Полезная для здоровья композиция и способ ее получения

Авторы патента:

 

C12N1/00 - Микроорганизмы, например простейшие; их композиции (лекарственные препараты, содержащие материал из микроорганизмов A61K 35/66; приготовление лекарственных составов, содержащих бактериальные антигены или антитела, например бактериальных вакцин A61K 39/00); способы размножения, содержания или консервирования микроорганизмов или их композиций; способы приготовления или выделения композиций, содержащих микроорганизмы; питательные среды

Владельцы патента RU 2544969:

БАСФ СЕ (DE)

Изобретение относится к области полезных для здоровья композиций и способу их получения. Способ получения композиции неживой лактобациллы, обладающей способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, включает следующие стадии: нагревание суспензии клеток лактобациллы или смеси лактобацилл, обладающих способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, с исходной температуры ниже 40°C до температуры пастеризации от 75 до 85°C с изменением температуры от 0,5 до 2°C/мин, удерживание нагретой суспензии при температуре пастеризации в течение от 20 до 40 минут и охлаждение суспензии до конечной температуры ниже 40°C с изменением температуры от 0,5 до 2°C/мин. Причем специфическое связывание суспензии клеток лактобациллы или смеси лактобацилл со Streptococcus mutans является устойчивым к термообработке и/или устойчивым к обработке протеазами и/или зависимым от кальция и/или происходит в диапазоне значения рН между 4,5 и 8,5, и/или происходит в присутствии слюны. Изобретение позволяет получить средство, предотвращающее или замедляющее образование кариозных повреждений. 8 з.п. ф-лы, 4 пр.

 

Изобретение относится к области полезных для здоровья композиций и способу их получения.

При развитии кариеса центральную роль играет бактерия Streptococcus mutans. Данная бактерия превращает способные к ферментации сахара в органические кислоты, создавая таким образом кислотную микросреду. Органические кислоты могут деминерализировать зубную эмаль и тем самым вызывать развитие кариозных повреждений или способствовать ему. Кроме того, S. mutans образует нерастворимый в воде глюкановый матрикс. Последний способствует образованию и адгезии зубного налета, а также адгезии S. mutans к поверхности зуба. Далее было установлено, что в кариозных повреждениях часто имеются и другие бактерии, однако всегда вместе с S. mutans. Поэтому в настоящее время исходят из того, что наличие S. mutans является обязательной предпосылкой для развития кариозных повреждений.

Имеется постоянная потребность в средствах, с помощью которых можно предотвратить образование кариозных повреждений. В этой связи задача изобретения заключается в предоставлении средств, с помощью которых можно воздействовать на S. mutans для предотвращения, остановки или замедления образования кариозных повреждений. Кроме того, задача изобретения заключается в предоставлении способа получения таких средств.

Для борьбы с кариозными повреждениями, в частности, для их предотвращения или, по меньшей мере, замедления их образования, в прошлом испытывали целый ряд средств. В частности, специалисту известны обычные химические средства для борьбы с кариесом и связанными с кариесом микроорганизмами, применяемые в зубных пастах, составах для полоскания рта и/или других средствах для ухода за зубами. Кроме того, были предприняты попытки бороться со связанными с кариесом микроорганизмами с помощью других микроорганизмов или их продуктов, в частности, снижая их количество на зубах или в полости рта, или путем другого воздействия на их кариогенность. Такой подход описан, например, в заявке WO 2006/027265 А1. Однако его недостаток заключается в том, что во многих случаях применение живых микроорганизмов в средствах для ухода за ртом потребителями не принимается или же полностью запрещается законодателями. К тому же продукты обмена веществ живых микроорганизмов могут влиять на вкус и/или внешний вид содержащего их продукта, причем такой эффект может быть нежелательным в некоторых продуктах для борьбы с кариозными повреждениями. Кроме того, использование живых микроорганизмов в продуктах для борьбы с кариозными повреждениями ограничивает срок годности данных продуктов.

Поэтому в общем в разных областях техники пытаются вместо живых микроорганизмов использовать метаболически неактивные микроорганизмы, в частности лиофилизированные микроорганизмы. При этом проблема заключаются в том, что такие микроорганизмы в благоприятных для них условиях могут становиться снова метаболически активными, например, если они попадают в благоприятную им водную среду. Поэтому применение метаболически неактивных микроорганизмов связано со значительными ограничениями относительно возможного состава содержащего их продукта.

Поэтому в других областях техники были предприняты попытки производить продукты с умерщвленными микроорганизмами вместо продуктов с живыми или метаболически активными микроорганизмами. Так, например, в заявке WO 01/95741 А1 описан пищевой продукт для содействия равновесию кишечника, содержащий нежизнеспособные молочнокислые бактерии. Молочнокислые бактерии можно лишить жизнеспособности путем термической обработки, например, пастеризации или стерилизации. В указанном документе, однако, указывается также на риск, что вследствие термической обработки могут быть потеряны и некоторые иначе достигаемые способствующие здоровью эффекты микроорганизмов. Хотя в документе говорится о том, что эти способствующие здоровью эффекты могут быть устранены "избирательно", там нет указаний на то, как можно избегать потери желаемого, способствующего здоровью признака при термической обработке микроорганизмов. Таким образом, на основе этого документа специалист не может предсказать или толково предполагать, какие способствующие здоровью эффекты теряются при термической обработке микроорганизмов и какие эффекты не теряются. В частности, не является предсказуемым или предвидимым, теряется ли антикариозный эффект вследствие термической обработки.

