Способ диагностики у детей от 5 до 10 лет когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца техногенного происхождения


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2546528:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу диагностики когнитивных нарушений у детей при воздействии марганца техногенного происхождения. Сущность способа: по результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования устанавливают у ребенка наличие когнитивных нарушений. Затем в крови ребенка определяют содержание марганца и при превышении его содержания более референтного уровня определяют уровни: гидроперекиси липидов в сыворотке крови, малонового диальдегида МДА в плазме крови и содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина 8-OHdG в моче; глутатионпероксидазы ГлПО, Cu/Zn-супероксиддисмутазы Cu/Zn-СОД, уровень антиоксидантной активности ОАС сыворотки кров; глутамата и γ-аминомасляной кислоты в сыворотке крови; содержание гормонов гипофизарно-надпочечниковой оси: уровень адренокортикотропного гормона АКТГ, кортизола и серотонина в сыворотке крови, циклического аденозинмонофосфата цАМФ и циклического гуанозинмонофосфата цГМФ. При повышенном содержании марганца в крови более 0,029 мкг/см3 с не менее чем 50% указанных клинико-лабораторных показателей при их следующей характеристике: повышенные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни гидроперекиси липидов, МДА, 8-OHdG, глутамата, АКТГ, кортизола, цГМФ, пониженные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни ГлПО, Cu/Zn-СОД, ОАС, γ-аминомасляной кислоты и цАМФ диагностируют наличие когнитивных нарушений у ребенка, ассоциированных с воздействием марганца. Применение изобретения обеспечивает высокую точность диагностики. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам лабораторной диагностики токсического действия марганца в виде проявления когнитивных нарушений у детей, проживающих в условиях техногенной нагрузки среды обитания, и может быть использовано для выявления указанных нарушений, ассоциированных с воздействием марганца, для последующего проведения в отношении таких детей определенно направленных лечебно-профилактических мероприятий.

Среда обитания промышленных городов характеризуется многосредовым загрязнением химическими веществами. Одним из загрязнителей из ряда тяжелых металлов является марганец, хроническое накопление которого в организме выше определенной нормы оказывает токсический эффект.

Когнитивные нарушения - это собирательное обозначение нарушений высших мозговых функций вследствие расстройства процессов получения, переработки и анализа информации. К когнитивным функциям относятся память, внимание, психомоторная координация, речь, гнозис, праксис, счет, мышление, ориентация, планирование и контроль высшей психической деятельности, в детской практике когнитивные расстройства могут быть следствием не только патологических состояний (гипоксическое поражение мозга, родовая травма) или перенесенных заболеваний (менингиты, менингоэнцефалиты, гидроцефалия, инсульты и т.д.), но и являться результатом длительного воздействия нейротоксических химических веществ. В последние годы проблема когнитивных расстройств у детей все чаще рассматривается в связи с воздействием внешнесредовых химических факторов техногенного происхождения, обладающих нейротропными свойствами.

Из уровня техники известен ряд технических решений, представляющих собой способы диагностики когнитивных нарушений у населения (Патент РФ №2504325, Заявка на выдачу Патента РФ №2012126302), согласно которым проводят нейропсихологическое тестирование, по которому оценивают степень нарушения.

Однако указанные известные способы являются недостоверными при выполнении диагностики когнитивных расстройств у детей, проживающих в условиях хронического воздействия марганца, т.к. не принимают во внимание его токсическое действие.

Также известны способы оценки когнитивных нарушений при хронической интоксикации рабочих промышленных предприятий нейротоксикантами: нефтепродуктами и винилхлоридом (Патент РФ №2485514, Заявка на выдачу Патента РФ №94024373). Однако указанные известные способы предназначены для оценки когнитивных нарушений взрослого населения.

Из уровня техники также был установлен Патент РФ №2497453, описывающий способ психопатологической оценки психического состояния детей раннего и дошкольного возраста, согласно которому в качестве симптомов психического состояния пациента оценивают состояние сферы когнитивных функций, а в качестве симптомов неврологического состояния пациента оценивают состояние сферы неврологических знаков, моторики и состояние сферы исходного вегетативного тонуса - ваготонии и симпатотонии. При этом оценку каждого симптома осуществляют в баллах от 0 до 7. Подсчитывают суммарное значение среднего балла выявленных симптомов по каждой сфере, отражающего тяжесть психического и неврологического состояния пациента. Однако этот способ также является неточным при выполнении диагностики когнитивных расстройств у детей, проживающих в условиях хронического воздействия марганца, т.к. не принимает во внимание его токсическое действие.

Сведения, изложенные в статье «Особенности когнитивных функций городских детей с нарушениями психического развития в связи с содержанием химических элементов в волосах», авторы: Залата О.А. и Евстафьева Е.В., Саратовский научно-медицинский журнал, вып. №2 / том 8/2012, показывают особенности когнитивных функций детей с нарушениями психического развития, обусловленные содержанием химических элементов в волосах. При этом у 30 детей (12,8±0,3) лет с нарушениями психического развития и у 30 здоровых ровесников методом рентген-флуоресцентной спектрофотометрии установлены особенности элементного баланса организма по содержанию в пробах волос кальция, железа, марганца, никеля, молибдена, стронция и свинца. Установлен гиперэлементоз никеля, кальция, избыток марганца у 55%, дефицит железа у 21% детей в опытной группе. Установлен гипоэлементоз кальция, железа и марганца у детей группы контроля. Содержание стронция и свинца в обеих группах было нормальным, содержание молибдена в волосах обнаружилось у 40% детей опытной и 30% контрольной группы. С помощью непараметрического корреляционного анализа обнаружено статистически значимое влияние концентрации никеля, кальция, железа, стронция, свинца в организме на особенности когнитивных функций детей обеих групп, но в большей степени для детей с нарушением психического развития. Причем из всех исследованных элементов тяжелых металлов авторы статьи не обнаружили влияние марганца на характеристики когнитивных функций обеих групп городских детей.

При этом из уровня техники не были выявлены известные способы диагностики у детей когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца техногенного происхождения, поэтому сделать выбор ближайшего аналога к заявляемому объекту не представляется возможным.

Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении высокой точности диагностики у детей когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца техногенного происхождения, за счет комплексного использования при интерпретации результатов наряду с известными нейропсихологическими тестами дополнительных клинико-лабораторных показателей, характеризующих состояние нервной системы, и показателей содержания химического контаминанта - марганца в крови.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом диагностики у детей от 5 до 10 лет когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца техногенного происхождения, согласно которому по результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования устанавливают у ребенка наличие когнитивных нарушений, далее в крови этого ребенка осуществляют определение содержания марганца и при превышении этого содержания более референтного уровня проводят последующее лабораторно-диагностическое обследование ребенка путем установления совокупности следующих клинико-лабораторных показателей: уровень гидроперекиси липидов в сыворотке крови, уровень малонового диальдегида МДА в плазме крови и содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина 8-OHdG в моче, характеризующих активность окислительных процессов; уровень глутатионпероксидазы ГлПО, уровень Cu/Zn-супероксиддисмутазы Cu/Zn-СОД, уровень антиоксидантной активности ОАС сыворотки крови, характеризующих состояние антиоксидантной системы; уровень глутамата и уровень γ-аминомасляной кислоты в сыворотке крови, являющихся нейротрансмиттерами; содержание гормонов гипофизарно-надпочечниковой оси: уровень адренокортикотропного гормона АКТГ, уровень кортизола и уровень серотонина в сыворотке крови, характеризующих состояние нейроэндокринной регуляции, уровень циклического аденозинмонофосфата цАМФ и циклического гуанозинмонофосфата цГМФ, характеризующих состояние внутриклеточного энергетического обеспечения; далее проводят корреляционный анализ между указанными клинико-лабораторными показателями и содержанием марганца в крови ребенка и при установлении достоверной зависимости: повышенное содержание марганца в крови более 0,029 мкг/см3 с не менее чем 50% указанных клинико-лабораторных показателей, при их следующей характеристике: - повышенные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни гидроперекиси липидов, МДА, 8-OHdG, глутамата, АКТГ, кортизола, цГМФ, - пониженные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни ГлПО, Cu/Zn-СОД, ОАС, γ-аминомасляной кислоты и цАМФ, диагностируют наличие когнитивных нарушений у ребенка, ассоциированных с воздействием марганца.

Дополнительно к результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования производят выполнение функциональной диагностики ребенка путем оценки вегетативного тонуса в покое и вегетативной реактивности в ортостазе, а также путем исследования биоэлектрической активности мозга.

Поставленный технический результат достигается за счет следующего.

Для понимания существа вопроса, следует пояснить, что проблема оценки влияния промышленного загрязнения окружающей среды на здоровье детского населения является актуальной для многих стран мира, в том числе и для России. Детская популяция представляет собой группу высокого риска, так как дети имеют ряд физиологических особенностей, характеризуются наличием критических периодов развития, большей чувствительностью нервной системы к влиянию токсичных веществ. Болезни нервной системы у детей, проживающих в условиях загрязнения среды обитания химическими веществами с нейротропным механизмом, имеют тенденцию к более раннему развитию, быстрому прогрессированию и нарастающей резистентности к медикаментозному лечению.

Соединения марганца при поступлении в организм с атмосферным воздухом практически полностью абсорбируются в кровь, гематогенно попадают в центральную нервную систему (ЦНС), легко проходят гематоэнцефалический барьер благодаря облегченной диффузии, активному катионному транспорту, эндоцитозу в эндотелиальных клетках мозга. В ЦНС марганец накапливается в структурах экстрапирамидной нервной системы (в базальных ганглиях и ядрах ствола головного мозга) - в медиальном сегменте бледного шара и ретикулярной части черной субстанции. В меньшей степени поражаются хвостатое ядро, скорлупа, субталамическое ядро. В отдельных случаях страдают кора лобных и теменных долей, мозжечок и гипоталамус. При поражении базальных ганглиев нарушается функционирование корково-подкорковых кругов и паллидарно-стволовых связей, афферентации лобных и стволовых структур от базальных ганглиев. Накопление марганца в мозговой ткани приводит к уменьшению числа нейронов и глиозу, развитию разнообразных астено-невротических, вегетативных, когнитивных и неврологических нарушений.

Развитию у детей когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца, как правило, предшествует манифестация астенического и астено-невротического синдромов. При этом клиническими признаками указанных синдромов, инициированных длительным воздействием соединений марганца, являются общая слабость, повышенная утомляемость, снижение физической и умственной трудоспособности, двигательной активности, повышенная сонливость. Характерна мышечная гипотония, гипергидроз, гипомимия, лабильность пульса и артериального давления, чувствительные нарушения. В дальнейшем к астеническим и астено-вегетативным проявлениям добавляются признаки интеллектуально-мнестических нарушений, экстрапирамидной недостаточности (брадикинезия, умеренное повышение мышечного тонуса, координационные нарушения).

Марганец нарушает обмен биогенных аминов, ряда окислительных ферментов, угнетает адренореактивные и активирует холинэргические системы, увеличивает содержание ацетилхолина в синапсах подкорковых узлов и гипоталамуса. Марганец влияет на синтез и депонирование дофамина, изменяет баланс содержания ацетилхолина и дофамина, в результате чего снижается мышечный тонус, нарушается точность, ловкость и плавность произвольных движений, развиваются вегетативные расстройства. К системным эффектам марганца относят гипофункцию желез внутренней секреции, функциональную недостаточность печени, вазомоторную недостаточность, снижение кровенаполнения мозга (в бассейне вертебро-базиллярных артерий) и суммарного мозгового кровотока. Марганец действует на нейротрансмиттерные сигнальные пути, на обмен глутамата и гамма-аминобутириловой кислоты в ЦНС. Марганец способствует высвобождению большого количества глутамата во внеклеточное пространство. Глутамат является одним из основных возбуждающих медиаторов в коре, гиппокампе, полосатом теле и гипоталамусе; участвует в регуляции процессов памяти; входит в состав малых и средних регуляторных пептидов мозга, таких как глутатион. Велика его энергетическая роль, так как глутамат служит поставщиком а-кетоглутарата - компонента цитратного цикла. Избыток глутамата удаляется астроцитами, преимущественно глутамат/аспарат транспортным белком (GLAST). Неблагоприятное воздействие марганца связано с подавлением функции астроцитов, удаляющих избыточное количество глутамата из внеклеточного пространства, и как следствие нарушением медиаторного обмена.

Таким образом, влияя на обмен нейротрансмиттеров и нейромедиаторов, соединения марганца будут способствовать развитию нарушений, как процессов торможения, так и возбуждения в ЦНС, формированию синдромов астении и/или гипервозбудимости, развитию когнитивных расстройств и вегетативных дисфункций.

Помимо нейротоксического действия марганец обладает системным эффектом, в основе которого лежат его выраженные окислительные свойства. Марганец выполняет роль кофактора оксидаз, катализирующих окислительно-восстановительные реакции в организме человека, участвует в процессах образования свободных радикалов. В субтоксических дозах он разобщает процессы тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования. Субтоксические дозы марганца повреждают митохондриальный аппарат, что усугубляет процессы клеточного повреждения. Окислительная деградация мембран клеток эритроцитов приводит к изменению ее мембранного потенциала, транспортных свойств, проницаемости, нарушению баланса внутриклеточных микроэлементов.

