Способ оценки действия цитомегаловирусной инфекции на подавление дыхательной активности эритроцитов беременных путем определения активности глутатионредуктазы в эритроцитах периферической крови и при нарастании в них перекисей жирный кислот

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных измеряют титр антител к цитомегаловирусу, содержание перекисей жирных кислот и снижение активности глутатионредуктазы, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 определяют нарастание перекисей жирных кислот и снижение активности глутатионредуктазы, после чего вычисляют значение дискриминантной функции по формуле DФ=(+0.143×ПОЛ)+(-2.825×глутатионредуктаза), и при DФ более (+2.60) создается угроза формирования гемической анемии. Способ позволяет оценить угрозу формирования гемической анемии вследствие повреждения клеточных мембран и накопления в них перекисей жирных кислот. 1 табл., 2 ил.

 

1. Цель изобретения - выявить, что дыхательная активность эритроцитов возникает при снижении активности глутатионредуктазы вследствие нарастания перекисей жирных кислот в мембранах эритроцитов, индуцированных обострением у беременной в третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к оценке подавления дыхательной активности эритроцитов у беременных при обострении в период гестации цитомегаловирусной инфекции.

3. Раскрытие изобретения

Возбудитель цитомегаловирусной инфекции, вступая в контакт с мембраной эритроцитов через белки PvTRAgS (10), способствует изменению фосфолипидного состава, что приводит к появлению в мембранах большого количества перекисей жирных кислот (ПОЛ). Перекиси жирных кислот угнетают ферментативную активность эритроцитов, к их числу относится и глутатионредуктаза. Глутатион - активное вещество, принимающее участие во многих окислительно-восстановительных процессах в организме. Он обеспечивает функционирование многих ферментов, содержащих SH группы. Восстановленный глутатион разрушает в эритроцитах Н2О2 в ходе реакции, катализируемой глутатионпероксидазой GGSH+H2O2→GSSG+2H2O. Эта реакция подтверждает защитную роль глутатиона в эритроцитах против оксидантов (1, 2, 6, 7). Больше всего глутатион находят в таких органах как почки, печень, головной мозг, эритроциты периферической крови (5). Восстановленная форма глутатиона легко подвергается окислению, в результате чего образуется дисульфидная форма глутатиона -G-S-S-G, но этот процесс обратим: 2 G S H + 2 H 2 H + G S S G . Реакция успешно протекает в присутствии ионов Mg+2. Восстановление окисленного глутатиона происходит под влиянием глутатионредуктазы, что отчетливо наблюдается в эритроцитах периферической крови. В связи со своей функциональной мобильностью глутатион может принимать участие во многих окислительно-восстановительных реакциях (5). Установлено, что глутатион защищает гемоглобин эритроцитов от различных окислителей, поддерживая тем самым структурную устойчивость их мембран (2, 6). Гемолитическая анемия проявляется у новорожденных в связи с недостаточностью глутатионредуктазы, от которой зависит уменьшение содержания в эритроцитах G-SH. Нарушение реакций глутатионовой системы приводит к ряду острых интоксикационных воздействий на клеточные системы организма (4).

4. Прототипы работы

Среди работ, изучавших изменение активности глутатионредуктазы, имеется исследование Луценко М.Т. и Андриевской И.А. (9), в котором в отличие от настоящего исследования нарушение дыхательной активности эритроцитов изучали при воздействии на эритроциты герпес-вирусной инфекции. В этой работе не был изучен конкретный механизм повреждения ферментативной активности глутатионредуктазы. В настоящем исследовании было изучено содержание в мембранах эритроцитов перекисей жирных кислот при обострении в организме цитомегаловирусной инфекции.

5. Новая техническая задача

Нарушение дыхательной активности эритроцитов при обострении у беременной цитомегаловирусной инфекции возникает вследствие повреждения клеточных мембран и накопления в них перекисей жирных кислот.

