Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов



Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов
Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов
Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов
Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов
Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов
Штамм макромицета trametes versicolor, используемый в качестве продуцента для получения биологически активных противоплесневых препаратов

 


Владельцы патента RU 2541770:

Громовых Татьяна Ильинична (RU)
Садыкова Вера Сергеевна (RU)
Жилинская Наталия Викторовна (RU)

Изобретение относится к микробиологии. Предложен штамм Trametes versicolor, используемый для получения противоплесневых препаратов в отношении грибов рода Penicillium. Штамм депонирован в ВКПМ под номером F-1024. Штамм обладает высокими хитиназной и фунгицидной активностями. 4 ил., 1 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к области микробиологии, касается нового штамма В 08/06 Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat. (ВКПМ F-1024) и может быть использовано для получения противоплесневых препаратов, используемых в пищевой промышленности.

В настоящее время для предотвращения плесневения пищевых продуктов с успехом используются антисептики, химические консерванты, фитонциды, органические кислоты, а также композиции химических веществ [Белова В.Ю. Предотвращение плесневения сырокопченых колбас // В.Ю. Белова, В.В. Вагин, Л.В. Зимина / Молочная и мясная промышленность. 1989. - №6. - С.39; Кузнецова Л.С. Состав плесневых грибов, поражающих поверхность мясной продукции // Л.С. Кузнецова, Н.В. Михеева, Е.В. Казакова, С.М. Озерская, Н.Е. Иванушкина / Мясная индустрия. 2009. - №3. - С.28-30]. Одним из перспективных направлений защиты поверхности пищевых продуктов от поражения плесневыми грибами является использование доброкачественных грибов или доброкачественной плесени. Большое количество сырокопченых колбас с доброкачественной плесенью производят в Румынии, Венгрии, Италии, Испании [Белова В.Ю. Применение препаратов, предотвращающих плесневение продукта при производстве сырокопченых колбас // В.Ю. Белова, В.В. Вагин, Л.В. Зимина и др./М.: АгроНИИТЭИИММП. 1990. -28 с.]. Плесневые грибы при созревании не только придают особый внешний вид колбасе - налет плотной белой или серой плесени на оболочке, но и регулируют выделение влаги при сушке сырокопченых колбас. Их использование позволяет в определенной степени компенсировать колебания влажности воздуха в камере созревания и способствует образованию специфического аромата колбасы [Шипулин В.И. Антимикробные препараты в производстве колбас // В.И. Шипулин, А.В. Серов, И.М. Шевченко / Мясная индустрия. 2009. - №4. -С.63-65].

При производстве венгерской салями на поверхности колбас выращивают слой плесени, в которой преобладают представители актиномицетов рода Sporichthya. Этот вид плесени способствует быстрому высыханию колбасы и обеспечивает равномерный ход сушки при большом диаметре батонов [Белова В.Ю. Предотвращение плесневения сырокопченых колбас // В.Ю. Белова, В.В. Вагин, Л.В. Зимина / Молочная и мясная промышленность. 1989. - №6. - С.39; Корнелаева Р.П. Микробиология мяса и мясопродуктов // Р.П. Корнелаева, М.А. Сидоров / Учебное пособие. 3-е издание. 2005. - 204 с.].

В Федеральном научно-исследовательском центре мясной промышленности (г. Кульмбах, ФРГ) выделен штамм Penicillium malgiovensies, названный ′′благородной плесенью Кульмбах′′ (Edelschimmell Kulbach), который применяется для созревания сырокопченых колбас. В США фирма San Francisco Sausage Со при изготовлении сырокопченой колбасы салями использует закваски молочнокислых бактерий для сохранения поверхности салями от порчи и придания ей специфических вкуса и аромата [Белова В.Ю. Предотвращение плесневения сырокопченых колбас // В.Ю. Белова, В.В. Вагин, Л.В. Зимина / Молочная и мясная промышленность. 1989. - №6. - С.39; Кузнецова Л.С. «Ромонат» - добавка для стабилизации качества мясных продуктов // Л.С. Кузнецова, Н.В. Михеева, Г.П. Чижов/Мясная индустрия. 2009. - №9. - С.30-33].