Поэтому задача изобретения заключается в предоставлении средств для борьбы с кариозными повреждениями, в частности, средств для предотвращения или замедления образования кариозных повреждений. В частности, средства должны обеспечить достижение желаемого эффекта. Их изготовление должно быть простым и недорогим, причем по возможности вышеприведенные недостатки должны отсутствовать или иметься лишь в незначительной мере.

Таким образом, изобретение относится к способу получения неживой композиции молочнокислых бактерий со способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, включающий следующие стадии:

i) нагревание суспензии клеток молочнокислой бактерии или смеси молочнокислых бактерий, обладающих способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, причем специфическое связывание является

а) устойчивым к термообработке и/или

б) устойчивым к обработке протеазами и/или

в) зависимым от кальция и/или

г) происходит в диапазоне значения рН между 4,5 и 8,5, и/или

д) происходит в присутствии слюны,

с исходной температуры ниже 40°С до температуры пастеризации от 75 до 85°С с изменением температуры от 0,5 до 2°С/мин.,

ii) удерживание нагретой суспензии при температуре пастеризации в течение от 20 до 40 мин,

iii) охлаждение суспензии со стадии ii) до конечной температуры ниже 40°С с изменением температуры от 0,5 до 2°С/мин.

Подобные молочнокислые бактерии раскрыты в заявке WO 2006/027265 А1, на содержание которой полностью ссылается с целью раскрытия настоящего изобретения.

Неожиданно было установлено, что путем осторожной пастеризации выбранных согласно изобретению молочнокислых бактерий согласно стадиям предлагаемого способа удается получить композицию, полностью или в основном свободную от живых, метаболически активных микроорганизмов - молочнокислых бактерий, но обладающую способностью специфического связывания со Streptococcus mutans. Поэтому полученная согласно изобретению композиция пригодна для создания антикариогенного эффекта и, следовательно, в качестве средства для предотвращения и/или лечения кариеса. Понятия "кариес" и "кариозное повреждение" в рамках настоящей заявки использованы взаимозаменяемыми и обозначают хроническую инфекционную болезнь, характеризующуюся образованием размягченных мест на, соответственно в зубе, и при прогрессировании приводящую к смерти зуба. Кариес можно диагностировать известными способами, причем специалист может ссылаться, например, на публикацию Angmar-Mansson и ten Bosch, "Adv. Dent. Res." №7 (1993 г.), 70 до 79.

В рамках настоящего изобретения понятие "борьба с кариесом", соответственно "борьба с кариозными повреждениями" включает также профилактику кариеса. То есть и лица, полость рта которых должна быть свободной от S. mutans, могут извлекать пользу из получаемых согласно изобретению композиций в том смысле, что эти композиции связывают случайно попадавшие клетки S. mutans и облегчают их устранение.

В рамках настоящего изобретения понятие "лечение кариеса" относится также к даче полученных согласно изобретению композиций страдающему от кариеса пациенту для снижения количества клеток S. mutans и по возможности полного удаления S. mutans изо рта, в частности всей полости рта, включая зубы и межзубные промежутки.

Выбранные согласно изобретению микроорганизмы являются очень термостойкими в отношении их способности связывания с S. mutans. Это позволяет сохранить описанный в заявке WO 2006/027265 А1 для живых клеток молочнокислых бактерий, способствующий здоровью эффект связывания с S. mutans также после пастеризации согласно изобретению, не теряя его. Это является особенно необычным, так как в принципе следует исходить из того, что при пастеризации микроорганизмов денатурируется значительная доля, например, их белков, и разлагаются или повреждаются другие компоненты клеток, так что способствующие здоровью эффекты микроогранизмов обычно теряются после пастеризации. И в вышеупомянутой заявке WO 01/95741 А1 указано лишь то, что в случае определенных молочнокислых бактерий возможно сохранить способствующий здоровью эффект на кишечную флору несмотря на пастеризацию. Однако, полость рта имеет совсем другие структуру, содержание и нагрузку, чем кишечник, так что специалист не мог перенести техническое решение согласно вышеназванному документу на настоящее изобретение.

Дальнейшим объектом изобретения является композиция молочнокислых бактерий со способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, получаемая или полученная путем предлагаемого способа получения. Композиция обладает вышеприведенными преимуществами способа получения согласно изобретению, в частности она пригодна для получения антикариогенного продукта для применения на теле человека.

