Способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2546035:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской диагностике в области онкологии, и описывает способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи. Способ включает исследование ткани удаленной во время операции опухоли, определение уровней маркеров VEGF C и VEGF A, расчет величины их соотношения и при увеличении этого показателя относительно значений в интактной коже, полученной при оперативном лечении неонкологических больных, в 5 и более раз прогнозируют метастазы в лимфатические узлы, тогда как при снижении этого соотношения в 10 и более раз прогнозируют гематогенное метастазирование. Способ характеризуется доступностью, относительной простотой и практичностью оценки факторов роста сосудов и позволяет прогнозировать риск наличия скрытой метастатической фазы заболевания, проводить объективный контроль за развитием злокачественного процесса, в частности меланомы кожи, предполагать развитие метастазов до их клинического проявления и включать больных в группу риска для интенсивного наблюдения, своевременно принимать меры для назначения адъювантного лечения. Изобретение может быть использовано в повседневной клинической практике учреждений здравоохранения, НИИ и онкологических диспансеров. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения заболевания меланомой кожи.

Одной из важных задач клинической онкологии является поиск критериев прогноза заболевания до клинического проявления метастазов и рецидивов, что может способствовать индивидуализации тактики адъювантных методов лечения и, в конечном итоге, определить продолжительность жизни больного.

Известен способ прогнозирования течения заболевания при меланоме кожи с использованием в качестве маркера кинетики видимого роста опухоли, отмеченного больными (Grob Jean Jacques, Richard Marie Aleth, Gonven Johary et al./ The kinetics of the visible growth of a primary melanoma reflects the tumor aggressiveness and is an independents prognostic marker. Jnt. S. Cancer., 2002, Vol.102, №1, P. 34-38). Авторы проанализировали анамнестические данные о времени возникновения и темпах увеличения опухоли в каждом конкретном случае 362 больных меланомой кожи. Сопоставив полученную информацию с последующей клинической картиной заболевания, пришли к заключению, что кинетика видимого роста является более ценным и качественным прогностическим маркером, чем такой широко применяемый критерий, как толщина опухоли по Берслоу.

Однако указанный способ прогнозирования имеет определенные недостатки. Один из них обусловлен субъективностью получаемого от больного описания предшествующего хода развития новообразования. При достаточно большой выборке, которую рассматривали авторы, а именно 362 случая, субъективная оценка может в определенной степени нивелироваться, но при индивидуальном применении неизбежны значительные ошибки.

Вторым недостатком указанного способа прогнозирования можно считать тот факт, что согласно современным представлениям клиническая характеристика опухолей не является достаточной для предсказания прогноза заболевания. Важная роль в этом отношении принадлежит индивидуальным особенностям метаболических процессов в организме носителе опухоли, что подтверждается многочисленными примерами различного течения злокачественной патологии и эффективности противоопухолевых воздействий у лиц с одинаковыми клиническими показателями болезни.

Известен способ прогнозирования течения меланомы кожи на основании характеристики молекулярного фенотипа опухоли (Cree Jan А. Cell cycle and melanoma - two different tumours from the same cell type. J.Pathol, 2000, Vol. 191, P. 112-114), выбранный нами в качестве прототипа. Авторы исследовали экспрессию белков, связанных с клеточным циклом и участвующих в клеточной пролиферации, в ткани опухоли. Было установлено, что состояние повышенной экспрессии c-myc и циклина Д1 определяет плохой прогноз заболевания.

Однако недостатком данного способа является прогнозирование течения меланомы только на основании изучения особенности молекулярного статуса опухоли без учета метаболических факторов, способных существенно влиять на развитие опухолевого процесса при сходных морфологических и фенотипических свойствах опухоли, а именно предвидеть вариант метастазирования. Другим недостатком является высокая стоимость и длительность выполнения генетических исследований.

Техническим результатом изобретения является выявление критериев прогноза вариантов метастазирования у больных меланомой кожи.

Технический результат достигается тем, что в ткани удаленной во время операции опухоли исследуют уровень VEGF C и VEGF A, рассчитывают величину их соотношения и при увеличении этого показателя относительно значений в интактной коже, полученной при оперативном лечении неонкологических больных (косметические операции), в 5 и более раз прогнозируют метастазы в лимфатические узлы, тогда как при снижении этого соотношения в 10 и более раз прогнозируют гематогенное метастазирование.