Благодаря тому, что в предлагаемом способе, наряду с результатами клинической диагностики и нейропсихологического тестирования, дополнительно используют информацию о содержании марганца в крови ребенка и заявляемые конкретные клинико-лабораторные совокупные показатели, характеризующие активность окислительных процессов, состояние антиоксидантной системы, нейроэндокринной регуляции и содержание нейротрансмиттеров, с использованием корреляционного анализа, обеспечивается дополнительная информационная связь указанных клинико-лабораторных показателей с определенным содержанием (более 0,029 мкг/см3) марганца в крови, и информационная связь между самими указанными лабораторными показателями, что делает способ точным и достоверным.

Кроме того, результаты испытаний показали, что для установления точного диагноза о нарушении когнитивных функций ассоциированных с внешнесредовым воздействием металлов техногенного происхождения (марганец) достаточно, чтобы, по меньшей мере, с 50% и более указанных клинико-лабораторных показателей коррелировали с указанной концентрацией марганца в крови ребенка, что подтверждается параметрами модели.

Исследования показали, что достоверная корреляция между указанными клинико-лабораторными показателями и концентрацией марганца в крови достигается только в диапазоне концентрации марганца более 0,029 мкг/см3. При более низкой концентрации марганца в пробе крови достоверная связь между этой концентрацией и клинико-лабораторными показателями не выявлена. Это, по-видимому, обусловлено тем, что марганец при его содержании в крови ниже указанной цифры оказывает повреждающее действие на структуры ЦНС, не способное вызывать клинически диагностируемые когнитивные нарушения. Данные о концентрации марганца и указанной достоверной связи были подтверждены и нижеприведенными исследованиями, характеризующими пример реализации предлагаемого способа.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет диагностировать когнитивные расстройства у детского населения, обусловленные токсическими эффектами воздействия марганца. Все это позволит повысить эффективность медикаментозного лечения и профилактики детей с точным диагнозом, обеспечить конкретное планирование санитарно-гигиенических мероприятий по предупреждению и устранению воздействия вредных химических веществ, в частности марганца, обуславливающих экологически обусловленную патологию у детского населения.

При реализации предлагаемого способа осуществляют следующие операции в нижеуказанной последовательности:

- выбирают экологически неблагополучную территорию по высокой нагрузке химических факторов среды обитания, в частности, характеризующейся наличием хронического аэрогенного воздействия марганца;

- у детей в возрасте 5-10 лет, длительно проживающих на этой территории и подвергающихся хроническому воздействию токсиканта - марганца, проводят клиническую диагностику путем осмотра врачами специалистами: педиатром и неврологом, на предмет выявления признаков астенического и астено-невротического синдромов (раздражительность, плаксивость, головная боль, быстрая утомляемость, потливость, страхи, нарушения сна, слабость, непереносимость транспорта, ночные поты, ухудшение памяти, головокружение, эмоциональная лабильность, ухудшение успеваемости); клинических признаков интоксикации (бледность кожных покровов, периорбитальные тени, мраморный рисунок кожи, холодные влажные ладони и стопы, сухость кожи, тахикардия или брадикардия);

- далее выполняют нейропсихологическое тестирование у указанных детей и устанавливают у ребенка наличие или отсутствие когнитивных нарушений путем исследования когнитивных функций: памяти (речевой, зрительной); праксиса (моторно-двигательной функции) - пространственного, динамического, реципрокного, кинестатического; гнозиса (восприятия) - тест «какие предметы спрятаны»); внимания и темпов психической деятельности (тест «поставь знаки») (Лурия А.Р., 1973; Симерницкая Э.Г., 1985; Хомская Е.Д., 2005; Семенович А.В. и соавт., 2005);

- можно также провести дополнительно к вышеуказанным исследованиям еще и функциональную диагностику ребенка с целью определения нарушения исходного вегетативного тонуса (ваготония, симпатикотония) и вегетативной реактивности (гипер-асимпатикотоническая реактивность) по результатам КИГ - кардиоинтервалографии, с помощью кардиоритмографической программы компании «Нейрософт» - "Поли-Спектр", основанной на математическом анализе сердечного ритма (P.M. Баевский, 1979; Д. Жемайтите, 1989). Используются параметры, рекомендуемые кардиоритмографическими стандартами (HRV/Standards of measurements, 1996): вариационный размах - Дх, мода Мо, амплитуда моды - АМо, индекс напряжения, процент и мощность парасимпатических - HF, гуморально-метаболических волн - LF); Исследование биоэлектрической активности мозга на 32-канальном программно-аппаратном комплексе Нейрон-Спектр-5 компании «Нейрософт». Методика исследования предусматривала стандартную запись ЭЭГ в состоянии бодрствования и функциональные пробы (фотостимуляцию, фоностимуляцию, гипервентиляцию, открывание глаз);

- далее в крови тех детей, у которых имеются признаки когнитивных нарушений, осуществляют определение содержания марганца методом атомно-абсорбционной спектрометрии («Aanalyst 400» PERKIN ELMER, США, регистрационный номе в Государственном реестре №38267-08);

- если содержание марганца в крови ребенка превышает реферативный уровень марганца (0,011±0,004 мкг/см3), то проводят последующее лабораторно-диагностическое обследование ребенка путем установления совокупности следующих клинико-лабораторных показателей: уровень гидроперекиси липидов в сыворотке крови, уровень малонового диальдегида МДА в плазме крови, содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина 8-OHdG в моче, уровень глутатионпероксидазы ГлПО, уровень Cu/Zn-супероксиддисмутазы Cu/Zn-СОД, уровень антиоксидантной активности ОАС сыворотки крови, уровень глутамата и уровень у-аминомасляной кислоты в сыворотке крови, содержание гормонов гипофизарно-надпочечниковой оси: уровень адренокортикотропного гормона АКТГ, уровень кортизола и уровень серотонина в сыворотке крови; цАМФ, цГМФ. Все указанные показатели определяются унифицированными биохимическими и иммуноферментными методами с помощью биохимического "Konelab 20» (ThermoFisher, Финляндия) и иммуноферментного "Infinite F50" (Австрия, Тесап) анализаторов. В качестве критериев оценки отклонений клинико-лабораторных показателей используются возрастные физиологические уровни, а для содержания марганца - референтные уровни (Н. Тиц, 2003);

- далее проводят корреляционный анализ между полученными клинико-лабораторными показателями и содержанием марганца в крови ребенка с использованием модели логистической регрессии, согласно которой рассчитывают вероятность негативного изменения маркера ответа организма (вышеуказанные клинико-лабораторные показатели) при воздействии на организм маркера экспозиции (марганца, поступающего с атмосферным воздухом). Выявление и оценку связи между изменением клиническо-лабораторных показателей у детей и концентрацией марганца в крови выполняется на основании расчета показателя отношения шансов (OR) и его доверительного интервала (DI). Критерием наличия связи «концентрация марганца в крови - показатель ответа» является OR≥1. Обоснование маркеров ответа осуществляется на основании оценки параметров зависимости изменения показателя отношения шансов от концентрации марганца в крови, описываемой регрессионной моделью в виде экспоненциальной функции. В качестве критерия для проверки статистических гипотез используется критерий Фишера (F). Различия считаются статистически значимыми при вероятности р≤0,05;

- и при установлении достоверной зависимости: повышенное содержание марганца в крови ребенка более 0,029 мкг/см3 с не менее, чем с 50% указанных клинико-лабораторных показателей, при их следующей характеристике: - повышенные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни гидроперекиси липидов, МДА, 8-OHdG, глутамата, АКТГ, кортизола, цГМФ, - пониженные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни ГлПО, Cu/Zn-СОД, ОАС, γ-аминомасляной кислоты, цАМФ, диагностируют наличие когнитивных нарушений у ребенка, ассоциированных с воздействием марганца.