Предпочтительно клетки молочнокислых бактерий выбраны из клеток штаммов Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus или их смесей. Способ получения согласно изобретению можно осуществлять с использованием суспензии чистой культуры штамма молочнокислых бактерий, в частности, штамма Lactobacillus paracasei или Lactobacillus rhamnosus, или же смеси двух, трех, четырех, пяти, шести, семи или больше штаммов. Особенно предпочтительными для способа согласно изобретению являются упомянутые в заявке WO 2006/027265 А1 виды и штаммы молочнокислых бактерий, в частности те, которые под номерами DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 и DSMZ 16673 депонированы в Немецкой коллекции микроогранизмов и клеточных культур, по адресу Машеродер Ber 1б, г.Брауншвайг, Германия, 26-го августа 2004 г. Когда в рамках настоящего изобретения речь идет о клетках молочнокислых бактерий, имеются ввиду, по меньшей мере предпочтительно, также клетки упомянутых штаммов и смеси двух, трех, четырех, пяти, шести или семи из упомянутых штаммов. Специалисту очевидно, что в способе согласно изобретению вместо клеток или дополнительно к клеткам одного из указванных штаммов можно также использовать мутант или производную клеточную линию, причем мутант или производные клеточные линии сохранили способность специфического связывания с S. mutans.

Клетки молочнокислых бактерий предпочтительно обладают способностью специфического связывания со Streptococcus mutans серотипа с (DSMZ 20523) и/или серотипа е (NCTC 10923) и/или серотипа f (NCTC 11060).

Мутант, в частности мутант одного из вышеприведенных штаммов молочнокислых бактерий, обладает одним или несколькими неизменными наследственными изменениями, обычно его нуклеиновой кислоты (кислот). Такие изменения обычно включают точечные мутации, такие как транзиции или трансверсии, а также делецию, вставку и присоединение одного или более оснований нуклеиновой кислоты, вследствие чего нуклеиновая кислота изменяется, и вызывается отклоняющееся от нормы экспрессия гена и/или транскрипция и/или трансляция, соответственно инактивация генных продуктов. Мутации могут происходить спонтанно или вследствие воздействия агентами, таких как, например, химические вещества или облучение. Способы отбора и получения мутантов и производных клеточных линий описаны, например, в публикации Sambrook, "Molecular cloning, a laboratory manual" ["Молекулярное клонирование, справочник для лаборатории"], Cold Spring Harbour Laboratory, Нью-Йорк, 2001 г., а также Ausubel, "Current protocols in molecular biology" ["Актуальные протоколы молекулярной биологии", Green Publishing Associates and Wiley Interscience Нью-Йорк, 1989 г. Дальнейшую информацию специалист найдет в заявке WO 2006/027265 А1.

В рамках настоящего изобретения понятия "специфическое связывание" соответственно "способность специфического связывания" со Streptococcus mutans означает то, что используемые согласно изобретению клетки молочнокислых бактерий, соответственно пастеризованные согласно изобретению клетки, связываются с S. mutans, однако не связываются с большинством, или не связываются ни с какими, остальных микроорганизмов, обычно имеющихся в полости рта в значительном количестве. Предпочтительно выбранные согласно изобретению микроорганизмы не связываются с клетками Streptococcus salivarius, Streptococcus salivarius thermophilus, Streptococcus oralis, Streptococcus mitis и/или Streptococcus sanguinis. Особенно предпочтительно используемые согласно изобретению клетки молочнокислых бактерий не связываются с Streptococcus salivarius ssp.thermophilus API 50 CH (Biomerieux, Франция), Streptococcus oralis DSMZ 20066, Streptococcus oralis DSMZ 20395, Streptococcus oralis DSMZ 20627, Streptococcus mitis DSMZ 12643 и/или Streptococcus sanguinis DSMZ 20567. Далее, используемые согласно изобретению клетки молочнокислых бактерий предпочтительно не связываются с бактериями других родов, чем стрептококков. Особенно предпочтительно они не связываются со Staphylococcus epidermidis DSMZ 1798 и/или Stapyhlococcus epidermidis DSMZ 20044. Для испытания способности связывания специалист поступает согласно описанному в заявке WO 2006/027265 А1 методу, причем он смешивает названные бактерии с выбранными согласно изобретению молочнокислыми бактериями, соответственно их пастеризованными остатками, в объемном соотношении 3:1 и наблюдает возможно вызванное молочнокислыми бактериями агрегирование. Соответствующий способ описан в примере 3 указанной международной заявки.

В соответствие с этим предпочтительным является способ, согласно которому клетки одного или нескольких предпочтительных штаммов молочнокислых бактерий, в частности, L. paracasei или L. rhamnosus, и предпочтительно одного или нескольких из штаммов DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 и DSMZ 16673 и, особенно предпочтительно, по меньшей мере, DSMZ 16671 и/или вышеописанного мутанта или производной клеточной линии, на первой стадии нагревают в суспензии с исходной температуры ниже 40°С до температуры пастеризации от 75 до 85°С с изменением температуры от 0,5 до 2°С, на второй стадии в течение 20 до 40 мин. удерживают на температуре пастеризации (время пастеризации), и на третьей стадии суспензию охлаждают до конечной температуры ниже 40°С с изменением температуры от 0,5 до 2°С.

