Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения

Авторы патента:


Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения
Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения
Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения
Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения
Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения
Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения

 


Владельцы патента RU 2547465:

СУЧЖОУ МАЙДИСЯНЬ ФАРМАСЬЮТИКАЛ ИНК. (CN)
ЧЖУН Жун (CN)
БАНХЭ ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД (CN)
ЧЖАН Нань (CN)

Настоящее изобретение относится к цитрату соединения, имеющему приведенную ниже формулу (II), и фармацевтической композиции, содержащей заявленный цитрат. Экспериментальные результаты настоящего изобретения доказывают, что заявленный цитрат может подавлять активность фосфодиэстеразы 5 типа и может быть использован для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбозов, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, лечения астмы и диабетического гастропареза. 2 н.п. ф-лы.

 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к соединению, обладающему ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, его солям, способам его получения и фармацевтическим композициям, содержащим указанное соединение или его соли.

Предшествующий уровень техники

Циклический аденозин монофосфат (цАМФ) и циклический гуанозин монофосфат (цГМФ) являются важными вторичными мессенджерами в клетке, и уровень цАМФ и цГМФ в клетке важен для регулирования различных клеточных функций.

Ферменты, участвующие в регуляции клеточного уровня цАМФ и цГМФ, включают аденилатциклазы (АЦ), гуанилатциклазы (ГЦ) и фосфодиэстеразы (ФДЭ). Баланс этих ферментов поддерживает уровень цАМФ и цГМФ в клетке в пределах нормы. При некоторых болезненных состояниях (например, гипертония, стенокардия и т.д.) обнаружено, что уровень цАМФ и цГМФ в клетке падает. Для повышения уровня цАМФ и цГМФ в клетке могут быть использованы две возможности: 1) активировать АЦ и ГЦ, и 2) ингибировать ФДЭ, из которых вторая возможность имеет лучший эффект. В последние годы существует большой интерес к изучению и разработке ингибиторов ФДЭ, и клиническое применение селективных в отношении изоферментов ингибиторов ФДЭ достигло революционного прогресса. В настоящее время результаты экспериментов по клонированию молекулы кДНК доказали, что существует по крайней мере 10 семейств генов ФДЭ у млекопитающих. Для каждого семейства генов ФДЭ существует множество подтипов изоферментов ФДЭ (сплайсинг-вариантов), из которых фосфодиэстераза 5 типа (ФДЭ-5) может селективно гидролизовать цГМФ и широко распространена в отдельных органах тела.

Ингибитор ФДЭ-5 имеет следующие фармакологические функции и клинические применения:

(1) Ингибирование агрегации тромбоцитов и борьба с тромбозом:

идеальные антитромботические препараты должны подавлять агрегацию тромбоцитов без релаксации гладкой мускулатуры сосудов, чтобы избежать возникновения участка ишемии с дальнейшим развитием ишемии. Как ингибиторы ФДЭ-3, так и ингибиторы ФДЭ-5 ингибируют агрегацию тромбоцитов. Однако учитывая, что ингибитор ФДЭ-5 в меньшей степени расслабляет гладкую мускулатуру сосудов, он имеет существенное преимущество в лечении артериальных тромботических заболеваний. Типичный ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой дипириамол, имеет хороший антитромботический эффект.

(2) Снижение легочной гипертензии и лечение сердечно-сосудистых заболеваний: аномалия легочного сосудистого сопротивления часто является важным фактором, вызывающим сердечно-сосудистые заболевания. В экспериментах на животных моделях селективный ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой запринаст, может существенно увеличить эффективное время и интенсивность оксида азота и оказывает относительно сильное действие на снижение легочной гипертензии. Клинически это используется для лечения стенокардии, гипертонии и инфаркта миокарда. В последнем докладе ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой Е-4010, может увеличить выживаемость крыс, имеющих гипертонию, индуцированную монокроталином.

(3) Противоастматическое действие: Сообщается, что эксперименты с использованием свиней в качестве животной модели показывают, что ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой SR-265579, имеет терапевтический эффект для гистамининдуцированных бронхоэктазов;

(4) Лечение диабетического гастропареза: Сообщается, что у крыс, имеющих диабет, ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой силденафила цитрат, может устранить задержку опорожнения желудка и обладает определенными терапевтическими и положительными эффектами на автономную нейропатию пищеварительной системы, осложненную диабетом.

(5) Лечение эректильной дисфункции: Поскольку ФДЭ5 широко распространен в пещеристых телах полового члена, ингибитор ФДЭ5 может вызвать увеличение уровня цГМФ в пещеристых телах полового члена. Вследствие ряда физиологических и биохимических реакций гладкая мускулатура сосудов пениса расслабляется и происходит эрекция пениса. В отличие от простагландина Е1 ингибитор ФДЭ-5 не будет вызывать патологическую эрекцию; ее функция все еще будет нуждаться в сексуальные стимулах.

