии. Иммуногенные композиции, которые содержат вирус собачьего гриппа и собачий респираторный коронавирус, а также они могут дополнительно содержать Bordetella bronchiseptica, пертактин, вирус собачьего парагриппа и собачий аденовирус серотипа 2 являются эффективными для лечения или предупреждения комплекса инфекционных респираторных заболеваний собак. При использовании иммуногенных композиций не наблюдается иммунологически негативное взаимодействие между различными вирусными и бактериальными антигенами. 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм Pseudomonas aeruginosa O11 депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ под наименованием «Pseudomonas aeruginosa №10» и регистрационным номером «№10-ДЕП». Штамм имеет высокую длительно сохраняющуюся иммуногенную активность, в связи с чем может быть использован для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa №34-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе предложенного штамма титр антител к соматическому антигену О1 Pseudomonas aeruginosa в сыворотке крови кроликов и свиней через 14 дней после последней иммунизации составляет соответственно 1:819,2 и 1:1024. 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa №25-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе предложенного штамма титр антител к соматическому антигену О19 Pseudomonas aeruginosa в сыворотке крови кроликов и свиней через 14 дней после последней иммунизации составляет соответственно 1:512 и 1:716,8. 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм Pseudomonas aeruginosa №1 КВЛ-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе предложенного штамма титр антител к соматическому антигену О3 Pseudomonas aeruginosa в сыворотке крови кроликов и свиней через 14 дней после последней иммунизации составляет соответственно 1:768 и 1:1024. 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота. Охарактеризованная вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей эшерихиоза Е. coli, стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и стафилококкоза Staphylococcus aureus в равных соотношениях, полученных путем отбора патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, а также формалин и гидроокись алюминия. Представленное изобретение обладает высокой иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет и не вызывает поствакцинальных осложнений. 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa №6-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе предложенного штамма титр антител к соматическому антигену О6 Pseudomonas aeruginosa в сыворотке крови кроликов и свиней через 14 дней после последней иммунизации составляет соответственно 1:819,2 и 1:1024. 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения бесклеточной коклюшной вакцины. Способ включает культивирование коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделение супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикацию его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбцию анатоксина на геле гидроокиси алюминия. В качестве продуцента коклюшного токсина используют штамм Bordetella pertussis №287. Детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток. Полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия. Изобретение позволяет повысить активность и снизить токсичность полученной бесклеточной коклюшной вакцины. 3 табл., 1 пр.

Наверх