Температура пастеризации на стадии i) составляет предпочтительно 78 до 80°С, особенно предпочтительно 80°С. При этой температуре пастеризации обеспечено быстрое и экономящее энергию, и при этом надежное умерщвление выбранных согласно изобретению клеток молочнокислых бактерий при одновременном незначительном уменьшении способности связывания по сравнению с непастеризованной культурой живых клеток молочнокислых бактерий.

Время пастеризации составляет предпочтительно 25 до 35 мин, особенно предпочтительно 30 минут. Было установлено, что в частности при температуре пастеризации от 78 до 80°С (предпочтительно 80°С), возможно быстрое умерщвление выбранных согласно изобретению клеток молочнокислых бактерий при малой потере способности связыванию с S. mutans по сравнению с культурой живых клеток молочнокислых бактерий.

Далее предпочтительно изменение температуры на стадиях i) или iii) составляет 0,8 до 1,2°С/мин, предпочтительно 1°С/мин, что обеспечивает короткое время нагревания до достижения температуры пастеризации и, следовательно, экономит энергию без снижения надежности умерщвления клеток молочнокислых бактерий и без сильной потери способности связывания с S. mutans.

В частности предпочтительным является способ, при котором клетки одного или нескольких предпочтительных штаммов молочнокислых бактерий L, paracasei или L. rhamnosus, предпочтительно одного или нескольких из штаммов DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 и DSMZ 16673, особенно предпочтительно, по меньшей мере, DSMZ 16671, и/или вышеописанного мутанта или производной клеточной линии, на первой стадии нагревают в суспензии с исходной температуры ниже 40°С до температуры пастеризации от 78 до 80°С, предпочтительно 80°С, при изменении температуры от 0,8 до 1,2°С, предпочтительно 1°С, на второй стадии в течение 25 до 35 минут, предпочтительно 30 минут, удерживают при температуре пастеризации (время пастеризации), и суспензию на третьей стадии охлаждают до конечной температуры ниже 40°С с изменением температуры от 0,8 до 1,2°С, предпочтительно 1°С.

Пастеризованные согласно изобретению клетки находятся предпочтительно в постэкспоненциальной фазе роста. Особенно предпочтительно на стадии i) предлагаемого способа получения используют клетки из среды культуры, которая сначала обеспечила экспоненциальный рост, при котором, однако, концентрация глюкозы упала до значения не более 1 ммоль глюкозы. При этом является предпочтительным использовать клетки, находившиеся на уровне концентрации глюкозы максимум 1 ммоль в течение не более одного часа, так как иначе начинает теряться способность получаемого в результате предлагаемого способа продукта к специфическому связыванию со Streptococcus mutans, т.е. продукта, получаемого на стадии iii), и, в случае необходимости, на стадии промывки или сушки распылением, описанной ниже.

Далее способ согласно изобретению предпочтительно включает стадию промывки, при которой полученную на стадии (iii) суспензию центрифугируют для повышения концентрации пастеризованных клеток, полученные таким образом концентрированные клетки смешивают с водой и снова центрифугируют для повышения концентрации клеток. Полученные концентрированные клетки имеются в качестве массы, в которой содержание сухого вещества составляет от 10 до 30%, предпочтительно от 18 до 22% от веса массы.

Особенно предпочтительным является способ, наряду со стадиями i) до iii) (в частности, с использованием одного штамма молочнокислых бактерий или смеси двух, трех, четырех, пяти, шести или семи штаммов молочнокислых бактерий, выбранных из DSM 16667, DSM 16668, DSM 16669, DSM 16670, DSM 16671, DSM 16672 и DSM 16673, или с использованием вышеописанного мутанта или производной клеточной линии или штамма L. paracasei или L. rhamnosus) и, в случае необходимости, промывки включающий следующие стадии:

iv) смешивание полученной на стадии iii) и предпочтительно промытой суспензии с носителем для получения смеси для распылительной сушки, причем носитель выбран из сульфатов щелочных и щелочноземельных металлов, предпочтительно сульфата натрия, калия или кальция, и смеси двух или нескольких этих сульфатов, и причем количество носителя выбрано с обеспечением содержания сухого вещества в смеси для распылительной сушки от 10 до 30 вес.%, и

v) распылительную сушку полученной на стадии iv) смеси для распылительной сушки.

При распылительной сушке подлежащий сушке материал подвергается очень суровым условиям, в частности, температуре от 70°С до 200°С. До сих пор не было известно, что выбранные согласно изобретению клетки молочнокислых бактерий выдерживают суровые условия распылительной сушки без существенной потери способности специфического связывания с S. mutans. Кроме того, ввиду большой доли носителя согласно изобретению на стадии iv) ожидалось бы, что отвечающие за связывание с S. mutans структуры поверхности молочнокислых бактерий денатурируются или другим образом повреждаются. Неожиданно было установлено, что при выбранных условиях возможна распылительная сушка полученной на стадии iii) суспензии без существенной потери способности связывания с S. mutans.