Пример реализации предлагаемого способа:

- выбирают экологически неблагополучную территорию по высокой нагрузке химических факторов среды обитания. В качестве такой территории был выбран г. Чусовой Пермского края, характеризующийся наличием хронического аэрогенного воздействия на население компонентов выбросов Чусовского металлургического завода («ЧМЗ»). В частности, марганец является одним из приоритетных компонентов выбросов в атмосферный воздух данного промышленного предприятия (его концентрация в воздухе превышала ПДК в 2,2 раза);

- отбирают случайным образом группу детей, проживающих на этой территории в течение длительного времени в зоне воздействия выбросов «ЧМЗ». В результате было отобрано 89 детей из организованного детского дошкольного учреждения и учащихся школы, проживающих в зоне влияния компонентов выбросов «ЧМЗ», в том числе, 42 мальчика (47% от числа обследованных детей), 47 девочек (53% от числа обследованных детей) - группа наблюдения. Возраст обследованных детей составил 5-10 лет. Также была сформирована группа сравнения из 87 детей также в возрасте 5-10 лет, которые проживали на территории, где не зарегистрировано нарушений гигиенических нормативов по содержанию в атмосферном воздухе марганца;

- далее, с целью сопоставления и доказательства влияния марганца на возникновение когнитивных нарушений и точности диагностики по предлагаемому способу, все дети из обеих групп проходили клиническую диагностику - осмотр врачами специалистами: педиатром и неврологом, на предмет выявления признаков астенического и астено-невротического синдромов (раздражительность, плаксивость, головная боль, быстрая утомляемость, потливость, страхи, нарушения сна, слабость, непереносимость транспорта, ночные поты, ухудшение памяти, головокружение, эмоциональная лабильность, ухудшение успеваемости); клинических признаков интоксикации (бледность кожных покровов, периорбитальные тени, мраморный рисунок кожи, холодные влажные ладони и стопы, сухость кожи, тахикардия или брадикардия).

Причем было выявлено, что дети группы наблюдения и группы сравнения практически одинаково часто предъявляли жалобы на потливость (24,9% и 26,0% соответственно), ночные страхи и нарушения сна (23,2% и 21,4% соответственно), непереносимость транспорта (26,1% и 24,3% соответственно), эмоциональная лабильность (28,9% и 27,3% соответственно) (p≤0,05).

В тоже время в группе наблюдения вероятность выявления клинических проявлений астенического и астено-невротического синдромов была статистически выше, чем в группе сравнения: раздражительность (53,1% и 25,0% соответственно, OR=3,4, p=0,03), слабость, повышенная утомляемость (47,7% и 26,3% соответственно, OR=3,1, p=0,04), головная боль (28,9% и 16,4% соответственно, OR=2,9, p=0,04), ухудшение памяти и успеваемости (34,8% и 17,1% соответственно, OR=3,5, p=0,03).

При объективном обследовании у детей группы наблюдения чаще, чем в группе сравнения, выявлялись: бледность кожных покровов (45,16% и 20,00% соответственно, OR=3,29, DI=1,08-9,12, p=0,05), периорбитальные тени (67,6% и 37,1% соответственно, OR=3,55, DI=1,25-9,27, p=0,025), мраморный рисунок кожи (35,48% и 14,28% соответственно, OR=4,541, DI=1,4-12,76, p=0,014), холодные влажные ладони и стопы (80,84% и 16,23% соответственно, OR=13,11, DI=1,68-49,13, p=0,01), сухость кожи (25,81% и 2,67% соответственно, OR=11,83, DI=1,35-50,99, p=0,019), брадикардия (32,26% и 8,57% соответственно, OR=5,08, DI=1,2-17,1, p=0,035) (32,26% и 8,57% соответственно, OR=5,08 DI=1,2-17,1 p=0,035), что свидетельствовало о преобладании ваготонического варианта астении;

- с целью исследования когнитивных функций у детей использовался набор нейропсихологических тестов оценивающий: уровень развития памяти (речевой, зрительной); праксис (моторно-двигательная функция) - пространственный, динамический, реципрокный, кинестатический; гнозис (восприятие) - тест «какие предметы спрятаны»); внимание и темп психической деятельности (тест «поставь знаки»).

Анализ когнитивных функций методом нейропсихологического тестирования позволил установить статистически значимые различия между сравниваемыми группами по результатам исследования памяти, гнозиса, праксиса, внимания. Результаты тестирования детей на зрительную (образную) память выявили статистически значимые различия в обследуемых группах (p≤0,05). Детей с низкой балльной оценкой в группе наблюдения было в 4,5 раза больше, чем в группе сравнения (29,4% и 6,5%, соответственно), результаты проб в группе наблюдения были оценены в среднем 1,71±0,16 баллов, в группе сравнения - 1,93±0,09 баллов, p=0,015.

Установлено, что 55,9% детей группы наблюдения не справились с тестом, оценивающим восприятие (зрительный гнозис, тест «какие предметы спрятаны»). В группе сравнения детей с неудовлетворительными результатами теста было в 1,7 раза меньше (32,3%, p=0,014), чем в группе наблюдения. Средний балл в группах составил 4,27±1,04 у.е. и 6,71±0,92 у.е. соответственно (p=0,04).

Дети группы наблюдения, в отличие от группы сравнения, чаще демонстрировали низкие показатели в пробах на внимание и темп деятельности («тест проставь знаки») (64,7% и 32,3% соответственно, p=0,05), средний балл составил в группах 4,29±0,70 баллов и 6,22±7,05 баллов соответственно (p=0,05).

При оценке функции праксиса (пространственного и кинестатического) установлено, что количество детей, не справившихся с тестом «праксис позы пальцев», в группе наблюдения было статистически значимо больше, чем в группе сравнения (44,1% и 19,4% соответственно, p=0,014), средний балл составил в группе наблюдения - 1,41±0,39 баллов и в группе сравнения - 0,74±0,36 баллов (p=0,014).

В пробе Хеда количество детей с неудовлетворительными пробами на пространственный пракис в группе наблюдения было в 2,5 раза больше, чем в группе сравнения (41,2% и 16,1% соответственно, p=0,038), оценочный средний балл в группе наблюдения составил 1,29±0,41 баллов, в группе сравнения - 0,67±0,40 баллов (p=0,05).

