Способ получения модели функционально-неактивных макрофагов в условиях "in vitro"

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано получения функционально неактивных макрофагов из перитонеального экссудата мыши. Для этого используют функционально-активные воспалительные макрофаги, полученные при введении в брюшную полость животного воспалительного агента, в качестве которого используют крахмал или протеозо-пептон. Причем суспензию крахмала предварительно доводят до кипения и немедленно замораживают. Перед применением размораживают, гомогенизируют и ресуспендируют для внутрибрюшинного введения. Полученные перитонеальные макрофаги подвергают культивированию в течение 96 часов. Использование данного способа позволяет получить в условиях «in vitro» функционально неактивных или покоящихся (resting) макрофагов, близких по своим свойствам к резидентным, и способ может быть использован в скрининговых работах для выявления иммуномодулирующих свойств у различных по происхождению агентов. 1 табл.

 

Макрофаг является ключевой клеткой в инициации и развитии иммунного ответа. Именно с его открытием связано начало развития и формирования иммунологии как науки. Макрофаг определяет стратегию организма по отношению к его реагированию на тот или иной антиген. В настоящее время известно, что действие исследуемого препарата на макрофаги зависит от его изначального функционального состояния. Последнее может быть определяющим в решении вопроса о наличии или отсутствии у него тех или иных иммуномодулирующих свойств. Это состояние влияет не только на величину исследуемой у макрофага активности, но и на ее «знак» (активация или депрессия). В связи с этим крайне важным является выбор тест-системы для выявления тех или иных свойств у предполагаемого иммуномодулятора. В большинстве случаев для таких исследований используются резидентные перитонеальные макрофаги. Однако давняя история их использования выявила у них ряд недостатков. Во-первых, из брюшной полости одной мыши их можно выделить всего от 500 тысяч до 1 миллиона (для проведения одного теста на фагоцитоз или противоопухолевую активность этого иногда крайне недостаточно). Положение значительно осложняется, когда эксперимент проводится в стерильных условиях: в среднем на один эксперимент порой уходит от 7 до 20 мышей, поскольку это становится затратным и трудоемким; во-вторых, резидентные макрофаги фенотипически не отличаются хорошими функциональными способностями, например: а) способностью к фагоцитозу довольно крупных тест-частиц, поэтому исследователи начинают использовать в экспериментах очень маленькие частицы, которые порой визуально трудно идентифицировать, что приводит к увеличению трудоемкости и некомфортности работы с ними; б) неспособностью отвечать на некоторые общеизвестные активаторы макрофагов, например MAF (макрофаг активирующий фактор). Еще большие трудности встречает экспериментатор при работе по выделению резидентных макрофагов печени и легких (добавляется кропотливая препаративная работа по выделению вначале самого органа, а затем процедура выделения из них соответствующих клеток с использованием ферментных препаратов); в-третьих, не исключено, что выделенные резидентные макрофаги в организме животного уже находились в условиях измененной функциональной активности (латентная инфекция или продромальный период). Учитывая эти недостатки резидентных макрофагов, большинство исследователей используют в своих экспериментах элиситированные с помощью различных воспалительных агентов (протеозо-пептон, тиогликолят натрия, минеральное масло, крахмал, акриламидные бусы, вакцину БЦЖ и так далее) перитонеальные макрофаги, иначе говоря, они прибегают к искусственной стимуляции притока в брюшную полость большого количества функционально активных макрофагов.