Некоторые преимущества распылительной сушки согласно изобретению и полученной в ее результате предлагаемой композиции заслуживают особого внимания. В отличии от простой пастеризации, распылительная сушка согласно изобретению обеспечивает получение нелипкой или негигроскопической композиции. Понятие "гигроскопический" в данной связи означает, что при открытом хранении при температуре 20°С в течение 12 месяцев и при относительной влажности воздуха, составляющей 50%, вес композиции повышается не более чем на 2%. Полученная таким образом композиция согласно изобретению особенно пригодна для дальнейшей переработки в сухих продуктах, она отрицательно не влияет на свойства этих продуктов вследствие притягивания воды или особенной липкости.

Далее, предлагаемый способ получения позволяет получить композицию согласно изобретению, которая является свободно текучей. Хранение и переработка свободно текучих композиций в виде частиц являются особенно простыми, и такие композиции можно ввести в разные продукты, причем с точной дозировкой. Благодаря этому полученные путем предлагаемого способа распылительной сушки композиции согласно изобретению можно использовать в крупных экономических масштабах в более широком диапазоне продуктов, чем суспензию, непосредственно полученную на стадии iii).

В качестве носителя на стадии iv) особенно предпочтительно используют сульфат натрия. Предпочтительно количество носителя, предпочтительно сульфата натрия, составляет 4-кратное количество сухой массы используемой суспензии, полученной на стадии iii). При этом общее количество сухого вещества в используемой на стадии v) смеси для распылительной сушки составляет примерно 20 вес.%.

Распылительную сушку согласно стадии v) осуществляют предпочтительно при входной температуре используемого для распылительной сушки входного газа от 180 до 250°С и при температуре выходящего из зоны сушки, обычно распылительной башни, газа от 70 до 100°С, предпочтительно 85°С, причем среднее время пребывания подлежащего сушке материала в зоне воздействия используемого для распылительной сушки газа составляет от 10 до 60 секунд, предпочтительно от 20 до 40 секунд. В остальном в отношении распылительной сушки специалист может ссылаться на информацию заявки WO 01/25411 А1. В данном документе описаны в общем пригодные способы распылительной сушки для получения высушенных путем распылительной сушки ферментных продуктов. Неожиданно было установлено, что и при предлагаемых предпочтительно высоких температурах возможна распылительная сушка без существенной потери способности связывания с S. mutans. Этого нельзя было ожидать исходя из заявки WO 01/25411 А1, в частности, потому, что данная заявка не содержит ни одного примера успешной распылительной сушки после пастеризации и, с точки зрения специалиста, является спекулятивной относительно пригодности распылительной сушки, якобы, для очень широкого класса ферментов.

Поэтому особенно предпочтительным является предлагаемый способ, согласно которому

(i) клетки одного или несколько предпочтительных штаммов молочнокислых бактерий L. paracasei или L. rhamnosus, предпочтительно одного или несколько из штаммов DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 и DSMZ 16673, особенно предпочтительно, по меньшей мере, DSMZ 16671, и/или вышеописанного мутанта, или производной клеточной линии, в вышеописанной постэкспоненциальной фазе роста на первой стадии нагревают в суспензии с исходной температуры ниже 40°С до температуры пастеризации 78-80°С, предпочтительно 80°С, с изменением температуры от 0,8 до 1,2°С, предпочтительно 1°С, после чего

(ii) суспензию удерживают в течение 25 до 35 минут, предпочтительно 30 минут, при температуре пастеризации, после чего

(iii) суспензию охлаждают до конечной температуры ниже 40°С с изменением температуры от 0,8 до 1,2°С, предпочтительно 1°С, с последующей промывкой водой, как описано выше, и путем центрифугирования устанавливают на содержание сухого вещества от 10 до 30 вес.%, предпочтительно от 18 до 22 вес.%, после чего

(iv) суспензию смешивают с носителем для получения смеси для распылительной сушки, причем носитель выбран из сульфата натрия, сульфата калия и сульфата кальция и смеси двух или более из них, а особенно предпочтительно представляет собой сульфат натрия, и причем количество носителя выбрано с обеспечением содержания сухого вещества в смеси для распылительной сушки в пределах от 10 до 30 вес.%, после чего

(v) полученную на стадии (iv) суспензию, снабженную носителем, подвергают распылительной сушке при температуре входного газа для распылительной сушки от 180 до 250°С и температуре выходного газа из предусмотренной для сушки зоны, обычно сушильной башни, от 70 до 100°С, предпочтительно 85°С, причем среднее время пребывания подлежащего распылительной сушке материала в зоне воздействия газа для распылительной сушки составляет 10 до 60 секунд, предпочтительно 20 до 40 секунд.

Этот способ обеспечивает достижение вышеприведенных преимуществ изобретения.