Изобретение «Способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи» является новым, так как оно неизвестно из уровня медицины в области поиска критериев прогноза заболевания путем исследования факторов ангиогенеза в ткани меланомы.

Новизна изобретения заключается в оценке индивидуальных особенностей ткани опухоли индуцировать ангиогенные факторы, ответственные за образование лимфатических (VEGF C) или кровеносных (VEGF A) сосудов. Авторами учитываются факторы злокачественной опухоли, способные стимулировать неолимфангиогенез или неоангиогенез и существенно влиять на развитие процесса при сходных морфологических и фенотипических свойствах.

Изобретение «Способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи» является промышленно применимым, так как может быть использовано в учреждениях здравоохранения, в научно-исследовательских онкологических институтах, онкологических диспансерах и других медицинских учреждениях, занимающихся лечением меланомы кожи.

Изобретение «Способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи» выполняется следующим образом.

Навеску ткани меланомы кожи, удаленной во время операции, в количестве 100 мг гомогенизировали на льду с 1 мл 0,1 M калий-фосфатного буфера pH 7.4, содержащего 0,1% Твин-20 и 1% БСА. Полученные гомогенаты центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин, осадок отбрасывали в приготовленной 10% цитозольной фракции методом ИФА с использованием стандартных тест-систем исследовали уровень VEGF C и VEGF A, рассчитывали соотношение первого ко второму.

В качестве контрольных значений используют уровень VEGF C и VEGF A, а также соотношение первого ко второму, определенное в интактной коже неонкологических больных, полученную при выполнении косметических операций.

Под нашим наблюдением находилось 28 больных обоего пола, у которых при поступлении была диагностирована меланома кожи. Возраст больных колебался от 45 до 66 лет. Больные подвергались оперативному лечению в объеме иссечения опухоли, после операции устанавливалась стадия процесса - pT1-4N0M0.

Всем больным проводилось исследование уровней фактора роста эндотелия сосудов (VEGF C и VEGF A), рассчитывалось соотношение VEGF C к VEGF A. В 16 образцах меланомы кожи (1 группа) соотношение VEGF C к VEGF A было в 5 и более раз выше (от 11,1 до 86,8), чем этот показатель в интактной коже (2,2±0,06). В 8 образцах (2 группа) соотношение VEGF C к VEGF A было в 10 и более раз ниже (от 0,22 до 0,03), чем этот показатель в интактной коже. В 4 образцах меланомы кожи (3 группа) соотношение VEGF C к VEGF A колебалось от 3,2 до 9,0.

Динамическое наблюдение за этими пациентами выявило в сроки от 1 года до 1,5 лет появление:

- у 12 из 16 больных 1 группы метастазов в регионарные лимфатические узлы;

- у 5 из 8 больных - метастазы в висцеральные органы - у 2-х в печень, у 2-х - в легкие и у 1-го - в мозг.

Все больные 3 группы живы в течение этого срока без признаков метастазирования.

Пример 1

Больная X., история болезни №С-16257/б, 1954 г.р., поступила в отделение реконструктивно-пластической хирургии 9.09.2012 г. с диагнозом: Меланома кожи правого плеча кл.гр. 2. При поступлении предъявляла жалобы на наличие пигментного опухолевого образования на коже правого плеча.

Объективно: На наружной поверхности правого плеча пигментное (иссиня-черное) экзофитное образование с четкими границами, около 2,5 см в диаметре, наличие сателлита опухоли. Регионарные лимфоузлы не увеличены, безболезненны при пальпации, не спаяны с окружающими тканями.

Данные дополнительных методов обследования:

ФЛО ОГК от 2.10.2012 - легкие и сердце без патологии.

УЗИ ОБП и регионарных л/у от 26.09.2012 г. - Гепатомегалия. Диффузные изменения паренхимы печени (по типу жирового гепатоза). Диффузные изменения поджелудочной железы. Уплотнение стенок желчного пузыря. Микролиты почек.