В свете вышеизложенных фармакологических функций ингибитора ФДЭ5 авторы изобретения модифицировали химическую структуру силденафила методом химической молекулярной модификации и получили новые соединения и их цитраты, т.е. 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-кетон и его цитрат (ZTH). Установлено, что ZTH может эффективно подавлять активность фермента ФДЭ-5. Таковы предпосылки изобретения.

Краткое описание изобретения

Первой задачей настоящего изобретения является создание нового соединения, которое может ингибировать активность фосфодиэстеразы 5 типа и его соли, такой как цитрат. Второй задачей настоящего изобретения является разработка способа получения нового соединения и его цитрата. Третьей задачей настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции, которая содержит новое соединение или его соль, такую как цитрат.

Настоящее изобретение предлагает соединение формулы I и его фармацевтический цитрат формулы II:

Химическое название соединения, представленного формулой I: 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-он. Для иллюстрации его структуры использован метод ядерного магнитного резонанса и для вычисления молекулярной массы использована масс-спектрометрия:

[013]1H-NMR (400MHz, MeOD) δ 8,180-8,185 (d, J=2Hz, 1H), 7,880-7,908 (dd, J1=2,4Hz, J2=8,8Hz, 1H), 7,356- 7,379 (d, J=9,2Hz, 1H), 4,284- 4,337 (q, J=14Hz, 2H), 4,234 (s, 3H), 3,575-3,603 (d, J=11,2Hz, 2H), 2,865-2,902 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,377 (br, 2H), 2,261 (s, 3H), 2,112-2,168 (t, J=11,2Hz, 2H), 1,795-1,851 (m, 2H), 1,465-1,500 (t, J=7,2Hz, 3H), 1,090-1,105 (d, J=6Hz, 6H), 0,978-1,015 (t, J=7,2Hz, 3H). MS 503 [M+H]+

Цитрат формулы II получают в результате реакции соединения формулы I и лимонной кислоты. Химическое название цитрата, представленного формулой II: 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-онацитрат. Анализ выполнен с помощью ядерного магнитного резонанса: 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ8,164-8,170 (d, J=2,4Hz, 1H), 7,914-7,942 (dd, J1=2,4Hz, J2=8,8Hz, 1H), 7,363-7,385 (d, J=8,8Hz, 1H), 4,276-4,329 (q, J=14Hz, 2H), 4,231 (s, 3H), 3,746-3,776 (d, J=11,2Hz, 2H), 2,986 (br, 2H), 2,858-2,895 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,792 (s, 2H), 2,739 (s, 2H), 2,590 (s, 3H), 2,406-2,464 (t, J=11,6Hz, 2H), 1,784-1,839 (m, 2H), 1,448-1,483 (t, J=7,2Hz, 3H), 1,253-1,269 (d, J=6,4Hz, 6H), 0,972-1,009 (t, J=7,2Hz, 3H).

Соединение формулы I получают главным образом, используя цис-2, 6-диметилпиперазин и 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-е]пиримидин-7-кетон в качестве исходных материалов и синтезируют в несколько этапов. Путь синтеза выглядит следующим образом:

В 2,6-диметилпиперазин и ди-трет-бутилдикарбонат добавляют тетрагидрофуран, проводят реакцию при комнатной температуре, а затем максимально концентрируют тетрагидрофуран и получают 3,5-диметил-1-трет-бутоксикарбонил-пиперазин (ZTH-1). По данным ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ3,8-4,1 (br, 2H), 2,75-2,80 (м, 2Н), 2,2-2,5 (br, 2H), 1,45 (с, 9H), 1,052-1,067 (d, J=6 Гц, 6H). MS 215 [M+H]+.

К ZTH-1 последовательно добавляют тетрагидрофуран, углекислый калий и йодистый метил, и проводят реакцию при комнатной температуре в течение ночи; затем фильтруют и концентрируют, добавляют воду и дихлорметан в осадок и промывают дихлорметаном, соединяют органические слои, промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют и остаток очищают колоночной хроматографией (метанол:дихлорметан = 1:20) и получают 3,4,5-триметил-1-трет-бутил-карбонилпиперазидин (ZTH-2). По данным спектрометрии ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1H-NMR (400MHz, MeOD), 54,505-4,533 (m, 2H), 4,110-4,134 (m, 2H), 2,943 (s, 3H), 2,779 (br, 2H), 2,196 (s, 9H), 1,782-1,797 (d, J=6Hz, 6H). MS 229 [M+H]+.

ZTH-2 растворяют в диоксане, охлаждают, медленно по каплям добавляют концентрированный раствор соляной кислоты в диоксане, перемешивают при комнатной температуре и затем выпаривают растворитель при пониженном давлении и получают 1,2,6-триметилпиперазин (ZTH-3). По данным спектрометрии ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1Н- NMR (400MHz, MeOD) δ4,505-4,533 (m, 2Н), 3,722 (br, 2Н), 3,611-3,644 (m, 2Н), 3,310-3,423 (m, 2Н), 2,937 (s, 3Н), 1,493-1,506 (d, J=5,2Hz, 6H). MS 129 [M+H]+.