Предлагаемую композицию молочнокислых бактерий, обладающую способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, получаемую или полученную путем способа, включающего стадии i) до iii) и, в случае необходимости, iv) и v), предпочтительно вводят в продукт для применения на теле человека. При применении на теле человека, в частности, путем введения в полость рта и/или приведения в контакт с зубами, можно в самом деле осуществлять профилактику кариеса с использованием предлагаемых композиций.

Целесообразно предлагаемые изделия содержат предлагаемую композицию в достаточном для связывания с S. mutans и/или для достижения антикариогенного эффекта количестве. Данное количество зависит от вида соответствующего продукта, а также от его галенической формы. В частности, количество зависит от желаемой меры возможного связывания с S. mutans соответственно возможного антикариогенного эффекта. Путем стандартных исследований специалист может легко определить количество предлагаемой композиции, достаточное в зависимости от желаемого эффекта, вида продукта и его галенической формы. В частности, специалист будет учитывать, что продукт можно снабжать покрытием из предлагаемой композиции или смешивать с данной композицией.

Предпочтительно продукт согласно изобретению относится к группе, включающей пищевые продукты, вкусовые продукты, напитки, полуфабрикаты, средства для гигиены полости рта, косметические и фармацевтические продукты. Соответствующие продукты описаны в заявке WO 2006/027265 А1.

Особенно предпочтительными продуктами являются жевательные резинки, зубная паста, средства для полоскания рта и конфеты.

Изобретение ниже описано более подробно на основе примеров, причем примеры не ограничивают объем защиты формулы изобретения.

Пример 1: Общий способ получения

Клетки молочнокислых бактерий, обладающие способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, причем специфическое связывание является

а) устойчивым к термообработке и/или

б) устойчивым к обработке протеазами и/или

в) зависимым от кальция и/или

г) происходит в диапазоне значения рН между 4,5 и 8,5, и/или

д) происходит в присутствии слюны,

культивируют в подходящей водной питательной среде при температуре 37°С. Пригодная питательная среда содержит глюкозу, дрожжевой экстракт, Tween 80 и соли. Культивирование осуществляют в режиме подпитки в виде водной суспензии.

Как только содержание глюкозы в питательной среде упало ниже 1 ммоль, или в течение не более 1 часа после этого момента, суспензию нагревают до температуры пастеризации от 75 до 85°С, предпочтительно от 78 до 80°С. При нагревании суспензии изменение температуры составляет от 0,5 до 1,2°С/мин, предпочтительно от 0,8 до 1,2°С/мин.

Нагретую суспензию держат при температуре пастеризации в течение 20 до 40 минут, предпочтительно 25 до 35 минут, особенно предпочтительно 30 минут.

Затем суспензию охлаждают до температуры ниже 40°С. При этом изменение температуры составляет 0,5 до 2°С/мин., предпочтительно 0,8 до 1,2°С/мин.

После этого охлажденную суспензию путем центрифугирования концентрируют до содержания сухого вещества от 10 до 30 вес.%. Полученный таким образом концентрат повторно суспендируют в воде и снова концентрируют путем центрифугирования до содержания сухого вещества от 10 до 30 вес.%. Повторное суспендирование и концентрирование проводят в общем до 8 раз. В результате получают промытую массу с содержанием сухого вещества от 10 до 30 вес.%.

Полученная масса обладает еще способностью специфического связывания со Streptococcus mutans. Массу как таковую можно вводить в пищевые продукты, вкусовые продукты, напитки, полуфабрикаты, средства для гигиены полости рта, косметические и фармацевтические продукты, для придания соответствующему продукту свойства для борьбы с кариесом или усиления его имеющихся свойств для борьбы с кариесом.

Пример 2: Получение композиции для ухода за ртом

Культуру L. paracasei или L. rhamnosus, обладающую способностью специфического связывания со Streptococcus mutans по определению согласно изобретению, культивируют, пастеризуют и промывают аналогично примеру 1. Температура пастеризации составляет 80°С, время пастеризации - 30 минут. Изменение температуры каждый раз составляет 0,8 до 1,2°С/мин. Полученную после первого центрифугирования концентрированную суспензию повторно суспендируют добавлением воды до содержания сухого вещества 5 вес.% в вновь полученной суспензии. Полученную таким образом суспензию подвергают повторному центрифугированию до содержания сухого вещества 20 вес.%.

К полученной таким образом промытой и концентрированной массе добавляют водный носитель и ароматизаторы. Таким образом получают средство для полоскания рта, пригодное для борьбы с кариесом.

Таким же образом получают промытые и концентрированные массы из DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 и DSMZ 16673. И эти массы смешивают с водным носителем и ароматизаторами для получения средства для полоскания рта для борьбы с кариесом.

Вместо средства для полоскания рта получают жевательные резинки, зубную пасту и конфеты для борьбы с кариесом путем введения соответствующей промытой и концентрированной массы в основную массу жевательной резинки, зубной пасты и конфет, и добавления желаемых ароматизаторов.