Большой потенциал для использования в пищевой промышленности имеют представители вида Trametes versicolor благодаря их антимикробному действию. Ксилотрофные макромицеты рода Trametes стали объектами различных исследований начиная с 60-х годов прошлого века. Авторы исследований в Японии предлагали в качестве продуцентов следующие виды этого рода: T. hirsuta, Т. pubescens, Т. versicolor и Т. zonatus [Белова Н.В. Перспективы использования биологически активных соединений высших базидиомицетов в России // Н.В. Белова / Микология и фитопатология. 2004. -Т.38, №2. -С.1-4; Горшина Е.С. Биотехнологический препарат лекарственного гриба кориола опушенного // Е.С. Горшина, М.М. Скворцова, В.Г. Высоцкий / Современная микология России. Тезисы докладов I конгресса микологов России. М.: Национальная академия микологии. 2002. -С.295; Шишкина Л.Н. Антиоксидантная активность липидов ксилотрофных базидиомицетов // Л.Н. Шишкина, А.Н. Капич / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т.VII. - С.262-263].

В настоящее время базидиальные грибы рода Trametes широко используются народной медициной Японии и Китая в виде настоев порошка плодовых тел, а их высокоочищенные экстракты, содержащие полисахариды, известны как препараты, обладающие иммуномодулирующей и противоопухолевой активностью, усиливающие клеточный иммунитет, обладающие антиметастатической активностью и снижающие гематологическую супрессию, вызываемую противоопухолевыми лекарствами, а также эффективные при заболеваниях печени различной этиологии [Cui J. Polysaccharopeptides Coriolus versicolor: physiological activity, uses and production // J. Cui, Y. Chisti / Biotechnology advances. 2003. - V.21. - P.109-122; Sliva D. Ganoderma lucidum in cancer research // D. Sliva / Leukemia Research. 2006. - V.30. -P.767-768; Ooi V. Immunomodulation and anti-cancer activity of polysaccharide-protein complex // V. Ooi, F. Liu/Current medicinal chemistry. 2000. - V.7. - P.715-729; Zhang W. Effect Chinese medicinal fungus water extract on tumor metastasis and some parameters of immune function // W. Zhang, Y. Wang, Y. Hou / International Immunopharmacology. 2004. - V.4. - P.461-468].

В Иркутском филиале института ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН с использованием современных методов биотехнологии на основе базидиального гриба Coriolus pubescens был разработан препарат «Леван-2», обладающий антимикробной активностью в отношении референтных штаммов микроорганизмов и штаммов, выделенных от больных животных из родов Salmonella, Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Bacillus, Enterobacter [Чхенкели B.A. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel. // B.A. Чхенкели, Т.И. Никифорова, Р.Г. Скворцова / Микология и фитопатология. 1998. - Т. 32, №1 - С.69-71].

В работах Е.С. Горшиной и В.Г. Скворцовой показано, что препарат, полученный на основе сухой мицелиальной субстанции одного из штаммов С. pubescens, обладает высокой биологической активностью. Изучен его химический состав и препарат сертифицирован как пищевая добавка [Горшина Е.С. Биотехнологический препарат лекарственного гриба кориола опушенного // Е.С. Горшина, М.М. Скворцова, В.Г. Высоцкий / Современная микология России. Тезисы докладов I конгресса микологов России. М.: Национальная академия микологии. 2002. - С.295; Скворцова М.М. Иммунотропные свойства БАД «Трамелан». Биохимические, медико-биологические и клинические исследования // М.М. Скворцова, Е.С. Горшина / Успехи медицинской микологии. 2006 - Т.VII. - С.206-209].

Большинство работ по поиску и выделению биологически активных веществ базидиомицетов проведены с использованием плодовых тел. Использование плодовых тел не может служить надежной основой для производства биологически активных соединений. Известно, что биологически активные вещества высших грибов содержатся не только в базидиомах, но и в вегетативном мицелии гриба, получаемом путем жидкофазного и твердофазного культивирования. Важным преимуществом получения биомассы мицелия с помощью биотехнологических методов являются: неограниченная возможность и безотходность производства препаратов, не дефицитность сырьевых ресурсов. Поэтому важным преимуществом получения биомассы мицелия с помощью методов биотехнологии являются: экологическая чистота получаемых препаратов, неограниченная возможность производства, многообразие и дешевизна сырьевых ресурсов и безотходность производства [Феофилова Е.П. Новые биотехнологии получения биологически активных веществ из мицелиальных грибов // Е.П. Феофилова / Успехи медицинской микологии. 2007. - Т.IX. -С.195-196; Winther К. A combination of Japanese ginseng, Ganoderma lucidum and Trametes versicolor, referred to as the GOINO PROCEDURE, can lower blood glucose and LDL-cholesterol in patients with NIDDM // K. Winther, J. Mehlsen, E. Rein, A. Hansen, T. Goino / XIIIth International Symposium on Atherosclerosis, Japan. 2003. - P. 339].