6. Осуществление изобретения

6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Обследовано 15 беременных на третьем триместре гестации с обострением цитомегаловирусной инфекции с титром 1:1600. У беременных забиралась кровь для определения гистохимическим методом перекисей жирных кислот в эритроцитах, а также активности глютатионредуктазы. Контролем служили 15 беременных, не болевших цитомегаловирусной инфекцией в период гестации. У беременных симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также ДНК цитомегаловируса. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

6.2. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител класса IgM и IgG, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК цитомегаловируса методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.3. Перекиси жирных кислот в мембранах эритроцитов определяли гистохимическим методом по Винклеру-Шульце (8). Суть метода заключалась в инкубации эритроцитов цельной крови в растворе, состоящем из 576 мг α-нафтола в 6 мл 1 N натриевой щелочи, доведенной до 50 мл дистиллированной водой. Вторым ингредиентом инкубационной среды является раствор, состоящий из 691 мг n-амино-N,N-диметиламина в 50 мл дистиллированной воды. Смешивают эти 2 раствора, фильтруют накануне реакции, отбирают в пробирку PUTH, КЗ ЭДТА 500 мкл этого раствора и вносят в него 200 мкл цельной крови с коагулянтом, взятой натощак из локтевой вены. Через 10 мин каплю инкубационного раствора с эритроцитами наносят на предметное стекло и на центрифуге Diffe Spin-2 (USA) приготовляют монослойный мазок. Высушивают при комнатной температуре и изучают под цифровым микроскопом МТ (Япония), связанным с компьютером через программу «Scion Corporation» (USA), позволяющую проводить количественно цитофотометрический анализ: определять площадь клетки и автоматически плотность продукта реакции.

6.4. Активность глутатионредуктазы у здоровых беременных и беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции, определяли с использованием реагентов «Sentinel diagnostics)) (Италия) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

6.5. Анализ полученных результатов проводился с помощью дискриминантного метода статистической обработки.

Исследования показали, что в случае обострения цитомегаловирусной инфекции у беременной в третьем триместре гестации с титром 1:1600 в мембранах эритроцитов отмечается содержание перекисей жирных кислот до 97,9±2,5 усл. ед. (фигура 1), контроль - 22,0±0,85 усл. ед. (фигура 2). Одновременно определяется снижение активности в эритроцитах глутатионредуктазы до 4,0±0,08 Е/г Hb; контроль - 7,90±0,15 Е/г Hb, что создает угрозу формированию у беременной гемической анемии.

Проведенный дискриминантный анализ показал, что дискриминантная функция (DФ) определяется следующим образом:

Имя выборки Объем выборки Кол-во выборки Расстояния Махалан Критерий Фишера, различия выборок Вероятность различия выборок Граничное значение дискриминантной функции Вероятность ошибочности классиф., %
493 15 2 4.35 52.76 100.000 -10.06 2.760
00R 15 2 1.851
D0=(+.143×ПОЛ)+(-2.825×глутатионредуктаза)
где DФ - дискриминантная функция
ПОЛ - перекиси жирных кислот
+.143 - коэффициент, автоматически выставленный компьютером в дискриминантном уравнении при значении ПОЛ
Глутатионредуктаза - фермент эритроцита
-2.825 - коэффициент, автоматически выставленный компьютером в дискриминантном уравнении при значении глутатионредуктазы
В результате анализа DФ=(+13.99)+(-11.30)=(+2.60)

Следовательно, при DФ(+2.60) > больше граничного значения (-11.30) отмечается снижение активности глютатионредуктазы и создается угроза формирования у беременной гемической анемии.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на перекиси жирных кислот в эритроците периферической крови беременной, перенесшей в третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600. В эритроцитах интенсивность реакции на перекиси жирных кислот составляет при цитофотометрическом исследовании по программе «Scion Corporation)) 97,9 усл. ед. Активность глутатионредуктазы снижается при этом до 4,0±0,08 Е/гHb, контроль - 7,90±0,15 Е/гHb. Создается угроза формирования гемической анемии.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на перекиси жирных кислот в эритроците беременной на третьем триместре гестации. В течение гестации беременная не болела. В мембранах эритроцитов количество жирных кислот не превышало 22,0±0,85 усл. ед. Количество глутатионредуктазы было в пределах контроля - 7,90±0,15 Е/гHb. Угрозы формирования анемии не предусматривалось.

ЛИТЕРАТУРА

1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. 1998. М.: Медицина, 750.

2. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики, профилактики и терапии. Биохимия. 2004. 69. 1; 53-66.

3. Глушко С.И., Куценко С.Л., Новикова Т.И., Аксенов В.В. Состояние системы глутатиона в тканях сердца крыс при острых отравлениях доксорубицином // Вопросы онкологии. 2005. 5 г. 1; 108-112.