Пример 3: Общий способ распылительной сушки

Предоставляют основной раствор для распылительной сушки путем получения водного 10 до 30%-го раствора сульфата щелочного или щелочноземельного металла. Полученную согласно примеру 1, промытую и концентрированную массу повторно суспендируют в четырехкратном количестве основного раствора для распылительной сушки для образования смеси для распылительной сушки, так что из 100 объемных единиц массы получают 500 объемных единиц смеси для распылительной сушки.

Смесь для распылительной сушки подвергают распылительной сушке путем подачи в башню для распылительной сушки. В последнюю вводят газ для распылительной сушки, который при подаче в башню для распылительной сушки имеет температуру от 180 до 250°С, а при выпуске из башни распылительной сушки - от 70 до 100°С. Среднее время пребывания смеси для распылительной сушки в башне для распылительной сушки составляет не более 60 секунд.

В полученном в результате распылительной сушки материале сохранена способность специфического связывания со Streptococcus mutans, описанная выше в примере 1. Полученный в результате распылительной сушки материал можно как таковой вводить в пищевые продукты, вкусовые продукты, напитки, полуфабрикаты, средства для гигиены полости рта, косметические и фармацевтические продукты, для придания соответствующему продукту свойства для борьбы с кариесом или усиления в нем имеющихся свойств для борьбы с кариесом.

Пример 4: Получение дальнейшей композиции для ухода за ртом

Культуру L. paracasei или L. rhamnosus, обладающую способностью специфического связывания со Streptococcus mutans по определению согласно изобретению, культивируют, пастеризуют и промывают аналогично примеру 1. Температура пастеризации составляет 80°С, время пастеризации - 30 минут. Изменение температуры составляет от 0,8 до 1,2°С/мин. Полученную в результате первого центрифугирования концентрированную суспензию повторно суспендируют путем добавления воды до содержания сухого вещества 5 вес.% во вновь полученной суспензии. Полученную таким образом суспензию вновь центрифугируют до содержания сухого вещества 20 вес.%.

Затем суспензию подвергают распылительной сушке путем способа, описанного в примере 3. Основной раствор для распылительной сушки представляет собой 20%-ный водный раствор сульфата натрия. Входная температура газа для распылительной сушки при впуске в башню для распылительной сушки составляет 180-250°С. Выходная температура газа для распылительной сушки при выпуске из башни для распылительной сушки составляет 70-100°С. Среднее время пребывания смеси для распылительной сушки в башне для распылительной сушки составляет 10 секунд.

Получают высушенный путем распылительной сушки материал, к которому добавляют водный носитель и ароматизаторы, в результате чего получают средство для полоскания рта для борьбы с кариесом.

Таким же образом получают высушенные путем распылительной сушки материалы из DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672, соответственно DSMZ 16673, и данные материалы смешивают с водным носителем и ароматизаторами для получения средств для полоскания рта для борьбы с кариесом.

Вместо средства для полоскания рта можно получать жевательные резинки, зубные пасты и конфеты для борьбы с кариесом путем введения соответствующего материала в основную массу для жевательной резинки, зубной пасты или конфет и добавления желаемых ароматизаторов.

1. Способ получения композиции неживой лактобациллы, обладающей способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, включающий следующие стадии:
i) нагревание суспензии клеток лактобациллы или смеси лактобацилл, обладающих способностью специфического связывания со Streptococcus mutans, причем специфическое связывание является
а) устойчивым к термообработке и/или
б) устойчивым к обработке протеазами и/или
в) зависимым от кальция и/или
г) происходит в диапазоне значения рН между 4,5 и 8,5, и/или
д) происходит в присутствии слюны,
с исходной температуры ниже 40°C до температуры пастеризации от 75 до 85°C с изменением температуры от 0,5 до 2°C/мин,
ii) удерживание нагретой суспензии при температуре пастеризации в течение от 20 до 40 минут,
iii) охлаждение суспензии со стадии ii) до конечной температуры ниже 40°C с изменением температуры от 0,5 до 2°C/мин.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что клетки лактобациллы выбраны из клеток Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, или их смеси.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что клетки лактобациллы выбраны из клеток Lactobacillus paracasei или Lactobacillus rhamnosus, предпочтительно с номером DSMZ - DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 и DSMZ 16673, или мутанта или производной клеточной линии, причем в мутанте или производной клеточной линии сохранена способность специфического связывания со Streptococcus mutans.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что лактобациллы обладает способностью специфического связывания со Streptococcus mutans серотипа с (DSMZ 20523) и/или серотипа е (NCTC 10923) и/или серотипа f (NCTC 11060).

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что на стадии i) температура пастеризации составляет 78 до 80°C.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что изменение температуры на стадии i) и/или iii) составляет 0,8 до 1,2°C/мин.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что на стадии i) среда суспензии содержит глюкозу в количестве не более 10 ммоль /л.