СРКТ ОГК, ОБП и малого таза от .09.12 г. - без патологии.

МРТ г. мозга от 15.10.12 г. - без патологии.

Проведенное лечение: операция (10.10.2012 г.) - широкое иссечение образования кожи правого плеча с пластикой ротационным лоскутом.

Верификация процесса (гистологический анализ №62307-08/12): Меланома из невусоподобных клеток, ст. III по Кларку, 3 мм по Бреслоу, с подлежащей тканью.

В ткани меланомы методом ИФА определили уровень VEGF-C и VEGF-A, величина которых составила 1216,6 пг/мл и 29,2 пг/мл соответственно. Коэффициент соотношения VEGF-C/ VEGF-A был равен 41,7, т.е. коэффициент превосходил контрольные значения в 19 раз, что указывало на вероятность развития лимфогенного метастазирования.

Послеоперационный период протекал гладко, без осложнений. В п/о периоде проводилась а/б терапия медоцефом 1 г 1 р/д, курсом 5 дней. Рубец розовый. Заживление первичным натяжением.

Заключительный диагноз: (С 43.6) Меланома кожи в/з правого плеча pT3aN0M0, st. IIa, состояние после хирургического лечения кл. гр. 2.

С 1.10.12 по 23.10.12 г. получила курсы ДГТ на область п/о рубца и зоны лимфооттокав ГОД г. Шахты в СОД=40 изоГр., курсы иммунотерапии - роферон 3 млн. ME п/к 3 раза в неделю, с перерывами 2 недели, длительностью 8 месяцев.

Повторно больная X., история болезни №С-1625 7/б, 1954 г.р., поступила в отделение реконструктивно-пластической хирургии 17.07.2013 г. с диагнозом: Меланома кожи правого плеча pT3aN0M0, St. IIa, состояние после комбинированного лечения, интерферонотерапии, mts в аксиллярный л/у справа, кл.гр.2.

При поступлении предъявляла жалобы на наличие гиперплазированного л/у в подкрыльцовой области справа. Объективно: в п/о рубце на коже правого плеча без рецидива. При пальпации в аксиллярной области справа обнаружен гиперплазированный лимфоузел до 4 см в диаметре, умеренной подвижности, плотной консистенции.

Данные дополнительных методов обследования:

ФЛО ОГК от 15.07.13 г. - сердце и легкие без патологии.

УЗИ ОБП и регионарных л/у от 15.07.2013 г. - Гепатомегалия. Диффузные изменения паренхимы печени (по типу жирового гепатоза). Диффузные изменения поджелудочной железы. Уплотнение стенок желчного пузыря. Микролиты почек. В правой аксиллярной области определяется единичный изоэхогенный л/у размером 4,2 см.

СРКТ ОГК, ОБП и малого таза от 15.07.13 г. - без патологии.

Проведенное лечение: операция (18.07.2013 г.) - подкрыльцово-подлопаточная ЛАЭ справа. Верификация процесса (гистологический анализ №43010-11/13): метастаз меланомы.

Заключительный диагноз: (С 43) Меланома кожи правого плеча pT3aN0M0, st. IIa, состояние после комбинированного лечения, интерферонотерапии, mts в аксиллярные л/у справа, состояние после хирургического лечения, кл. гр. 2: Больная прошла 4 курса ПХТ дакарбазин 1000 мг в/в кап. в 1 и 8 день, метотрексат 40 мг в/в в 1 и 8 день, винкристин 1 мг/м2 в/в в 1 и 8 день. Перерыв до 28 дней. Под контролем OAK.

В настоящее время больная наблюдается без признаков рецидива. Рекомендовано динамическое наблюдение у онколога по месту жительства (УЗИ ОБП 1 раз в 3 мес. СРКТ ОГК. МРТ г. мозга 1 раз в 6 мес.).

Пример 2

Больная П., история болезни №С-15996/б, 1946 г.р., поступила в отделение реконструктивно-пластической хирургии 4.10.2012 г. с диагнозом: (С 43) меланома кожи правой голени T4NxMx St III, кл. гр. 2

При поступлении предъявляла жалобы на наличие пигментного опухолевого образования на коже нижней трети правой голени.