4. Глушко С.И. Нарушения системы глутатиона и их роль в патогенезе острых интоксикаций ксенобиотиками с различными механизмами токсического действия. С.П. 2007. Автореф.…дисс. докторской. 35.

5. Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. 2001. М.: Наука, Интерпериодика, 343.

6. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С Биологическая роль глутатиона. Успехи биол. химии. 1990. 110. 1(4); 20-23.

7. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Обмен глутатиона. Успехи биол. химии. 1990. 31; 157-179.

8. Лилли Р. Патологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 1969, 645.

9. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Способ диагностики дыхательной функции эритроцитов беременных путем определения активности глутатионредуктазы в эритроцитах периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции // Бюллетень «Изобретения, полезные модели». 27.10.2010. №30.

10. Tyagi R.K., Sharma V.D. Erythrocyte bilding activity displayed by a selective group of Plasmodium vivax tryptophan rich antigens is inhibited by patients antibodie // Plos One. 2012. 7(12). S.50754.

Способ оценки угрозы формирования гемической гипоксии у беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, включающий измерение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, содержание перекисей жирных кислот и активности глутатионредуктазы в мембранах эритроцитов, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 определяют нарастание перекисей жирных кислот и снижение активности глутатионредуктазы, после чего вычисляют значение дискриминантной функции по формуле: DФ=(+0.143×ПОЛ)+(-2.825×глутатионредуктаза), и при DФ более (+2.60) создается угроза формирования гемической анемии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицине труда и описывает способ оценки воздействия производственного микробиологического фактора на медицинских сестер крупных многопрофильных детских больниц.
Изобретение относится к измерительной технике и представляет собой способ определения нано-микропримесей, включающий использование эмульсии из капель жидкого кристалла, диспергированных в воде, способной изменять конфигурацию капель жидкого кристалла при наличии в составе эмульсии посторонних примесей, измерение изменения интенсивности света, рассеянного эмульсией, по которому судят о наличии и концентрации искомых примесей, отличающийся тем что в качестве жидкого кристалла выбирают соединения, способные к транс-цис-переходу под действием актиничного света, и перед измерением изменения интенсивности света дополнительно освещают эмульсию актиничным светом, обеспечивая тем самым изменение конфигурации в каплях жидкого кристалла за счет транс-цис-перехода в молекулах жидкого кристалла.

Изобретение относится к области измерительной техники и может быть использовано для анализа конкретного компонента, содержащегося в образце, в частности уровня глюкозы в крови.

Изобретение относится к способу идентификации живых и мертвых организмов мезозоопланктона в морских пробах, который включает отбор пробы, крашение организмов соответствующими красителями, визуальную оценку интенсивности окраски особей под микроскопом, которую выполняют одновременно с микрофотосъемкой организмов, используя настройки фотокамеры в ручном режиме, сохраняя эти настройки неизменными на протяжении фотосъемки по крайней мере одной пробы, после чего в полученных изображениях, применяя редактор растровой графики, например программный пакет Adobe Photoshop, измеряют средние для каждой особи цветовые и яркостные характеристики и относят особи к классу живых или мертвых, осуществляя дискриминантный анализ измеренных цифровых величин. .

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения острого и хронического типов лимфобластного лейкоза.
Изобретение относится к области медицины, к клинической лабораторной диагностике и может найти применение в клинико-диагностических лабораториях инфекционных стационаров.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано получения функционально неактивных макрофагов из перитонеального экссудата мыши.

Изобретение относится к медицине и описывает композицию ферментных чернил, содержащую фермент, способный избирательно распознавать глюкозу в пробе крови, медиатор и первый и второй пирогенный диоксид кремния, в которой первый пирогенный диоксид кремния имеет удельную поверхность по БЭТ в диапазоне от приблизительно 130 до 170 м2/г и содержание углерода от приблизительно 0,8 до приблизительно 1,23% вес., а второй пирогенный диоксид кремния имеет удельную поверхность по БЭТ в диапазоне от приблизительно 270 до 330 м2/г и содержание углерода от приблизительно 1,4 до приблизительно 2,6% вес.