Известно, что большинство штаммов Т. versicolor хорошо культивируется на агаризованных питательных средах с образованием густого разветвленного, септированного мицелия, с многочисленными пряжками одиночного типа. Учитывая современные научные тенденции, касающиеся сохранения качества и обеспечения микробиологической безопасности полноценной продукции, штаммы Т. versicolor могут послужить основой для разработки и внедрения в производство новых поколений экологически безопасных комплексных пищевых добавок, предназначенных для длительной и надежной антимикробной и противоплесневой защиты [Ковалева Г.К. Биологические особенности и биохимический состав ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. Et Sing., Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. - М., 2009. - 21 с.; Чхенкели В.А. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel. // В.А. Чхенкели, Т.И. Никифорова, Р.Г. Скворцова / Микология и фитопатология. 1998. - Т. 32, №1. - С.69-71; Cui J. Polysaccharopeptides Coriolus versicolor: physiological activity, uses and production // J. Cui, Y. Chisti / Biotechnology advances. 2000. - V. 21. - P. 109-122].

В настоящее время мировой микробиологической промышленностью не освоено производство противоплесневых биологических препаратов на основе активных штаммов T. versicolor.

Техническим результатом изобретения является штамм В 08/06 Trametes versicolor (ВКПМ F-1024), обладающий противоплесневой активностью.

Цель достигается использованием штамма В 08/06 для подавления роста плесневых грибов. Штамм при глубинном и поверхностном культивировании выделяет в культуральную жидкость метаболиты, обладающие противоплесневыми свойствами в отношении микромицетов рода Penicillium. Продукты, выделяемые штаммом, обладают хитиназной активностью.

Предлагается применение этого штамма в качестве биопродуцента для создания на его основе противоплесневых препаратов.

Штамм выделен тканевым методом из плодового тела, собранного в Республике Тыва. Идентификация штамма проведена по макро- и микроморфологическим признакам [Определитель грибов России. Порядок Аффилофоровые. Вып.2. С-Пб. Наука, 1998. - 391 с.].

Штамм В 08/06 Trametes versicolor характеризуется следующими признаками:

Макроморфологические:

На среде: на сусло-агар (СА) - штамм обладает умеренным ростом; формирует приземистый кожистый воздушный мицелий с ярко выраженными концентрическими кругами; край колонии ровный, слегка приподнятый (фиг.1А).

Размер колонии на 7-10 сутки культивирования на этой среде составляет 90 мм. Цвет воздушного и субстратного мицелия белый. Обратная сторона колонии неокрашенная.

При культивировании на сусло-агаре в течение 20-24 сут воздушный мицелий темнеет от кремового до светло-коричневого цвета; появляются капли экссудата, воздушный мицелий сильно уплотняется и образует плодовые тела (фиг.1Б).

Быстрый рост с образованием густого и высокого воздушного мицелия достигается на сусло-агаре с добавлением 1% лиственничных опилок; умеренный рост на среде Чапека и на грибном агаре.

Микроморфология:

Мицелий септированный, тонкий, неокрашенный с пряжками (фиг.2А, 2Б). Спороношение конидиальное не выявлено, хламидоспоры и склероции отсутствуют.

Область применения штамма: биоконтроль плесневых грибов. Штамм проявляет гиперпаразитическое и фунгицидное действие в отношении грибов рода Penicillium, вызывающих плесневение пищевых продуктов. Гиперпаразитическая активность в отношении штаммов рода Penicillium определяется методом встречных культур [Егоров Н.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии // Н.С. Егоров / М.: Изд-во МГУ. 1995. - 224 с.].

При жидкофазном стационарном культивировании на пивном сусле, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:2 при температуре 24±1°C на 10-е сутки биомасса мицелия составляет 12,23 г/л, на 20-е - 21,70±0,28 г/л, на 30-е - 23,01±0,54 г/л. Накопление биомассы штамма изучается весовым методом.