По каплям добавляют 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразол[4,3-D]пиримидин-7-он в хлорсульфоновую кислоту, поддерживая температуру реакционного раствора не выше 25°C, проводят реакцию при комнатной температуре, а затем заливают реакционный раствор в колотый лед, механически перемешивают при комнатной температуре, поддерживая температуру не выше 25°C, а затем фильтруют и сушат и получают 5-(2-этоксифенил-5-хлорсульфонил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-он (ZTH-4). По данным спектрометрии ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1H-NMR (400MHz, DMS0) δ 7,871-7,876 (s, 1Η), 7,700-7,727 (dd, J1=2Hz, J2=8,4Hz, 1H), 7,098-7,119 (d, J=8,4Hz, 1H), 4,125-4,161 (m, 5H), 2,778-2,816 (t, J=7,6Hz, 2H), 1,700-1,756 (m, 2H), 1,303- 1,337 (t, J=6,8Hz, 3H), 0,919-0,956 (t, J=7,6Hz, 3H). MS 411 [M+H]+.

В тетрагидрофуран добавляют ZTH-4, ZTH-3 и триэтиламин, перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем выпаривают растворитель, в остаток добавляют воду и метиленхлорид, отделяют и последовательно промывают слой метиленхлорида насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде, насыщенным раствором соли, и затем сушат и концентрируют, после перекристаллизации образовавшегося остатка из этанола получают соединение формулы I (ZTH-5).

В ZTH-5 добавляют безводный метанол, перемешивают, нагревая до растворения, добавляют лимонную кислоту после осветления раствора; по окончании реакции растворения, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, промывают метанолом и сушат и получают соединение формулы II (ZTH).

ZTH-5, соли ZTH-5, такие как ZTH, являются пиразоло-пиримидино-кетоновыми соединениями, химическая структура которых схожа с химической структурой цГМФ и они могут конкурировать с цГМФ за связывание каталитического домена ФДЭ-5 и, таким образом, препятствовать деградации цГМФ на ФДЭ-5, увеличивать концентрацию цГМФ и поддерживать концентрацию цГМФ в пределах нормы. ZTH-5, соли ZTH-5, такие как ZTH, могут эффективно ингибировать активность фосфодиэстеразы 5 типа и, таким образом, могут быть использованы как ингибиторы фосфодиэстеразы 5 типа или в качестве эффективного компонента депрессанта фосфодиэстеразы 5 типа. ZTH-5, соли ZTH-5, такие как ZTH, потенциально могут быть основой для разработки препаратов нового поколения для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбоза, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, для лечения астмы и лечения диабетического гастропареза.

Подробное описание изобретения

(1) Получение ZTH-5(5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-он):

1. Получение 3,5-диметил-1-трет-бутоксикарбонил-пиперазина (ZTH-1):

В 250 мл колбу добавляют 2,6-диметилпиперазин (11,4 г, 100 ммоль, 1 экв) и дитретбутилбутилдикарбонат (21,8 г, 100 ммоль, 1 экв), затем добавляют 100 мл тетрагидрофурана, проводят реакцию при комнатной температуре в течение 4 часов и концентрируют тетрагидрофуран (пока тетрагидрофуран не израсходуется полностью) и получают 21,4 г ZTH-1 в виде оранжевого маслянистого вещества, в котором выход целевого вещества составляет 100%.

2. Получение 3,4,5-триметил-1-трет-бутил-карбонильной пиперазидина (ZTH-2):

В 250 мл колбу добавляют ZTH-1 (10,7 г, 50 ммоль, 1 экв); последовательно добавляют 100 мл тетрагидрофурана, карбонат калия (10,35 г, 75 ммоль, 1,5 экв.) и йодистый метил (8,52 г, 60 ммоль, 1,2 экв.), проводят реакцию при комнатной температуре в течение ночи; фильтруют и концентрируют, к осадку добавляют 100 мл воды и 100 мл дихлорметана и промывают дихлорметаном (50 мл×дважды), соединяют органические слои, промывают насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют и осадок очищают колоночной хроматографией (метанол: дихлорметан=1:20), и получают 5,7 г ZTH-2 в виде оранжевого маслянистого вещества, в котором выход целевого вещества составляет 50%.

3. Получение 1,2,6-триметилпиперазина (ZTH-3):

ZTH-2 (11,4 г, 50 ммоль, 1 экв) растворяют в 100 мл диоксана, охлаждают до 0°C и медленно по каплям добавляют насыщенный раствор соляной кислоты в диоксане (4М, 25 мл, 2 экв.), перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и выпаривают растворитель при пониженном давлении и получают ZTH-3 в виде твердого сырого продукта белого цвета, который непосредственно, без очистки используют на следующей стадии.

4. Получение 5-(2-этоксифенил-5-хлорсульфонил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4, 3-е]пиримидин-7-она(ZTH-4):

При температуре -10°C к 100 мл хлорсульфоновой кислоты добавляют по каплям 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразол[4,3-D]пиримидин-7-он(50 г, 160 ммоль), в процессе капания температуру реакционного раствора поддерживают не выше 25°C, по завершении капания проводят реакцию при комнатной температуре в течение 3 часов; затем заливают реакционный раствор в колотый лед, механически перемешивают, поддерживая температуру не выше 25°C, а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, фильтруют и сушат и получают 50 г ZTH-4 в виде твердого вещества белого цвета, в котором выход целевого продукта составляет 75,9%.