Безусловно, это позволяет экспериментатору сразу решить две задачи: а) получить с одной мыши в несколько раз большее количество макрофагов; б) получить макрофаги с выраженной функциональной способностью. Однако сегодня накоплено достаточно данных, которые позволяют сделать вывод о том, что все перечисленные воспалительные агенты изменяют функциональное равновесие макрофага, а полученные с их использованием экспериментальные данные требуют переосмысления. В настоящий момент самым идеальным способом для получения функционально-интактных макрофагов является выращивание последних из моноцитов крови в присутствии GM-CSF (Andreesen R, Scheibenbogen C, Brugger W, Krause S, Meerpohl HG, Leser HG, Engler H, Löhr GW. Adoptive transfer of tumor cytotoxic macrophages generated in vitro from circulating blood monocytes: a new approach to cancer immunotherapy. Cancer Res. 1990 Dec 1; 50(23):7450-6). Однако этот метод неплохо зарекомендовал себя только в работе с моноцитами крови человека, выделить достаточное количество моноцитов от экспериментальных животных проблематично и крайне трудоемко, и поэтому этот метод не нашел своего широкого применения в работе с экспериментальными животными. Использование моноцитов крови человека также является трудоемким и затратным. Кроме того, дифференцировка моноцитов в макрофаги требует большей длительности культивирования: 7-9 дней.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что функционально неактивные макрофаги получают из воспалительных макрофагов, элиситированных в брюшную полость животного введением либо гранул крахмала, либо раствора протеозо-пептона, подвергая их процессу длительного (96 часов) культивирования. Последнее позволяет функционально разбалансированному макрофагу катаболизировать воспалительный раздражитель и вновь приобрести функциональные характеристики, предшествующие моменту введения биодеградабельного ирританта.

Предлагаемый способ предусматривает несколько стадий.

В основе способа получения перитонеальных макрофагов лежит давно известная общепринятая методика (Hogg N, Parish CR. Surface antigens of the murine cytostatic peritoneal macrophage. Immunology. 1980 Sep; 41(1):187-93). По этой методике в качестве элиситирующего агента используют 4% картофельный крахмал (прокипяченный и автоклавированный), который вводится в брюшную полость мыши в объеме 1 мл. В предлагаемом способе крахмал лишь доводят (на 3-5 секунд) до состояния кипения, не прибегая к автоклавированию, - это не позволяет раствору крахмала превращаться в гель, который проявляет значительно меньшие ирритантные свойства. Добавленная стадия быстрого замораживания (-20°C) имеет целью приостановить процесс гелеобразования. Перед непосредственным применением раствор крахмала подвергают гомогенизации (в стеклянном коническом гомогенизаторе), для того чтобы гранулы крахмала стали однородными по размеру и свободно проходили через иглу шприца.

1) Приготовление 4% суспензии крахмала.

В коническую термостойкую колбу заливают 250 мл забуференного физиологического раствора и доводят его до кипения. В отдельном стаканчике с 50 мл забуференного раствора (при комнатной температуре) готовят суспензию крахмала, предназначенную для получения 4% раствора крахмала в 300 миллилитрах забуференного раствора. Затем при постоянном помешивании приготовленную суспензию выливают в колбу с кипящим раствором. Дождавшись первых признаков кипения (образование пузырей сопровождающиеся характерным «потрескивающим» звуком), быстро разливают по флакончикам (по 10 мл), поместив немедленно последние в морозильную камеру (-20°C), чтобы избежать процесса гелеобразования. Использовать такую суспензию лучше через несколько дней, но можно и через сутки.

2) Получение элиситированных перитонеальных макрофагов.

Размороженную суспензию 4% крахмала гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе до тех пор, пока суспензия свободно не будет ресуспендироваться шприцем с насаженной иглой для внутримышечного введения. Затем по 1 мл такой суспензии быстро (гранулы крахмала быстро оседают) вводят внутрибрюшинно мыши с весом примерно 25 грамм и более. После введения суспензии необходимо помассировать брюшко в течение нескольких секунд. Через 4 суток мышь забивают декапитацией, чтобы обескровить тушку. Затем с области брюшка снимают шкурку. Далее шприцем с объемом в 10 мл через мышцы бедра вводят очень холодный забуференный физиологический раствор (либо раствор любой питательной среды для культивирования клеток). После 1 минуты интенсивного массирования (взбалтывания) наполненного раствором брюшка пальцем руки начинают откачивать жидкость, предварительно введя в брюшную полость 1-2 мл воздуха, вводя иглу вдоль мышц бедра. Для выделения большего количества макрофагов желательно повторить эту процедуру дважды. Откаченную жидкость заливают в центрифужные пробирки и откручивают при 1000 об/мин в течение 7 минут. Такой способ позволяет получить от одной мыши от 15 до 25 миллионов макрофагов, а это в несколько раз превышает их количество, получаемое с помощью вышеупомянутой оригинальной методики.

