Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней erysipelothrix rhuisipathie



Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней erysipelothrix rhuisipathie
Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней erysipelothrix rhuisipathie
Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней erysipelothrix rhuisipathie

 


Владельцы патента RU 2541454:

Институт биологии южных морей им. А.О. Ковалевского (RU)

Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie, относится к общей биотехнологии и ветеринарной микробиологии и может быть использована для приготовления микробиологических питательных сред для наращивания биомассы штамма возбудителя рожи свиней.

В питательной среде в качестве источника азотного питания используют смесь рыбного автолизата и щелочного мидийного гидролизата при следующем соотношении компонентов:

щелочной мидийный гидролизат 20-50% пептон ферментативний 1% калий фосфорнокислый 0,3% натрий фосфорнокислый 1,8% рыбный автолизат остальное.

 

Изобретение относится к общей биотехнологии и ветеринарной микробиологии и может быть использовано для приготовления микробиологических питательных сред для наращивания биомассы штамма возбудителя рожи свиней.

Возбудитель рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie является культурой, требовательной к условиям питания. При активации штамма после длительного хранения большое значение имеет скорость наращивания биомассы. Как правило, для научных и коммерческих целей применяют традиционные питательные среды на основе мясного сырья. Мясопептонный бульон МПБ и ΜΠΑ из перевара Хоттингера обеспечивают хороший рост микроорганизмов без изменения их культуральных и биологических свойств. Гидролизаты кильки и рыбной муки также широко применяются при производстве сухих питательных сред для культивирования микроорганизмов, т.к. белки рыбы по своему строению и аминокислотному составу наиболее сходны с белками мяса и способны удовлетворить потребности микроорганизмов в органических соединениях азота. Тем не менее, поиск высококачественных и недорогих питательных сред является актуальной задачей.

Известна Питательная среда для выращивания микроорганизмов (см. патент № 2089609, С1, C12N1/20, RU), содержащая источник азотного питания, хлористый натрий, агар. В качестве азотного питания используют панкреатический гидролизат кормовой рыбной муки с содержанием аминного азота 4,4±0,2%, общего азота 12,±0,5%. Существенным недостатком является то, что гидролизат имеет высокую стоимость, из-за необходимости ввоза из-за границы. Наиболее близким по совокупности признаков к заявляемому изобретению является «Поживне середовище «Аквамеда» для культивування микроорганизмов» (див. Пат. №34711 U, C12N1/20, UA), где питательной средой является смесь щелочного гидролизата из моллюсков с кислотным гидролизатом из рыбного сырья в соотношении 3:1 - 1:3. Конечная концентрация содержания аминного азота составляла 60-120 мг %. В состав среды также входят глюкоза или мальтоза, пептон и агар. Недостатком известной среды является недостаточная для культивирования штамма возбудителя рожи свиней конечная концентращя содержания аминного азота.

Признаками, общими с существенными признаками изобретения Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie, является то, что в состав среды входят пептон ферментативный, а также щелочной гидролизат из морского сырья.

В основу изобретения Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie поставлена задача путем использования продуктов морского генеза сконструировать питательную среду, которая обеспечит оптимальный рост штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie для приготовления вакцины.

Поставленная задача достигается тем, что для культивирования вакцинного штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie готовят питательную среду, состоящую из рыбного автолизата, в который дополнительно вводят 20-50% щелочного мидийного гидролизата.

Мидийный гидролизат и автолизат кильки получают по с известным технологиям (см. Крутченский Г.В., Кулясова В.Е. К вопросу получения белковых гидролиза-тов из моллюска леды//Известия ТИНРО.- 1976.- 99.- С. 102-104); Лихварь Н.А. Сухие питательные среды из свежих и замороженных отходов рыбной промышленности. Ученые записки ДагНИВИ по производству питательных сред. Махачкала, 1956, 2.).

Авторы исследовали уровень формирования биомассы промышленного штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie №286 на различных средах (табл. 1).

Как видно из табл. 1 культура проявляла на всех средах, кроме эталонной, невысокую интенсивность роста, что свидетельствует о требовательности к условиям питания. На некоторых средах к тому же отмечали полиморфизм палочек возбудителя рожи свиней: появлялись удлиненные цепочки E.rhuisipathie, что является признаком неблагоприятных условий культивирования, в частности из-за несбалансированного питания.

Далее исследовали среды, которые кроме гидролизатов кильки содержали от О до 50% мидийного гидролизата (табл. 2). Культивировали штамм в стандартных температурных условиях в течение 48 часов. Оптическую плотность измеряли на фото-электрокалориметре при длине волны 545 нм и толщине кюветы 5 мм. Контрольным образцом было незасеянная среда такого же состава.