5. Получение 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-она(ZTH-5):

В 500 мл тетрагидрофурана добавляют ZTH-4 (36 г, 10 ммоль, 1 экв), ZTH-3 (17,6 г, 10 ммоль, 1 экв), и триэтиламин (60,6 г, 60 ммоль, 6 экв.), перемешивают при комнатной температуре в течение ночи; выпаривают растворитель, добавляют 200 мл воды и 200 мл метиленхлорида, отделяют и последовательно промывают слой метиленхлорида насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде затем насыщенным солевым раствором, а затем сушат и концентрируют, после перекристаллизации из 10-кратного количества этанола получают 32 г ZTH-5 в виде белого кристаллического остатка, затем после перекристаллизации из 50- кратного количества этанола получают 16,5 г белого кристаллического ZTH-5, при этом при этом выход целевого вещества составляет 37%.

(2) Получение ZTH (5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-онцитрат):

В 500 мл реакционный сосуд (бутылку) добавляют 15 г соединения ZTH-5, 270 мл безводного метанола, перемешивают, нагревая до растворения, добавляют 12,5 г лимонной кислоты после осветления раствора; в ходе реакции растворения в течение примерно 1,5 часов, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, промывают метанолом (три раза×5 мл) и сушат с получением 15 г ΖΤΗ в виде белого твердого вещества.

(1) и (2) указанные выше являются вариантами получения и (3), указанный ниже является экспериментальным воплощением.

(3) Исследования ингибирующего эффекта ΖΤΗ на ФДЭ-5

1. Ингибирующий эффект ΖΤΗ на действие ФДЭ-5 на цГМФ: Экспериментальный метод:

Для обнаружения in vitro ингибирующих эффектов различных концентраций ZTH на деградацию цГМФ под действием ФДЭ-5 используют иммуноферментный анализ. Концентрацию цГМФ определяют в соответствии с процедурой, предусмотренной для набора для иммуноферментного анализа биотрансформации цГМФ (набор ИФА) (также называемого: cGMP biotrack enzymeimmuoassy system, EIA), изготовленного компанией Amersham (компания). В качестве положительного контроля используют силденафила цитрат.

Получение реагента:

Получение ZTH и силденафил цитрата с различной концентрацией лекарственного средства:

Делают навеску ZTH для растворения в дистиллированной деминерализованной воде, соответственно, добавляют ДМСО для его растворения (препарат: ДМСО=1 моль:1 литр) в 100 мкл микролунки, конечные концентрации: 10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр.

Препарат сравнения, представляющий собой силденафил цитрат, готовится таким же образом, как описано выше.

Получение рабочего раствора ФДЭ-5:

Отбирают определенное количество ФДЭ-5, разбавленного соответствующим объемом буферного раствора для ИФА, где конечная концентрация составляет 1 Ед/мкл, причем раствор хранится при низкой температуре -80°C для последующего использования.

Получение цГМФ:

Делают навеску цГМФ (цГМФ, Na), растворяют в соответствующем объеме буферного раствора для ИФА, конечная концентрация цГМФ составляет 3200 фемтомоль/50 мкл, раствор хранится при низкой температуре -20°C для последующего использования.

Эксперимент:

Деградирующее действие ФДЭ5 на цГМФ:

ФДЭ-5 и цГМФ смешивают, 100 мкл микролунка содержит 3200 фмоль цГМФ, деградирующее действие ФДЭ5 на цГМФ детектируется в ходе реакции при 30°C в течение 20 минут.

Ингибирующее действие ZTH на ФДЭ5:

ZTH и силденафила цитрат, представляющий собой положительный контроль, смешивают с цГМФ соответственно и хорошо перемешивают (предполагают использование раствора ДМСО в дистиллированной деминирализованной воде в качестве отрицательного контроля) и 3 Ед ФДЭ-5 добавляют и проводят реакцию при 30°C в течение 20 мин. В 100 мкл микролунке содержатся 3200 фмоль цГМФ. Концентрация препарата может быть 10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр для выявления ингибирующего действия различных концентраций ZTH и положительного контроля на вызываемую ФДЭ-5, деградацию цГМФ. Вышеуказанные образцы добавляют в микролунки, покрытые антителами, а затем 100 мкл антисыворотки добавляют соответственно, чтобы приостановить реакцию, которая осуществляется при 4°C в течение 15-18 ч, а затем добавляют 50 мкл цГМФ, конъюгированного с пероксидазой, чтобы приостановить реакцию, протекавшую в течение 3 часов, а затем промывают, добавляют 200 мкл ТМБ для развития окраски и используют BIORAD 450 ИФА ридер для чтения поглощения при длине волны 630 нм. На основании измеренного значения поглощения цГМФ рассчитывают отношение В/ВО % по формуле поглощения ИФА [(ОП стандарта или образца - ОП NSB)×100/(ОП О стандарта - ОП NSB)] (NSB - фон, характеризующий неспецифическое связывание). IC50 для ZTH, силденафил цитрата, представляющего собой положительный контроль испытуемого препарата ФДЭ-5, рассчитывают с использованием линейной регрессии для аппроксимации S-кривой и кривой регрессии, построенной методом пробит.