3) Для получения перитонеальных макрофагов элиситацией раствором протеозо-пептона за 4 дня до выделения из брюшной полости перитонеальных макрофагов мыши внутрибрюшинно вводят 1 мл стерильного 10% раствора протеозо-пептона (Difco). Далее по вышеописанной методике.

4) Все тесты проводят в 24-луночных планшетах фирмы «Linbro». Клетки перитонеального эксудата в концентрации 800 тысяч в 1 миллилитре (именно такая плотность клеток является оптимальной для процесса распластывания макрофага по поверхности лунки от воздействия активирующего агента) ресуспендируют в культуральной среде RPMI 1640 с добавлением: 5% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 2 тМ L-глютамина, 10 mM HEPES-буфера, 5×10-5 M 2-меркаптоэтанола и 80 мкг/мл гентамицина. В каждую лунку заливают по 1 мл суспензии. После чего закрывают крышкой и оставляют в ламинаре (не сдвигая с места) на 10 минут для того, чтобы макрофаги равномерно осели и распределились по поверхности лунки (равномерность распределения клеток контролировать на инвертированном микроскопе). Основным критерием должно быть наличие между рядом расположенными и уже распластанными макрофагами расстояния, примерно равного диаметру одной клетки (около 15 микрон), так как через несколько часов эти макрофаги, распластываясь, будут увеличиваться в размерах. Через 60 минут инкубирования в инкубаторе с 5% CO2 и температуре 37°C промывают каждую лунку 2 мл теплой среды RPMI 1640 для удаления неприлипаюших клеток. Затем лунки вновь заливают полной культуральной средой и планшет вновь помещают в CO2-инкубатор на 4 суток. Только по прошествии этого времени можно приступать к исследованию влияния какого-либо агента на функциональную активность макрофага, ибо этого времени хватает ему, чтобы полностью метаболизировать гранулы крахмала и вернуться в исходное функциональное состояние.

В качестве испытуемого вещества авторы использовали известный активатор многих функций макрофага - МАФ (макрофаг-активирующий фактор), действующим началом которого является гамма-интерферон (Yoshimura Fukazawa, Keiko Kagaya, Hiroshi Miura, Takako Shinoda et al. Biological and biochemical characterization of macrophage activating factor (MAF) in murine lymphocytes: physicochemical similarity of MAF to gamma interferon (INF-γ). Microbiol. Immunol. V.28 (6), 691-702, 1984). Последний получали, используя общепринятую методику (Satoshi Muto, Akihito Yamasaki, Naoyuki Yamamoto and Hidetaka Yuki. Rapid effect of lymphokines on macrophage activities determined by measuring chemiluminescence. Chem. Pharm. Bull. - V.33. - Р.4041-4044, 1985). Время обработки монослоя макрофагов 10% раствором МАФ составляло 48 часов. В качестве исследуемых функций взяли Fc-зависимый фагоцитоз эритроцитов барана, определямый спектрофотометрическим способом (Rummage J.A and Leu R.W Photometric microassay for quantitation of macrophage Fc and C3b receptor function // J. Immunol. Meth. http://-1985.-v.77. - P.155-163) и продукцию супероксидного радикала, которую оценивали с помощью реакции восстановления п-нитросинего тетразолия (Amano D., Kagosaki G., Usui Т. Inhibitory effects of superoxide dismutases ans various other proteins on the nitroblue tetrasolium reduction by phagizitizing guinea pig polymorphonuclear leucocytes. Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1975. - V.1. - Р.272-279).