8. Способ по одному из пп.1-7, дополнительно включающий следующие стадии:
iv) смешивание полученной на стадии iii) суспензии с носителем для получения смеси для распылительной сушки, причем носитель выбран из сульфатов щелочных и щелочноземельных металлов, и причем количество носителя выбрано с обеспечением содержания сухого вещества в суспензии для распылительной сушки от 10 до 30 вес.%,
v) распылительную сушку полученной на стадии iv) смеси для распылительной сушки.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что распылительную сушку осуществляют при входной температуре используемого для распылительной сушки газа от 180 до 250°C и при температуре выходящего из зоны сушки, обычно распылительной башни, газа от 70 до 100°C, предпочтительно 85°C, причем среднее время пребывания подлежащего распылительной сушке материала в зоне воздействия газа для распылительной сушки составляет 10 до 60 секунд, предпочтительно 20 до 40 секунд.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений касается способа улучшения показателей роста животного и композиции, используемой в таком способе. Охарактеризованный способ включает введение животному, не являющемуся насекомым или человеком, эффективного количества композиции, включающей Bacillus subtilis QST713, с кормом или питьевой водой.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ очистки сточных вод.

Изобретение относится к биотехнологии и к сельскохозяйственной микробиологии. Способ предусматривает предпосевную обработку семян, пролив почвы и обработку вегетативных частей растений культуральной жидкостью штамма Lactobacillus plantarum 60-ДЕП, депонированного во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, с титром 106 KOE/мл при расходе 5-30 мл на 100 мл воды.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для очистки промышленных сточных вод машиностроительных, приборостроительных, электротехнических предприятий от повышенных концентраций ионов меди и других тяжелых металлов.
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению плотной питательной среды, с помощью которой возможно определение антибиотикочувствительности культур возбудителя легионелеза - Legionella pneumophila.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена бактерия Bacillus subtilis, продуцирующая 5′-аминоимидазол-4-карбоксамидрибозид (АИКАР).

Изобретение «Применение глубинной морской воды из сероводородной зоны Черного моря в качестве среды культивирования морских водорослей» относится к марикультуре и предназначено для культивирования морских водорослей в лабораторных и промышленных условиях. Техническая сущность изобретения заключаются в применении глубинной воды Черного моря как содержащей сероводород, так и окисленной в качестве среды культивирования морских водорослей. Исследования биогенных свойств водной среды из восстановительной зоны Черного моря, выполненные авторами изобретения показали, что глубинная вода не оказывает губительного действия на черноморские планктонные водоросли в присутствии высоких исходных концентраций сероводорода.

Изобретение относится к винодельческой промышленности. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae «Айвовый-Д» депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ), ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером Y-3973.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Lactobacillus delbrueckii подвид lactis CNCM I-3741, снижающий содержание холестерина в крови.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Arthrospira platensis (Nordst.) Geitl.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения антигена для диагностики бруцеллеза. Способ получения бруцеллезного L-антигена осуществляют следующим образом.

Изобретение относится к аппаратам для проведения биохимических процессов с использованием жидких сред различной вязкости, в частности при культивировании клеток тканей и микроорганизмов в питательных средах повышенной вязкости, и может быть использовано в различных отраслях промышленности, в частности биотехнологии и пищевой промышленности.
Изобретение относится к биотехнологии. Плоды и кожуру бананов взвешивают, промывают, измельчают и смешивают с предварительно подогретой до 45±1°C водой в соотношении 1:3.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения протективных антигенов на основе секретируемых белоксодержащих соединений Staphylococcus aureus.

Изобретение относится к микробиологии. Способ культивирования сублимированных штаммов микроорганизмов предусматривает внесение в плотную питательную среду стимулятора роста и источника углерода с последующим посевом клеток микроорганизма, инкубацией посевов и учетом жизнеспособных микробных клеток.
Изобретение относится к области микробиологии. Готовят две взвеси.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к лейколектинам, и может быть использовано в медицине. Получен полипептид лейколектин, характеризующийся SEQ ID NO:1-8.

Изобретение относится к очистке окружающей среды. Для детоксикации загрязненного нефтепродуктами грунта в него вносят природный сорбент с биопрепаратом до достижения заданной концентрации загрязняющего вещества в грунте.

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано для регулирования проницаемости метан-продуцирующей клетки. Получают полипептид, который способен проникать в метан-продуцирующую клетку и повышать ее проницаемость, характеризующийся аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:117, 118 или 119 или по меньшей мере 90% идентичностью к указанной последовательности или по меньшей мере 15 последовательно расположенными аминокислотами указанной последовательности.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам разведения полезных насекомых. Способ предусматривает приготовление питательной среды, содержащей соевую муку, сахарозу, сухое молоко, масло пальмоядровое, сухую тлю, соль Вессона, сухие пивные дрожжи, токоферол, аскорбиновую кислоту, агар-агар, витамины B1, B6, В12, метабен, инозит и дистиллированную воду в заданном соотношении и выращивание кокцинеллиды Harmonia axyridis Hall.

Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой косметический продукт, который имеет, в каждом случае в расчете на общий состав продукта, следующее содержание компонентов: по меньшей мере 0,1 мас.
Наверх