Результаты эксперимента:

Деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ

ФДЭ-5 реагирует с цГМФ при 30°C в течение 20 минут и затем ФДЭ-5 мог разрушать 3200 фмоль цГМФ до 1600 фмоль.

Ингибирующее действие ZTH на вызываемую ФДЭ-5 деградацию цГМФ:

Сравнивают ингибирующее действие различных концентраций (10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр), соответствующих групп ZTH, контроля испытуемого препарата и раствора ДМСО в дистиллированной деминерализованной воде на деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ.

Значение IC50 препарата рассчитывают на основе различий в поглощении (значения ОП) при разных концентрациях препарата ZTH, подавляющего способность ФДЭ-5 деградировать цГМФ, используя формулу поглощения ИФА для расчета % В/ВО [(ОП стандарта или образца - ОП NSB)×100/(ОП 0 стандарта - ОП NSB)]. Данные могут быть аппроксимированы S кривой (p<0,05) с использованием линейной регрессии; IC50 рассчитывают с помощью регрессии, построенной методом пробит. Значение IC50 для ZTH составляет 2,12×10-9, и силденафил цитрата, представляющего собой положительный контроль испытуемого препарата, составляет 6,958×10-9 М.

2. Действие ZTH на вызываемый ФДЭ 5 распад цГМФ:

Экспериментальный метод:

Для обнаружения in vitro эффектов различных концентраций ZTH на деградацию цГМФ под действием ФДЭ-5 используют иммуноферментный анализ. Концентрацию цГМФ определяют в соответствии с процедурой, предусмотренной для набора для иммуноферментного анализа биотрансформации цГМФ (набор ИФА) (также называемого: cGMP biotrack enzymeimmuoassy system, EIA), сделанного Amersham. В качестве контроля используют силденафила цитрат.

Получение реагента:

Получение цАМФ:

Определенное количество цАМФ (цАМФ, Na) взвешивают и растворяют в соответствующем объеме буферного раствора для ИФА, соответственно. Конечная концентрация цАМФ составляет 1600 фмоль/50 мкл. Продукт хранят при низкой температуре -20°C для последующего использования.

Получение ZTH и силденафил цитрата и получение рабочего раствора ФДЭ-5 представляют собой такие же, как описано выше.

Эксперимент:

Деградирующее действие ФДЭ-5 на цАМФ:

ФДЭ-5 и цАМФ смешивают, 100 мкл микролунка содержит 1600 фмоль цАМФ. Деградирующее действие ФДЭ-5 на цАМФ обнаруживается в ходе реакции при 30°C в течение 20 минут.

Эффект ZTH на действие ФДЭ-5 по отношению к цАМФ:

ZTH и положительный контроль испытуемого препарата соединяют с цАМФ и тщательно перемешивают (в качестве отрицательного контроля используют раствор ДМСО в дистиллированной деминерализованной воде), и добавляют 3 Ед ФДЭ-5 и проводят реакцию при 30°C в течение 20 мин. 100 мкл микролунка содержит 1600 фмоль цАМФ. Концентрация препарата может быть 10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр. Перечисленные выше образцы добавляют в тестовые лунки, покрытые антителами, затем добавляют 100 мкл антисыворотки, чтобы приостановить реакцию, длившуюся при 4°C в течение 2 часов, а затем добавляют 50 мкл цАМФ, конъюгированного с пероксидазой, чтобы приостановить реакцию, осуществлявшуюся в течение 1 ч, а затем промывают, добавляют 150 мкл ТМВ для развития окраски и результаты спектрофотометрируют при длине волны 630 нм на ИФА планшет-ридере. Основываясь на измеренной величине поглощения цАМФ отношение %В/ВО рассчитывают, используя формулу поглощения ИФА [(ОП стандарта или образца - ОП NSB)×100/(ОП 0 стандарта - ОП NSB)]. Значение IC50 для ZTH, силденафил цитрата, являющегося положительным контролем испытуемого препарата, по отношению к ФДЭ-5 рассчитывают с использованием линейной регрессии для аппроксимации S кривой и регрессии, построенной методом пробит.

Результаты эксперимента:

Деградирующее действие ФДЭ-5 на цАМФ:

ФДЭ-5 не разрушает цАМФ.

Эффект ZTH на действие ФДЭ-5 по отношению к цАМФ:

Не наблюдается существенного различия в значениях ОП между ZTH группой, контрольной медицинской группой и отрицательной контрольной группой, представляющей собой дистиллированную деминерализованную воду (р>0,05), и данные не могут быть аппроксимированы S кривой (р>0,05).