На скошенном сусло-агаре при 4°C жизнеспособность штамма сохраняется в течение 5 месяцев. Оптимальной средой для размножения и поддержания штамма является сусло-агар (неохмеленное пивное сусло 6°Б разбавить дистиллированной водой в отношении 1:2, отфильтровать, добавить агар из расчета 20 г/л). Другие среды, используемые для культивирования, - сусло-агар с добавлением 1% лиственничных опилок, картофельно-декстрозный агар (КДА), мальтакс-агар.

Оптимальный рН: 6,0-6,2. Время инкубирования: 7-10 суток. Штамм одинаково хорошо растет с освещением и без него.

Наиболее оптимальная температура для роста мицелия штамма T. versicolor - 20-25°C, при понижении температуры культивирования до +15°C изменяется морфология колоний штамма: воздушный мицелий становился рыхлым, паутинистым.

Проведены исследования химического состава мицелия и плодовых тел T. versicolor и установлено, что количество экстрактивных веществ в мицелии бизидиомицета T. versicolor значительно превосходит их количество в плодовом теле. Количество общего белка в мицелии составляет около 14,6%, причем с возрастом его количество изменяется незначительно. В плодовых телах гриба Т. versicolor доля белка составляет 7,2%, что в два раза ниже, чем в мицелии.

Сравнительная оценка аминокислотного состава мицелия и плодовых тел T. versicolor показала, что содержание незаменимых аминокислот в плодовых телах гриба от общего количества аминокислот превосходит почти на 30% этот показатель в мицелии. Причем в мицелии наблюдается преобладание таких незаменимых кислот как изолейцин, лейцин и тирозин, в то время как в плодовых телах - лейцин и тирозин.

Известно, что Т. versicolor содержит большое количество полисахаридов, причем количество легкогидролизуемых углеводов в мицелии значительно отличается от количества трудно гидролизуемых углеводов. Содержание общего количества липидов в мицелии данного штамма составляет от 1,02 до 1,49%. Липидная фракция включает нейтральные липиды, гликолипиды и фосфолипиды. Наблюдается преобладание нейтральных липидов. Из представленных сведений видно, что доля биологически активных веществ в биомассе мицелия изучаемого штамма превосходит их содержание в плодовых телах и содержит все необходимые компоненты для создания биологических активных добавок.

Кроме того, входящие в состав мицелия биологически активные соединения обладают противоплесневой и антимикробной активностью. Наличие противогрибных свойств у штамма обусловлено наличием антигрибных соединений и ферментов хитиназ.

По заключению специалистов Красноярской краевой ветеринарной лаборатории данный штамм авирулентен, нетоксичен, нетоксигенен в отношении теплокровных организмов и не вызывает инфекционных заболеваний.

На фиг. 1-4 представлены следующие иллюстрации:

Фиг. 1. Морфология мицелия штамма В 08/06 Trametes versicolor и образование плодовых тел на сусло-агаре.

Фиг. 2. Микроморфология воздушного мицелия штамма В 08/06 Trametes versicolor (световая микроскопия, увеличение х 1350): стрелками указаны пряжки.

Фиг. 3. Гиперпаразитическая активность штамма В 08/06 Trametes versicolor в отношении штамма F - 4499 Penicillium chrysogenum: А - подсев тест-культуры к штриху T. verscolor, Б - активное развитие исследуемого базидиомицета T. verscolor на 3-и сутки культивирования, В и Г - подавление развития мицелия P.chrysogenum штаммом В 08/06 на 6-е сутки совместного культивирования.

Фиг. 4. Антигрибная активность культуральной жидкости Trametes versicolor В 08/06 в отношении Penicillium brevicompactum F - 4481: А - вискозная оболочка, обработанная культуральной жидкостью, Б - контрольная проба, В - белковая оболочка «Белкозин», обработанная культуральной жидкостью, Г - контрольная проба.

Пример 1. Определение антагонистических свойств культуральных фильтратов штамма В 08/06 Trametes versicolor методом «лунок»

Для исследований используют метаболиты культуральной жидкости штамма В 08/06 Trametes versicolor, полученные на 14-е сутки культивирования продуцента на среде сусло. Культивирование штамма проводят глубинным способом на качалке при 24-26°C в колбах объемом 750 мл в течение 10 суток пока гриб не достигнет стационарной фазы роста. Полученную культуральную жидкость центрифугируют и удаляют осадок, стерилизуют фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм и тестируют на штаммах микромицетов: Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481.