Объективно: на коже н/3 правой голени (задне-внутренняя поверхность) плотное, не подвижное опухолевое образование 7×7 см, с язвенным дефектом (последствие биопсии) до 1 см в диаметре, кожа вокруг образования инфильтрирована, гиперемирована. Пахово-бедренные лимфоузлы не увеличены, безболезненны при пальпации, не спаяны с окружающими тканями.

Данные дополнительных методов обследования:

УЗИ ОБП и регионарных л/у от 22.08.2012 - Печень без очаговых изменений. Диффузные изменения поджелудочной железы.

ФЛО ОГК от 22.08.2012 - в легких и сердце без видимой патологии.

СРКТ ОГК, ОБП и малого таза от 18.09.12 г. - без патологии.

МРТ г. мозга от 5.10.12 г. - МР - данных за опухоль и мтс поражения структур головного мозга не выявлено.

Проведенное лечение: операция (8.10.2012 г.) - широкое иссечение образования кожи правой голени с аутодермопластикой. Верификация процесса (гистологический анализ №61797-98/12): смешанноклеточная меланома с крупными очагами некроза IV-V по Кларку, 1 см по Бреслоу.

В ткани меланомы методом ИФА определили уровень VEGF-C и VEGF-A, величина которых составила 22,2 пг/мл и 143,2 пг/мл соответственно. Коэффициент соотношения VEGF-С/ VEGF-A был равен 0,16, т.е. коэффициент был ниже контрольных значений в 14,7 раза, что указывало на вероятность развития гематогенного метастазирования.

Послеоперационный период протекал гладко, без осложнений. В п/о период была проведена а/б терапия медоцеф по 1 г 1р/день, курсом 7 дней. Рубец розовый. Заживление первичным натяжением.

Заключительный диагноз: (С 43) Меланома кожи правой голени pT4bNxMx St IIIb,. кл. гр.2.

С 28.10.12 по 20.11.12 г. получила курсы ДГТ на область п/о рубца и зоны лимфооттока в РНИОИ в СОД=40 изоГр., курсы иммунотерапии - роферон 3 млн ME п/к 3 раза в неделю, с перерывами 2 недели, длительностью 1 год.

Повторно больная П., история болезни №С-17504/в, 1946 г.р., поступила в отделение реконструктивно-пластической хирургии 06.11.2013 г. с диагнозом: (С 43) Меланома кожи правой голени pT4bNxMx St IIIb,. кл. гр.2., состояние после комбинированного лечения, интерферонотерапии.

Данные дополнительных методов обследования:

СРКТ ОГК, ОБП и малого таза от 19.11.13 г. - в легких справа в нижней доле кальцинаты, слева в нижней доле очаг 0,5 см, вероятнее всего мтс. СРКТ головного мозга от 19.11.13 г. - без патологии.

УЗИ регионарных л/у от 19.11.2013 г. - Гепатомегалия. Диффузные изменения паренхимы печени (по типу жирового гепатоза). Диффузные изменения поджелудочной железы. Л/у не увеличены.

Заключительный диагноз: (С 43) Меланома кожи правой голени pT4bNxMx St IIIb,. кл. гр.2., состояние после комбинированного лечения, интерферонотерапии, генерализация (mts в легкие).

Больная прошла 3 курса ПХТ цисплатин 20 мг/м2 в/в кап. 2-5 дни после водной нагрузки и форсированного диуреза; дакарбазин 800 мг/м2 в/в кап 1 день; винбластин 5 мг в/в стр. 1 и 5 дни. Контроль OAK, на фоне противорвотных (ондасетрон).

В настоящее время больная наблюдается без признаков рецидива. Рекомендовано динамическое наблюдение у онколога по месту жительства (УЗИ ОБП 1 раз в 3 мес. СРКТ ОГК. МРТ г.мозга 1 раз в 6 мес).

Технико-экономическая эффективность заявленного «Способа прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи» позволяет:

- прогнозировать риск наличия скрытой метастатической фазы заболевания;

- проводить объективный контроль за развитием злокачественного процесса (меланомы кожи);

- предположить развитие метастазов до их клинического проявления и включить больных в группу риска для интенсивного наблюдения;

- своевременно принять меры для назначения адъювантного лечения.