Полученные результаты показали следующее.

Таблица 1.

Макрофаги, элиситированные протеозо-пептоном Макрофаги, элиситированные крахмалом
Показатель 48 часов 144 часа 48 часов 144 часа
Реакция восстановления p-нитросинего тетразолия ↓ 16.7% (P<0,05) ↑ 60.5% (P<0,01) ↓ 65% (P<0,01) ↑ 14.9% (P<0,05)
Fc-зависимый фагоцитоз ↓ 17.2% (P<0,05) ↑ 19.1% (Р<0,05) ↓ 38.1% (P<0,01) ↑ 70.8% (P<0,01)

Через 48 часов экспозиции с MAF свежевыделенных элиситированных макрофагов отмечалась достоверная (P<0.01) супрессия Fc-зависимого фагоцитоза на 38% по сравнению с контролем, с такой же достоверностью проявлялась супрессия продукции супероксидного радикала, достигавшая разницы с контролем в 47%. По прошествии 96 часов интактного культивирования был добавлен 10% MAF (конечная концентрация). После экспозиции с активатором вновь были определены величины исследуемых ранее функций. Результаты экспериментов выявили у MAF уже активирующие свойства на Fc-зависимый фагоцитоз и продукцию супероксидного радикала с достоверностью P<0,01.

Поскольку процесс прилипания иногда может привносить в функциональное состояние макрофага свои коррективы, например отмечено значительное снижение базальной (не стимулированной) продукции супероксидного радикала у макрофагов, подвергшихся процессу длительного культивирования, то предлагаемый способ следует проводить в планшетах с гидрофобными свойствами поверхности пластика.

Основными преимуществами такого способа получения функционально неактивных макрофагов являются:

а) дешевизна;

б) снижение трудоемкости;

в) способность полученных макрофагов проявлять значительно большее число активностей по сравнению с резидентными перитонеальными макрофагами, что указывает на высокую степень их дифференцировки;

г) количество полученных с одной мыши функционально интактных макрофагов в несколько десятков раз превышает количество резидентных макрофагов;

д) предлагаемая модель позволяет более объективно и дифференцированно (в динамике процесса трансформации функционального состояния) подойти к исследованию свойств различных иммуномодулирующих агентов.

Способ получения функционально неактивных макрофагов из перитонеального экссудата мыши, отличающийся тем, что используют функционально-активные воспалительные макрофаги, полученные при введении в брюшную полость животного воспалительного агента, в качестве которого используют крахмал или протеозо-пептон, причем суспензию крахмала предварительно доводят до кипения и немедленно замораживают, а перед применением размораживают, гомогенизируют и ресуспендируют для внутрибрюшинного введения; полученные перитонеальные макрофаги подвергают культивированию в течение 96 часов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и описывает композицию ферментных чернил, содержащую фермент, способный избирательно распознавать глюкозу в пробе крови, медиатор и первый и второй пирогенный диоксид кремния, в которой первый пирогенный диоксид кремния имеет удельную поверхность по БЭТ в диапазоне от приблизительно 130 до 170 м2/г и содержание углерода от приблизительно 0,8 до приблизительно 1,23% вес., а второй пирогенный диоксид кремния имеет удельную поверхность по БЭТ в диапазоне от приблизительно 270 до 330 м2/г и содержание углерода от приблизительно 1,4 до приблизительно 2,6% вес.