При проведении теста Лурия на запоминание слов, на динамический праксис и реципрокные движения в обеих группах получены результаты, не имеющие статистически значимых различий. Доля детей, не справившихся с заданиями, и среднегрупповая балльная оценка в группе наблюдения и группе сравнения составили: при проведении теста Лурия - 23,5% и 19,4% соответственно (p=0,07), средний балл - 3,11±0,40 баллов и 2,87±0,18 баллов соответственно (p=0,27); при проведении теста на динамический праксис - 50% и 29% соответственно (p=0,06), средний балл составил 1,47±0,39 баллов и 1,0±0,39 баллов соответственно (p=0,098); при проведении реципрокной пробы - 17,6% и 13,2% соответственно (p=0,06), средний балл составил 0,61±0,38 баллов и 0,22±0,22 баллов соответственно (p=0,081).

Оценка причинно-следственных связей результатов нейропсихологического тестирования с содержанием марганца в крови установила достоверную корреляционную связь с оценочным баллом в пробах на гнозис (тест «какие предметы спрятаны») - r=-0,67-0,82, пространственный праксис (проба Хеда) - r=0,37 и 0,46, на кинестетическую функцию (проба праксис позы пальцев) r=0,49 и 0,62, внимание и темп деятельности (тест «поставь знаки») r=-0,63-0,87 (p≤0,05); (r - коэффициент корреляции);

- У детей группы наблюдения содержание марганца в крови составляло 0,029±0,001 мкг/см3, что в 1,5 раза превышало показатель группы сравнения (0,019±0,002 мкг/см3) и в 2,6 раза референтный уровень (0,011±0,004 мкг/см3) (p=0,01).

- При исследовании клинико-лабораторных показателей у детей группы наблюдения установлена активизация окислительного повреждения: уровень гидроперекиси липидов в сыворотке крови составил 325,44±23,72 мкмоль/дм и МДА 3,54±0,117 мкмоль/см, что в 1,5-1,7 раза выше показателей группы сравнения (216,96±15,72 мкмоль/дм3 и 2,08±0,06 мкмоль/см3 соответственно, p=0,000-0,001); концентрация 8-OHdG в моче 148,94±31,32 нг/см3, что в 2,2 раза выше аналогичного показателя в группе сравнения (67,7±13,14 нг/см3, p=0,000). Частота регистрации проб с повышенным уровнем гидроперекиси липидов и 8-OHdG составила 28-34% при полном отсутствии этого явления в группе сравнения; с повышенным уровнем МДА 52%, что в 5 раз выше показателя группы сравнения. Установлена связь окислительного повреждения на клеточном и ядерном уровне с концентрацией марганца в крови более 0,029 мкг/см3 (OR=3,1-4,2; DI=2,5-4,8; p=0,001).

Выявленный дисбаланс окислительных и антиоксидантных процессов обусловлен истощением ресурсов антиоксидантной защиты от субклеточного до системного уровня: активность ГлПО в сыворотке крови составила 30,95±3,36 нг/см3, Cu/Zn-СОД 36,448±2,156 нг/см3, что в 1,2-1,6 раза ниже показателей в группе сравнения (37,14±4,11 нг/см3 и 58,317±3,821 нг/см3, p=0,000). Частота регистрации пониженных уровней данных ферментов (51-55% случаев) в 3,7-4,2 раза выше показателей в группе сравнения (p=0,000).

Уровень антиоксидантной активности, как интегральный показатель, практически у всех детей группы наблюдения отражает выраженное снижение активности процессов антиоксидантной защиты (ОАС 125,64±8,38 мкмоль/дм3), что в 2,2 раза ниже показателя в группе сравнения - 276,41±12,53 мкмоль/дм3 (p=0,000). Установлена связь угнетения антиоксидантных процессов с концентрацией марганца в крови (OR=2,6-5,1; DI=2,0-6,1; p=0,000). Доля вклада марганца в развитие дисбаланса окислительно-антиоксидантных процессов составила 13-25% (F=16,19-425,05; p=0,000-0,040).

У детей группы наблюдения обращает на себя внимание выявленный патологический дисбаланс обмена нейромедиаторов ЦНС, регулирующих процессы возбуждения и торможения: повышенный в 1,5 раза относительно группы сравнения уровень глутамата (148,87±16,76 мкмоль/дм3 против 99,25±11,44 мкмоль/дм3 p=0,001) и сниженный в 2 раза уровень гамма-аминомасляной кислоты в сыворотке крови (0,046±0,013 мкмоль/дм3 против 0,093±0,009 мкмоль/дм3 p=0,000). Частота регистрации указанных измененных показателей у детей группы наблюдения была в 4,3-5,0 раза выше группы сравнения. Установлена связь нарушения обмена медиаторов с концентрацией марганца в крови (OR=3,4-6,1; DI=2,2-10,5; p=0,000). Доля вклада марганца в развитие нейромедиаторного дисбаланса составляла 64-79% (F=145,06-287,55, p=0,000).

У детей группы наблюдения установлено нарушение синтеза гормонов гипофизарно-надпочечниковой оси. Содержание кортизола в крови детей группы наблюдения превышало показатель группы сравнения (791,63±127,39 нмоль/см3 и 431,44±139,57 нмоль/см3 соответственно, р=0,03), при этом установлена прямая связь повышения уровня кортизола с содержанием в крови марганца более 0,029 мкг/см (R=0,59-0,61,47; F=139,41-l 18,23; р=0,001). Содержание серотонина в крови детей группы наблюдения было ниже показателя группы сравнения (66,81±11,17 нг/мл и 113,58±24,12 нг/мл соответственно, p=0,03), при этом установлена обратная связь содержания в крови серотонина с уровнем в крови марганца (R2=0,47; F=115,4; p=0,001).

Содержание АКТГ в крови детей группы наблюдения превышало показатель группы сравнения (11,2±2,3 пмоль/л и 8,2±0,8 пмоль/л соответственно, p=0,04), при этом установлена прямая связь повышения уровня АКТГ с содержанием в крови марганца (R=0,33-0,41; F=81,74-98,03; p=0,001).

Кроме того, у детей группы наблюдения определялось нарушение баланса биохимических регуляторов внутриклеточного энергетического обмена - выраженное снижение цАМФ и повышение цГМФ, что свидетельствовало о длительном перенапряжении симпатоадреналовой системы и усилении парасимпатических регуляторных влияний. Отмечалось снижение уровня цАМФ в группе наблюдения (4,14±1,67 пмоль/см3) у 70% детей относительно нормы (8,40±1,5 пмоль/см3, p<0,05), в группе сравнения - только у 40% детей (4,09±1,26 пмоль/см3) (p>0,05). Выявлено увеличение содержания цГМФ в группе наблюдения до 5,6±2,78 пмоль/см3 относительно физиологической нормы (3,45±0,85 пмоль/см3), в группе сравнения этот показатель составил 2,73±0,844 пмоль/см3, межгрупповые различия были статистически значимы (p<0,001). Уровень цГМФ зависел от концентрации марганца в крови и статистически значимо увеличивался при повышение содержания в крови металла более 0,029 мкг/см3 (R2=0,61,47; F=139,41; p=0,001).