Контролем в опыте используют дистиллированную воду. Для тестирования используют метод, основанный на радиальной диффузии в агар биологически активных веществ. Тест-штаммы рассевают «газоном» на поверхности сусло-агара в чашке Петри штамма из расчета 1,5-2×106 конидий на 1 мл питательной среды. В качестве посевного материала используют культуру тест-штамма, выращенную на скошенном сусло-агаре. Из пробирок делают смыв в колбы со стерильной водой, затем определяют титр спор в полученной суспензии микроскопическим способом в камере Горяева и методом пересчета на весь объем питательной среды используют необходимое количество суспензии для засева в чашки Петри.

Из агара стерильным пробойным сверлом делают лунку, в которую помещают культуральную жидкость штамма макромицета В 08/06 Trametes versicolor. Учет результатов проводят путем измерения миллиметровой линейкой диаметра зон подавления роста тест-культуры микроорганизма вокруг «лунки». Полученные результаты интерпретируют следующим образом: « - » - отсутствие активности; зона подавления до 12 мм - слабая чувствительность; зона подавления от 13 до 29 мм - средняя активность; зона подавления 30 мм и более - высокая чувствительность.

Исследования показали, что культуральные фильтраты штамма макромицета В 08/06 Trametes versicolor оказывают противогрибное действие, вызывая зоны угнетения роста тест-штаммов 16 мм (таблица 2).

Пример 2. Оценка гиперпаразитической активности штамма Trametes versicolor В 08/06

Гиперпаразитическую активность базидиомицета Trametes versicolor изучают в отношении тест-объектов: Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481 методом перпендикулярных штрихов и методом встречных культур на твердых агаризованных средах.

Испытуемый штамм Trametes versicolor В 08/06 высевают штрихом (полоской) на поверхность агаровой пластинки в чашке Петри. После того как микроорганизм разовьется, перпендикулярно его штриху подсевают тест-организм штаммы Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481. Принимая во внимание тот факт, что конкурентные грибы растут быстрее, в сравнении с Т. versicolor, базидиомицет культивируют на протяжении 3-х суток и только затем осуществляют посев спорами микромицетов рода Penicillum. Инкубирование культур проводят в термостате при температуре 25±1°C в течение всего срока наблюдения.

В другом варианте проводят исследования методом встречных культур. Для чего на одной половине чашки Петри делают посев штрихом штамма T. versicolor, а на другой штаммы - Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481. Исследования показали, что в обоих опытах T. versicolor проявляет активное антагонистическое действие и за 6-7 суток полностью подавляет рост и развитие грибов Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481 (фиг. 3).

Пример 3. Оценка колонизации пленок, используемых для колбасных покрытий, микромицетами рода Penicillum

Для исследования используют пищевые оболочки: белковая оболочка «Белкозин», производства ОАО «Лужский завод» (Россия), d=120 мм и вискозно-армированная оболочка «Fibrous SR SL», производство: ООО «Эдельвейс», Санкт-Петербург, d=120 мм. Оценку колонизации пленок, используемых для колбасных покрытий, проводят методом нанесения инокулянта споровой суспензии штаммами Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481 поэтапно на разных стадиях: на 1, 2, 3-й сутки. Оценку колонизации пленки микромицетами рода Penicillum проводят визуально.

Пример 4. Антигрибная активность штамма в отношении микромицета рода Penicillum

Для исследования используют пищевые оболочки: белковая оболочка «Белкозин», производства ОАО «Лужский завод» (Россия), d=120 мм и вискозно-армированная оболочка «Fibrous SR SL», производство: ООО «Эдельвейс», Санкт-Петербург, d=120 мм. Споровую суспензию тестируемой культуры гриба наносят шпателем на твердую питательную среду (Maltax 10) в чашках Петри. Затем стерильные пищевые оболочки d=2,5 см смачивают в культуральной жидкости исследуемого базидиомицета T. versicolor и выкладывают на посевы «газоном» тестируемыми культурами штаммов Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F - 4481. Чашки с посевами инкубируют при температуре 25±1°C. Измеряют зону задержки роста (зона подавления развития) плесневой культуры в течение срока наблюдений - 5 суток.

В результате исследований показано, что исследуемый штамм T. versicolor проявляет антигрибную активность за счет выделения антибиотических метаболитов (фиг.4А и В). Оболочки, обработанные культуральной жидкостью Т. versicolor, не инфицируются тест-культурами плесневых грибов, в то время как в контроле оболочка покрыта возбудителями плесневения - грибами рода Penicillium.