Выводы:

ZTH является пиразоло-пиримидино-кетоновым соединением, химическая структура которого похожа на цГМФ и которое может конкурировать с цГМФ за связывание каталитического домена ФДЭ-5 и, таким образом, подавлять деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ и увеличивать концентрацию цГМФ.

В ходе изучения ингибирующего эффекта ZTH на вызываемую ФДЭ-5 деградацию цГМФ, IC50 для ZTH (концентрация ZTH, необходимая для ингибирования ФДЭ5 на 50%) определена как 2,12 х 10-9 моль, а для положительного контроля испытуемого препарата IC50 определена как 6,958 х 10-9 моль. Результат показывает, что ZTH может подавлять деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ, имеет зависимость доза-эффект и является очень хорошим ингибитором ФДЭ-5. Его ингибирующая активность по отношению к ферменту ФДЭ-5 значительно лучше, чем ингибирующая активность силденафил цитрата. Таким образом, ZTH потенциально может быть основой для разработки препаратов нового поколения для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и борьбы с тромбозом, для снижения легочной гипертензии и борьбы с сердечно-сосудистыми заболеваниями, для борьбы с астмой и лечения диабетического гастропареза.

В приведенных выше экспериментальных воплощениях изобретения, хотя раскрыты только экспериментальные данные, касающиеся ZTH, ввиду того, что ZTH является цитратом ZTH-5 и ZTH-5 имеет схожую структуру с ZTH (т.е. ZTH-5 и соли ZTH-5, кроме цитрата, имеют структуру, аналогичную ZTH, и имеют общую пиразоло-пиримидин-кетоновую структуру), из экспериментальных эффектов ZTH может быть сделано заключение, что ZTH-5, соли ZTH-5, кроме цитрата, обладают ингибирующим действием на вызываемую ФДЭ-5 деградацию цГМФ и являются ингибитором ФДЭ-5 и потенциально могут быть основой для разработки препаратов нового поколения для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбоза, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, для лечения астмы и лечения диабетического гастропареза.

1. Соединение, представляющее собой 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-он цитрат формулы II:

2. Фармацевтическая композиция для ингибирования фосфодиэстеразы 5 типа, включающая 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-он цитрат по п.1 в качестве эффективного компонента и общеизвестный носитель лекарственного средства и/или эксципиент.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и (II), фармацевтической композиции на их основе и способу лечения или предупреждения рака, иммунологических состояний, диабета, ожирения, неврологических расстройств и возрастных заболеваний, способу ингибирования mTOR киназы в клетке, способу лечения или предупреждения состояния, которое можно лечить или предупреждать ингибированием mTOR киназного метаболического пути.

Изобретение относится к химическому соединению формулы I, где R=бензил и к противотуберкулёзному лекарственному средству, представляющему собой композицию производного имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразина формулы I, где R=бензил, изопропил или фенил и известного противотуберкулёзного препарата пиразинамида при мольном соотношении компонентов 1:1.

Изобретение относится к способу получения циклического гуанидина, который может найти применение в композициях покрытия, в частности в электроосаждаемых композициях покрытия.

Изобретение относится к соединению структурной формулы (I), которое обладает ингибирующей активностью в отношении фосфодиэстеразы 10. В формуле (I) R1 представляет собой водород, галоген или низший алкил; кольцо А представляет собой необязательно замещенные 6-10-членный моноциклический или бициклический гетероарил, содержащий от 1 до 3 атомов азота в качестве гетероатомов, или группу, содержащую циклоалифатическое 6-членное кольцо, конденсированное с указанным гетероарилом, которое выбрано из 6-членного циклоалкана и алифатического 6-членного гетероциклического кольца, содержащего атом кислорода; кольцо В представляет собой необязательно замещенные 4-6-членную моноциклическую содержащую азот гетероциклическую группу, которая может дополнительно содержать атом кислорода или 3-6-членную моноциклическую углеводородную группу, которая необязательно частично насыщена; R3 представляет собой водород; низший алкил, необязательно замещенный заместителем, выбранным из низшего алкокси; или низший циклоалкил.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами модулятора рецептора 5-HT2C и/или 5-НТ6, фармацевтической композиции на их основе и способам их получения.

Изобретение относится к новым циклическим индолизинкарбоксамидам и азаиндолизинкарбоксамидам формул Ia и Ib, приведенных ниже, где значения R, Ra, R10, R20, R30, R40, Y, n, p и q указанны в пункте 1 формулы.