Доступность, относительная простота и практичность оценки факторов роста сосудов позволяет использовать их в повседневной клинической практике с целью индивидуализации адъювантного лечения. Индивидуальное планирование химиолучевой терапии является залогом ее эффективности и минимального риска осложнений лечения, что лежит в основе улучшения качества жизни пациентов.

Способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи заключается в том, что в ткани удаленной во время операции опухоли исследуют уровень VEGF C и VEGF A, рассчитывают величину их соотношения и при увеличении этого показателя относительно значений в интактной коже, полученной при оперативном лечении неонкологических больных (косметические операции), в 5 и более раз прогнозируют метастазы в лимфатические узлы, тогда как при снижении этого соотношения в 10 и более раз прогнозируют гематогенное метастазирование.



 

Похожие патенты:

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования у пациента с влажной возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) повышенной вероятности эффекта от лечения высокоаффинным антителом против VEGF, в частности ранибизумабом.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики стеатоза печени и стеатогепатита путем биохимического исследования, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют фосфолипазу A2, оксид азота и эндотоксин и при значении фосфолипазы A2 199,7-252,5 нг/мл, оксида азота 93-94,6 мкмоль/л и эндотоксина 2,2-2,6 ЕЭ/мл диагностируют стеатоз печени, а при значении фосфолипазы A2 412,5-576,5 нг/мл, оксида азота 137,5-168,5 мкмоль/л и эндотоксина 3,32-4,18 ЕЭ/мл диагностируют стеатогепатит.
Изобретение относится к медицине и описывает способ прогнозирования высокого риска развития производственно обусловленных и профессиональных заболеваний у работников химического комплекса, занятых во вредных условиях труда, включающий определение в сыворотке крови общего антиоксидантного статуса, при этом дополнительно в сыворотке крови определяют количественное содержание продуктов перекисного окисления липидов и при одновременном увеличении количественного содержания перекисей в липидах более 4,31 мкмоль/л и снижении общего антиоксидантного статуса менее 1,3 ммоль/л прогнозируют высокий риск развития производственно обусловленных и профессиональных заболеваний.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для лечения вторичной митохондриальной дисфункции у детей с патологией мочевой системы.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики апоптоза лимфоцитов. Для этого клетки выделяют, инкубируют 48 часов при температуре 37°С и с 5% содержанием СО2, с добавлением индуктора апоптоза дексаметазона в концентрации 10-4 моль/мл.

Группа изобретений относится к инструментам для контроля качества и безопасности в ходе производства нейротоксинов. В частности, группа изобретений относится к способу определения количества частично процессированного и/или непроцессированного нейротоксин А полипептида (BoNT/A) в растворе, содержащем процессированный и частично процессированный и/или непроцессированный BoNT/A, где указанный способ содержит стадию контактирования образца указанного раствора с захватывающим антителом, которое специфически связывается с частично процессированным и непроцессированным BoNT/A в условиях, допускающих связывание указанного антитела с указанным частично процессированным и непроцессированным BoNT/A, в результате чего формируется комплекс, и стадию определения количества образованного комплекса, где количество комплекса является показателем количества частичного процессированного и/или непроцессированного BoNT/A в указанном растворе.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. Изобретение представляет способ дифференциальной диагностики типов хориоидальной неоваскуляризации (ХНВ) при влажной форме возрастной макулярной дистрофии, отличающийся тем, что производят забор влаги передней камеры глаза, определяют концентрацию фактора роста эндотелия сосудов, после чего оценивают результат по уровню данных показателей.

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии, и может быть использовано для прогнозирования замедленной консолидации переломов. Описано прогнозирование замедленной консолидации переломов, которое осуществляют на основании определения относительного содержания ростового фактора (TGFβ1), лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (ЛТА), дезоксипиридинолина (ДПИД), регистрации показателя микроциркуляции (ПМ) конечностей пациента на 10-е сутки посттравматического периода и расчета коэффициента по предлагаемой формуле, на основании значения которого прогнозируют замедленную консолидацию переломов.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа идентификации пациентов с инфарктом миокарда, имеющих повышенный риск развития патологического состояния сердца, включающего исследование, после инфаркта, образца биологической жидкости пациента на предмет уровней сосудистого эндотелиального фактора роста В (VEGFB), тромбоспондина-1 (THBS1) и плацентарного фактора роста (PGF).
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для оценки риска развития хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у пациентов с хроническим бронхитом.