На основании проведенного исследования показано, что штамм при росте образует антимикробные соединения, которые являются активными в отношении штаммов Penicillium chrysogenum F - 4499, Penicillium polonicum F - 4497, Penicillium nalgiovense F - 4493, Penicillium brevicompactum F -4481.

Пример 5. Анализ хитиназной активности метаболитов в культуральной жидкости штамма Trametes versicolor В 06/08

Культуральную жидкость для определения хитиназной активности получают путем поверхностного культивирования на жидкой среде мaltax - 10, имеющей состав: мaltax - 10-50 г/л, вода - 1000 мл. Культивирование проводят в течение 14 суток при 27°C в статических условиях. После чего отделяют выросшую биомассу от культуральной жидкости. К суспензии коллоидного хитина (10 мг/мл) добавляют натрий ацетат - уксусной кислоты (рН 5,5), аликвоту анализируемого образца отфильтрованной культуральной жидкости, воду и инкубируют при температуре 37°C в течение 15 мин. Для определения активности хитиназы в полученных культуральных фильтратах микроорганизмов используют ДНС-метод (динитросалициловый), основанный на определении активности фермента по количеству образующихся в результате реакции редуцирующих сахаров с коллоидным хитином в качестве субстрата. Количество восстанавливающих сахаров определяют путем регистрации оптической плотности при длине волны 420 нм. Полученные значения переводят по калибровочной кривой, построенной с известными концентрациями N-ацетилглюкозамина. За единицу хитиназной активности принимают такое количество фермента, которое в описываемых условиях реакции вызывает прирост концентрации N-ацетилглюкозамина на 1,0 мкмоль х мин-1·мл-1 [Патент на изобретение №2213773. Продуцент комплекса хитинолитических ферментов и ламинариназы. Авторы Мелентьев А.И., Актуганов Г.Э., Усанов Н.Г., Кузьмина Л.Ю. Заявка: 2001101594/13. Опубликовано: 10.10.2003 г.]. Показано, что хитиназная активность культурального фильтрата штамма В 08/06 Trametes versicolor составляет 9,1 ед/мл.

Штамм Trametes versicolor (L.:Fr.) Pilat. ВКПМ F-1024, используемый для получения противоплесневых препаратов в отношении грибов рода Penicillium.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве. Штамм Trichoderma harzianum Rifai депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-180.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения протеиназы - активатора протеина С плазмы крови предусматривает твердофазное культивирование штамма гриба Aspergillus ochraceus BKM F-4104D на питательной среде.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Способ получения гранулированного продукта предусматривает выращивание нитчатых грибов семейства Monilialeae, предпочтительно Arthrobotrys conoides Dreschsler в пригодной жидкой культуральной среде.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Способ получения биологического средства для защиты растений от фитопатогенов и нематод на основе штамма гриба рода Trichoderma осуществляют путем приготовления посевного материала штамма гриба, приготовления препарата в жидкой либо сыпучей форме на основе посевного материала, а также перемешивания препарата с минеральным, органическим или бактериальным удобрением.

Группа изобретений относится к биохимии. Предложено устройство для поверхностного выращивания микроорганизма на жидкой питательной среде.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при заживлении раневых повреждений кожного покрова. Ранозаживляющее средство представляет собой концентрат культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № ВКПМ: F-180, в качестве продуцента L-лизин-альфа-оксидазы и может быть применен как ранозаживляющее средство при повреждении кожного покрова.
Изобретение относится к области биохимии и касается применения концентрата культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № ВКПМ F-180, в качестве ингибитора Андийского вируса крапчатости картофеля.