Оценка вариабельности сердечного ритма методом кардиоинтервалографии, проведенная у детей группы наблюдения, выявила в 50% случаев преобладание исходного парасимпатического вегетативного тонуса - ваготонию. Показатель Дх (вариационный размах) составил 0,91±0,06 мм, что статистически значимо выше физиологической нормы (0,23±0,05 мм, р<0,05) и показателя в группе сравнения (0,25±0,08 мм, р<0,05). Активность симпатического звена у детей группы наблюдения была снижена (индекс напряжения 51,12±15,7 у.е.), относительно нормы (94,0±15,0 у.е.), и группы сравнения (89,0±11,0 у.е.) (р<0,05). В ортостазе установлено парадоксальное нарастание ваготонии (52,7% против 43,7% исходно, р<0,05), в то время как в группе сравнения прослеживалась тенденция к увеличению частоты регистрации физиологического симпатикотонического и избыточого гиперсимпатикотонического типов вегетативной реакции (51,8% против 58,7% исходно; p≤0,05). На фоне нарастающей ваготонии в ортостазе отмечалось увеличение мощности VLF2, величина его в основной группе в 1,5 раза превышала аналогичный показатель группы сравнения (1414,45±220,58 мс и 2148,65±250,93 мс, соответственно, р<0,02).

Также установлены достоверные корреляционные связи между показателями кардиоинтервалографии и уровнем содержания в крови соединения марганца. В причинно-следственной связи с содержанием марганца в крови находились парасимпатические (мощность HF) (r=0,59-0,43, p<0,02) и симпатические показатели (Мо r=-0,62-0,67, р<0,01; ИН r=-0,474, p<0,05; p<0,001), (HF1 r=-0,393, p=0,013; LF2 r=0,393, p=0,013).

С помощью визуальной оценки ЭЭГ выявлено, что у 56,3% детей группы наблюдения в отличии от 32,1% в группе сравнения отмечалось снижение амплитудных характеристик альфа-ритма (p<0,05). При проведении функциональных проб в 1,2 раза чаще наблюдался рост числа одиночных и групповых заостренных потенциалов, появление генерализованных разрядов и десинхронизации фоновой активности (p<0,05).

Для обоснования существенности признака: обязательность наличия корреляционной связи: повышенное содержание марганца в крови ребенка более 0,029 мкг/см3 с не менее чем 50% клинико-лабораторных показателей, влияющего на точность предлагаемой диагностики, было проведено медикаментозное лечение (сочетанное применение препаратов: Энтеросгель + Кудесан + Пантогам, направленных на коррекцию выявленных отклонений когнитивных функций, ассоциированных с воздействием марганца) детей (первая группа), у которых была выявлена вышеуказанная корреляционная связь, а также детей (вторая группа), у которых с повышенным содержанием марганца в крови коррелировало количество клинико-лабораторных показателей менее 50%. После указанной коррекции у детей первой группы улучшились показатели когнитивных функций внимания, гнозиса и праксиса, а именно увеличился среднегрупповой балл по пробе на внимание и темп деятельности с 4,01±0,72 ед. до 5,42±0,45, соответственно, p=0,05, по пробе, оценивающий зрительный гнозис с 4,63±0,43 до 5,9±0,62, соответственно, p=0,04, снизился - по пробе на кинестатический праксис с 1,59±0,44 до 0,58±0,29, p=0,01. Во второй подгруппе существенной динамики исследуемых показателей не установлено. Это доказывает существенность признака заявляемого способа: обязательность наличия корреляционной связи: повышенное содержание марганца в крови ребенка более 0,029 мкг/см3 с не менее чем 50% клинико-лабораторных показателей, влияющего на точность предлагаемой диагностики.

Таким образом, вышеприведенными исследованиями была подтверждена точность диагностики когнитивных нарушений у детей 5-10 лет, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца, путем использования в заявляемом способе, наряду с другими признаками, предлагаемого приема: установления достоверной зависимости: повышенное содержание марганца в крови более 0,029 мкг/см3 с не менее чем 50% клинико-лабораторных показателей, при их следующей характеристике: - повышенные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни гидроперекиси липидов, МДА, 8-OHdG, глутамата, АКТГ, кортизола, цГМФ, - пониженные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни ГлПО, Cu/Zn-СОД, ОАС, γ-аминомасляной кислоты, цАМФ.

Апробация предложенного способа диагностики когнитивных нарушений у детей с астено-невротическим синдромом и/или синдромом вегетативных дисфункций, проживающих на территории, характеризующейся нарушения гигиенических нормативов по содержанию соединений марганца, позволила выявить когнитивные нарушения у 78% обследованных, в то время как тестирование этих же детей по общепринятой экспресс-методике: Цветаева Л.C. Методика нейропсихологической диагностики детей. 2-е изд., исправл., доп. М., 2000. 76 с., установило нарушения когнитивных функций только у 38% этих детей.

Предлагаемый способ позволяет оценить влияние неблагоприятных химических факторов, а именно марганца антропогенного происхождения, на адекватность когнитивных расстройств с целью выявления контингента детей, в отношении которых необходимо осуществление дополнительной медикаментозной коррекции.