Изобретение относится к медицине и токсикологической химии, а именно к способам определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический материал, содержащий 3-метоксигидроксибензол, неоднократно (трижды) по 45 минут обрабатывают алкилацетатом, в качестве которого используется метилацетат, отдельные извлечения объединяют, растворитель из объединенного алкилацетатного извлечения испаряют, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, ацетоновые извлечения объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°C, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в эфире, полученный раствор разбавляют гексаном в соотношении 1:1 по объему, экстрагируют буферным раствором с pH 12-13, водно-щелочное извлечение отделяют, подкисляют до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия, экстрагируют диэтиловым эфиром, эфирное извлечение отделяют, обезвоживают, упаривают в токе воздуха при 18-22°C, а затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в смеси растворителей гексан-диоксан-пропанол-2, взятых в соотношении 20:5:1 по объему, хроматографируют в макроколонке силикагеля L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 18-22°C, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в дихлорметане и проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом с применением капиллярной колонки длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой (5%-фенил)-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70° до 290°C со скоростью 20°C в минуту, температура инжектора составляет 250°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество 3-метоксигидроксибензола исходя из площади хроматографического пика, полученного регистрацией сигнала по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z. Способ обеспечивает повышение чувствительности. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический материал, содержащий новокаин, измельчают, трижды обрабатывают ацетоном, содержащим 0,2-0,4% воды, жидкое извлечение отделяют, ацетон из жидкого извлечения упаривают вместе с водой в токе воздуха при температуре 18-22°C до полного удаления растворителя, остаток, полученный в результате упаривания, неоднократно обрабатывают ацетоном, содержащим 0,2-0,4% воды, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток растворяют в диэтиловом эфире, полученный раствор разбавляют гексаном в соотношении 1:1 по объему, экстрагируют буферным раствором с pH 1-2, кисло-водный экстракт отделяют, нейтрализуют 10% раствором аммиака, подщелачивают аммонийным буферным раствором до pH 9,0-9,5, образующийся водно-щелочной раствор насыщают сульфатом аммония, экстрагируют двукратно порциями органического экстрагента, в качестве которого используют 30% раствор камфоры в метилацетате, при соотношении водной и органической фаз 1:1 по объему, органические экстракты отделяют, объединяют, растворитель из объединенного экстракта испаряют в токе воздуха при температуре 18-22°C до сухого остатка, остаток растворяют в смеси дихлорметана и этанола, взятых в объемном отношении 1:1, полученный раствор вносят в колонку силикагеля КСС №3 80/120 мкм, хроматографируют, используя двухкомпонентную подвижную фазу дихлорметан-этанол в соотношении 1:1 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в метаноле и проводят определение методом газожидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 80°С, данная температура выдерживается в течение 1 минуты, в дальнейшем температура повышается от 80°C до 200°C со скоростью 40°C в минуту, затем от 200°C до 300°C со скоростью 12,5°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 200°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество новокаина по площади хроматографического пика. Достигается повышение чувствительности определения. 2 пр., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам лабораторной диагностики токсического действия никеля, и описывает способ диагностики окислительного стресса у детского населения в условиях внешнесредового воздействия никеля, при этом осуществляют определение содержания никеля в пробе крови и определение лабораторных показателей: в сыворотке крови - содержание гидроперекиси липидов, а в моче - содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина, далее проводят корреляционный анализ между указанными лабораторными показателями и уровнем никеля в крови, и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка никеля более 0,083 мг/дм3 и повышенное, по сравнению с референтным уровнем, содержание гидроперекиси липидов в сыворотке крови и повышенное, по сравнению с референтным уровнем, содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина в моче, диагностируют наличие окислительного стресса в организме на уровне ДНК клетки и мембраны клетки. Изобретение обеспечивает высокую точность диагностики окислительного стресса населения на ранней стадии в условиях внешнесредового воздействия никеля, за счет комплексного использования при интерпретации результатов наряду с лабораторными показателями, характеризующими окислительное повреждение ДНК и мембраны клетки, также показателей содержания химического контаминанта - никеля в крови. 