Изобретение относится к медицине, точнее к хирургии, и может найти применение при трансплантации трупной печени. Изобретение представляет способ оценки донорской печени, включающий выявление в ней наличия и выраженности жировой дистрофии, фиброза, воспалительных явлений и ишемических повреждений, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют морфометрию печени, для чего из края нативной печени до ее забора из тела донора и после завершения периода консервации печени и запуска кровотока в ней у реципиента берут биоптаты печени, обрабатывают их CD 31, измеряют удельные площади синусоидов в донорской печени после запуска кровотока по сравнению с удельной площадью синусоидов в нативной донорской печени не менее чем в 2 раза судят о нарушении внутрипеченочной микроциркуляции у реципиента.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и предназначено для определения инсулинорезистентности у пациентов с нормальной концентрацией глюкозы крови.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения степени тяжести симфизиопатии у беременных во II и III триместрах. Сущность способа состоит в том, что у беременных во II и III триместрах определяют диастаз лонного сочленения с помощью УЗИ, определяют в сыворотке крови магний общий в ммоль/л, суточную экскрецию кальция с мочой в ммоль/сутки, а также выявляют жалобы на боли в области лонного сочленения и пояснично-крестцовом отделе позвоночника, парестезии, судорожные подергивания и сведения икроножных мышц, болезненности при пальпации лонного и/или крестцово-подвздошного сочленения и при определенных значениях указанных параметров определяют легкую, среднюю и тяжелую степени симфизиопатии.
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу отбора биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных. Способ включает сбор мочи после естественного мочеиспускания животного в стерильную емкость.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования риска прогрессирования периферических витреохориоретинальных дистрофий (ПВХРД) на парном глазу после операций по поводу регматогенной отслойки сетчатки (РОС).
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования риска прогрессирования периферических витреохориоретинальных дистрофий (ПВХРД) на парном глазу после операций по поводу регматогенной отслойки сетчатки (РОС).

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к молекулярной биологии, микробиологии и хирургии, и может быть использовано в диагностических целях для идентификации синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa в клиническом биоматериале.

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики хронического простатита с помощью выявления дисфункции регионального микрососудистого эндотелия.
Изобретение относится к области медицины, к клинической лабораторной диагностике и может найти применение в клинико-диагностических лабораториях инфекционных стационаров. Для эффективной терапии и предотвращения развития неврологического дефицита необходима своевременная и как можно более ранняя диагностика заболевания с верификацией его природы. Ранняя дифференциальная диагностика вирусной или бактериальной природы заболевания способствует назначению адекватной стартовой этиотропной терапии, приводит к снижению генерализации процесса, эрадикации возбудителя, санации цереброспинальной жидкости и улучшению исхода болезни. Предложен принципиально новый способ дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных менингитов, обеспечивающий точность и экспрессность за счет определения суммарной концентрации гаптоглобина в цереброспинальной жидкости. Результат достигается тем, что в ликворе, полученном при диагностической люмбальной пункции в остром периоде заболевания, дополнительно в течение 1 часа определяют суммарную концентрацию гаптоглобина методом количественной иммунотурбидиметрии и при концентрации, равной или менее 0,7 мг/дл, диагностируют вирусный менингит, при концентрации свыше 0,7 мг/дл - бактериальный менингит. Данный способ обеспечивает быстрое и точное определение вирусной или бактериальной природы менингита на ранней стадии заболевания и назначение адекватной этиотропной стартовой терапии и может найти широкое применение в клинико-диагностических лабораториях инфекционных стационаров. 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения острого и хронического типов лимфобластного лейкоза. Для этого выделяют лимфоциты крови, определяют поверхностный потенциал и модуль упругости не менее 15 клеток из каждой пробы на атомно-силовом микроскопе и оценивают индекс торможения миграции лимфоцитов с митогеном в сравнении со спонтанной (без митогена) миграцией. При повышении значения поверхностного потенциала клетки от -30,7±0,7 до -28,8±2,1 mV, снижении модуля упругости от 1,9±0,2 до 2,8±0,1 µПа и значении индекса торможения миграции лимфоцитов в интервале от 15 до 95% прогнозируют неблагоприятный исход течения острого типа лимфобластного лейкоза. При повышении значения поверхностного потенциала клетки от -9,5±0,7 до -6,7±0,2 mV, повышении модуля упругости от 7,8±0,5 до 9,6±0,3 µПа и значении индекса торможения миграции лимфоцитов в интервале 38-65% прогнозируют неблагоприятный исход течения хронического типа лимфобластного лейкоза. Использование данного способа позволяет прогнозировать течение заболевания острого и хронического типов лимфобластного лейкоза, развитие их рецидивов во время стадии ремиссии, а также скорректировать длительную терапию у больных хроническим лимфобластным лейкозом. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к способу идентификации живых и мертвых организмов мезозоопланктона в морских пробах, который включает отбор пробы, крашение организмов соответствующими красителями, визуальную оценку интенсивности окраски особей под микроскопом, которую выполняют одновременно с микрофотосъемкой организмов, используя настройки фотокамеры в ручном режиме, сохраняя эти настройки неизменными на протяжении фотосъемки по крайней мере одной пробы, после чего в полученных изображениях, применяя редактор растровой графики, например программный пакет Adobe Photoshop, измеряют средние для каждой особи цветовые и яркостные характеристики и относят особи к классу живых или мертвых, осуществляя дискриминантный анализ измеренных цифровых величин.