1. Способ диагностики у детей от 5 до 10 лет когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца техногенного происхождения, характеризующийся тем, что по результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования устанавливают у ребенка наличие когнитивных нарушений, далее в крови этого ребенка осуществляют определение содержания марганца и при превышении этого содержания более референтного уровня проводят последующее лабораторно-диагностическое обследование ребенка путем установления совокупности следующих клинико-лабораторных показателей: уровень гидроперекиси липидов в сыворотке крови, уровень малонового диальдегида МДА в плазме крови и содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина 8-OHdG в моче, характеризующих активность окислительных процессов; уровень глутатионпероксидазы ГлПО, уровень Cu/Zn-супероксиддисмутазы Cu/Zn-СОД, уровень антиоксидантной активности ОАС сыворотки крови, характеризующих состояние антиоксидантной системы; уровень глутамата и уровень γ-аминомасляной кислоты в сыворотке крови, являющиеся нейротрансмиттерами; содержание гормонов гипофизарно-надпочечниковой оси: уровень адренокортикотропного гормона АКТГ, уровень кортизола и уровень серотонина в сыворотке крови, характеризующих состояние нейроэндокринной регуляции, уровень циклического аденозинмонофосфата цАМФ и циклического гуанозинмонофосфата цГМФ, характеризующих состояние внутриклеточного энергетического обеспечения; далее проводят корреляционный анализ между указанными клинико-лабораторными показателями и содержанием марганца в крови ребенка и при установлении достоверной зависимости: повышенное содержание марганца в крови более 0,029 мг/дм3 с не менее чем 50% указанных клинико-лабораторных показателей при их следующей характеристике: повышенные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни гидроперекиси липидов, МДА, 8-OHdG, глутамата, АКТГ, кортизола, цГМФ, пониженные по сравнению с возрастными физиологическими нормами уровни ГлПО, Cu/Zn-СОД, ОАС, γ-аминомасляной кислоты и цАМФ диагностируют наличие когнитивных нарушений у ребенка, ассоциированных с воздействием марганца.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что дополнительно к результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования производят выполнение функциональной диагностики ребенка путем оценки вегетативного тонуса в покое и вегетативной реактивности в ортостазе, а также путем исследования биоэлектрической активности мозга.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения пентахлорфенола в крови.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам лабораторной диагностики токсического действия никеля, и описывает способ диагностики окислительного стресса у детского населения в условиях внешнесредового воздействия никеля, при этом осуществляют определение содержания никеля в пробе крови и определение лабораторных показателей: в сыворотке крови - содержание гидроперекиси липидов, а в моче - содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина, далее проводят корреляционный анализ между указанными лабораторными показателями и уровнем никеля в крови, и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка никеля более 0,083 мг/дм3 и повышенное, по сравнению с референтным уровнем, содержание гидроперекиси липидов в сыворотке крови и повышенное, по сравнению с референтным уровнем, содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина в моче, диагностируют наличие окислительного стресса в организме на уровне ДНК клетки и мембраны клетки.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий.