Изобретение относится к новым соединениям формулы Ia, их стереомерам или фармацевтически приемлемым солям, ингибирующим активность JAK киназы. Соединения могут найти применение при лечении воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, при лечении аутоиммунных заболеваний, таких как волчанка, рассеянный склероз, нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, и др.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) где R1 представляет собой гидроксиадамантил, метоксикарбониладамантил, карбоксиадамантил, аминокарбониладамантил или аминокарбонилбицикло[2.2.2]октанил и где A представляет собой CR5R6; или фенил, хлорбензил, бензил, хлорфенилэтил, фенилэтил, дифторбензил, дихлорфенил, трифторметилфенил или дифторфенилэтил и где A представляет собой CR5R6; R2 и R3 вместе с атомом азота N* и атомом углерода С*, к которому они присоединены, образуют группу или ; R4 представляет собой водород, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкоксиалкил, арилалкил, арилалкоксигруппу, арилалкоксиалкил, гидроксиалкил, арил, гетероарилалкил, гетероарилоксиалкил, замещенный арил, замещенный гетероарилалкил или замещенный гетероарилоксиалкил, где замещенный арил, замещенный гетероарилалкил и замещенный гетероарилоксиалкил замещены 1-3 заместителями, независимо выбранными из алкила, циклоалкила, цианогруппы, галогена, галогеналкила, гидроксигруппы и алкоксигруппы; R5 представляет собой водород; R6 представляет собой водород;, а также их фармацевтически приемлемым солям и сложным эфирам, которые могут быть использованы в качестве ингибиторов 11b-HSD1.

Изобретение относится к соединению формулы I или его терапевтически приемлемым солям, где А1 представляет собой фурил, имидазолил, изотиазолил, изоксазолил, пиразолил, пирролил, тиазолил, тиадиазолил, тиенил, триазолил, пиперидинил, морфолинил, дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-ил, бензотиен-2-ил, бензотиазол-2-ил, тетрагидротиен-3-ил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиримидин-2-ил или имидазо[2,1-b][1,3]-тиазол-5-ил; где А1 незамещен или замещен одним, или двумя, или тремя, или четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из R1, OR1, C(O)OR1, NHR1, N(R1)2, C(N)C(O)R1, C(O)NHR1, NHC(O)R1, NR1C(O)R1, (O), NO2, F, Cl, Br и CF3; R1 представляет собой R2, R3, R4 или R5; R2 представляет собой фенил; R3 представляет собой пиразолил или изоксазолил; R4 представляет собой пиперидинил; R5 представляет собой C1-C10алкил или C2-C10алкенил, каждый из которых не замещен или замещен заместителями, выбранными из R7, SR7, N(R7)2, NHC(O)R7, F и Cl; R7 представляет собой R8, R9, R10 или R11; R8 представляет собой фенил; R9 представляет собой оксадиазолил; R10 представляет собой морфолинил, пирролидинил или тетрагидропиранил; R11 представляет собой C1-C10алкил; Z1 представляет собой фенилен; Z2 представляет собой пиперидин, не замещенный или замещенный OCH3, или пиперазин; Z1A и Z2A оба отсутствуют; L1 представляет собой C1-C10алкил или C2-C10алкенил, каждый из которых не замещен или замещен R37B; R37B представляет собой фенил; Z3 представляет собой R38 или R40; R38 представляет собой фенил; R40 представляет собой циклогексил или циклогексенил; где фенилен, представленный Z1 не замещен или замещен группой OR41; R41 представляет собой R42 или R43; R42 представляет собой фенил, который не конденсирован или конденсирован с пирролилом, имидазолилом или пиразолом; R43 представляет собой пиридинил, который не конденсирован или конденсирован с пирролилом; где каждый вышеуказанный циклический фрагмент, представленный R2, R3, R4, R8, R9, R10, R38, R40, R42 и R43, независимо не замещен или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из R57, OR57, С(О)OR57, F, Cl CF3 и Br; R57 представляет собой R58 или R61; R58 представляет собой фенил; R61 представляет собой C1-C10алкил; и где фенил, представленный группой R58, не замещен или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из F и Cl.