2 табл., 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения пентахлорфенола в крови. Для осуществления предлагаемого способа количественного определения пентахлорфенола в крови методом газохроматографического анализа производят отбор пробы крови, подкисляют ее до pH 2-3 водным раствором щавелевой кислоты, проводят экстракцию толуолом в течение 5 мин, полученный экстракт центрифугируют в течение 60 мин при 7000 об/мин, далее к полученному экстракту добавляют сульфат натрия для удаления воды и проводят ацетилирование в течение 3 часов введением трифторуксусного ангидрида при непрерывном перемешивании в среде пиридина. Пробу крови, толуол, трифторуксусный ангидрид и пиридин берут в объемном соотношении 5:2,5:0,2:0,1 соответственно. Способ обеспечивает упрощение стадии пробоподготовки при одновременном повышении чувствительности определения пентахлорфенола. 2 з.п. ф-лы, 4 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к способу диагностики когнитивных нарушений у детей при воздействии марганца техногенного происхождения. Сущность способа: по результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования устанавливают у ребенка наличие когнитивных нарушений. Затем в крови ребенка определяют содержание марганца и при превышении его содержания более референтного уровня определяют уровни: гидроперекиси липидов в сыворотке крови, малонового диальдегида МДА в плазме крови и содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина 8-OHdG в моче; глутатионпероксидазы ГлПО, Cu/Zn-супероксиддисмутазы Cu/Zn-СОД, уровень антиоксидантной активности ОАС сыворотки кров; глутамата и γ-аминомасляной кислоты в сыворотке крови; содержание гормонов гипофизарно-надпочечниковой оси: уровень адренокортикотропного гормона АКТГ, кортизола и серотонина в сыворотке крови, циклического аденозинмонофосфата цАМФ и циклического гуанозинмонофосфата цГМФ. При повышенном содержании марганца в крови более 0,029 мкг/см3 с не менее чем 50% указанных клинико-лабораторных показателей при их следующей характеристике: повышенные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни гидроперекиси липидов, МДА, 8-OHdG, глутамата, АКТГ, кортизола, цГМФ, пониженные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни ГлПО, Cu/Zn-СОД, ОАС, γ-аминомасляной кислоты и цАМФ диагностируют наличие когнитивных нарушений у ребенка, ассоциированных с воздействием марганца. Применение изобретения обеспечивает высокую точность диагностики. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения бенз(а)пирена в крови, для оценки риска здоровью человека и разработки мероприятий по обеспечению химической безопасности. Способ осуществляется следующим образом. Каждую пробу крови анализируют дважды. Свежеотобранную пробу крови центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Разделяют на фракции плазмы и форменных элементов. Проводят твердофазную экстракцию плазмы путем последовательного пропускания под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3 сс 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, плазмы, дистиллированной воды, 50%-ного водного раствора ацетонитрила. Затем картридж с сорбентом высушивают под вакуумом и пропускают через сорбент 100%-ный метиленхлорид. Аликвотную часть полученного экстракта хроматографируют. Для получения экстракта форменных элементов проводят дисперсионную твердофазную экстракцию: добавляют к ним 100%-ный ацетонитрил, интенсивно встряхивают. Добавляют набор солей QuECHeRS для экстракции, встряхивают интенсивно, центрифугируют 10 минут со скоростью 2000 об/мин, при этом образуется 3 слоя, верхний слой переносят в другую пробирку, в которой содержится набор солей QuECHeRS для очистки, центрифугируют со скоростью 2000 об/мин, отбирают верхний слой. Экстракт плазмы и форменных элементов анализируют на жидкостном хроматографе Agilent серии 1200 с флуориметрическим детектором на колонке Zorbax длиной 50 мм и внутренним диаметром 4,6 мм с сорбентом Eclipse РАН C18 при температуре колонки 27°C, при использовании в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды со скоростью потока 1,5 см3/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (1 мин подача подвижной фазы 60 об.