Изобретение относится к медицине и токсикологической химии, а именно к способам определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораторий.
Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской диагностике в области онкологии, и описывает способ прогнозирования развития метастазов у больных меланомой кожи.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования у пациента с влажной возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) повышенной вероятности эффекта от лечения высокоаффинным антителом против VEGF, в частности ранибизумабом.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики стеатоза печени и стеатогепатита путем биохимического исследования, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют фосфолипазу A2, оксид азота и эндотоксин и при значении фосфолипазы A2 199,7-252,5 нг/мл, оксида азота 93-94,6 мкмоль/л и эндотоксина 2,2-2,6 ЕЭ/мл диагностируют стеатоз печени, а при значении фосфолипазы A2 412,5-576,5 нг/мл, оксида азота 137,5-168,5 мкмоль/л и эндотоксина 3,32-4,18 ЕЭ/мл диагностируют стеатогепатит.
Изобретение относится к медицине и описывает способ прогнозирования высокого риска развития производственно обусловленных и профессиональных заболеваний у работников химического комплекса, занятых во вредных условиях труда, включающий определение в сыворотке крови общего антиоксидантного статуса, при этом дополнительно в сыворотке крови определяют количественное содержание продуктов перекисного окисления липидов и при одновременном увеличении количественного содержания перекисей в липидах более 4,31 мкмоль/л и снижении общего антиоксидантного статуса менее 1,3 ммоль/л прогнозируют высокий риск развития производственно обусловленных и профессиональных заболеваний.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для лечения вторичной митохондриальной дисфункции у детей с патологией мочевой системы.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики апоптоза лимфоцитов. Для этого клетки выделяют, инкубируют 48 часов при температуре 37°С и с 5% содержанием СО2, с добавлением индуктора апоптоза дексаметазона в концентрации 10-4 моль/мл.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения бенз(а)пирена в крови, для оценки риска здоровью человека и разработки мероприятий по обеспечению химической безопасности. Способ осуществляется следующим образом. Каждую пробу крови анализируют дважды. Свежеотобранную пробу крови центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Разделяют на фракции плазмы и форменных элементов. Проводят твердофазную экстракцию плазмы путем последовательного пропускания под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3 сс 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, плазмы, дистиллированной воды, 50%-ного водного раствора ацетонитрила. Затем картридж с сорбентом высушивают под вакуумом и пропускают через сорбент 100%-ный метиленхлорид. Аликвотную часть полученного экстракта хроматографируют. Для получения экстракта форменных элементов проводят дисперсионную твердофазную экстракцию: добавляют к ним 100%-ный ацетонитрил, интенсивно встряхивают. Добавляют набор солей QuECHeRS для экстракции, встряхивают интенсивно, центрифугируют 10 минут со скоростью 2000 об/мин, при этом образуется 3 слоя, верхний слой переносят в другую пробирку, в которой содержится набор солей QuECHeRS для очистки, центрифугируют со скоростью 2000 об/мин, отбирают верхний слой. Экстракт плазмы и форменных элементов анализируют на жидкостном хроматографе Agilent серии 1200 с флуориметрическим детектором на колонке Zorbax длиной 50 мм и внутренним диаметром 4,6 мм с сорбентом Eclipse РАН C18 при температуре колонки 27°C, при использовании в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды со скоростью потока 1,5 см3/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (1 мин подача подвижной фазы 60 об.% ацетонитрила и 40 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 60 об.% до 68 об.% в течение 3 мин, увеличение ацетонитрила с 68 об.% до 70 об.% в течение 0,5 мин, увеличение ацетонитрила с 70 об.% до 90 об.% в течение 1,5 мин, увеличение ацетонитрила с 90 об.% до 100 об.% в течение 4,5 мин, подача 100%-ного ацетонитрила в течение 1,5 мин, затем снижение ацетонитрила до 60 об.% и подача 60%-ного ацетонитрила в течение 4 мин до уравновешивания колонки). При этом длина волны возбуждения флуориметрического детектора составляла 265 нм и длина волны эмиссии 412 нм. По градуировочному графику отдельно определяют содержание бенз(а)пирена в плазме и форменных элементах, а результаты суммируют. Изобретение обеспечивает высокую чувствительность способа при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов. 2 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу диагностики токсигенных штаммов Clostridium difficile. Сущность способа состоит в том, что пробу кала пациента выдерживают в абсолютном 96% спирте 30-60 мин при соотношении спирта и кала 1:1, центрифугируют 15-20 минут, далее обрабатывают пробу кала 1% раствором дезоксихолата натрия при соотношении 1:1 30-60 минут, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, затем проводят первичный посев осадка на среде с добавлением 1% лактозы и 0,5-1,0 мМ арабинозы, инкубируют в анаэростате в течение 24-48 ч, выросшие колонии наносят на стандартные диски, пропитанные хромогенным субстратом - орто-нитрофенил-β-D-галактозидазой. При появлении ярко-желтой окраски диска диагностируют токсигенные штаммы Clostridium difficile. Использование заявленного способа позволяет с высокой чувствительностью и специфичностью, простотой и доступностью диагностировать токсигенные штаммы Clostridium difficile. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития детского церебрального паралича у недоношенных новорожденных с экстремально низкой массой тела при рождении. Сущность способа заключается в определении концентрации нейронспецифической енолазы (NSE) и васкулоэндотелиального фактора (VEGF) в сыворотке пуповинной крови и сыворотке периферической крови, концентрации мозгового нейротрофического фактора (BDNF) в сыворотке периферической крови на 7 сутки жизни с последующим вычислением прогностического индекса (PI) по формуле: PI=0,033×X1+0,016×X2-0,36×X3+0,002×X4+0,00054×X5-4,0, где X1 - концентрация NSE в пуповинной крови (мкг/л); X2 - концентрация VEGF в пуповинной крови (нг/мл); X3 - концентрация NSE в периферической крови на 7 сутки жизни (мкг/л); X4 - содержание VEGF в периферической крови на 7 сутки жизни (нг/мл); X5 - концентрация BDNF в периферической крови на 7 сутки жизни (нг/мл); Const=-4,0. Если PI менее 0, делают заключение о низком риске развития ДЦП. Если PI более 0, прогнозируют высокий риск развития данной патологии. Предлагаемый способ позволяет повысить эффективность развития детского церебрального паралича у недоношенных новорожденных с экстремально низкой массой тела при рождении до 85%. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования судорожного синдрома у детей с перинатальными поражениями ЦНС в раннем неонатальном периоде. Для этого в сыворотке крови пуповины у новорожденных детей методом капиллярного электрофореза определяют концентрацию агматина и при его концентрации 0,038 мг/мл и выше прогнозируют развитие судорожных состояний. Изобретение позволяет прогнозировать возникновение судорожных состояний у новорожденных с перинатальным поражением ЦНС и своевременно назначить патогенетическую терапию. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей (ЧБД). Сущность способа состоит в том, что определяют уровень интерлейкина-17 и ММР-9 в слюне и при уровне интерлейкина-17 выше 5 пг/мл и уровне ММР-9 выше 10 нг/мл прогнозируют высокий риск формирование хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД. Использование заявленного способа позволяет своевременно определить высокий риск формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД и проводить ранние профилактические мероприятия, направленные на их предотвращение. 4 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, к хирургии, к онкологии и может быть использовано при дооперационном определении объема хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы. Сущность способа: в материале опухоли, взятом тонкоигольной аспирационной биопсией, определяют экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки и при экспрессии менее 1% в объем операции дополнительно включают центральную лимфодиссекцию. Экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки определяю методом проточной флуороцитометрии. Способ позволяет на основе дооперационного определения экспрессии натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки достоверно установить объем хирургического лечения высокодифференцированных раков щитовидной железы - папиллярного и фолликулярного. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ММР9-1562 C>Т (rs3918242). Способ основан на снятии кривых плавления с флуоресцентно-мечеными аллель-специфичными олигонуклеотидными пробами. В способе используют общую для всех аллелей пару праймеров, отличающиеся для каждого аллеля флуоресцентно-меченые аллель-специфичные олигонуклеотидные пробы и универсальный олигонуклеотид, меченый гасителем флуоресценции следующего нуклеотидного состава: MMP9-1562s CGAAACCAGCCTGGTCAACG; ММР9-1562а TCTGCCTCCCGGGTTCAAGC; ММР9-1562р1 GGCGCACGCCTATAA-FAM; ММР9-1562р2 GGCGCATGCCTATAA-HEX; ММР9-1562pq BHQ1-ACCAGCTACTCGGGAGGC-3'-(P), где FAM - означает флуоресцентный краситель FAM, HEX - означает флуоресцентный краситель HEX, BHQ1 - означает присоединенный к 5'-концевому нуклеотиду темновой гаситель флуоресценции. Отнесение образца к гомозиготе или гетерозиготе по данному аллелю оценивается по форме кривых плавления ДНК - по максимуму первой производной графиков флуоресценции. Изобретение позволяет повысить надежность и доступность генотипирования. 1 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования течения саркоидоза. Сущность способа состоит в том, что исследуют биоптат средней доли правого легкого. Проводят иммуногистохимическое исследование, по меньшей мере, в 5 полях зрения при увеличении ×400 по определению среднего количества миофибробластов в межальвеолярном интерстиции. При значении этой величины более 50 прогнозируют неблагоприятное течение саркоидоза, при выявлении 15 и менее среднего количества миофибробластов прогнозируют благоприятное течение саркоидоза. Использование заявленного способа позволяет осуществить ранний прогноз и выявить группу больных, которым нет необходимости проводить большое количество дополнительных исследований. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и описывает способ диагностики нутриционной недостаточности при язвенном колите путем иммунологического исследования, при котором в сыворотке крови определяют уровень растворимых форм молекул адгезии sICAM-1, sICAM-2 и sICAM-3 и при легкой степени нутриционной недостаточности уровень лимфоцитов крови составляет 1500-1800·109/л и уровень sICAM-1 13,4-24,7 нг/мл, уровень sICAM-2 8,1-17 нг/мл и уровень sICAM-3 4,4-19 нг/мл; уровень IgG 650-500 мг/л; при умеренной степени нутриционной недостаточности уровень лимфоцитов крови составляет 900-1490·109/л и уровень sICAM-1 25-37,8 нг/мл, уровень sICAM-2 17,1-23,9 нг/мл и уровень sICAM-3 19,5-30,8 нг/мл, уровень IgG 950-1400 мг/л; при тяжелой степени нутриционной недостаточности уровень лимфоцитов крови составляет 890·109/л и менее, уровень sICAM-1 38-63 нг/мл, уровень sICAM-2 24-29 нг/мл и уровень sICAM-3 30,9-42,3 нг/мл; уровень IgG 1500-1800 мг/л. Изобретение обеспечивает повышение точности диагностики нутриционной недостаточности при язвенном колите. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и эндокринологии, и может быть использовано для выявления манифестации нарушения тканевой чувствительности к инсулину у пациентов в раннем периоде острого инфаркта миокарда. Способ включает исследование в крови пациента в первые сутки острого инфаркта миокарда с элевацией сегмента ST уровня инсулинемии, гликемии, свободных жирных кислот (СЖК), ретинолсвязывающего белка, фактора некроза опухоли и уровня грелина, далее на основании полученных результатов рассчитывают линейную классификационную дискриминантную функцию (КЛДФ1-с) по формуле: КЛДФ1-с=-3,877+0,095Адп+0,246Грл-0,025ИЛ-6-0,053ФНО, где АДП - концентрация адипонектина, Грл - уровень грелина, ИЛ-6 - значения интерлейкина - 6, а ФНО - фактора некроза опухолей альфа, при этом вероятный риск развития инсулинорезистентности определяют при значениях КЛДФ1, меньших точки разделения кластеров 0,4545 и максимально приближенных к центроиду -0,561. Изобретение обеспечивает повышение достоверности диагностики развития инсулинорезистентности у пациентов с острым инфарктом миокарда с элевацией сегмента ST в раннем госпитальном периоде. 2 пр., 2 ил., 2 табл.
Наверх