Как видно из табл. 2, добавление в питательную среду мидийного гидролизата в количестве 20% от объема обеспечивало удвоение биомассы как в эталонной среде (0,163 против 0,081), так и в опыте (0,130 против 0,063), а внесение 50% мидийного гидролизата в среду утраивало прирост. При этом разница между опытной и эталонной средой, несмотря на отсутствие в исследуемой среде глюкозы, с увеличением содержания мидийного гиролизата постепенно уменьшалась.

Благодаря высокому содержанию аминного азота (показатель питательности сред для выращивания микроорганизмов) гидролизаты из морепродуктов являются ценным сырьем для биотехнологических производств. В автолизате рыбы содержится в 4-10 раз больше аминного азота, чем необходимо для продуктивного роста промысловых штаммов. Мидийный гидролизат, при содержании его в среде не больше 20%, удваивает бактериальную массу. Таким образом объединение рыбного автолизата и щелочного мидийного гидролизата позволяет получить сбалансированную питательную среду для культивирования возбудителя рожи свиней.

Пример реализации способа. Готовили опытную серию вакцины против рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie №286 в объеме 3 дм3. Предварительно определили, что рН рыбного гидролизата составляла 6,0, a bmict амшного азоту -740 мг%. В мидийном гидролизате рН 7,7, а содержание амина азота 247мг%. Из этих компонентов готовили жидкие и твердые питательные среды по стандартным прописям для МПБ. В состав среды для культивирования промышленного штамма на предлагаемой питательной среде входила смесь рыбного автолизата и 20% по объему щелочного мидийного гидролизата, пептон ферментативный - 1% от общего объема, калий фосфорнокислый - 0,3%, натрий фосфорнокислый - 1, 8%, рН среды составляла 7,3-7,4. Штамм высевали в пробирки с жидкой средой, затем пересевали во флаконы с бульонами, а после культивирования в соответствующих условиях, пересевали во флаконы с такой же средой и культивировали в соответствующих условиях. По окончании культивирования определяли типичность и чистоту культуры микроскопией мазков из сред и устанавливали концентрацию микробных клеток.

Культура промышленного штамма возбудителя рожи свиней, полученная на средах из гидролизатов, по сравнению со средами, полученными с мясного сырья, не отличались по культурно-морфологическими свойствам и отвечала требованиям паспортных данных на штамм. Концентрация микробных клеток в 1 см должна составлять не менее 50 млн. Авторами получены следующие данные: на питательных средах из морепродуктов концентрация микробных клеток составила 50 млн., а на средах, изготовленных из отвара Хоттингера - 70 млн.

Инактивацию микробных культур проводили с использованием формальдегида в концентрации 0,4%. Проверку полноты инактивации проводили путем посевов полученной вакцины на питательные среды, микроскопией окрашенных по Грамму мазков. Контроль на безвредность вакцины проводили на 5 белых мышах массой 18-20 г, вводя им внутрибрюшинно по 0,3см3. Результаты наблюдения за животными в течение 16 суток показали, что вакцина безвредна: подопытные животные оставались живыми, нормально питались, изменений в поведении не отмечено.

Контроль иммуногенной активности проводили на тех же белых мышах после прививки вакциной. Мышей заражали контрольным штаммом возбудителя рожи в смертельной дозе. Все контрольные мыши (10 голов), которые не были привиты, погибли в течение 4-6 суток, все вакцинированные выжили в течение 10 суток. Исходя из результатов этих исследований, сделан вывод, что изготовленная вакцина является имунногенно-активной.

Таким образом, заявленная питательная середа с использованием продуктов морского генеза, обеспечивает рост штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie, пригодно для приготовления эффективной вакцины.

Питательная среда для культивирования штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothrix rhuisipathie, в состав которой входят пептон ферментативный, калий фосфорнокислый, натрий фосфорнокислый, а также гидролизат из морского сырья, отличающаяся тем, что в качестве источника азотного питания используют смесь рыбного автолизата и щелочного мидийного гидролизата при следующем соотношении компонентов:

щелочной мидийный гидролизат 20-50%
пептон ферментативний 1%
калий фосфорнокислый 0,3%
натрий фосфорнокислый 1,8%
рыбный автолизат остальное.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии, пищевой и медицинской промышленности и может быть использовано при производстве бактериальных концентратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных пищевых продуктов.
Изобретение относится к способу приготовления закваски. Способ предусматривает приготовление субстрата из смеси ячменной муки и сухого молока, смешанной с водой при соотношении 1:3-1:4 с температурой 75-80°С, охлаждение субстрата, внесение смеси ферментных препаратов амилазы и ксиланазы, выдерживание при температуре 48-50°С в течение 90-120 мин, охлаждение ячменно-молочного гидролизата до 32-35°С, введение комбинированного препарата «Линекс» из расчета 1 капсула на 100 г ячменно-молочного гидролизата и 0,1% прессованных хлебопекарных дрожжей к общей массе ячменно-молочного субстрата, инкубацию ячменно-молочной закваски в течение 18-20 ч при температуре 32-35°С до титруемой кислотности 10-12 град.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения коклюшного компонента комплексных вакцин. Представленный способ включает выращивание культуры B.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Lactobacillus delbrueckii подвид lactis CNCM I-3741, снижающий содержание холестерина в крови.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-11353, обладающий способностью к расщеплению широкого спектра моно- и дисахаров и широким спектром антагонистического действия в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий и грибов, вызывающих заболевания у растений и сельскохозяйственных животных.
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии. Штамм бактерий Paenibacillus sp.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к средствам защиты человека и сельскохозяйственных животных от кровососущих комаров. Штамм Bacillus thuringiensis var.
Изобретение относится к области биотехнологии защиты окружающей среды, в частности к способам очистки почв от нефтяных загрязнений в сокращенные сроки в условиях низких положительных температур.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантному штамму бактерий Rhodococcus rhodochrous ВКПМ Ас1960, обладающему конститутивной ацилирующей активностью и полученному путем замещения в хромосоме штамма Rhodococcus rhodochrous ВКМ Ас-1515Д гена, кодирующего нитрилгидратазу на ген, кодирующий ациламидазу из штамма Rhodococcus erythropolis 37 ВКПМ Ас-1793, а также к способу синтеза N-замещенных акриламидов из акриламида и аминов с его использованием в качестве биокатализатора.

Группа изобретений относится к сельскому хозяйству и может быть использована при микробиологической защите растений. Средство для микробиологической защиты растений включает смесь культуральных жидкостей Trichoderma viride, Azotobacter chroococcum, Bacillus megaterium, Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae с необходимым количеством воды.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения антигена для диагностики бруцеллеза. Способ получения бруцеллезного L-антигена осуществляют следующим образом.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к химерным или гибридным белкам для индуцирования иммунного ответа против Р. gingivalis.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному полипептиду, который является биологической мишенью для ингибирования клетки-метанопродуцента, а также к выделенному полинуклеотиду, который кодирует этот полипептид.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при заживлении раневых повреждений кожного покрова. Ранозаживляющее средство представляет собой концентрат культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № ВКПМ: F-180, в качестве продуцента L-лизин-альфа-оксидазы и может быть применен как ранозаживляющее средство при повреждении кожного покрова.
Группа изобретений относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использована для применения композиции для защиты от инфекции, вызываемой Lawsonia intracellularis.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота. Способ профилактики инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота включает вакцинацию вакциной ассоциированной против инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа I, при этом за 29-31 день до вакцинации животным вводят подкожно в область верхней трети шеи в дозе 0,045-0,055 мл/кг живой массы иммуностимулирующий препарат «Кероконвитин», полученный на основе цитотоксической сыворотки из крови лошадей-доноров путем гипериммунизации их антигеном, приготовленным из тканей глаз - конъюнктивы и роговицы крупного рогатого скота, переболевшего инфекционным конъюнктиво-кератитом.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба. Представленное изобретение предусматривает изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, при этом приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин-1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, а лиофилизацию проводят соблюдая определенный режим.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается технологии получения иммуногенных сибиреязвенных антигенов - протективного антигена и белка ЕА1. .

Изобретение относится к фармацевтике и представляет собой композицию вакцины для индукции иммунного ответа у животных. Композиция содержит антиген и 40% эмульсию «масло в воде», разведенную до 2,5%, где указанная 40% эмульсия «масло в воде» содержит 30% об./об. легкого углеводородного неметаболического масла, 10% об./об. лецитина, 0,6% об./об. сорбитана моноолеата, 1,4% об./об. полиоксиэтиленсорбитана моноолеата, причем масляный компонент диспергирован в водном компоненте путем эмульгирования, а композиция вакцины получена с помощью микрофлюидизатора. Средний размер капель в композиции составляет менее 0,3 мкм. Композиция обладает улучшенными физическими признаками, усиленным иммунизирующим действием, а также повышенной безопасностью. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 20 пр., 17 табл., 11 ил.
Наверх