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для выращивания мицелиальных грибов-дерматомицетов из клинического материала содержит глюкозу, агар бактериологический, пептон мясной, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, хлористый натрий, углекислый натрий, L-цистин, тиогликолевую кислоту и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает обработку чувствительного слоя биосенсора раствором общей фракции протеаз гепатопанкреаса камчатского краба в буфере состава трис-НСl 50 мМ, СаСl2 3 мМ, NaCl 100 мМ, рН 8,0 при температуре раствора в диапазоне 35-40°С.
Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно противовирусному средству. Способ получения противовирусного средства проводят путем приготовления посевного мицелия базидиомицета опенок зимний Flammulina velutipes (Curtis) Singer, приготовления жидкой питательной среды, содержащей воду, в качестве источников углерода - растительное масло и мелассу, в качестве источника азота - кукурузную муку, в качестве минеральных солей дигидрофосфат калия и сульфат магния, ее стерилизации, засева приготовленным посевным мицелием стерильной жидкой питательной среды, культивирование в ней базидиомицета в аэробных условиях, полученную погруженную культуру разделяют на биомассу базидиомицета и культуральную жидкость, из которой выделяют сгусток посредством добавления к последней этилового спирта, который отжимают, высушивают и измельчают с получением противовирусного средства, при определенных условиях.

Изобретение относится к технологии получения углеродных сорбентов с антибактериальными и антимикотическими свойствами на основе пористых углеродных адсорбентов и предназначено для применения в медицине и ветеринарии.

Данное изобретение относится к противогрибковым соединениям на основе производных 3,5,8-триоксабицикло[5.1.0]октана, полученным транс-раскрытием его эпоксидного цикла, а именно 6-(арилтио)-1,3-диоксепан-5-олам в рацемическом и энантиочистом виде общей формулы Ia и Ib, где при R1=F, R2=H, R3=H; при R1=Br, R2=H, R3=H; при R1=H, R2=Br, R3=H; при R1=H, R2=H, R3=Br.
Изобретение относится к области медицины и касается фармацевтической композиции для лечения гинекологических заболеваний. Композиция включает в качестве активного вещества бутоконазол, основу, являющуюся комбинацией гидрофобного компонента, гидрофильного компонента и эмульгатора, и гелеобразующий полимер.
Изобретение относится к области медицины, химико-фармацевтической промышленности и представляет собой противогрибковый препарат в суппозиториях для детей, включающий рекомбинантный человеческий интерферон 2α и флуконазол, в который дополнительно введены лизоцим, ликопид и димефосфон.

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к фармакологии, и описывает композицию, содержащую фульвовую кислоту или ее соль и противогрибковое соединение, выбранное из флуконазола и амфотерицина В.
Заявленная группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для лечения животных, больных бактериозами и дрожжевыми микозами. Заявленный препарат содержит окситетрациклина гидрохлорид, сульфадимезин, ампициллина натриевую соль, нистатин, растворитель и проводник активных веществ диметилсульфоксид, анестетик быстрого действия - лидокаин при следующем соотношении компонентов, масс.%: ампициллина натриевая соль 4,0-8,0, окситрациклина гидрохлорид 2,0-4,0, нистатин 1,0-2,0, сульфадимезин 2,0-4,0, новокаин 0,25-0,5, лидокаин 0,25-0,5, диметилсульфоксид 10,0-20,0, 1,2-пропиленгликоль - остальное.

Изобретение относится новому фунгицидному средству, представляющему собой ассоциат соли, указанной ниже структурной формулы. Средство может быть использовано для уничтожения грибов и при лечении заболеваний, вызванных грибами, а также для предотвращения порчи грибами различных материалов и сельскохозяйственных продуктов.
Изобретение относится к композициям и полимерным материалам биомедицинского назначения, содержащим наночастицы серебра (0,0005-0,02 мас.%), стабилизированные амфифильными сополимерами малеиновой кислоты (0,0008-0,05 мас.%), низкомолекулярные органические амины (0,0002-0,04 мас.%) и воду.
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к композиции, содержащей инкапсулированную тритерпеновую кислоту: бетулиновую кислоту, урсоловую кислоту или их производные в виде солей и эфиров или тритерпеновый спирт - бетулин, которая может быть использована в медицине для лечения и профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК- и РНК-содержащими вирусами, такими как вирусы гриппа, онковирусы, герпес, опоясывающий лишай, а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp., патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida, в т.ч.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно и гомеопатическим суппозиториям для лечения грибковых кольпитов, вульвовагинитов, эндометриоза, папиллом, зрозии шейки матки, кандидоза и сухости влагалища (варианты).
Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота содержит поливалентный анатоксин против клостридиозов овец, культуральную жидкость штамма Escherichia coli А-5 с содержанием микробных клеток 7,0·108-1·109 КОЕ/мл и культуральную жидкость штамма Escherichia coli Б-5 с содержанием микробных клеток 7,0·108-1·109 КОЕ/мл в соотношении 1:1:1.
Наверх