Изобретение относится к медицине, точнее к хирургии, и может найти применение при трансплантации трупной печени. Изобретение представляет способ оценки донорской печени, включающий выявление в ней наличия и выраженности жировой дистрофии, фиброза, воспалительных явлений и ишемических повреждений, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют морфометрию печени, для чего из края нативной печени до ее забора из тела донора и после завершения периода консервации печени и запуска кровотока в ней у реципиента берут биоптаты печени, обрабатывают их CD 31, измеряют удельные площади синусоидов в донорской печени после запуска кровотока по сравнению с удельной площадью синусоидов в нативной донорской печени не менее чем в 2 раза судят о нарушении внутрипеченочной микроциркуляции у реципиента.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и предназначено для определения инсулинорезистентности у пациентов с нормальной концентрацией глюкозы крови.

Изобретение относится к ортопедии и представляет собой способ диагностики степени тяжести острых послеоперационных гемосиновитов коленного сустава. Согласно изобретению для определения степени тяжести острых послеоперационных гемосиновитов коленного сустава используется микроскопическое исследование гемосиновиальной жидкости с учетом в синовиоцитограмме значения цитоза, содержания нейтрофилов, лимфоцитов и синовиоцитов, что позволяет диагностировать легкую, среднюю или тяжелую степень острого гемосиновита. Изобретение обеспечивает повышение точности и упрощение способа диагностики. 5 табл., 3 пр.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и представляет собой способ доклинических исследований кардиотропных антиаритмических средств, включающий определение биоэлектрических параметров в изолированных многоклеточных перфузируемых препаратах и оценку изменения длительности потенциалов действия, отличающийся тем, что в качестве изолированных многоклеточных перфузируемых препаратов используют миокард легочных вен крысы, причем изменения параметров получают в трех режимах работы многоклеточных препаратов, дополнительно оценивают потенциал покоя и по изменениям ДПД 90%, отношения ДПД 50%/ДПД 90%, скорости спонтанного сдвига потенциала покоя, наиболее положительного значения мембранного потенциала в покоящемся препарате, частоты следования пачек спонтанной активности, частоты и вариабельности следования спонтанных ПД в пачке, количества и интенсивности постдеполяризаций, а также по смещению мембранного потенциала, соответствующего началу пачечной активности, оценивают признаки антиаритмического или аритмогенного действия. Изобретение обеспечивает повышение надежности прогнозирования антиаритмического действия потенциальных фармакологических средств и сокращение длительности экспериментальной фазы. 3 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к трансфузиологии, и предназначено для определения качественных показателей эритроцитсодержащих сред, находящихся на хранении в банке крови. Сущность способа: в процессе их хранения путём сканирования с помощью атомно-силового микроскопа сухих мазков данных компонентов крови и определения модуля Юнга мембран эритроцитов исследуемых эритроцитных сред на любом этапе их хранения и сопоставления полученных результатов со значениями МЮ, полученными с помощью предложенной формулы МЮ=1,81+0,04*х, где МЮ - модуль Юнга [КРа]; х - срок хранения эритроцитсодержащей среды [сутки], описывающей функцию линейной регрессии средних значений МЮ эритроцитов с течением времени до 35 суток при хранении эритроцитсодержащих сред при стандартных условиях - Т=4 °С. Предложенный способ может быть использован отделами технического контроля службы крови для скрининга эритроцитных сред с целью формирования выводов об их пригодности для клинического использования в процессе их хранения. 6 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике разных патологических состояний человека. Для этого проводится измерение характеристик клеток крови пациента по определению их адгезивности к стеклу. При этом исследуют их агрегабильность и ведут учет по месторасположению и составу взаимодействующих клеток. Далее клетки разделяют на мононуклеарные и полинуклеарные, количественно стандартизируют и проводят их совместное инкубирование при оптимальных условиях. Способ может быть использован для цитологической характеристики клеток при онкологических и аутоиммунных заболеваниях. Изобретение повышает достоверность и эффективность известного метода подсчета агломеризированных лейкоцитов. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, эндокринологии, биологии, и предназначено для дифференциальной диагностики вторичного и третичного гиперпаратиреоза. Способ включает проведение тонкоигольной аспирационной биопсии узловых образований в проекции околощитовидных желез, выполняемое под контролем ультразвукового исследования, и приготовление цитологических препаратов. Цитологические препараты высушивают на воздухе и окрашивают по методу Паппенгейма. Исследование препаратов проводят с использованием световой микроскопии при увеличении ×40. При выявлении ряда определенных цитоморфологических признаков, присущих гиперплазии ткани околощитовидной железы, диагностируют вторичный гиперпаратиреоз. При выявлении ряда определенных цитоморфологических признаков, присущих аденоме околощитовидной железы, диагностируют третичный гиперпаратиреоз. Способ прост, малоинвазивен, доступен, обеспечивает точную дифференциальную цитоморфологическую диагностику вторичного и третичного гиперпаратиреоза во время обследования больного до начала лечения, в дооперационном периоде, позволяет выбрать оптимальную тактику лечения, избегая лишнего оперативного вмешательства. 2 пр., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике во внутренних болезнях. Изобретение представляет способ дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и жирового поражения печени у больных с синдромом дислипидемии, заключающийся в том, что у больного в сыворотке крови определяют активность фермента антиоксидантной системы супероксиддисмутазы (СОД), которую оценивают спектрофотометрическим методом, и при значении СОД менее или равно 23 Ед/мг белка диагностируют жировую болезнь печени, при концентрации СОД более 23 Ед/мг белка - хронический вирусный гепатит. Изобретение обеспечивает снижение травматичности, повышение доступности и простоты исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности. 4 пр., 1 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией. Сущность способа оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией состоит в том, что в периферической крови определяют показатель электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ) периферической крови непосредственно перед трансфузией, через 60 минут после ее окончания и далее ежедневно до стабилизации состояния, и при понижении показателя ЭФПЭ периферической крови реципиента от 1,05±0,01 до 1,17±0,01мкм×см×В-1с-1, то есть до 80-90% от значений нормы, оценивают проведенную гемотрансфузию как эффективную и достаточную, при снижении показателя ЭФПЭ от 0,98±0,01 до 1,02±0,01 мкм×см×В-1с-1 от значения нормы, то есть более чем на 21-25% на фоне показателя гемоглобина ниже 80 г/л на следующие за измерением сутки, оценивают проведенную гемотрансфузию как неэффективную и назначают проведение повторной гемотрансфузии, при норме показателя ЭФПЭ 1,31±0,02 мкм×см×В-1с-1. Использование заявленного способа позволяет повысить точность оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Для этого определяют электрическую активность желудка (ЭА), коэффициент ритмичности желудка (Kritm) и коэффициент сравнения желудка и двенадцатиперстной кишки (КС), 24-часовую рН-метрию пищевода, оксид азота (соотношение нитратов/нитритов). При ЭА желудка более 23,2±4,1%, Kritm желудка более 5,43±2,2, КС желудка и двенадцатиперстной кишки более 11,2±5,6, количестве кислых рефлюксов, равном 50 и более в сутки, уровне оксида азота более 35,2±2,7 мкмоль/л и уровне оксида азота менее 35,2±2,7 мкмоль/л диагностируют гастроэзофагеальную рефлюксную болезнь. Способ позволяет повысить точность диагностики гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, в том числе и при эндоскопически негативной её форме. 5 табл., 2 пр.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам подготовки проб, и описывает способ подготовки пробы для газохроматографического определения пестицидов в биоматериале. Способ включает отбор, измельчение биоматериала, двухстадийную экстракцию пестицидов n-гексаном, очищение биоматериала от соэкстративных веществ концентрированной серной кислотой, формирование концентрата n-гексанового экстракта пестицидов, сушку, формирование пробы путем растворения в 0,5-1 мл n-гексана и проведение газохроматографического определения. Изобретение характеризуется повышенной эффективностью и точностью исследований и может быть использовано в биологии, экологии, медицине для газохроматографического определения хлорорганических пестицидов, а именно α-ГХЦГ, β-ГХЦГ, γ-ГХЦГ, ДДТ, ДДД, ДДЕ, в различных биоматериалах, таких как липиды внутренних органов и тканей, кровь, молоко, перья птиц. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии, артрологии и иммунологии, и может быть использовано для лечения острого артрита колена. Для этого перед началом лечения у больных определяют процентное содержание лимфоцитов в крови. После этого проводят 5 сеансов пальцевого точечного массажа точек IV.9, XI.34, VII.60, III.36. Дополнительно при значении процентного содержания лимфоцитов менее 25% вводят миелопид в дозе 6 мг через день курсом 5 инъекций. Способ обеспечивает уменьшение клинических проявлений острого артрита колена с учетом состояния иммунореактивности. 3 пр.
Наверх