Изобретение относится к области измерительной техники и может быть использовано для анализа конкретного компонента, содержащегося в образце, в частности уровня глюкозы в крови. Заявлено анализирующее устройство или способ анализа, посредством которых могут быть получены достоверные результаты анализа даже в условиях, когда окружающая температура изменяется, при этом избавляя пользователя от неудобств. Анализирующее устройство (1) снабжено средством (13) определения, которое определяет, находится ли окружающая температура, измеренная с помощью средства (6) измерения температуры, в пределах предварительно определенного температурного диапазона. Средство (13) определения выполнено таким образом, чтобы определить, находится ли окружающая температура в пределах предварительно определенного температурного диапазона, даже в условиях, когда информация, относящаяся к намеченному веществу в образце, не может быть получена из анализирующего устройства. Технический результат - повышение точности и достоверности данных анализа. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 14 ил.
Изобретение относится к измерительной технике и представляет собой способ определения нано-микропримесей, включающий использование эмульсии из капель жидкого кристалла, диспергированных в воде, способной изменять конфигурацию капель жидкого кристалла при наличии в составе эмульсии посторонних примесей, измерение изменения интенсивности света, рассеянного эмульсией, по которому судят о наличии и концентрации искомых примесей, отличающийся тем что в качестве жидкого кристалла выбирают соединения, способные к транс-цис-переходу под действием актиничного света, и перед измерением изменения интенсивности света дополнительно освещают эмульсию актиничным светом, обеспечивая тем самым изменение конфигурации в каплях жидкого кристалла за счет транс-цис-перехода в молекулах жидкого кристалла. Изобретение обеспечивает повышение чувствительности способа определения нано-микропримесей.
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицине труда и описывает способ оценки воздействия производственного микробиологического фактора на медицинских сестер крупных многопрофильных детских больниц. Способ включает посев мазка со слизистой оболочки носа на мясопептонный агар, инкубацию при 37°С в течение 24 часов, определение общего количества микроорганизмов путем подсчета выросших колоний, определение общей микробной обсемененности исследуемого материала, выраженной в КОЕ/мл. При значении общей микробной обсемененности более 10*3 КОЕ/мл воздействие производственного микробиологического фактора на медицинскую сестру оценивают как вредное, 10*3 КОЕ/мл и менее - как допустимое. Изобретение может быть использовано для диагностики воздействия производственного микробиологического фактора на медицинских сестер крупных многопрофильных детских больниц, не работающих с инфицированным материалом, зараженным материалом или материалом, подозрительным на заражение микроорганизмами 3-4 группы патогенности, и грибами. 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных измеряют титр антител к цитомегаловирусу, содержание перекисей жирных кислот и снижение активности глутатионредуктазы, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 определяют нарастание перекисей жирных кислот и снижение активности глутатионредуктазы, после чего вычисляют значение дискриминантной функции по формуле DФ=(+0.143×ПОЛ)+(-2.825×глутатионредуктаза), и при DФ более (+2.60) создается угроза формирования гемической анемии. Способ позволяет оценить угрозу формирования гемической анемии вследствие повреждения клеточных мембран и накопления в них перекисей жирных кислот. 1 табл., 2 ил.