Изобретение относится к соединениям формулы I, в которой R обозначает C1-6алкил, C1-6галогеналкил, гидрокси-C1-6алкил, гидроксигруппу или галоген; m, n равно 0 или 1; Z1 обозначает CH или NH; Z2 обозначает CH или N; Z3 обозначает CR1, N или NR2; R1 обозначает H, C1-6алкил, C3-7циклоалкил, цианогруппу, циано-C1-6алкил или галоген; R2 обозначает H или C1-6алкил; X обозначает CH, CR′ или N; X′ обозначает CH, CR′ или N; r равно 1; Y обозначает CH или CR′; R′ обозначает R′a или R′b; R′a обозначает галоген или цианогруппу; R′b обозначает C1-6алкил, гетероциклоалкил, выбранный из пиперазинила, морфолинила, пиперидинила, тиоморфолинила, азетидинила, пирролидинила, OR″, SR″, S(=O)2R″ или NR″R″, необязательно замещенный одним или более R′c; R′c обозначает гидроксигруппу, оксогруппу, цианогруппу, C1-6алкил, пиридинил, карбокси-C1-6алкил, аминокарбонил-C1-6алкиламиногруппу, C1-6алкиламиногруппу, C1-6диалкиламиногруппу или C1-6алкоксигруппу; R″ обозначает H, C1-6алкил, гидрокси-C1-6алкил, пиперидинил, C3-7циклоалкил или пиридинил; Q обозначает S(=O)2Q1, C(=O)Q2, C(=O)OQ3 или Q4; Q1 обозначает C1-6алкил, C3-7циклоалкил-C1-6алкил, C1-6алкиламиногруппу или C1-6диалкиламиногруппу, необязательно замещенный одним или более Q1′; каждый Q1′ независимо обозначает C1-6алкил или цианогруппу; Q2 обозначает C1-6алкил, необязательно замещенный одним или более Q2′; каждый Q2′ независимо обозначает цианогруппу; Q3 обозначает C1-6алкил; Q4 обозначает C1-6алкил, оксетанил, необязательно замещенный одним или более Q4′; каждый Q4′ независимо обозначает галоген, цианогруппу, циано-C1-6алкил; p равно 0, 1 или 2; q равно 1 или 2; каждый означает ординарную связь или двойную связь; и при условии, что связи между Z1 и Z2, и Z3 и Z3 не обе являются двойными связями и не обе являются ординарными.
Группа изобретений относится к области терапии и/или профилактики заболеваний млекопитающих, в частности человека. Группа изобретений включает лекарственное средство для лечения и/или предупреждения сердечно-сосудистого заболевания, и/или воспалительного заболевания, и/или заболевания печени, и/или неврологического заболевания, и/или стеатоза путем повышения содержания полиненасыщенных жирных кислот в крови млекопитающего, представляющее собой молочный продукт жвачных животных с пониженным содержанием холестерина, где содержание холестерина составляет от 10 мг/100 г жира до 150 мг/100 г жира, а также применение молочного продукта жвачных животных с пониженным содержанием холестерина, в котором содержание холестерина составляет от 10 мг/100 г жира до 150 мг/100 г жира, для лечения и/или предупреждения сердечно-сосудистого заболевания, и/или воспалительного заболевания, и/или заболевания печени, и/или неврологического заболевания, и/или стеатоза путем повышения содержания полиненасыщенных жирных кислот в крови млекопитающего.

Изобретение относится к новым соединениям формулы I, в которой R1 и R2 являются одинаковыми или разными и выбраны из алкильной или алкенильной углеводородной цепи, значения группы R3, которая отщепляется липазой, определены в формуле изобретения.
Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и представляет собой способ медикаментозного лечения пациентов в позднем реабилитационном периоде после аортокоронарного шунтирования, заключающийся в комбинированном назначении пациенту препаратов тромбо АСС 100 мг, аторвастатина 20 мг и дополнительно амлодипина в суточной дозе от 5 до 10 мг и лозартана в суточной дозе от 25 до 100 мг.

Изобретение относится к фторированным аминотриазольным производным формулы (I), где А представляет собой группу, выбранную из фуранила, оксазолила и тиазолила, где две точки присоединения указанной группы находятся в 1,3-положении; R1 представляет собой фенил, который является незамещенным, моно- или дизамещенным, где заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоген, метил, метоксигруппу, трифторметил, трифторметоксигруппу и диметиламиногруппу; и R2 представляет собой водород, метил, этил или циклопропил.
Изобретение относится к медицине, а именно к физиотерапии. Способ включает проведение на фоне стандартной медикаментозной терапии общих ванн и аппликации грязей на нижние конечности.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения прогениторных клеток из образцов миокарда млекопитающего. Представленный способ включает измельчение образцов, посадку их на культуральные чашки с покрытием, обеспечивающим их адгезию, культивирование образцов в условиях гипоксии, обеспечивающей адгезию образцов, с образованием клеточной культуры, извлечение клеток из клеточной культуры посредством обработки ее ферментами, культивирование извлеченных клеток до момента образования клеточных агрегатов и обработку клеточных агрегатов раствором ферментов для получения прогениторных клеток миокарда.
Изобретение относится к сбору для профилактики первичного ишемического инсульта у больных цереброваскулярной болезнью. Заявленный сбор оказывает гиполипидемическое, антиагрегантное, вазопротективное и адаптогенное действие.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к композициям для индукции развития кровеносных сосудов в тканях, и может быть использовано в медицине. Способ предусматривает трансформацию штамма E.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Описаны биспецифические антитела против фактора роста сосудистого эндотелия человека VEGF и ангиопоэтина-2 человека ANG-2, способы их получения, фармацевтические композиции, содержащие указанные антитела, и их применения.

Изобретение относится к мостиковым производным спиро[2.4]гептана формулы (I), в которой W обозначает -CH2CH2- или -СН=СН-; Z обозначает -C(O)NR3-* или -CH2NR4C(O)-*, Y обозначает связь или (C1-C4)алкандиильную группу , R1-R4 являются такими, как определено в описании, их получению и применению в качестве агонистов рецептора ALX и/или FPRL2 для лечения воспалительных и обструктивных заболеваний дыхательных путей.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, медицине, фармакологии и касается получения твердых и мягких лекарственных форм для наружного применения системного и топического действия в виде 1,5% гидрофильного геля и ректальных капсул, содержащих 1,9 г 7,5% гидрофильного геля (в пересчете на количество действующего вещества 0,14 г/капсула), для профилактики и лечения хронической венозной недостаточности, обладающих антикоагулянтной, антитромботической, противовоспалительной, антиэкссудативной и антитранссудативной, капилляропротекторной активностями и улучшающих реологические свойства крови.
Наверх