% ацетонитрила и 40 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 60 об.% до 68 об.% в течение 3 мин, увеличение ацетонитрила с 68 об.% до 70 об.% в течение 0,5 мин, увеличение ацетонитрила с 70 об.% до 90 об.% в течение 1,5 мин, увеличение ацетонитрила с 90 об.% до 100 об.% в течение 4,5 мин, подача 100%-ного ацетонитрила в течение 1,5 мин, затем снижение ацетонитрила до 60 об.% и подача 60%-ного ацетонитрила в течение 4 мин до уравновешивания колонки). При этом длина волны возбуждения флуориметрического детектора составляла 265 нм и длина волны эмиссии 412 нм. По градуировочному графику отдельно определяют содержание бенз(а)пирена в плазме и форменных элементах, а результаты суммируют. Изобретение обеспечивает высокую чувствительность способа при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов. 2 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу диагностики токсигенных штаммов Clostridium difficile. Сущность способа состоит в том, что пробу кала пациента выдерживают в абсолютном 96% спирте 30-60 мин при соотношении спирта и кала 1:1, центрифугируют 15-20 минут, далее обрабатывают пробу кала 1% раствором дезоксихолата натрия при соотношении 1:1 30-60 минут, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, затем проводят первичный посев осадка на среде с добавлением 1% лактозы и 0,5-1,0 мМ арабинозы, инкубируют в анаэростате в течение 24-48 ч, выросшие колонии наносят на стандартные диски, пропитанные хромогенным субстратом - орто-нитрофенил-β-D-галактозидазой. При появлении ярко-желтой окраски диска диагностируют токсигенные штаммы Clostridium difficile. Использование заявленного способа позволяет с высокой чувствительностью и специфичностью, простотой и доступностью диагностировать токсигенные штаммы Clostridium difficile. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития детского церебрального паралича у недоношенных новорожденных с экстремально низкой массой тела при рождении. Сущность способа заключается в определении концентрации нейронспецифической енолазы (NSE) и васкулоэндотелиального фактора (VEGF) в сыворотке пуповинной крови и сыворотке периферической крови, концентрации мозгового нейротрофического фактора (BDNF) в сыворотке периферической крови на 7 сутки жизни с последующим вычислением прогностического индекса (PI) по формуле: PI=0,033×X1+0,016×X2-0,36×X3+0,002×X4+0,00054×X5-4,0, где X1 - концентрация NSE в пуповинной крови (мкг/л); X2 - концентрация VEGF в пуповинной крови (нг/мл); X3 - концентрация NSE в периферической крови на 7 сутки жизни (мкг/л); X4 - содержание VEGF в периферической крови на 7 сутки жизни (нг/мл); X5 - концентрация BDNF в периферической крови на 7 сутки жизни (нг/мл); Const=-4,0. Если PI менее 0, делают заключение о низком риске развития ДЦП. Если PI более 0, прогнозируют высокий риск развития данной патологии. Предлагаемый способ позволяет повысить эффективность развития детского церебрального паралича у недоношенных новорожденных с экстремально низкой массой тела при рождении до 85%. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования судорожного синдрома у детей с перинатальными поражениями ЦНС в раннем неонатальном периоде. Для этого в сыворотке крови пуповины у новорожденных детей методом капиллярного электрофореза определяют концентрацию агматина и при его концентрации 0,038 мг/мл и выше прогнозируют развитие судорожных состояний. Изобретение позволяет прогнозировать возникновение судорожных состояний у новорожденных с перинатальным поражением ЦНС и своевременно назначить патогенетическую терапию. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей (ЧБД). Сущность способа состоит в том, что определяют уровень интерлейкина-17 и ММР-9 в слюне и при уровне интерлейкина-17 выше 5 пг/мл и уровне ММР-9 выше 10 нг/мл прогнозируют высокий риск формирование хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД. Использование заявленного способа позволяет своевременно определить высокий риск формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД и проводить ранние профилактические мероприятия, направленные на их предотвращение. 4 табл., 2 пр.
Наверх