Изобретение относится к ортопедии и представляет собой способ диагностики степени тяжести острых послеоперационных гемосиновитов коленного сустава. Согласно изобретению для определения степени тяжести острых послеоперационных гемосиновитов коленного сустава используется микроскопическое исследование гемосиновиальной жидкости с учетом в синовиоцитограмме значения цитоза, содержания нейтрофилов, лимфоцитов и синовиоцитов, что позволяет диагностировать легкую, среднюю или тяжелую степень острого гемосиновита. Изобретение обеспечивает повышение точности и упрощение способа диагностики. 5 табл., 3 пр.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и представляет собой способ доклинических исследований кардиотропных антиаритмических средств, включающий определение биоэлектрических параметров в изолированных многоклеточных перфузируемых препаратах и оценку изменения длительности потенциалов действия, отличающийся тем, что в качестве изолированных многоклеточных перфузируемых препаратов используют миокард легочных вен крысы, причем изменения параметров получают в трех режимах работы многоклеточных препаратов, дополнительно оценивают потенциал покоя и по изменениям ДПД 90%, отношения ДПД 50%/ДПД 90%, скорости спонтанного сдвига потенциала покоя, наиболее положительного значения мембранного потенциала в покоящемся препарате, частоты следования пачек спонтанной активности, частоты и вариабельности следования спонтанных ПД в пачке, количества и интенсивности постдеполяризаций, а также по смещению мембранного потенциала, соответствующего началу пачечной активности, оценивают признаки антиаритмического или аритмогенного действия. Изобретение обеспечивает повышение надежности прогнозирования антиаритмического действия потенциальных фармакологических средств и сокращение длительности экспериментальной фазы. 3 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к трансфузиологии, и предназначено для определения качественных показателей эритроцитсодержащих сред, находящихся на хранении в банке крови. Сущность способа: в процессе их хранения путём сканирования с помощью атомно-силового микроскопа сухих мазков данных компонентов крови и определения модуля Юнга мембран эритроцитов исследуемых эритроцитных сред на любом этапе их хранения и сопоставления полученных результатов со значениями МЮ, полученными с помощью предложенной формулы МЮ=1,81+0,04*х, где МЮ - модуль Юнга [КРа]; х - срок хранения эритроцитсодержащей среды [сутки], описывающей функцию линейной регрессии средних значений МЮ эритроцитов с течением времени до 35 суток при хранении эритроцитсодержащих сред при стандартных условиях - Т=4 °С. Предложенный способ может быть использован отделами технического контроля службы крови для скрининга эритроцитных сред с целью формирования выводов об их пригодности для клинического использования в процессе их хранения. 6 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано получения функционально неактивных макрофагов из перитонеального экссудата мыши. Для этого используют функционально-активные воспалительные макрофаги, полученные при введении в брюшную полость животного воспалительного агента, в качестве которого используют крахмал или протеозо-пептон. Причем суспензию крахмала предварительно доводят до кипения и немедленно замораживают. Перед применением размораживают, гомогенизируют и ресуспендируют для внутрибрюшинного введения. Полученные перитонеальные макрофаги подвергают культивированию в течение 96 часов. Использование данного способа позволяет получить в условиях «in vitro» функционально неактивных или покоящихся макрофагов, близких по своим свойствам к резидентным, и способ может быть использован в скрининговых работах для выявления иммуномодулирующих свойств у различных по происхождению агентов. 1 табл.

Наверх